生物化學(xué)檢驗技術(shù) 課件 第八章 脂代謝紊亂的生物化學(xué)檢驗

職業(yè)教育醫(yī)學(xué)檢驗技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫生物化學(xué)檢驗技術(shù)第八章脂代謝紊亂的生物化學(xué)檢驗BASICCLINICALLABORATORYMEDICINE2目錄

第一節(jié)

血脂及血漿脂蛋白代謝1

第二節(jié)脂代謝紊亂與動脈粥樣硬化2

第三節(jié)血脂、血漿脂蛋白及載脂蛋白測定3學(xué)習(xí)目標：1．掌握：血脂及血漿脂蛋白的概念、組成和分類；血清總膽固醇、甘油三酯、脂蛋白測定的基本原理、方法類別及評價和臨床意義。2．熟悉：血漿脂蛋白的基本結(jié)構(gòu)特征；高脂蛋白血癥的分型及實驗室鑒別方法；脂蛋白代謝紊亂及其與動脈粥樣硬化的關(guān)系；血清(漿)靜置試驗在高脂蛋白血癥分型上的應(yīng)用；血清載脂蛋白AⅠ及B測定的基本原理、方法評價和臨床意義。3．了解：血脂及血漿脂蛋白的代謝途徑；低脂蛋白血癥的分類和主要特征。4．具有熟練進行血清總膽固醇、甘油三酯、脂蛋白及載脂蛋白測定的技術(shù)操作能力。5．能夠正確的采集血脂標本及對標本的初步處理第一節(jié)血脂及血漿脂蛋白代謝一、血漿脂質(zhì)

血液脂質(zhì)物質(zhì)不溶于水或微溶于水，血液中除FFA與清蛋白結(jié)合外，其余都與載脂蛋白（Apo）結(jié)合形成脂蛋白，血漿脂蛋白是血漿脂質(zhì)的主要存在形式與運輸形式第一節(jié)血脂及血漿脂蛋白代謝

脂蛋白具有微團結(jié)構(gòu)。非極性的TG、CE等位于核心，表層覆蓋有少量Apo、FC、PL等極性基團（不含F(xiàn)FA）第一節(jié)血脂及血漿脂蛋白代謝二、血漿脂蛋白的分類、組成1、血漿脂蛋白的分類

常用于血漿脂蛋白分類的方法有電泳法和超速離心法。

第一節(jié)血脂及血漿脂蛋白代謝第一節(jié)血脂及血漿脂蛋白代謝2.血漿脂蛋白的組成及特征脂蛋白密度電泳位置顆粒直徑（nm）主要脂質(zhì)主要載脂蛋白來源主要功能CM＜0.95原位80～500TGApoB48、ApoAⅠ、ApoAⅡ小腸合成將小腸中來自食物的TG和膽固醇轉(zhuǎn)運至其他組織VLDL0.95～1.006前-β30～80TGApoB100、ApoA、ApoE、ApoCs肝臟合成將肝內(nèi)合成的TG轉(zhuǎn)運至外周組織，經(jīng)脂酶水解后釋放FFAIDL1.006～1.019β與前β之間27～30TG、TCApoB100、ApoEVLDL中TG經(jīng)脂酶水解后形成屬于LDL前體，部分經(jīng)肝臟攝取LDL1.019～1.063β20～27TCApoB100VLDL和IDL中TG經(jīng)脂酶水解后形成膽固醇的主要載體，經(jīng)LDL受體介導(dǎo)而被外周組織攝取利用，與冠心病直接相關(guān)HDL1.063～1.21α8～10PL、TCApoAⅠ、ApoAⅡ、ApoCs肝臟和小腸合成，CM和VLDL脂解后表面物衍生促進膽固醇從外周組織轉(zhuǎn)運至肝臟或其他組織再分布，HDL-C與冠心病呈負相關(guān)Lp（a）1.04～1.13β與前β之間25～35TCApoB100、Apo（a）肝臟合成后與LDL形成復(fù)合物可能與冠心病相關(guān)第一節(jié)血脂及血漿脂蛋白代謝三、載脂蛋白

脂蛋白中的蛋白質(zhì)部分稱為載脂蛋白(apolipoprotein，Apo)，載脂蛋白在肝臟和小腸黏膜細胞中合成，具有結(jié)合與轉(zhuǎn)運脂質(zhì)及穩(wěn)定脂蛋白的結(jié)構(gòu)等作用，在脂蛋白代謝中具有重要的功能。第一節(jié)血脂及血漿脂蛋白代謝1．載脂蛋白的種類與功能

種類：按1972年Alaupovic建議的命名方法，用英文字母順序編碼，分為ApoA、B、C、D、E、J等。由于氨基酸組成的差異，每一型又可分若干亞型。第一節(jié)血脂及血漿脂蛋白代謝功能：①構(gòu)成并穩(wěn)定血漿脂蛋白的結(jié)構(gòu)，作為脂質(zhì)的運輸載體

②調(diào)解脂蛋白代謝關(guān)鍵酶的活性

③作為脂蛋白受體的配體，參與脂蛋白與細胞表面脂蛋白受

體的識別、結(jié)合及其代謝過程第一節(jié)血脂及血漿脂蛋白代謝2．載脂蛋白的一般特性載脂蛋白血漿濃度（g/L）主要分布合成部位主要功能AⅠ1.00～1.50HDL、CM肝、小腸HDL結(jié)構(gòu)蛋白，激活LCATAⅡ0.35～0.50HDL肝HDL結(jié)構(gòu)蛋白，抑制LCATAⅣ0.13～0.16CM、HDL肝、小腸激活LCAT，參與膽固醇逆轉(zhuǎn)運B480.03～0.05CM

轉(zhuǎn)運TGB1000.80～1.00LDL、VLDL肝、小腸轉(zhuǎn)運TG、TC，識別LDL受體CⅡ0.03～0.05VLDL、CM、HDL肝激活LPL，抑制肝臟攝取CM和VLDLCⅢ0.12～0.14VLDL、CM、HDL肝抑制LPL活性，抑制肝臟攝取HDLE0.03～0.05VLDL、HDL、CM肝、巨噬細胞促進CM殘粒和IDL攝取，運輸TG（a）0～1.0Lp(a)肝抑制纖維蛋白溶酶活性第一節(jié)血脂及血漿脂蛋白代謝四、脂代謝有關(guān)的酶類與特殊蛋白質(zhì)

參與脂質(zhì)代謝的酶主要有LPL、肝脂肪酶（HL或HTGL）、LCAT和羥甲基戊二酰輔酶A（HMGCoA）還原酶等，這些酶類主要參與TG分解、FC合成和酯化。

脂質(zhì)代謝過程中還有幾種特殊蛋白質(zhì)如膽固醇酯轉(zhuǎn)運蛋白（CETP）、磷脂轉(zhuǎn)運蛋白、微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)運蛋白等參與幾種脂蛋白的轉(zhuǎn)換和清除。第一節(jié)血脂及血漿脂蛋白代謝五、脂蛋白受體

存在于細胞膜上與相應(yīng)的脂蛋白配體特異結(jié)合的一類糖蛋白稱為脂蛋白受體。第一節(jié)血脂及血漿脂蛋白代謝1、LDL受體（ApoB、E受體）

廣泛分布于肝細胞、動脈壁平滑肌細胞等細胞膜表面，能特異識別與結(jié)合含ApoB100、ApoE的脂蛋白，故又稱ApoB、E受體。

第一節(jié)血脂及血漿脂蛋白代謝LDL受體途徑：由LDL受體介導(dǎo)的，通過細胞膜吞飲作用而攝入LDL等含ApoB100、ApoE的脂蛋白的代謝過程。第一節(jié)血脂及血漿脂蛋白代謝2．VLDL受體（ApoE受體）

廣泛分布于代謝活躍的心肌、骨骼肌和脂肪等組織細胞。VLDL受體能識別、結(jié)合含ApoE的脂蛋白，是清除血液循環(huán)中CM殘粒和β-VLDL殘粒的主要受體，使它們進入細胞內(nèi)降解。故VLDL受體又稱殘粒受體。第一節(jié)血脂及血漿脂蛋白代謝3.

清道夫受體（SR）

主要存在于巨噬細胞及血管內(nèi)皮細胞表面，介導(dǎo)修飾的LDL（如氧化型LDL）從血液循環(huán)中清除。而氧化型LDL可導(dǎo)致脂質(zhì)沉積，促使巨噬細胞形成泡沫細胞，具有強烈的致動脈粥樣硬化作用。第一節(jié)血脂及血漿脂蛋白代謝六、脂蛋白代謝

第一節(jié)血脂及血漿脂蛋白代謝第一節(jié)血脂及血漿脂蛋白代謝1.乳糜微粒

CM由小腸黏膜細胞合成

小腸黏膜細胞將吸收進入細胞內(nèi)的脂肪酸和甘油一酯等重新組成TG及磷脂，連同吸收及合成的膽固醇，再與ApoB48、ApoA等共同形成新生的CM，經(jīng)淋巴進入血液循環(huán)，接受HDL轉(zhuǎn)移來的ApoC及ApoE后，同時將部分ApoA轉(zhuǎn)移給HDL，而形成成熟的CM。第一節(jié)血脂及血漿脂蛋白代謝

進入血中的CM，獲得ApoCⅡ等后，ApoCⅡ激活肝外的LPL使CM中的TG水解成甘油和脂肪酸，被組織攝取利用，而外源性膽固醇則全部進入肝。

隨著TG的水解，CM顆粒逐漸變小，其表面過剩的磷脂、膽固醇及ApoA、ApoC轉(zhuǎn)移至HDL上，最后轉(zhuǎn)變成富含CE及部分TG的CM殘余顆粒（CM殘粒），被肝細胞膜上的ApoE受體識別攝入肝細胞內(nèi)進行代謝。第一節(jié)血脂及血漿脂蛋白代謝

2.極低密度脂蛋白

VLDL主要由肝臟合成和分泌

肝細胞以葡萄糖、脂肪酸等為原料合成TG進入血液，在血中從HDL處獲得ApoC及E，形成成熟的VLDL。

在肝外的LPL作用下，VLDL中的TG被水解，釋出甘油和脂肪酸為組織所利用。隨著TG的水解，顆粒逐漸變小，其表面過剩的磷脂、FC及ApoC轉(zhuǎn)移至HDL上，同時HDL中的CE經(jīng)CETP轉(zhuǎn)送給VLDL。此時，VLDL的CE含量及ApoB100、ApoE含量相對增加，密度逐漸增大，轉(zhuǎn)變成VLDL殘粒即IDL。第一節(jié)血脂及血漿脂蛋白代謝

IDL主要有兩條代謝途徑：

一部分IDL可被肝細胞膜的ApoE受體識別、攝取進行代謝；

未被肝細胞攝取的IDL繼續(xù)被LPL作用轉(zhuǎn)變?yōu)橐阅懝檀技癆poB100為主的LDL，經(jīng)LDL受體途經(jīng)代謝。第一節(jié)血脂及血漿脂蛋白代謝3.低密度脂蛋白

正常人空腹時血漿的主要脂蛋白（占2/3），是運輸肝合成的內(nèi)源性膽固醇從肝內(nèi)至肝外的主要形式。LDL與LDL受體結(jié)合后（肝或肝外細胞），與溶酶體結(jié)合，ApoB100被溶酶體蛋白酶水解為氨基酸，CE被膽固醇酯酶水解成FC及脂肪酸。第一節(jié)血脂及血漿脂蛋白代謝4.高密度脂蛋白HDL

主要在肝臟合成，其次是小腸第一節(jié)血脂及血漿脂蛋白代謝第一節(jié)血脂及血漿脂蛋白代謝HDL的主要功能是參與膽固醇逆向轉(zhuǎn)運，將肝外組織細胞內(nèi)的膽固醇，通過血循環(huán)轉(zhuǎn)運到肝臟，經(jīng)酯化后再在肝臟轉(zhuǎn)化為膽汁酸后排出體外。逆向轉(zhuǎn)運加速組織細胞內(nèi)膽固醇的清除，故HDL具有抗動脈粥樣硬化的作用。第二節(jié)脂代謝紊亂與動脈粥樣硬化一、高脂蛋白血癥及分型1、定義

高脂蛋白血癥（hyperlipoproteinemia，HLP）系指血漿中TG和（或）TC濃度異常升高。

由于血脂在血中以脂蛋白形式運輸，因此高脂蛋白血癥實際上就是高脂血癥（hyperlipidemia）。一般以成人空腹12-14h血清（漿）TG＞2.26mmol/L，膽固醇＞6.21mmol/L，兒童膽固醇＞4.14mmol/L為高脂血癥。第二節(jié)脂代謝紊亂與動脈粥樣硬化2．分型

1970年世界衛(wèi)生組織（WHO）建議將高脂血癥分為五型六類類型脂蛋白變化血脂變化血漿外觀電泳圖譜特點發(fā)病率ICM↑TG↑↑↑血漿上層出現(xiàn)“奶油樣”，下層清澈透明CM明顯增多，其他正常罕見IIaLDL↑TC↑↑清澈β-脂蛋白明顯增高常見IIbVLDL、LDL↑TC↑↑,TG↑↑清澈或微混β-脂蛋白和前β-脂蛋白含量均增高常見IIIIDL↑TC↑↑,TG↑↑“奶油樣”上層，下層混濁β-脂蛋白帶和前β-脂蛋白帶融合，出現(xiàn)寬β帶罕見IVVLDL↑TG↑↑混濁前β-脂蛋白明顯增高常見VCM及VLDL↑TG↑↑↑,TC↑“奶油樣”上層，下層混濁CM及前β-脂蛋白深染，尤以CM增加明顯較少第二節(jié)脂代謝紊亂與動脈粥樣硬化此法分型的缺點是過于繁雜。目前從臨床上可將高脂血癥簡易地分為4類：

①高膽固醇血癥（血清TC水平增高）；

②混合型高脂血癥（血清TC與TG水平均增高）；

③高甘油三酯血癥（血清TG水平增高）；

④低高密度脂蛋白血癥（血清HDL-C水平減低）。第二節(jié)脂代謝紊亂與動脈粥樣硬化

按病因分為原發(fā)性高脂血癥和繼發(fā)性高脂血癥兩大類。原發(fā)性高脂血癥：是指由于缺乏脂蛋白代謝的相關(guān)酶并有脂蛋白受體、載脂蛋白的遺傳性缺陷所致。其特點多具有家族聚集性，有明顯遺傳傾向。繼發(fā)性高脂血癥：是指繼發(fā)于某些疾病導(dǎo)致的脂蛋白代謝紊亂。以Ⅱ、Ⅳ型較常見。臨床上較為常見的有糖尿病、某些內(nèi)分泌紊亂和腎臟疾病等。第二節(jié)脂代謝紊亂與動脈粥樣硬化二、低脂蛋白血癥1、定義

一般將血清TC＜3.33mmol/L，或TG＜0.45mmol/L，或LDL-C＜2.1mmol/L者，稱為低脂蛋白血癥。第二節(jié)脂代謝紊亂與動脈粥樣硬化2、分類

原發(fā)性低脂蛋白血癥常有ApoAⅠ缺乏或變異、LCAT缺乏癥、無α脂蛋白血癥（Tangier?。oβ脂蛋白血癥和低β脂蛋白血癥等。

繼發(fā)性低脂蛋白血癥多見于內(nèi)分泌疾患［甲狀腺功能亢進、艾迪生?。ˋddisondisease）等］、重癥肝病、各種低營養(yǎng)、吸收障礙和惡性腫瘤等疾患。第二節(jié)脂代謝紊亂與動脈粥樣硬化三、動脈粥樣硬化1、定義

是指動脈內(nèi)膜的脂質(zhì)、血液成分的沉積，平滑肌細胞及膠原纖維增生，伴有壞死及鈣化等不同程度病變的一類慢性進行性病理過程。2、AS的形成有三大主要因素

高脂血癥、高血壓和吸煙第二節(jié)脂代謝紊亂與動脈粥樣硬化3、致動脈粥樣硬化的因素

凡能增加動脈壁膽固醇內(nèi)流和沉積的脂蛋白如LDL、VLDL、氧化型LDL和Lp（a）等

脂質(zhì)三聯(lián)征：包括高TG、sLDL增高和HDL水平低下第二節(jié)脂代謝紊亂與動脈粥樣硬化4、抗動脈粥樣硬化的因素

凡能促進膽固醇從血管壁外運的脂蛋白如HDL，則具有抗動脈粥樣硬化作用

目前公認血漿HDL水平與動脈粥樣硬化性心腦血管疾病的發(fā)病率呈明顯負相關(guān)。將HDL-C＜1.04mmol/L定為低HDL-C被認為是早發(fā)冠心病的獨立危險因素。第三節(jié)血脂、血漿脂蛋白及載脂蛋白測定血脂分析應(yīng)力求做到“標準化”1．影響血脂準確測定的因素（１）生物學(xué)因素（２）生活方式（３）臨床因素（４）樣本收集與處理第三節(jié)血脂、血漿脂蛋白及載脂蛋白測定2．減少分析前變異的措施（1）采血前（2）采血（3）樣本（4）復(fù)查第三節(jié)血脂、血漿脂蛋白及載脂蛋白測定一、血漿靜置試驗

是粗略判斷血中脂蛋白是否異常增加的簡易方法?？崭?/p>

血清清亮（TG正常）TC正常，正常人TC↑，Ⅱa型測TC混濁（TG增高）上層奶油（CM↑）下層清澈，Ⅰ型下層混濁，Ⅴ型均勻混濁（VLDL↑）TC↑，Ⅱb,Ⅲ型TC正常，Ⅳ型測TC4℃過夜第三節(jié)血脂、血漿脂蛋白及載脂蛋白測定二、總膽固醇的測定（一）總膽固醇測定方法簡介1．化學(xué)法

一般包括抽提、皂化、純化和顯色４個步驟。（1）Liberman-Burchard反應(yīng)（L-B反應(yīng)）L-B反應(yīng)是Liberman-Burchard（L-B）試劑與膽固醇顯色，所生成的綠色產(chǎn)物主要是五烯膽固醇正離子和膽烷六烯磺酸，其吸收峰為620nm。第三節(jié)血脂、血漿脂蛋白及載脂蛋白測定（2）Zak反應(yīng)

硫酸、乙酸和Fe３＋等與膽固醇作用生成紫紅色化合物的反應(yīng)，稱為Zak反應(yīng)。其吸收峰為536nm。方法學(xué)評價：

化學(xué)顯色反應(yīng)均需用具腐蝕性的強酸試劑，干擾因素較多，準確測定有賴于從樣本中抽提、皂化和純化過程，因而操作較復(fù)雜，不適于分析大批量樣本，且不適于自動化分析。第三節(jié)血脂、血漿脂蛋白及載脂蛋白測定2．酶法

膽固醇氧化酶法是目前臨床實驗室測定血清TC的常規(guī)方法。

方法學(xué)評價：

該法靈敏度高、準確度高、精密度好，線性范圍寬，樣本用量少，便于自動化分析。第三節(jié)血脂、血漿脂蛋白及載脂蛋白測定（二）總膽固醇測定的臨床意義1．高膽固醇血癥常見于AS、家族性高膽固醇血癥、家族性ApoB缺陷癥、高TC、混合型高脂血癥及腎病綜合征、甲狀腺功能減退、糖尿病、妊娠等。2．低膽固醇血癥

常見于低脂蛋白血癥、營養(yǎng)不良、慢性消耗性疾病和甲亢等。第三節(jié)血脂、血漿脂蛋白及載脂蛋白測定三、甘油三酯的測定（一）甘油三酯測定方法簡介1.化學(xué)法

其基本操作包括抽提、皂化、氧化和顯色4個步驟。

方法學(xué)評價：操作較為繁雜，影響測定因素太多，準確性差，一般很少用。第三節(jié)血脂、血漿脂蛋白及載脂蛋白測定2.酶法

常用的酶法有磷酸甘油氧化酶法、乳酸脫氫酶法和甘油氧化酶法。其中磷酸甘油氧化酶法使用最為普遍。第三節(jié)血脂、血漿脂蛋白及載脂蛋白測定方法學(xué)評價：

具有操作簡便、微量、快速準確且試劑穩(wěn)定等優(yōu)點，適用于自動化分析。第三節(jié)血脂、血漿脂蛋白及載脂蛋白測定（二）甘油三酯測定的臨床意義1．血清TG增高

TG水平與種族、年齡、性別以及生活習(xí)慣（如飲食、運動等）有關(guān)。

原發(fā)性高甘油三酯血癥包括家族性高甘油三酯血癥、家族性混合型高脂血癥及LPL減少或缺乏引起的原發(fā)性高脂血癥等。繼發(fā)性高甘油三酯血癥見于肥胖癥、糖尿病、糖原累積病、甲狀腺功能減退、腎病綜合征、高脂飲食及酗酒等。第三節(jié)血脂、血漿脂蛋白及載脂蛋白測定2．血清TG降低

比較少見。營養(yǎng)不良或消化吸收不良綜合征、甲亢、腎上腺皮質(zhì)功能減退和肝功能嚴重損傷時可引起TG降低。第三節(jié)血脂、血漿脂蛋白及載脂蛋白測定四、高密度脂蛋白膽固醇的測定（一）高密度脂蛋白膽固醇測定方法簡介1．化學(xué)沉淀法

常用多聚陰離子及兩價陽離子沉淀血清中含ApoB的LDL與VLDL等，然后用化學(xué)法或酶法測定上清液中的HDL-C。2.直接法

又稱均相測定法、勻相測定法，包括選擇性抑制法、清除法、PEG修飾酶法和免疫分離法等。第三節(jié)血脂、血漿脂蛋白及載脂蛋白測定（二）高密度脂蛋白膽固醇測定的臨床意義HDL-C是公認的一種抗動脈粥樣硬化脂蛋白，是冠心病的保護因素。冠心病的發(fā)病率與血清HDL-C水平呈負相關(guān)，HDL-C升高能降低發(fā)生冠心病的危險。HDL-C下降多見于糖尿病、腦血管病、肝炎等。第三節(jié)血脂、血漿脂蛋白及載脂蛋白測定五、低密度脂蛋白膽固醇的測定（一）低密度脂蛋白膽固醇測定方法簡介1、超速離心結(jié)合沉淀法，稱β-定量法(BQ法)。此法所測定LDL-C實際上包括了脂蛋白(a)[Lp(a)]和中間密度脂蛋白(IDL)的膽固醇含量。方法學(xué)評價：此法使用設(shè)備昂貴、操作復(fù)雜、費時且技術(shù)要求高，普通實驗室很難開展。第三節(jié)血脂、血漿脂蛋白及載脂蛋白測定2、聚乙烯硫酸沉淀法(PVS法)

空腹血清(漿)中含有HDL、LDL和VLDL，用聚乙烯硫酸鹽-聚乙二醇甲醚（PVS）選擇性沉淀LDL，離心后上層液中含有VLDL、HDL和可能存在的CM，同時測定血清和上清液中的膽固醇含量，以總膽固醇減去上清液中的膽固醇含量即為LDL-C的量。膽固醇