微生物檢驗(yàn)基本知識(shí)-實(shí)驗(yàn)室生物安全

實(shí)驗(yàn)室生物安全概述

一、實(shí)驗(yàn)室生物安全與保障

（一）實(shí)驗(yàn)室生物安全的概念和防護(hù)措施1．實(shí)驗(yàn)室生物安全的概念

：實(shí)驗(yàn)室生物安全是指用以防止實(shí)驗(yàn)室發(fā)生病原體或毒素意外暴露及釋放的防護(hù)原則、技術(shù)及實(shí)踐。實(shí)驗(yàn)室生物安全概述

?安全設(shè)備和個(gè)人防護(hù)（一）實(shí)驗(yàn)室生物安全的概念和防護(hù)措施2．實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)措施?實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)與建造?實(shí)驗(yàn)室生物安全管理規(guī)章制度?安全操作規(guī)程生物安全柜實(shí)驗(yàn)室生物安全概述

1.概念：即單位和個(gè)人為防止病原體或毒素丟失、被竊、濫用、轉(zhuǎn)移或有意釋放而采取的安全措施。2.措施：

?

病原體和毒素的貯存位置、接觸人員資料、使用記錄、運(yùn)送記錄、對(duì)材料進(jìn)行滅活和（或）丟棄等情況的最新調(diào)查結(jié)果；

?相關(guān)人員的作用和責(zé)任；

?必要時(shí)公共衛(wèi)生和安全保障管理部門在發(fā)生違反安全保障事件時(shí)的介入程度、作用和責(zé)任等；

?調(diào)查并糾正違規(guī)行為。（二）實(shí)驗(yàn)室生物安全保障的概念和措施二、微生物危害評(píng)估進(jìn)行微生物危害度評(píng)估最有用的工具之一就是列出微生物的危險(xiǎn)度等級(jí)。適當(dāng)時(shí)還應(yīng)考慮以下因素：

?病原微生物的致病性和感染量；?暴露的潛在后果；?自然傳播途徑；?實(shí)驗(yàn)室操作所致的其他感染途徑；?病原微生物在環(huán)境中的穩(wěn)定性；實(shí)驗(yàn)室生物安全概述

?所操作病原微生物的濃度；?病原微生物的宿主；?從動(dòng)物研究和實(shí)驗(yàn)室感染報(bào)告或臨床報(bào)告中得到的信息；?擬進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)操作（如超聲處理、離心等）；?可能會(huì)擴(kuò)大微生物的宿主范圍或改變病原微生物對(duì)于已知有效治療方案敏感性的所有基因技術(shù)；?當(dāng)?shù)厥欠衲苓M(jìn)行有效的預(yù)防或治療。實(shí)驗(yàn)室生物安全概述

三、病原微生物的分類管理實(shí)驗(yàn)室生物安全概述

國(guó)內(nèi)外病原微生物危害程度分類比較《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》(GB19489-2004)WHO《生物安全手冊(cè)》(第三版，2004)四類在通常情況下不會(huì)引起人類或者動(dòng)物疾病的微生物。

Ⅰ級(jí)（低個(gè)體危害，低群體危害）不會(huì)導(dǎo)致健康工作者和動(dòng)物致病的細(xì)菌、真菌、病毒和寄生蟲等生物因子。Ⅰ級(jí)（無(wú)或極低的個(gè)體和群體危險(xiǎn)）不太可能引起人或動(dòng)物致病的微生物。

三類能夠引起人類或者動(dòng)物疾病，但一般情況下對(duì)人、動(dòng)物或者環(huán)境不構(gòu)成嚴(yán)重危害，傳播風(fēng)險(xiǎn)有限，實(shí)驗(yàn)室感染后很少引起嚴(yán)重疾病，并且具備有效治療和預(yù)防措施的微生物。

Ⅱ級(jí)(中等個(gè)體危害，有限群體危害)能引起人或動(dòng)物發(fā)病，但一般情況下對(duì)健康工作者、群體、家畜或環(huán)境不會(huì)引起嚴(yán)重危害的病原微生物。實(shí)驗(yàn)室感染不導(dǎo)致嚴(yán)重疾病，具備有效治療和預(yù)防措施，并且傳播風(fēng)險(xiǎn)有限。

Ⅱ級(jí)（個(gè)體危險(xiǎn)中等，群體危險(xiǎn)低）病原微生物能夠?qū)θ嘶騽?dòng)物致病，但對(duì)實(shí)驗(yàn)室工作人員、社區(qū)、牲畜或環(huán)境不易導(dǎo)致嚴(yán)重危害。實(shí)驗(yàn)室暴露也許會(huì)引起嚴(yán)重感染，但對(duì)感染有有效的預(yù)防和治療措施，并且疾病傳播的危險(xiǎn)有限。管理?xiàng)l例 通用要求 WHO安全手冊(cè)實(shí)驗(yàn)室生物安全概述

二類能夠引起人類或者動(dòng)物嚴(yán)重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動(dòng)物與人、動(dòng)物與動(dòng)物間傳播的微生物。Ⅲ級(jí)（高個(gè)體危害，低群體危害）能引起人類或動(dòng)物嚴(yán)重疾病，或造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失，但通常不能因偶然接觸而在個(gè)體間傳播，或能使用抗生素、抗寄生蟲藥治療的病原微生物。Ⅲ級(jí)（個(gè)體危險(xiǎn)高，群體危險(xiǎn)低）病原微生物通常能引起人或動(dòng)物的嚴(yán)重疾病，但一般不會(huì)發(fā)生感染個(gè)體向其他個(gè)體的傳播，并且對(duì)感染有有效的預(yù)防和治療措施。管理?xiàng)l例 通用要求 WHO安全手冊(cè)實(shí)驗(yàn)室生物安全概述

一類能夠引起人類或動(dòng)物嚴(yán)重疾病的微生物，以及我國(guó)尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的微生物。

Ⅳ級(jí)(高個(gè)體危害，高群體危害)能引起人類或動(dòng)物非常嚴(yán)重的疾病，一般不能治愈，容易直接或間接或因偶然接觸在人與人，人與動(dòng)物，動(dòng)物與動(dòng)物間傳播的病原微生物。Ⅳ級(jí)（個(gè)體和群體的危險(xiǎn)均高）病原微生物通常能引起人或動(dòng)物的嚴(yán)重疾病，并且很容易發(fā)生個(gè)體之間的直接或間接傳播，對(duì)感染一般沒有有效的預(yù)防和治療措施。管理?xiàng)l例 通用要求 WHO安全手冊(cè)實(shí)驗(yàn)室生物安全概述

四、實(shí)驗(yàn)室生物安全的重要意義實(shí)驗(yàn)室生物安全概述

是建立病原微生物研究安全平臺(tái)的需要是生物防護(hù)（國(guó)防）的需要是出入境檢驗(yàn)檢疫的需要是動(dòng)物防疫的需要是傳染病的預(yù)防與控制的需要是醫(yī)院感染控制的需要GOARN監(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò)離不開生物安全實(shí)驗(yàn)室生物安全實(shí)驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范

一、實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)入要求1.禁止非工作人員進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。參觀實(shí)驗(yàn)室等特殊情況須經(jīng)實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人批準(zhǔn)后方可進(jìn)入。2.實(shí)驗(yàn)室的門應(yīng)保持關(guān)閉。3.BSL-2實(shí)驗(yàn)室入口處應(yīng)貼有國(guó)際通用的生物危害警告標(biāo)志，其下部應(yīng)注明實(shí)驗(yàn)室的生物安全等級(jí)、實(shí)驗(yàn)室名稱、負(fù)責(zé)人姓名和聯(lián)系電話等有關(guān)信息

4.進(jìn)入動(dòng)物房應(yīng)當(dāng)經(jīng)過特殊批準(zhǔn)，禁止將無(wú)關(guān)動(dòng)物帶入實(shí)驗(yàn)室。二、實(shí)驗(yàn)室操作要求1.所有實(shí)驗(yàn)操作要按盡量減少微小液滴和氣溶膠產(chǎn)生的方式來(lái)進(jìn)行。2.以移液器吸取液體，禁止舔標(biāo)簽。3.應(yīng)限制使用皮下注射針頭和注射器。4.盡可能應(yīng)用一次性注射器，用過的針頭禁止折彎、剪斷、折斷、重新蓋帽，禁止用手從注射器上取下針頭。用過的針頭必須放入防穿透的銳器盒中。非一次性利器必須放入銳器盒中并運(yùn)送到特定區(qū)域進(jìn)行高壓滅菌。5.禁止用手處理破碎的玻璃器具。裝有污染針、利器及破碎玻璃的容器在丟棄之前必須高壓滅菌。二、實(shí)驗(yàn)室操作要求6.實(shí)驗(yàn)室必須制定并嚴(yán)格執(zhí)行處理溢出物的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。7.在處理完感染性實(shí)驗(yàn)材料和動(dòng)物以及其他有害物質(zhì)后，脫掉手套后及離開實(shí)驗(yàn)室前，都必須洗手。8.禁止在實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)進(jìn)食、飲水、吸煙、處理隱形眼鏡、化妝及儲(chǔ)存食物。9.每天工作結(jié)束后應(yīng)消毒工作臺(tái)面，具有潛在危害性的材料濺出后要隨時(shí)消毒。二、實(shí)驗(yàn)室操作要求10.所有培養(yǎng)物、廢棄物在運(yùn)出實(shí)驗(yàn)室之前必須進(jìn)行高壓滅菌。需運(yùn)出實(shí)驗(yàn)室滅菌的物品必須放在專用密閉防漏的容器內(nèi)儲(chǔ)存、運(yùn)輸。11.實(shí)驗(yàn)室的文件紙張只有保證未受到污染才可帶出。12.將生物安全程序納入標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范或生物安全手冊(cè)，由實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人專門保管，工作人員在進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室之前要閱讀規(guī)范并按照規(guī)范要求操作。13.工作人員要接受有關(guān)的潛在危險(xiǎn)知識(shí)的培訓(xùn)，掌握預(yù)防暴露以及暴露后的處理程序。每年要接受一次最新的培訓(xùn)。三、感染性物質(zhì)的操作與處理

（一）感染性物質(zhì)的操作

1.標(biāo)本采集：必須有掌握相關(guān)職業(yè)知識(shí)和操作技能的工作人員進(jìn)行采集，并根據(jù)采集的標(biāo)本中可能含有病原微生物的危害程度而采取相應(yīng)的個(gè)人防護(hù)。2.標(biāo)本運(yùn)送：采集的標(biāo)本應(yīng)采取防止污染工作人員、患者及環(huán)境的方式在醫(yī)療機(jī)構(gòu)內(nèi)運(yùn)送。（一）感染性物質(zhì)的操作3.標(biāo)本接收和打開：需要接收大量標(biāo)本的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)設(shè)專門的房間或空間。標(biāo)本的內(nèi)層容器應(yīng)在生物安全柜內(nèi)打開，并備好消毒劑。

（一）感染性物質(zhì)的操作

4.血清分離：操作時(shí)應(yīng)戴手套并注意眼睛和黏膜的防護(hù)。

5.感染性物質(zhì)凍干管的開啟和儲(chǔ)存：凍干管的開啟應(yīng)在生物安全柜中進(jìn)行。首先清潔外表面，在管上靠近棉花或纖維塞的中部銼一痕跡，用一團(tuán)酒精浸泡的棉花將管包起來(lái)以保護(hù)雙手，然后從銼痕處打開。將頂部小心移去并按污染材料處理。緩慢向管中加入液體重懸凍干物，避免出現(xiàn)泡沫。（二）暴露的處理

1．銳器傷及其他損傷：受傷人員應(yīng)立即停止工作，脫防護(hù)服；清洗雙手和受傷部位，如有傷口，應(yīng)當(dāng)在傷口旁端輕輕擠壓，盡可能擠出損傷處的血液，再用洗手液和流動(dòng)水沖洗，禁止進(jìn)行傷口的局部擠壓；受傷部位的傷口沖洗后，使用皮膚消毒劑，如75%乙醇或者0.5%碘伏進(jìn)行消毒，必要時(shí)進(jìn)行醫(yī)學(xué)處理；應(yīng)記錄受傷原因及相關(guān)微生物，并保留完整的醫(yī)療記錄。（二）暴露的處理

2．潛在感染性物質(zhì)的食入

：應(yīng)立即脫防護(hù)服并進(jìn)行醫(yī)學(xué)處理，要報(bào)告食入材料的特性和暴露細(xì)節(jié)，并保留完整的醫(yī)療記錄。3．潛在危險(xiǎn)性氣溶膠釋放：所有人員必須立即撤離現(xiàn)場(chǎng)，并及時(shí)通知實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人和生物安全負(fù)責(zé)人，暴露者接受醫(yī)學(xué)咨詢。應(yīng)張貼“禁止進(jìn)入”的標(biāo)志，待氣溶膠排出、粒子沉降（約1小時(shí)）后方可入內(nèi)。清除污染時(shí)應(yīng)穿戴適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)裝備。（二）暴露的處理4.潛在感染性物質(zhì)溢出：處理溢出的人員必須穿防護(hù)服，戴手套，必要時(shí)需對(duì)面部和眼睛進(jìn)行保護(hù)。首先用布或紙巾覆蓋，由外圍向中心傾倒消毒劑，作用一定時(shí)間（約30分鐘）后，將布、紙巾以及破損物品清理掉，玻璃碎片應(yīng)用鑷子或硬的厚紙板等工具清理并置于銳器盒中，切勿直接用手，以免刺破皮膚。再用消毒劑擦拭污染區(qū)域。用于清理的布、紙巾、抹布及厚紙板應(yīng)放在盛放污染性廢棄物的容器內(nèi)，污染的文件（包括記錄）復(fù)制后，將原件丟入放污染物廢棄物的容器。（二）暴露的處理5．離心管破碎：

如果正在運(yùn)行時(shí)非封閉離心桶的離心機(jī)內(nèi)盛有潛在感染性物質(zhì)的離心管發(fā)生破裂，應(yīng)關(guān)閉機(jī)器電源，停止后密閉離心桶約30分鐘，待氣溶膠沉降后開蓋。

若離心機(jī)停止時(shí)發(fā)現(xiàn)離心管破碎，應(yīng)立即蓋上離心機(jī)，密閉30分鐘。隨后操作都應(yīng)戴結(jié)實(shí)手套。玻璃碎片用鑷子等工具清除，所有破碎的離心管、玻璃碎片、離心桶、十字軸和轉(zhuǎn)子都應(yīng)放在無(wú)腐蝕性、已知對(duì)相關(guān)微生物具有殺滅活性的消毒劑內(nèi)，消毒30分鐘。

未破損的帶蓋離心管應(yīng)放在另一裝有消毒劑的容器內(nèi)，然后回收。離心機(jī)內(nèi)腔應(yīng)用適當(dāng)濃度的同種消毒劑反復(fù)擦拭，然后用水沖洗并干燥。（三）感染性物質(zhì)的運(yùn)輸

感染性物質(zhì)運(yùn)輸要求按內(nèi)層、中層、外層三層進(jìn)行包裝。（四）感染性廢棄物的處理

感染性廢棄物處理的首要原則是必須在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)清除污染后丟棄。高壓蒸汽滅菌是清除污染時(shí)首選的方法。所有感染性廢棄物都應(yīng)裝入可高壓滅菌的黃色塑料袋，并置于防滲漏的容器內(nèi)進(jìn)行高壓滅菌后，放到運(yùn)輸容器內(nèi)運(yùn)輸至焚燒爐。（四）感染性廢棄物的處理

每個(gè)工作臺(tái)應(yīng)放置盛放廢棄物的容器、盤子或廣口瓶，最好是不易破損的容器并有生物危害標(biāo)記。實(shí)驗(yàn)過程產(chǎn)生的感染性廢棄物，宜置于盛有適宜消毒液的防碎裂的容器中浸泡，廢棄物應(yīng)保持和消毒液直接接觸狀態(tài)，并根據(jù)消毒劑的種類與特點(diǎn)確定浸泡時(shí)間，

將消毒液及廢棄物分別置于合適的容器中進(jìn)行高壓滅菌或焚燒處理。污染的或可能污染的玻璃碎片、注射針等銳器應(yīng)置于耐扎銳器盒內(nèi)，按以上原則處理。生物安全實(shí)驗(yàn)室與設(shè)備要求

一、實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)水平分級(jí)

《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》（GB19489-2008）根據(jù)生物安全實(shí)驗(yàn)室所操作的生物因子的危害程度及采取的防護(hù)措施，將生物安全實(shí)驗(yàn)室的生物安全防護(hù)水平分為4級(jí)。分級(jí)處理對(duì)象BSL-1對(duì)個(gè)體和群體低危害，不具有對(duì)健康成人、動(dòng)物致病的致病因子。BSL-2對(duì)個(gè)體中等危害，對(duì)群體危害較低，對(duì)人和動(dòng)物有致病性，但對(duì)健康成人、動(dòng)物和環(huán)境不會(huì)造成嚴(yán)重危害。具有有效的預(yù)防和治療措施。BSL-3對(duì)個(gè)體高度危害，對(duì)群體危害程度較高。通過直接接觸或氣溶膠使人傳染上嚴(yán)重的甚至是致命疾病的致病因子，通常有預(yù)防和治療措施。BSL-4對(duì)個(gè)體和群體具有高度危害性，通過氣溶膠途徑傳播或傳播途徑不明，或未知的、高度危險(xiǎn)的致病因子。沒有預(yù)防和治療措施。一、實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)水平分級(jí)

危害等級(jí)生物安全水平實(shí)驗(yàn)室類型實(shí)驗(yàn)室操作安全設(shè)備Ⅰ級(jí)BSL-1（基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)室）基礎(chǔ)的教學(xué)、研究GMT不需要；開放實(shí)驗(yàn)臺(tái)Ⅱ級(jí)BSL-2（基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)室）初級(jí)衛(wèi)生服務(wù)；診斷、研究GMT加防護(hù)服、生物危害標(biāo)志開放實(shí)驗(yàn)臺(tái)，此外需BSC用于防護(hù)可能生成的氣溶膠Ⅲ級(jí)BSL-3（屏障實(shí)驗(yàn)室）特殊的診斷、研究在二級(jí)生物安全防護(hù)水平上增加特殊防護(hù)服、準(zhǔn)入制度、定向氣流BSC和／或其他所有實(shí)驗(yàn)室工作所需要的基本設(shè)備Ⅳ級(jí)BSL-4（高度屏障實(shí)驗(yàn)室）危險(xiǎn)生物因子研究在三級(jí)生物安全防護(hù)水平上增加氣鎖入口、出口淋浴、污染物品的特殊處理Ⅲ級(jí)BSC或Ⅱ級(jí)BSC加正壓服、雙開門高壓滅菌器（穿過墻體）、經(jīng)過濾的空氣與病原微生物危害等級(jí)相對(duì)應(yīng)的生物安全水平、實(shí)驗(yàn)室類型、實(shí)驗(yàn)室操作以及主要安全設(shè)備的要求。

1.清潔區(qū)：為未被病原微生物污染的區(qū)域，包括辦公室、休息室、培養(yǎng)基配制室與試劑儲(chǔ)藏室等，此區(qū)域禁止帶入細(xì)菌檢驗(yàn)標(biāo)本。

2.半污染區(qū)：為可能被病原微生物污染的區(qū)域如緩沖間、工作服放置室、走廊等。

3.污染區(qū)（操作區(qū)）：為已被病原微生物污染的區(qū)域，用于接收臨床標(biāo)本，進(jìn)一步接種、分離培養(yǎng)、鑒定和藥敏試驗(yàn)及結(jié)果報(bào)告等工作。

（一）臨床微生物實(shí)驗(yàn)室布局二、臨床微生物實(shí)驗(yàn)室布局與基本要求

1．BSL-1和BSL-2實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的安全原則

在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)室時(shí)應(yīng)考慮可能造成實(shí)驗(yàn)室安全問題的情況，主要包括：氣溶膠形成處理高濃度微生物節(jié)肢動(dòng)物和嚙齒動(dòng)物的侵?jǐn)_

儀器設(shè)備過多和過度擁擠無(wú)關(guān)人員未經(jīng)允許進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室一些特殊樣品和試劑使用的工作流程（二）實(shí)