布魯氏菌病診斷標準

布魯氏菌病診斷標準布魯氏菌病診斷標準布魯氏菌病診斷標準資料僅供參考文件編號：2022年4月布魯氏菌病診斷標準版本號：A修改號：1頁次：1.0審核：批準:發(fā)布日期：布魯氏菌病診斷標準

WS268-2007

1

范圍

本標準規(guī)定了人群布魯氏菌病的診斷依據(jù)、診斷原則、診斷和鑒別診斷。

本標準適用于各級各類醫(yī)療衛(wèi)生機構(gòu)及其工作人員對布魯氏菌病診斷與報告。2

診斷依據(jù)

流行病學史

發(fā)病前病人與家畜或畜產(chǎn)品、布魯氏菌培養(yǎng)物有密切接觸史，或生活在疫區(qū)，或與疫苗生產(chǎn)、使用和研究有密切關(guān)系。其他流行病學參見附錄A。

臨床表現(xiàn)

出現(xiàn)持續(xù)數(shù)日乃至數(shù)周發(fā)熱(包括低熱)，多汗，乏力，肌肉和關(guān)節(jié)疼痛等。多數(shù)患者淋巴結(jié)、肝、脾和睪丸腫大，少數(shù)患者可出現(xiàn)各種各樣的充血性皮疹和黃疸；慢性期患者多表現(xiàn)為骨關(guān)節(jié)系統(tǒng)損害。具體臨床表現(xiàn)參見附錄B。

實驗室檢查（操作方法見附錄C)實驗室初篩平板凝集試驗(PAT)(見或虎紅平板凝集試驗(RBPT)(見結(jié)果為陽性或可疑。

皮膚過敏試驗(見后24h、48h分別觀察1次，皮膚紅腫浸潤范圍有一次在×及以上(或以上)。

血清學檢查

試管凝集試驗(SAT)(見滴度為1：l00++及以上，過2周-4周后應再檢查，滴度升高4倍及以上）。

補體結(jié)合試驗(CFT)(見滴度1：lO++及以上。

抗人免疫球蛋白試驗(Coomb’s)(見C.滴度l：400++及以上。

分離細菌

從病人血液、骨髓、其他體液及排泄物等任一種培養(yǎng)物中分離到布魯氏菌。3

診斷原則

布魯氏菌病的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸比較復雜，其臨床表現(xiàn)多種多樣，很難以一種癥狀來確定診斷。對人布魯氏菌病的診斷，應是綜合性的。即結(jié)合病人流行病學接觸史，臨床表現(xiàn)和實驗室檢查。4

診斷

疑似病例

應同時符合和中任一項者。

確診病例

疑似病例和或中任何一項者。

隱性感染符合和或中任何一項者，但不具備者。5

鑒別診斷主要應與風濕熱、傷寒、副傷寒、肺結(jié)核、風濕性關(guān)節(jié)炎等做出鑒別診斷（參見附錄D）。

附錄A

（資料性附錄）布魯氏菌病流行病學A．1

貯存宿主及傳染源

布魯氏菌（以下簡稱布氏菌）的貯存宿主很多，已知有六十多種動物（家畜、家禽、野生動物、馴化動物）可以作為布氏菌貯存宿主。布魯氏菌?。ㄒ韵潞喎Q布?。┩仍诩倚蠡蛞吧鷦游镏袀鞑ィS后波及人類，是人畜共患的傳染病。

疫畜是布病的主要傳染源，我國大部分地區(qū)羊是主要傳染源；有些地方牛是主要傳染源；南方有的省份，豬是主要傳染源；鹿和犬是次要傳染源。A．2傳播途徑及傳播因子

布氏菌可以通過體表皮膚粘膜、消化道和呼吸道等侵入機體。人的感染途徑與職業(yè)、飲食、生產(chǎn)生活習慣有關(guān)。

含有布氏菌的各種污染物及食品均可成為傳播媒介，主要有病畜流產(chǎn)物，病畜的乳、肉、內(nèi)臟，被布氏菌污染的皮毛、水、土壤、塵埃等。A．3易感人群

人群對布氏菌普遍易感。人群感染率與傳染源和傳播媒介密切接觸的機會、程度有關(guān)。布病患者可重復感染布氏菌。A．4分布A．職業(yè)

有明顯的職業(yè)性，凡與病畜、染菌畜產(chǎn)品接觸多者發(fā)病率高。牧民、獸醫(yī)、皮毛和乳肉加工人員感染率比一般人高。A．性別

人對布氏菌易感，無性別差異，主要取決于接觸機會。A．年齡

一歲以上各年齡組均有惑染發(fā)病報道。由于青壯年是主要勞動力，接觸病畜頻繁，因而感染率比其他年齡組高。A．季節(jié)

一年四季各月均可發(fā)病。羊種布氏菌流行區(qū)有明顯的季節(jié)性高峰。我國北方牧區(qū)人群發(fā)病高峰在4～5月。夏季剪羊毛和乳制品增多，也可出現(xiàn)一個小的發(fā)病高峰。豬種菌和牛種菌流行區(qū)，發(fā)病季節(jié)性不明顯。A．地區(qū)

一般情況下，牧區(qū)感染率高于農(nóng)區(qū)，農(nóng)區(qū)高于城鎮(zhèn)。牧區(qū)牲畜多，人與之接觸頻繁，感染機會多。牧區(qū)草原遼闊，居住分散，因此病人分布廣，很少集中暴發(fā)和流行。在農(nóng)區(qū)或半農(nóng)半牧區(qū)，以農(nóng)業(yè)生產(chǎn)為主，兼有少量牲畜，感染機會相對減少，但由于居住較密集，發(fā)病易呈點狀暴發(fā)。城市病人多集中在一些皮毛乳肉加工企業(yè)或城郊養(yǎng)畜戶。A．5不同疫區(qū)流行特點由于傳染源的種類、病原菌的種型、毒力和人群免疫水平不同，表現(xiàn)不同的流行病學特點。A．

羊種布氏菌疫區(qū)

羊種布氏菌疫區(qū)的主要傳染源是病羊。羊種菌各生物型對人、畜均有較強的侵襲力和致病力，易引起人、畜間布病暴發(fā)和流行，疫情重。大多出現(xiàn)典型的臨床癥狀和體征。A．牛種布氏菌疫區(qū)

牛種布氏菌疫區(qū)的主要傳染源是病牛。牛種菌生物型較多，毒力不一，有的菌株毒力接近羊種菌強毒株。就總體而言，牛種菌毒力較弱，但有較強的侵襲力，即使是弱毒株，也可使牛發(fā)生暴發(fā)性流產(chǎn)或不孕，嚴重影響畜牧業(yè)發(fā)展。但對人致病較輕，感染率高而發(fā)病率低，呈散發(fā)性，臨床癥狀和體征多不典型；病程短，后遺癥少。A．豬種布氏菌疫區(qū)

豬種布氏菌疫區(qū)主要傳染源是病豬。通常由豬1型和豬3型菌致病，毒力介于羊種菌和牛種菌之間。同一生物型菌株，既有強毒株，也有弱毒株。豬種菌對豬致病力強。對羊、牛致病力較低。對人致病力比牛種菌強，但也是感染率高，發(fā)病率低，除少數(shù)病例病情較重外，大多數(shù)無急性期臨床表現(xiàn)。A．犬種布氏菌疫區(qū)

犬種布氏菌疫區(qū)主要傳染源是病犬。犬種菌除了侵犯犬，引起犬流產(chǎn)外，也可使貓、牛、豬、兔、梅花鹿、鼠等動物感染，產(chǎn)生抗犬種布氏菌抗體。人也可被感染，但癥狀較輕。A．混合型布氏菌疫醫(yī)

兩種或兩種以上布氏菌同時在一個疫區(qū)存在，這與羊、牛在一個牧場放牧或圈舍鄰近有關(guān)。由于彼此接觸密切，菌種可以發(fā)生轉(zhuǎn)移，羊種菌轉(zhuǎn)移到牛多見，也有羊種菌轉(zhuǎn)移到豬；豬種菌、牛種菌也可以轉(zhuǎn)移到羊?；旌闲鸵邊^(qū)流行特點取決于當?shù)卮嬖诘闹饕N。

附錄B

（資料性附錄）布魯氏菌病臨床表現(xiàn)

布病的臨床癥狀多種多樣，病情的差別也很大。潛伏期一般為l周～3周，平均2周，最短僅3天，最長可達1年。B．1

主要癥狀B．發(fā)熱

是布病最常見的臨床表現(xiàn)之一，發(fā)熱多在午后或晚上開始，可見于各期病人，熱型不一、變化多樣，也有典型的波狀熱熱型，多數(shù)為低熱和不規(guī)則熱型。發(fā)熱常伴有寒戰(zhàn)等癥狀。

布病患者在高熱時神志清醒，痛苦也較少，但體溫下降時自覺癥狀惡化，這種高熱與病況相矛盾的現(xiàn)象為布病所特有。B．1。2多汗

也是布病患者的主要癥狀之一，尤其急性期患者，出汗非常嚴重，體溫下降時更為明顯，?？蓾裢敢卵?，使患者感到緊張、煩躁，甚至影響睡眠。B．骨關(guān)節(jié)和肌肉疼痛

骨關(guān)節(jié)和肌肉疼痛也是布病最常見的癥狀，大關(guān)節(jié)多見，常呈游走性疼痛。有的慢性期病人，關(guān)節(jié)強直，活動受限。B．乏力

這一癥狀幾乎為全部病人所具有，尤以慢性期患者為甚。B．頭痛

為急性期的常見癥狀之一。慢陛期患者在疲乏無力的同時，也經(jīng)常伴有頭痛。個別頭痛劇烈者常伴有腦膜刺激癥狀。當大腦皮層功能降低時，往住反應遲鈍，記憶力減退。部分病人可有眼眶內(nèi)疼痛和眼球脹痛等。B．其他癥妝

心悸、神經(jīng)痛、食欲不振、腹瀉、便秘等。B．2主要體征

急性期患者可出現(xiàn)各種各樣的充血性皮疹，多數(shù)患者淋巴結(jié)、肝、脾和睪丸腫大，少數(shù)患者可出現(xiàn)黃疸；慢性期患者多表現(xiàn)為骨關(guān)節(jié)系統(tǒng)損害。B．3臨床分期B．急性期

發(fā)病3個月以內(nèi)，凡有高熱和有明顯其他癥狀、體征（包括慢性期患者急性發(fā)作），并出現(xiàn)較高滴度的血清學反應者。B．亞急性期

發(fā)病在3～6個月，凡有低熱和有其他癥狀、體征（即有慢性炎癥），并出現(xiàn)血清學陽性反應或皮膚變態(tài)反應陽性者。B．慢性期

發(fā)病6個月以上，體溫正常，有布病癥狀、體征，并出現(xiàn)血清學陽性反應或皮膚變態(tài)反應陽性者。B．殘余期

體溫正常，癥狀、體征較固定或功能障礙往往因氣候變化，勞累過度而加重者。

附錄C

（規(guī)范性附錄）布魯氏菌病診斷的特異性實驗室檢查技術(shù)C．1

特異性血清學檢查C．

平板凝集試驗(PAT)C．

器材及試劑

赫德遜凹玻板或一塊清潔無油脂玻璃板，平板凝集抗原，被檢血清，已知陰性和陽性血清，0.2mL吸管或微量加樣器，牙簽或細鐵絲。C．，2操作方法C．備方形潔凈的玻璃板，劃成25個方格，橫數(shù)5格，縱數(shù)5格，第一列各格寫下血清號碼。C．用0.2mL吸管按下列劑量加受檢血清于任何一行的各格中：第一格，第二格0.04mL，第三格，第四格。C．加平板凝集抗原0.03mL于各血清格中，用牙簽或細鐵絲混合，由血清量最小的格混起，每份血清用一根牙簽}昆合即可，用后燒毀；若用細鐵絲混合時，每份血清混合后用酒精棉球擦凈，然后再用作另一份血清。C．混勻后將玻璃板置于酒精燈火焰或凝集反應箱上，均勻加溫，使其達到30℃左右，5min內(nèi)記錄反應結(jié)果。C．每次試驗用陰、陽性血清各1份作對照。C．按下列標準用加號記錄反應強度：

++++：出現(xiàn)大的凝榘片或小的粒狀物，液體完全透明．100%凝集。

+++：有明顯的凝集片，液體幾乎完全透明．7J%凝集。

++：有可見的凝集片，液體不甚透明，50%凝集。

+：液體混濁，只有少量粒狀物，25%凝集。

一：液體均勻混濁。C．平板凝集反應與試管凝集反應的關(guān)系

0.08mL血清量出現(xiàn)凝集相當于試管法1：25的血清稀釋度，相當于1：50，相當于1：100，相當于1：200。C．判定

人血清0.02mL出現(xiàn)++及以上凝集程度判為陽性，0.04mL出現(xiàn)++及以上凝集程度判為可疑。C．虎紅平板凝集試驗(RBPT)C．

器材及試劑

清潔脫脂玻片或有凹型孔的玻片，0.ImL吸管或微量加樣器，牙簽或細鐵絲，虎紅平板凝集抗原，被檢血清。C．操作方法

在玻片上加0.03mL被檢血清，然后加入虎紅平板抗原，搖勻或用牙簽混勻，在5min內(nèi)判定結(jié)果。C．判定

判定凝集程度（一至++++）同平板凝集反應；亦可只分為(+)陽性，（一）陰性兩類。C．試管凝集試驗(SAT)C．

器材及試劑

試管凝集抗原，被檢血清，0.5%的石碳酸生理鹽水，吸管，凝集試管，溫箱和試管架等。C．操作方法C．被檢血清的稀釋：在一般情況下，每份血清用5支小試管(口徑8mm～lOmm)，第一管加入2.3mL石碳酸生理鹽水，第二管不加，第三、四、五管各加。用ImL吸管吸取被檢血清，加入第一管中，混勻?；靹蚝?，以該吸管吸取第一管中血清加入第二管和第三管各0.5mL，以該吸管將第三管混勻，并吸取0.5mL加入第四管，混勻。從第四管吸取加入第五管，混勻。再從第五管吸取0.5ml。棄去。如此稀釋后，從第二管到第五管血清稀釋度分別為1：，1:25，1：50和1:100。C．加入抗原：先以0.5%石碳酸生理鹽水將抗原原液作適當稀釋（一般是作1：10稀釋）。稀釋后的抗原加入各稀釋的血清管（第一管不加，作為血清對照），每管加0.5mL，混勻。加入抗原后第二管至第五管，每管總量ImL，血清稀釋度從第二管至第五管分別為1:25，1:50，1：100和1:200，從第一管再吸出0.5mL，剩ImL。C．對照：陰牲血清對照，血清稀釋后加抗原（與被檢血清對照相似）。陽性血清對照，其血清稀釋到原有滴度，再加抗原，抗原對照，適當稀釋的抗原加石碳酸鹽水。C．判定C．判定比濁管制備：每次試驗須配制比濁管作為判定的依據(jù)。配制方法是：取本次試驗用的抗原稀釋液5mL--lOmIJ，加入等量的%石碳酸鹽水作倍比稀釋，按表C．1配制比濁管。管號抗原稀釋液mL石碳酸鹽水mL清亮度標記1100%++++275%+++350%++425%+50%—C．全部試驗管，對照管及比濁管充分振蕩后置37℃溫箱中20h～22h，取出后放室溫2h，然后以比濁管為標準判定結(jié)果。C．記錄結(jié)果：根據(jù)各管中上層液體的清亮度記錄結(jié)果。特別是so%清亮度(++)對判定結(jié)果關(guān)系較大，一定要與比濁管對比判定。

++++：完全凝集，上層液100%清亮。+++：幾乎完全凝集，上層液75%清亮。++：顯著凝集，液體50%清亮。+：有微量凝集，液體25%清亮。一：無凝集，液體不清亮。確定每份血清滴度是以出現(xiàn)“十+”及以上的凝集現(xiàn)象的最高血清稀釋度。C．抗人免疫球蛋白試驗(Coomb's)C．

器材及試劑

除試管凝集試驗所需的一般器材及試劑外，還需抗人免疫球蛋白血清及普通離心機。C．揉作方法C．試管凝集試驗階段：按C．進行試管凝集試驗。C．抗球蛋白反應階段：選取試管凝集試驗的可疑反應管及全部陰性反應管，記錄管號，經(jīng)4000rlmin離心15min，用生理鹽水反復洗滌3次，然后向各管中加人生理鹽水、一定稀釋度（一般是1:20倍稀釋）的抗人免疫球蛋白血清，混勻，將反應管置37℃溫箱中20h～22h，取出放室溫2h后判定結(jié)果。C．判定：判定結(jié)果的標準，程度均同試管凝集試驗。C．補體結(jié)合試驗【CFI)C．

器材及試劑

37℃水浴箱，普通離心機，普通冰箱，各種容量的吸管，燒瓶，凝集管和試管架，生理鹽水，補體（新鮮豚鼠血清或凍干補體），2%的綿羊紅細胞懸液(2%SRBC)．溶血素，補體結(jié)合抗原，陰性和陽性血清，被檢血清。C．操作方法C．補體滴定：在進行CFT時，必須當天滴定補體，將補體用生理鹽水稀釋為1:20，通常在十支凝集管中分別依次加入不同量的1:20補體稀釋液～O.2mL，然后各管中加入2個單位的抗原液0.2mL，再用生理鹽水把各管補至，混勻后放37℃水浴中30min，再加的溶血素(2個單位)和2%綿羊紅細胞，混勻，置37℃水浴中30min，判定結(jié)果（見表C．2）。表C．2補體滴定程序和結(jié)果

ml)管號12345678910對照抗原對照補體對照溶血素1:20補體量--2單位抗原量--生理鹽水量37℃水浴30分鐘2單位溶血素量

2%SRBC量

37℃水浴30分鐘結(jié)果舉例++++++++++++++++++++++++++++++++++----

上例中產(chǎn)生完全溶血且含補體量最少管為第八管，定為一個恰定單位，前一管（即第七管）為一個完全單位。在正式試驗時采用兩個完全單位的補體量，按式(C．1)計算出補體稀釋倍數(shù)X。20:2Y—X:………

…一

式中：Y——1個完全單位補體量。X一墊薈孚一號，Y=O．08

x—番磊一25

即補體作1:25稀釋。C．溶血素及抗原滴定：在進行CFT時溶血素和抗原亦需滴定，但不必在試驗當天進行；而且，在購到此二試劑時出售單位（或提供單位）都已滴定了，需用單位按說明稀釋即可。C．被檢血清滅活

人血清滅活補體的溫度是56℃，時間為30min。C．本試驗

滅活后的被檢血清從1:5稀釋開始，然后做倍比稀釋，每管中稀釋血清量為，再向各管中加2個單位抗原0.2mL，2個單位補體．混勻，置37℃水浴中30min，取出后，向各管加的溶血系，再放37℃水浴中作用30min，判定結(jié)果（見表C．3）。表C3本試驗程序

ml，成分血清稀釋度血清對照補體及抗原對照1:51:101:201:401:801:1601:5單位單位單位被檢血清

2單位抗原

2單位補體生理鹽水

37℃水浴30分鐘溶血系37℃水浴30分鐘結(jié)果++++++++++++++--++++-C．判定

++++：無溶血，SRBC沉于管底或懸浮。+++：25%溶血。++：50%溶血。+：75%溶血。-:100%溶血。以50%(++)及以上不溶血確定CFT的滴度。為防止判定的錯誤，可配制標準溶血管（見表C．4）。C．2皮膚過敏試驗C．

器材及試劑

布氏菌素，75%酒精棉球，1毫升注射器，皮內(nèi)注射針頭，測量尺。C．操作方法于被檢者前臂內(nèi)側(cè)前1／3處，用酒精棉球消毒后，晾干，皮內(nèi)注射0.ImL布氏菌素，在注射后24h和48h作兩次觀察。C．判定

兩次觀察，以反應最強的結(jié)果為準，注射局部出現(xiàn)充血，浸潤為2.及以上（或以反應面積≥4.Ocn12）判為陽性。C．3分離布氏茵C．血培養(yǎng)C．

雙相培養(yǎng)基培養(yǎng)

從可疑病人靜脈無菌取血渡4mL～5mL，在酒精燈火焰附近將血液注入5～6支含雙相培養(yǎng)基的中試管內(nèi)，或2～4只含雙相培養(yǎng)基燒瓶中，輕輕混合傾斜，使被檢血液均勻分布在瓊脂斜面上，置37℃溫箱培養(yǎng)（如果懷疑病人是牛種布氏菌感染時，應有一半標本置C02環(huán)境中培養(yǎng)），三天后觀察結(jié)果。如未見布氏菌生長，可按上法再傾斜，使血液均勻涂在瓊脂斜面上，繼續(xù)培養(yǎng)，每隔一天觀察一次，如有可疑布氏菌落，可用鉑金耳勾出接種到瓊脂試管培基，獲得純培養(yǎng)，進一步作布氏菌鑒定，血培養(yǎng)30天仍不出菌，可定為陰性。C．接種未受精雞卵法

取新鮮雞蛋兩個，把雞蛋放在固定架上，鈍端向上，以碘酒和酒精依次消毒蛋殼，用眼科手術(shù)刀在頂部穿一小孔，用三厘米長注射針頭將被檢血液徐徐注入卵黃中，每個雞蛋接種血液0.2mL，立即用滅菌石蠟將孔密封，置37℃溫箱中培養(yǎng)，五天后把接種血液的雞蛋無菌打開，用滅菌的毛細管把接種血液部分的卵黃及蛋清吸出0.5mL～O.6mL，接種2～3支斜面培養(yǎng)基上，置37℃培養(yǎng)，2～3天觀察1次，15天仍不見可疑菌落生長，定為陰性。C．尿液培養(yǎng)

用滅菌的導尿管將尿液導出放入滅菌容器中，為濃縮細菌，提高檢出率，可在尿液中加入1%～3%的高價布氏菌免疫血清，混合后，置37℃溫箱2h，高速離心沉淀，取沉淀物接種在選擇性培基上培養(yǎng)，或注射豚鼠，用生物學方法分離布氏菌。C．其他病原材料培養(yǎng)

由乳、腦脊液、關(guān)節(jié)液和滑囊液分離布氏菌，將液體標本無菌接種到瓊脂斜面上，或培養(yǎng)平板上，參照血培養(yǎng)法觀察結(jié)果，15天仍無可疑菌生長，定為陰性。C．生物學分離布氏茵法

為了提高對布氏菌的檢出率和從污染的材料中分離布氏菌，將被檢材料（固體標本加滅菌的生理鹽水研磨成漿液態(tài)）經(jīng)皮下或腹腔