如何寫好課題申請系列課程03逐個擊破（上）

如何寫好課題申請書系列講座一逐個擊破（上）Sunlight Angel目錄一、課題申報的渠道

二、課題申報的評審程序

三、課題申報書的評價標準

四、撰寫標書的技巧（上）

五、撰寫標書的技巧（下）

六、中標必須注意的幾個問題

七、醫(yī)學科研設計的原則及應用

國家級項目：國家973項目國家863項目國家科技攻關項目國家自然科學基金項目部委項目省級項目市級項目單位項目其他項目/一、課題申報的渠道國家級項目：部委項目國家教育部省級項目XX

省科技廳ＸＸ教育廳

ＸＸ衛(wèi)生廳市級項目Ｘ市科技局單位項目（校／院級）其他項目（企業(yè)橫向）/一、課題申報的渠道國家科技計劃體系基礎研究計劃重大科技發(fā)展專項計劃科研開發(fā)條件建設計劃國重八國國國國國家大六家家家家家自基三攻產(chǎn)工重重然礎計關業(yè)程點大科研劃計化技實科學究劃基術驗學基發(fā)地研室工金展究程規(guī)中劃心科技產(chǎn)業(yè)化環(huán)境建設計劃國國科科國火星家家技技家炬火重重興型科計計大點貿(mào)中技劃劃科新行小成技產(chǎn)動企果產(chǎn)品計業(yè)重業(yè)計劃創(chuàng)點工劃新推程基廣計地計劃劃資助格局:國家自然科學基金資助格局研究項目板塊人才項目板塊面上項目重點項目重大項目專項基金國際合作與交流國家杰出青年科學基金海外、港、澳青年合作研究基金創(chuàng)新研究群體科學基金國家基礎科學人才培養(yǎng)基金青年科學基金自由申請項目青年科學基金項目地區(qū)科學基金重大研究計劃聯(lián)合研究基金National

NaturalScienceFoundation

of

China國家自然科學基金二、課題申報的評審程序

1.初步篩選：3.學科組評審2.同行評議4.領導審批刪除：不符合招標范圍的；

標書填寫不合要求的；立項依據(jù)不充分的；手續(xù)不全的三、課題申報書的評價標準

1、立項依據(jù)

科學意義A.對科學發(fā)展有重要意義學術思想A.有明顯的創(chuàng)新B.屬于本學科中的關鍵問題C.屬于本學科中的一般問題D.科學意義不大B.有一定的創(chuàng)新和特色C.創(chuàng)新性不明顯D.無創(chuàng)新理論依據(jù)A.充分、科學性強B.較充分，科學性不強

C.不夠充分，科學性不強D.不充分或缺乏科學性對國內(nèi)外研究現(xiàn)狀清楚且分析準確清楚但分析不夠全面C.了解部分情況D.不了解現(xiàn)狀2、研究方案（1）研究內(nèi)容和擬解決的關鍵問題

（2）擬采用的研究方法可行，且有創(chuàng)新可行，對現(xiàn)方法有改進C.基本可行D.不可行A.范圍合適重點突出，關鍵問題準B.基本合適，較準確C.不夠合適，只抓住了部分問題D.不合適，沒有抓住關鍵問題……3、研究基礎……4、綜合評價優(yōu)：優(yōu)先資助中：同意，但需修改良：同意資助

差：不同意資助三、課題設計書的評價標準

四、撰寫標書的技巧（上）

1、封面2、題名3、摘要4、關鍵詞5、立項依據(jù)1、封面

項目名稱2、題名

題目一般不超過25個漢字，翻譯準確。題目力求“簡明、具體、新穎”基于XX方法（技術、理論）對XX的研究題目大而空。忌用中國，全國等字眼，這容易給評審專家造成空而大的感覺。題目太小，不足獲得國自然基金資助。題目與研究的內(nèi)容不符。2、題名（舉例）

題目要“準確、清晰”如：基于受益歸屬分析法的新型農(nóng)村合作醫(yī)療制度公平性評價及其政策研究反例：生化檢驗檢測在糖尿病病人尿蛋白中的臨床意義觀察研究修改：生化指標在糖尿病病人尿蛋白中的意義研究2、題名（舉例）

題目要“針對性”，避免“泛、大”例如：冬蟲夏草對糖尿病腎病大鼠腎基因表達調(diào)控研究（基本可以）中草藥抗菌的免疫調(diào)節(jié)研究（泛）胃腸道疾病的病理、生理和藥理（目標不明確）受試對象、處理因素、效應結果查看本領域的歷年《科研項目匯編》題目要“醒目、有新意”，避免“重復”3、摘

要（限400字）包括：研究方法、內(nèi)容、目標、科學意義。模板：采用……方法，進行……研究，

闡明……機制或揭示……規(guī)律，為……奠定基礎／提供……思路。作用：畫龍點睛效果：引發(fā)評議專家的興趣，使其產(chǎn)生探個究竟的好奇心——“他到底是怎么做的

？

”采用改良的消減雜交技術建立老年性白內(nèi)障晶狀體上皮細胞差異表達基因文庫并制備基因芯片，利用此芯片篩選出白內(nèi)障相關基因。通過基因轉染在體外培養(yǎng)的晶狀體上皮細胞，觀察細胞的形態(tài)、增殖和凋亡、骨架蛋白及晶狀體蛋白的變化，研究基因的功能。從晶狀體上皮細胞的角度闡明老年性白內(nèi)障發(fā)生的分子生物學機制，為防治白內(nèi)障提供新思路和理論依據(jù)。例1：例2：基于受益歸屬分析法的新型農(nóng)村合作醫(yī)療制度公平性評價及其政策研究新型農(nóng)村合作醫(yī)療制度的公平性，這既關系到農(nóng)村居民參合的積極性和“新農(nóng)合”制度的可持續(xù)性，也是政府這項制度設計的初衷。而當前“新農(nóng)合”制度的公平現(xiàn)狀究竟怎樣？其程度有多大？其是否偏離該項制度設計的初衷——讓最需要保障的農(nóng)村中低收入人群得到保障？及如果出現(xiàn)不公平，則這種不公平的具體體現(xiàn)和決定這種不公平的因素？為此，本研究將從“新農(nóng)合”制度的公平性這一視角入手，通過分析按典型抽樣方法抽取的第一批試點樣本縣的“新農(nóng)合”數(shù)據(jù)資料，利用集中指數(shù)（Concentration

Index，CI）、受益歸屬分析法（Benefit

Incidence

Analysis，BIA）

等方法來描述和分析“新農(nóng)合”制度運行的公平性和運行績效問題。在此基礎上，再利用Blinder-Oaxaca

方法試圖找出影響公平性和運行績效的影響因素。最后由此來提出完善“新農(nóng)合”制度的政策措施，以使“新農(nóng)合”不偏離制度設計的初衷。3、摘要翻譯得體、自然英文摘要（3000 characters）3、關鍵詞

《醫(yī)學主題詞樹狀結構表》和《醫(yī)學主題詞著錄規(guī)范》3、關鍵詞

例如：題名：基于受益歸屬分析法的新型農(nóng)村合作醫(yī)療制度公平性評價及其政策研究關鍵詞：新型農(nóng)村合作醫(yī)療制度；集中指數(shù)；

受益歸屬分析；公平性；運行績效；不超過5個，用分號“；”隔開對立論依據(jù)、實驗方案、研究基礎應闡述的內(nèi)容以及三者關系的理解立論依據(jù)：闡述背景和理由，為什么？實驗方案：是申請書的核心，怎么做？研究基礎：展示積累和實力，做了啥？申報書基礎研究：著重結合國際科學發(fā)展趨勢，論述科學意義。應用基礎研究：著重結合學科前沿，圍繞國民經(jīng)濟和社會發(fā)展中的重要科技問題論述應用前景。4、立項依據(jù)研究領域：白內(nèi)障的研究，包括發(fā)病機制、預防、診斷、治療措施等研究研究方向：白內(nèi)障發(fā)病機制的研究，包括環(huán)境因素、致病靶點、細胞水平、分子水平研究等科學問題：白內(nèi)障發(fā)病過程中的相關基因研究，包括致病基因篩選、功能研究、調(diào)控機制、信號轉導等。在立論依據(jù)的闡述中，對研究領域、研究方向、具體科學問題的理解。領域在研究領域?qū)用鎻难芯款I域切入方向從研究方向展開圍繞某一具體科學問題（本項目研究目標）進行歸納分析科學

?

提出研究設想問題國內(nèi)外現(xiàn)狀分析研究意義（套路）存在問題：對科學意義的闡述不足或夸大撰寫方法：從領域入手，提出主要問題，引出熱點研究方向。圍繞熱點研究方向進行簡要分析，找出目前尚未解決的具體科學問題，以此為切入點提出假設，闡述如果解決了該問題（研究目標），對該領域甚至相關領域的科學貢獻（理論意義或

應用前景）。4.1項目的研究意義舉例老年性白內(nèi)障是與年齡相關的疾病，隨著年齡的增加，其發(fā)病比率也不斷升高。特別是人類趨向老齡化，白內(nèi)障的患病人數(shù)還將持續(xù)增加。目前，它已是人類第一位的致盲疾病。迄今為止,

治療白內(nèi)障唯一有效的方法是通過手術摘除混濁的晶狀體并植入人工晶狀體。雖然手術后患者可以恢復良好的視力，但是不可避免的術后并發(fā)癥以及手術設備、材料耗資巨大，治療白內(nèi)障所花費的資金已成為世界各國包括富裕的發(fā)達國家嚴重的醫(yī)療負擔。最近的調(diào)查表明，如果把老年性白內(nèi)障的發(fā)病時間延緩10年，白內(nèi)障手術的數(shù)量就會減少45%[1]。所以，一些學者認為通過預防白內(nèi)障發(fā)生或延緩其發(fā)展的途徑征服白內(nèi)障已成為一項全球性的社會和社會經(jīng)濟問題[2]。但是目前我們對老年性白內(nèi)障發(fā)病機理的認識還不十分清楚。多年以來許多學者的研究結果證實晶狀體上皮細胞在老年性白內(nèi)障發(fā)生中起重要的作用，但對其中進一步的基因調(diào)控知之甚少。如果從參與老年性白內(nèi)障晶狀體上皮細胞變化的相關基因入手，研究基因的生物學功能，有可能抓住引起白內(nèi)障發(fā)生、發(fā)展的主要環(huán)節(jié)。據(jù)此，本研究擬利用改良的消減雜交技術和基因芯片技術準確、全面、快速的特點，以晶狀體上皮細胞為研究對象，一次性篩選出老年性白內(nèi)障全部有差異表達的基因，從中再篩選出與白內(nèi)障相關基因，并著重對其功能進行研究，從基因水平闡明白內(nèi)障的發(fā)病機制，為防治白內(nèi)障提供新思路和理論依據(jù)。舉例（續(xù)）存在問題：A、低水平重復：不了解最新進展，對國內(nèi)外現(xiàn)狀缺乏真正了解，提出的問題別人已解決。B、文獻復習不全：檢索文獻方法不當、選擇關鍵詞不妥，甚至人為縮小檢索范圍。C、總結表達不夠：對國內(nèi)外現(xiàn)狀缺乏歸納分析，只是簡單羅列，缺乏邏輯性和針對性。D

、對方法原理理解不夠：對研究方法不熟悉，簡單移植或夸大其作用，缺乏實際應用的可行性。4.2國內(nèi)外現(xiàn)狀分析（與綜述的區(qū)別）要緊緊圍繞本次申請項目的主題。A、從領域切入，簡要論述國內(nèi)外研究成果，并引出當前的熱點研究方向。B、從研究方向展開，較詳細地分析國內(nèi)外的研究進展，闡明在該方向上存在的問題。C、圍繞存在的問題，結合國內(nèi)外以往的研究結果、當前的現(xiàn)狀及今后的發(fā)展趨勢，詳細論述和分析這些問題產(chǎn)生的原因，提出該方面的空白點、未知數(shù)、以及研究的難點、焦點，從而為自己申請項目確立研究目標奠定充分的立論基礎。撰寫方法：D、對擬采用的技術方法進行介紹和分析。成熟的方法重點介紹可以應用于本研究的理論依據(jù)和實驗依據(jù)。新方法在詳細介紹其原理的基礎上，闡明可以應用于本研究的理論依據(jù)和實驗依據(jù)。需特別注意的問題：必須對所運用的技術方法的原理、流程尤其是在實際運用中可能出現(xiàn)的問題要十分清楚，絕不能是一種簡單的移植。例如：抗體

+

功能基團，理論上可以實現(xiàn)融合，但存在“活性、表達載體選擇、純化等問題。E、提出本項目的研究設想。撰寫方法：防治白內(nèi)障必須針對其發(fā)病的主要環(huán)節(jié)。多年以來，國內(nèi)外學者從不同的角度探討白內(nèi)障的發(fā)生機理。就致病的環(huán)境因素講，氧化因子、紫外線輻射、晶狀體周圍環(huán)境中離子濃度改變及一些生長因子、細胞因子的改變均與老年性白內(nèi)障的發(fā)生有關。就研究的部位分，晶狀體中皮質(zhì)與核的蛋白質(zhì)改變及晶狀體纖維的改變與白內(nèi)障的形成有關，而位于晶狀體前囊膜下單層的晶狀體上皮細胞在白內(nèi)障的形成中的變化更引人關注。4.2國內(nèi)外研究現(xiàn)狀（舉例）因為晶狀體上皮細胞是晶狀體中唯一有分裂活性、數(shù)量相對穩(wěn)定的細胞，它們分裂、分化出晶狀體纖維細胞、產(chǎn)生晶體蛋白，終生不停息，形成了晶狀體均一、對稱的結構，對維持晶狀體的透明起重要作用。不僅如此，晶狀體上皮細胞還是晶狀體中受外來刺激影響較早的部位，已有研究證實老年性白內(nèi)障的晶狀體上皮細胞還發(fā)生退行性變、細胞膜通透性增加、細胞內(nèi)酶活性改變、細胞數(shù)量減少、凋亡細胞增多等改變，與單純老化的晶狀體之間存在差異[3-5]

。體外實驗也證實多種因素(H2O2、UV-B、晶狀體蛋白的自身抗體)誘發(fā)的白內(nèi)障模型中晶狀體皮的損傷是晶狀體混濁的主要環(huán)節(jié)[6-8]。因此，從晶狀體上皮細胞的變化入手探討白內(nèi)障的成因，有可能抓住揭示白內(nèi)障發(fā)病機理的主要環(huán)節(jié)。而晶狀體上皮細胞變化的基因調(diào)控機制是問題的關鍵所在，也是有待我們深入研究的問題。白內(nèi)障的形成與晶狀體的老化密不可分，是晶狀體老化的極端表現(xiàn)。晶狀體的老化是多種因素相互作用的結果，包括基因的和非基因的隨機變化的不斷積累，也有程序性的、非隨機性的組織特異性多種基因表達的改變。目前，國內(nèi)外對白內(nèi)障相關基因的研究主要以下三方面：一是對體外培養(yǎng)的晶狀體白內(nèi)障模型及上皮細胞的研究。UV-B輻射作用誘導的白內(nèi)障中晶狀體上皮細胞是主要的靶細胞，其Na-K-ATP酶的活性增加，蛋白質(zhì)的合成和分泌增加；上皮細胞的凋亡增加，其中有c-fos基因的表達增加；還有組蛋白H4、H3 的低表達`和蛋白酶C、β-肌動蛋白、γ-肌動蛋白基因的高表達[9-12]。Carper等[13]利用RT-PCR-

DD(reverse

transcription-polymerase

chain

reactiondifferential

display)技術研究H2O2誘導的晶體上皮細胞的基因差異性表達結果顯示NADH脫氫酶4亞基、細胞色素b、谷氨酰胺轉移酶基因表達減少以及細胞因子的核蛋白、替代拼接因子2

（alternative

splicing

factor）、β-三羥基異丁酰輔酶A水解酶基因表達的增加。二是利用轉基因動物的研究。波形纖維蛋白基因（vimentin）、雜交的Ⅲ型中間纖維蛋白基因的轉基因小鼠表現(xiàn)出白內(nèi)障，而且有隨小鼠年齡增加白內(nèi)障加重的趨勢。晶狀體改變的共同特點是晶狀體纖維細胞分化受抑制[14,15]。Gong等[16]報告晶狀體的細胞膜蛋白連接蛋白α3（α3

Connexin）基因敲除小鼠（knockout

mouse）在晶狀體形成的早期及纖維細胞分化早期不受影響，其后出現(xiàn)與晶狀體蛋白溶解有關的核性白內(nèi)障。雖然體外實驗和白內(nèi)障轉基因小鼠都提示我們一些基因的變化與白內(nèi)障有關，但是，這些變化的基因是否與老年性白內(nèi)障形成有關，目前尚缺乏進一步的報告。三是對人老年性白內(nèi)障晶體上皮的研究。Lee[17]利用RT-PCR技術研究顯示前極性白內(nèi)障與核性白內(nèi)障上皮細胞中纖維連接蛋白、I型膠原纖維、α-平滑肌蛋白、TGF-β1、TGF-β2、TGF-βⅡ型受體、結締組織生長因子的基因表達有差異。Kantorow等[18]利用RT-PCR-DD研究老年性白內(nèi)障與正常晶狀體上皮的基因差異性表達的初步結果是老年性白內(nèi)障有三個高表達基因和12個低表達的基因。但就DD-PCR技術來講，在實驗中難以解決假陰性、假陽性以及克隆全長cDNA的問題。上述三方面的研究均取得了不同程度的研究結果，但由于當時技術條件的限制都未能全面闡明與白內(nèi)障相關的基因及其功能。尋找白內(nèi)障時晶狀體上皮細胞與正常晶狀體上皮細胞間差異表達的基因有可能揭示白內(nèi)障的發(fā)病機理。尋找差異表達基因的經(jīng)典方法是消減雜交技術（subtractive

hybridization,

SH），它是……，但是實驗操作復雜。經(jīng)過改進后的抑制性消減雜交（suppression

subtractive

hybridization

,SSH是Diatchenko等1996年建立的方法）……簡化了實驗操作，但仍然問題很多。我校生化教研室建立了改良消減雜交技術[19，20]，其特點是：簡便易行，能夠獲得目的細胞特異表達的全長基因，對低豐度基因也能有效分離。該方法的建立者已利用這一技術從脂多糖刺激前后的人牙髓細胞的差異表達的基因中克隆到脂多糖刺激后特異表達的基因，其中5個為新基因。同理，利用此方法也能快速、有效地獲得白內(nèi)障晶狀體上皮細胞與正常晶狀體上皮細胞間差異表達的基因，并克隆到全長cDNA，為進一步的結構和功能研究打下基礎?；蛐酒夹g的出現(xiàn)，使檢測差異表達基因和未知DNA分子變得更快捷、準確、高效?；蛐酒窃?996年被提出并開始研制的，該技術是將成千上萬的DNA探針集中到1厘米見方的基片上，利用堿基互補原理，DNA探針中的已知堿基序列與被測定的未知DNA