醫(yī)學(xué)教材 病毒性肝炎血清標(biāo)志物檢測

哈爾濱醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院實驗診斷教研室（LaboratoryDiagnosticsDepartmentofTheFirstHospitalofHMU)關(guān)秀茹.1病毒性肝炎血清標(biāo)志物檢測(Testsonserummarkersofviralhepatitis).2病毒性肝炎分類(ClassificationofViralHepatitis)1、已確定的肝炎：甲、乙、丙、丁、戊五種。2、未定論的：己、庚和輸血傳播病毒（TTV）引起的肝炎。3、非甲~戊型肝炎.3甲型肝炎乙型肝炎丙型肝炎丁型肝炎戊型肝炎病毒直徑核酸種屬27nm單鏈RNA微小RNA病毒科42nm雙鏈DNA嗜肝DNA病毒科30~60nm單鏈RNA黃病毒科35~37nm單環(huán)RNA缺陷病毒科27~38nm單鏈RNA杯狀病毒科主要傳播途徑流行性季節(jié)性

潛伏期發(fā)病黃疸糞至口散發(fā)或流行秋冬2~6周急性較多多見血液、母嬰散發(fā)無2~6月緩慢多見較少見血液散發(fā)無２~26周多緩慢多無血液散發(fā)無4~20周多緩慢多無糞至口散發(fā)或流行雨季或洪水后2~10周急性較多較重5型病毒性肝炎病原體、流行病學(xué)和臨床特征.4甲型肝炎乙型肝炎丙型肝炎丁型肝炎戊型肝炎慢性病毒攜帶者病變慢性化肝炎病毒標(biāo)志物無無抗-HAVIgM抗-HAVIgG有有HBsAgHBeAg抗-HBe抗-HBc抗-HBs前S1蛋白前S2蛋白HBV-DNA有有,多見抗-HCVIgM抗-HCVIgGHCV-RNA有有,較多見HDAg抗-HDIgM抗-HDIgG無無抗-HEVIgM抗-HEVIgG5型病毒性肝炎病原體、流行病學(xué)和臨床特征.5甲型肝炎(HepatitisA)

HA

由甲型肝炎病毒（HAV）引起的一種以肝臟損害為主的傳染性疾病。一、血清標(biāo)志物檢測及意義1、抗HAV-IgM：出現(xiàn)較早，HAV感染后1-2周內(nèi)血中即可檢出，3-6個月轉(zhuǎn)陰，是早期診斷甲型肝炎最簡便而可靠的血清學(xué)指標(biāo)。2、抗HAV-IgG：出現(xiàn)于急性感染后期和恢復(fù)期，可持續(xù)多年甚至終身，是一種保護(hù)性抗體。3、HAV-RNA：PCR法測定。.6二、流行特征與預(yù)后

潛伏期1個月左右，易暴發(fā)流行，通過消化道傳播，預(yù)后較好，一般3個月至半年恢復(fù)，不留后遺癥。.7HBV為DNA病毒，球形顆粒，結(jié)構(gòu)包括外殼蛋白（HBsAg，前S1、前S2）和核心顆粒（HBeAg，HBcAg，DNA聚合酶）。乙型肝炎(HepatitisB).8一、血清標(biāo)志物檢測及意義1、乙肝表面抗原（HBsAg）感染乙肝病毒2-11周后血清開始出現(xiàn)HBsAg，爾后出現(xiàn)轉(zhuǎn)氨酶異常和臨床癥狀。HBsAg陽性：見于急性乙肝，慢性乙肝患者，無癥狀乙肝病毒攜帶者。.92、前S1和前S2抗原（1）早期出現(xiàn)：比HBsAg還早，在轉(zhuǎn)氨酶升高前1-2個月即可出現(xiàn)陽性。（2）病毒復(fù)制的指標(biāo)：與HBV-DNA，HBeAg幾乎同時出現(xiàn)。（3）對于評價藥物療效是一項重要的指標(biāo)。.103、乙肝病毒表面抗體（HBsAb）是HBsAg刺激機體產(chǎn)生的特異性抗體，是一種保護(hù)性抗體，能中和HBV。初感染2-6月出現(xiàn)，抗-HBs陽性見于HBV既往感染者，乙肝恢復(fù)期及乙肝疫苗免疫后。（1）抗-HBs定量測定：抗-HBs含量大于10mIu/ml，表示具有保護(hù)性。（2）抗PreS1和抗PreS2：見于乙肝急性期和恢復(fù)早期?？筆reS1和抗PreS2陽性表示病毒正在或已被清除，表示預(yù)后好，抗PreS1和抗PreS2遲遲不出現(xiàn)，則意味著預(yù)后較差或轉(zhuǎn)為慢性。.114、乙肝病毒核心抗原（HBcAg）和核心抗體（抗HBc）（1）構(gòu)成病毒核心顆粒部分，HBcAg活性部分位于顆粒內(nèi)部，外周血沒有游離的HBcAg，經(jīng)過特殊處理后HBcAg可釋放出來。HBcAg陽性表示病毒在復(fù)制，傳染性強。（2）抗-HBc：不是中和抗體，有IgG和IgM兩種形式。IgM在早期出現(xiàn)，而IgG在恢復(fù)期出現(xiàn)，可持續(xù)多年或終身存在。.12對抗-HBc單獨陽性的解釋：l首先排除假陽性結(jié)果。l急性感染后的恢復(fù)早期（窗口期）：在HBV急性感染消退時，HBsAg減少甚至消失，抗-HBs尚未出現(xiàn)，稱為窗口期?？笻Bc-IgM陽性，有傳染性?？笻Bc-IgG陽性，恢復(fù)期，可持續(xù)多年，甚至終身。.135、乙肝病毒e抗原和e抗體HBeAg為可溶性，可分泌到細(xì)胞外，是病毒復(fù)制的標(biāo)志。HBeAg刺激機體產(chǎn)生抗-HBe抗體。（1）e抗原可作為急性乙肝輔助診斷和預(yù)后的指標(biāo)。HBeAg在乙型肝炎潛伏期后期出現(xiàn)，晚于HBsAg，它隨著HBsAg的消失而消失，若急性肝炎發(fā)病3-4個月后HBeAg轉(zhuǎn)陰，則預(yù)后良好。.14（2）HBeAg存在于HBsAg陽性的病人和攜帶者的血液中，其中大多數(shù)伴有HBV-DNA，DNA多聚酶陽性。HBeAg陽性說明病毒復(fù)制，具有很強的傳染性?？?HBe陽性者傳染性較低。（3）對HBsAg陰性而HBeAg陽性原因分析：l

檢測HBsAg的方法不夠靈敏。l

血清中RF的干擾（用熱聚IgG處理）l

HBsAg與抗-HBs形成復(fù)合物。

.15

●

HBsAg的濃度過高，抗原、抗體比例不合適，出現(xiàn)HBsAg假陰性。

●試劑盒的質(zhì)量和操作原因，可導(dǎo)致e抗原假陽性。

6、HBV-DNA：PCR法

.16經(jīng)典的乙肝血清標(biāo)志物時象曲線圖

.17.18.19常見乙肝病毒標(biāo)志物檢測模式HBsAgHBsAbHBeAgHBeAbHBcAb病程(courseofdiseasea)-----未感染(uninfection)+----感染早期(lateinfection)或攜帶者（carrierstate）+-+--急性感染初期(acutehepatitisB)

+-+-+急性或慢性乙型肝炎，高傳染性(acuteorchronichepatitisBwithhighinfectivity)

+---+急性、慢性乙型肝炎或HBsAg攜帶者(acuteorchronichepatitisBorpersistentcarrierstate)

+--++急性乙肝趨向恢復(fù)或慢性乙肝，弱傳染性(acuteorchronichepatitisBwithlowinfectivity)

.20HBsAgHBsAbHBeAgHBeAbHBcAb病程(courseofdiseasea)----+急性HBV感染“核心窗口期”或既往曾感染過乙肝，有流行病學(xué)意義

---++乙肝恢復(fù)期，弱傳染性(recoveryfromacutehepatitisBwithlowinfectivity)

-+-++急性乙肝康復(fù)期，開始產(chǎn)生免疫力(rcoveryfrominfectionandbeginproducingimmuneability)

常見乙肝病毒標(biāo)志物檢測模式.21HBsAgHBsAbHBeAgHBeAbHBcAb病程(courseofdiseasea)-+--+急性HBV感染康復(fù)期或有既往感染史，目前保持免疫力(recoveryfromacuteinfectionandreceiveimmuneabilityrecently)

-+---疫苗接種后或HBV感染后康復(fù)(recentHBVvaccination,repeatedexposuretoantigenwithoutinfection,orrecoveryfrominfectionwithlossofdetectableanti-HBc)

常見乙肝病毒標(biāo)志物檢測模式.22二、流行特征與預(yù)后60%感染，10%發(fā)病，農(nóng)村多于城市，男性多于女性，主要經(jīng)血液傳播，潛伏期1-6個月→無癥狀攜帶者和隱性感染，亞臨床感染和急、慢性臨床感染。急性乙肝，一般持續(xù)1-3個月，最多半年，80-90%可以治愈，10-20%轉(zhuǎn)為慢性肝炎，少部分轉(zhuǎn)為肝硬化和肝癌。.23丙型肝炎(HepatitisC)一、血清標(biāo)志物檢測及臨床意義1、抗-HCV：非保護(hù)性抗體，只是HCV感染指標(biāo)，可終身攜帶。2、HCV-RNA：比抗-HCV出現(xiàn)早，可作為早期診斷和獻(xiàn)血員篩查的指標(biāo)。二、流行特征及預(yù)后目前，輸血后丙型肝炎占70%，潛伏期1-6個月，臨床經(jīng)過較輕，與乙肝比較，轉(zhuǎn)氨酶和膽紅素水平較低，但發(fā)展為慢性肝炎的比例較高。

.24丁型肝炎(HepatitisD)一、血清標(biāo)志物檢測及臨床意義HDV是一種有缺陷的病毒，在許多方面需要嗜肝DNA病毒（主要是乙肝病毒）的輔助，所以認(rèn)為HDV不單獨存在，通常與乙肝伴存。1、抗HDV-IgM，感染早期出現(xiàn)，抗-HD-IgG，感染后期和恢復(fù)期。2、HDV-RNA：PCR法二、流行特征與預(yù)后潛伏期4-20周，人感染HDV后可表現(xiàn)為HBV/HDV聯(lián)合感染或重疊感染。.25戊型肝炎(HepatitisB)一、血清標(biāo)志物檢測及臨床意義1、抗HEV-IgM：出現(xiàn)于感染早期，3個月內(nèi)轉(zhuǎn)陰。2、抗HEV-IgG：感染后期和恢復(fù)期。3、HEV-RNA：PCR法二、流行特征及預(yù)后經(jīng)消化道傳播，易暴發(fā)流行。潛伏期10-60天，不發(fā)展為慢性，4-6周癥狀消失，肝功能恢復(fù)正常。.26血清病毒標(biāo)志物的檢測方法

1、ELISA方法（酶聯(lián)免疫吸附試驗）2、RIA法3、膠體金法4、化學(xué)發(fā)光法.27ELISA方法1、特點：敏感性高，特異性好，重復(fù)性好，試劑制備容易，結(jié)合物高度穩(wěn)定，有效期長，儀器設(shè)備簡單，可用肉眼觀察結(jié)果，操作易于自動化和判斷結(jié)果客觀，成本較低等優(yōu)點，可用于定性或定量測定可溶性抗原或抗體。

.282、反應(yīng)原理：酶能與抗原或抗體結(jié)合形成酶標(biāo)抗原或抗體。酶標(biāo)抗體具有酶和抗體雙重活性。待檢標(biāo)本（含抗體或抗原）與預(yù)先包被在固相載體表面