超級NK-NK2013-S4L的詳細(xì)介紹

TBDTMNK2013-S細(xì)胞活化擴(kuò)增試劑盒套裝說明書（4L體系）產(chǎn)品特色：1.本產(chǎn)品適用于新鮮提取的抗凝外周血或抗凝臍帶血NK細(xì)胞體外擴(kuò)增；2.本產(chǎn)品適用于凍存后PBMC的NK細(xì)胞體外擴(kuò)增；3.當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)起始量為9×107個PBMC時（約100ml抗外周凝血或抗凝臍帶血NK細(xì)胞可擴(kuò)增培養(yǎng)體系至6-8L?！井a(chǎn)品編號及規(guī)格】產(chǎn)品編號：TBDNK2013-S-KIT規(guī)格：1療程/套【試劑材料清單】?試劑盒組成序號名稱貨號規(guī)格保存溫度1試劑ⅠTBDNK2013-S-20℃至-80℃避光保存2試劑Ⅱ3試劑ⅢⅢ-1至Ⅲ-5共5支，混合使用4試劑Ⅳ5試劑Ⅴ4支6試劑Ⅵ7試劑Ⅶ8試劑Ⅸ3支9活化培養(yǎng)基添加物天津市灝洋生物制品科技有限責(zé)任公司◆TIANJINHAOYANGBIOLOGICALMANUFACTURECO.,LTD-1-天津濱海高新區(qū)華苑產(chǎn)業(yè)區(qū)（環(huán)外）海泰華科一路15號潤豐科技2幢技術(shù)服務(wù)Tel:158221211191582269111913920701119◆FaxQQ:3877454402572212016◆E-mail:g163.com灝洋生物TBDsciences?配套試劑及耗材序號名稱貨號規(guī)格保存溫度1樣本密度分離液（醫(yī)用級）HY2015200mlRT2PBSPB2004Y500mlRT3免疫細(xì)胞培養(yǎng)基ANDL-TBD-G2-8℃避光保存4PBMC高效離心管RT52.5L體系懸浮細(xì)胞培養(yǎng)袋N2500TBD2個RT【試劑配制】培養(yǎng)瓶包被液18mlPBS（產(chǎn)品貨號：PB2004Y）加入本試劑盒1支試劑Ⅰ、1支試劑Ⅱ。1.增殖培養(yǎng)基每1000ml免疫細(xì)胞無血清培養(yǎng)基（產(chǎn)品貨號：ANDL-TBD-G）中加入本試劑盒1支試劑Ⅴ。2.活化培養(yǎng)基的配制配制完增殖培養(yǎng)基后，取出500ml增殖培養(yǎng)基，加入本試劑盒1支試劑Ⅳ、1支活化培養(yǎng)基添加物?！救〔摹渴褂靡淮涡载?fù)壓采血管抽取自體外周血50ml。（建議使用枸櫞酸鈉或肝素抗凝劑）或臨床獲得健康新生兒臍帶血。（建議使用枸櫞酸鈉或肝素抗凝劑）【NK細(xì)胞的培養(yǎng)（2L體系）】培養(yǎng)前：T175培養(yǎng)瓶中加入包被液，2-8℃冰箱過夜，或置于37℃培養(yǎng)箱中至少包被2h。1.取出2支高效離心管，分別加入15ml樣本密度分離液，200g離心1min，確保離心后隔片下充滿分離液，隔片上有0.5-1cm高度分離液。小心將25ml抗凝血緩慢沿管壁加至分離天津市灝洋生物制品科技有限責(zé)任公司◆TIANJINHAOYANGBIOLOGICALMANUFACTURECO.,LTD-2-天津濱海高新區(qū)華苑產(chǎn)業(yè)區(qū)（環(huán)外）海泰華科一路15號潤豐科技2幢技術(shù)服務(wù)Tel:158221211191582269111913920701119◆FaxQQ:3877454402572212016◆E-mail:g163.com灝洋生物TBDsciences液界面上，確保血液及分離液之間有明顯界面（每管可加15-25ml血液，若超過25ml，則分管）。600g，離心30min（也可根據(jù)實際情況進(jìn)行調(diào)節(jié)注意慢升慢降。2.離心后可觀察從上至下分為4層，淡黃色血漿層，白色環(huán)狀PBMC層，分離液層，紅細(xì)胞層。用吸管吸取血漿層，做滅活處理。滅活步驟：置于水浴鍋中56℃,30min；然后-20℃靜置10min；最后800g，離心15min，保留上清棄去沉淀，短期保存于4℃?zhèn)溆?，長期保存請置于-20℃~-80℃環(huán)境下。3.用吸管吸取PBMC細(xì)胞層至50ml離心管中，為盡量獲得更多細(xì)胞，建議隔片以上部分全部吸取，注意不要吸到紅細(xì)胞。在PBMC離心管中加入PBS混勻（PBS量要多于吸取的PBMC體積600g，離心10min。棄去上清，加入PBS復(fù)溶洗滌，300g，離心10min。4.分離出的PBMC用未加任何因子的免疫細(xì)胞無血清培養(yǎng)基（產(chǎn)品貨號：ANDL-TBD-G）配制成細(xì)胞懸液40ml，加入1整套試劑Ⅲ（5支全部加入加入1支試劑Ⅸ。將上述所有液體加入到棄掉包被液的培養(yǎng)瓶中，加入8ml自體血漿，置于飽和濕度、37℃、5.0%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。（注：建議接種密度為1-3×106個/ml，如分離后細(xì)胞數(shù)少，則相對應(yīng)減少培養(yǎng)基及血漿使用量，但是活化因子添加量不變。）度維持在1×106個/ml，有利于細(xì)胞的生長。加入40mlNK活化培養(yǎng)基，加入5ml血漿，加入1支試劑Ⅸ,1支試劑Ⅵ。加入70mlNK活化培養(yǎng)基，加入5ml血漿，加入1支試劑Ⅸ,1支試劑Ⅶ。將培養(yǎng)瓶中細(xì)胞完全吹打下來，輕輕搖勻瓶內(nèi)培養(yǎng)液，無菌取出0.5ml-1ml細(xì)胞液計數(shù)，視細(xì)胞生長狀態(tài)及細(xì)胞密度，建議加入剩余自體血漿并補(bǔ)加剩余的活化培養(yǎng)基。轉(zhuǎn)移到1個培養(yǎng)袋（產(chǎn)品貨號：N2500TBD）。天津市灝洋生物制品科技有限責(zé)任公司◆TIANJINHAOYANGBIOLOGICALMANUFACTURECO.,LTD-3-天津濱海高新區(qū)華苑產(chǎn)業(yè)區(qū)（環(huán)外）海泰華科一路15號潤豐科技2幢技術(shù)服務(wù)Tel:158221211191582269111913920701119◆FaxQQ:3877454402572212016◆E-mail:g163.com灝洋生物TBDsciences圖示：活化過程中，PBMC會逐漸呈聚團(tuán)生長，有利于后期細(xì)胞增殖。輕輕搖勻袋內(nèi)培養(yǎng)液，無菌取出0.5ml-1ml細(xì)胞液計數(shù)，視細(xì)胞生長狀態(tài)及細(xì)胞密度，建議培養(yǎng)袋補(bǔ)加增殖培養(yǎng)基500ml。輕輕搖勻袋內(nèi)培養(yǎng)液，無菌取出0.5ml-1ml細(xì)胞液計數(shù)，視細(xì)胞生長狀態(tài)及細(xì)胞密度，建議培養(yǎng)袋補(bǔ)加增殖培養(yǎng)基1000ml。（細(xì)胞總量達(dá)到20億時進(jìn)行此項操作）輕輕搖勻袋內(nèi)培養(yǎng)液，無菌取出0.5ml-1ml細(xì)胞液計數(shù)，細(xì)胞總量達(dá)到40億時，將一半的培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移至新的2L培養(yǎng)袋中，每個培養(yǎng)袋補(bǔ)加增殖培養(yǎng)基1000ml。此時取樣做細(xì)菌、真菌、支原體、內(nèi)毒素檢測。收集NK細(xì)胞懸液4000ml，1500rpm×5min離心后棄去上清液，250ml離心管集2管每管生理鹽水200ml洗滌（1500rpm×8min）1次，再用50ml離心管生理鹽水100ml洗滌（1200rpm×5min）1次，按照100ml生理鹽水+8ml20%人血清白蛋白重懸細(xì)胞，封裝好后送病房，同時留樣封存以備日后檢測。注：分批收獲細(xì)胞擴(kuò)袋培養(yǎng)時，可收獲一部分的細(xì)胞，剩余的部分繼續(xù)補(bǔ)加增殖培養(yǎng)基進(jìn)行擴(kuò)增（原則為按照細(xì)胞密度補(bǔ)液客戶可按照方案分批收集或一次性收集。1.使用前請仔細(xì)閱讀本試劑盒說明書，并嚴(yán)格按照說明書執(zhí)行操作。2.本試劑盒必須按規(guī)定溫度保存，不可反復(fù)凍融。試劑在使用前需解凍，并充分混勻，不可劇烈震蕩。3.可視細(xì)胞生長的實際狀況適當(dāng)調(diào)整補(bǔ)液時間和用量。天津市灝洋生物制品科技有限責(zé)任公司◆TIANJINHAOYANGBIOLOGICALMANUFACTURECO.,LTD-4-天津濱