2025年高考生物復(fù)習(xí)熱搜題速遞之生物技術(shù)與工程（2024年7月）

第1頁（共1頁）2025年高考生物復(fù)習(xí)熱搜題速遞之生物技術(shù)與工程（2024年7月）一．選擇題（共15小題）1．某研究小組利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)，將綠色熒光蛋白基因（GFP）整合到野生型小鼠Gta3基因一端，如圖1所示。實驗得到能正常表達兩種蛋白質(zhì)的雜合子雌雄小鼠各1只，交配以期獲得Gata3﹣GFP基因純合子小鼠。為了鑒定交配獲得的4只新生小鼠的基因型，設(shè)計了引物1和引物2用于PCR擴增，PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果如圖2所示。下列敘述不正確的是（）A．翻譯時先合成Gata3蛋白，再合成GFP蛋白 B．Gata3基因的啟動子可同時控制GFP基因的表達 C．若用引物1和引物3進行PCR，不利于區(qū)分雜合子和純合子 D．2號條帶的小鼠是野生型，4號條帶的小鼠是Gata3﹣GFP基因純合子2．某同學(xué)擬用限制酶（酶1、酶2、酶3和酶4）、DNA連接酶為工具，將目的基因（兩端含相應(yīng)限制酶的識別序列和切割位點）和質(zhì)粒進行切割、連接，以構(gòu)建重組表達載體。限制酶的切割位點如圖所示，下列分析合理的是（）A．可選擇酶3切割質(zhì)粒和目的基因，再用E.coliDNA連接酶連接 B．可選擇酶2和酶4切割質(zhì)粒和目的基因，再用E.coliDNA連接酶連接 C．可選擇酶2切割質(zhì)粒、酶4切割目的基因，再用E.coliDNA連接酶連接，連接后的片段仍能被酶2和酶4切割 D．為了讓重組表達載體的構(gòu)建合理且高效，可用酶1和酶2切割質(zhì)粒和目的基因，再用T4DNA連接酶連接3．地膜的主要成分是聚乙烯，化學(xué)式是（C2H3）n。殘留在土壤中的地膜難以被降解，為篩選出高效降解地膜的細菌，研究人員進行了如圖所示操作。下列說法正確的是（）A．覆蓋地膜的土壤在富集培養(yǎng)前需要進行濕熱滅菌處理 B．X培養(yǎng)基以聚乙烯為唯一碳源，屬于選擇培養(yǎng)基 C．降解地膜最高效的是細菌①，可挑選①中的菌種接種到Y(jié)培養(yǎng)基上 D．Y培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基，其pH一般調(diào)至中性或弱酸性4．下列對發(fā)酵工程及其應(yīng)用的敘述，正確的有幾項（）①發(fā)酵工程的產(chǎn)品主要包括微生物的代謝物、酶及菌體本身②發(fā)酵工程的中心環(huán)節(jié)是滅菌，特別是發(fā)酵罐必須進行嚴格滅菌③啤酒的工業(yè)化生產(chǎn)過程中，酒精的產(chǎn)生積累主要在后發(fā)酵階段完成④生產(chǎn)檸檬酸需要篩選產(chǎn)酸量高的黑曲霉⑤用單細胞蛋白制成的微生物飼料，可通過發(fā)酵工程從微生物細胞中提取⑥可采用基因工程的方法將血紅蛋白基因轉(zhuǎn)入青霉菌中，提高其對氧的吸收和利用率A．2項 B．3項 C．4項 D．5項5．用氨芐青霉素抗性基因（AmpR）、四環(huán)素抗性基因（TetR）作為標(biāo)記基因構(gòu)建的質(zhì)粒如圖所示。用含有目的基因的DNA片段和用不同限制酶酶切后的質(zhì)粒，構(gòu)建重組質(zhì)粒，并轉(zhuǎn)化到受體菌中。下列敘述不正確的是（）A．若用HindⅢ酶切，通過篩選可得到兩種目的基因連入方向的重組質(zhì)粒 B．若用PvuⅠ酶切，在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上形成的菌落一定不含目的基因 C．若用SphⅠ酶切，使用雙抗生素平板篩選即可獲得正確的重組質(zhì)粒 D．若用ScaⅠ酶切，可通過瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)鑒定重組質(zhì)粒構(gòu)建是否成功6．關(guān)于“DNA的粗提取與鑒定”（實驗Ⅰ）和“DNA片段的擴增及電泳鑒定”（實驗Ⅱ）的實驗操作，下列相關(guān)敘述正確的是（）A．實驗Ⅰ中，取洋蔥研磨液的上清液，加入等體積冷酒精后析出粗提取的DNA B．實驗Ⅰ中，將白色絲狀物直接加入二苯胺試劑中并進行沸水浴，用于鑒定DNA C．實驗Ⅱ中，PCR實驗所需的微量移液器、槍頭、蒸餾水等必須進行高壓滅菌處理 D．實驗Ⅱ中，采用瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR產(chǎn)物，加樣前應(yīng)先接通電源7．黑豬具有耐粗飼、產(chǎn)仔率高、抗病力強等優(yōu)良特征，加之皮薄骨細、肉質(zhì)優(yōu)、口感佳，因此備受消費者喜愛。然而，由于黑豬生長速度慢，幾臨瀕危，急需進行種質(zhì)資源保護。體細胞核移植技術(shù)因具有繼承親本完整性狀、實驗周期短、保種效力強的優(yōu)點而備受關(guān)注。如圖表示培育克隆豬的流程。下列敘述錯誤的是（）A．甲豬卵母細胞去核前，需將其在體外培養(yǎng)至MⅡ期，有助于細胞核全能性的表達 B．過程①可用電刺激或Ca2+載體等方法激活重構(gòu)胚，重構(gòu)胚具有發(fā)育成完整個體的潛力 C．過程②表示胚胎移植，進行該過程前需對代孕乙豬進行同期發(fā)情處理，使生理狀態(tài)相似 D．幼仔豬細胞核遺傳物質(zhì)絕大部分來自黑豬，少部分來自甲豬8．科學(xué)家為了提高某種果實的儲藏時間，從該植物體內(nèi)提取Ers1基因（乙烯受體基因），按照如圖示的流程將Ers1基因重新導(dǎo)回該植物，使該植物原有Ers1基因的翻譯受到抑制。已知限制酶HpaⅠ切割后為平末端，XhoⅠ和BamHⅠ切割后露出的黏性末端堿基序列不同，據(jù)圖分析，提取的目的基因PCR時兩端需添加的限制酶識別序列為（）注：LB、RB分別為T﹣DNA的左邊界、右邊界A．目的基因A端添加HpaⅠ的識別序列，B端添加XhoⅠ的識別序列 B．目的基因A端添加XhoⅠ的識別序列，B端添加HpaⅠ的識別序列 C．目的基因A端添加XhoⅠ的識別序列，B端添加BamHⅠ的識別序列 D．目的基因A端添加BamHⅠ的識別序列，B端添加XhoⅠ的識別序列9．研究發(fā)現(xiàn)三特異性抗體可實現(xiàn)對小鼠多發(fā)性骨髓瘤細胞（MM）的選擇性殺傷，作用機理如圖所示。下列敘述錯誤的是（）A．用單克隆抗體技術(shù)制備的三種抗體融合可得到三特異性抗體 B．篩選該三特異性抗體時需使用制備三特異性抗體時所使用的3種抗原蛋白 C．三特異性抗體通過T細胞的活化并釋放細胞因子提高對MM的殺傷力 D．三特異性抗體與CD28結(jié)合抑制T細胞的死亡從而使T細胞維持一定數(shù)量10．雙層平板法是對噬菌體進行計數(shù)的常用方法。具體做法是：在無菌培養(yǎng)皿中倒入瓊脂含量為2%的培養(yǎng)基凝固成底層平板后，將瓊脂含量為1%的培養(yǎng)基熔化并冷卻至45～48℃，然后加入敏感指示菌和待測噬菌體稀釋懸液的混合液，充分混勻后立即倒入底層平板上形成雙層平板（如圖）。培養(yǎng)一段時間后，在雙層培養(yǎng)基的上層會出現(xiàn)透亮無菌圓形空斑——噬菌斑，根據(jù)噬菌斑的數(shù)目可計算原液中噬菌體的數(shù)量。判斷下列正確的是（）A．配置好的培養(yǎng)基滅菌后還需要添加緩沖液調(diào)節(jié)pH B．利用雙層平板法對T2噬菌體進行計數(shù)，選用的敏感指示菌為酵母菌 C．倒上層平板時需將培養(yǎng)基冷卻到45～48°C最主要的原因是防止下層固體培養(yǎng)基被液態(tài)化 D．與底層平板相比，上層培養(yǎng)基中瓊脂濃度較低的好處是形成的噬菌斑較大，有利于計數(shù)11．自然情況下，牛的生育率很低，畜牧業(yè)生產(chǎn)上可通過如圖兩種途徑實現(xiàn)良種牛的快速大量繁殖。下列相關(guān)敘述正確的是（）A．胚胎移植前需要用外源促性腺激素對雌性牛A與雌性牛B做同期發(fā)情處理 B．途徑1和途徑2過程中都有胚胎的形成，均為有性生殖 C．途徑2獲得的克隆牛的遺傳性狀完全由雌性牛C決定 D．兩個途徑中從雌性牛A卵巢內(nèi)取得的卵母細胞都需要先體外培養(yǎng)至MⅡ再進行操作12．當(dāng)水稻處于高Na+環(huán)境時，細胞膜上的轉(zhuǎn)運蛋白SOS1可借助膜兩側(cè)的H+濃度梯度將Na+排到細胞外。某研究團隊擬構(gòu)建SOS1基因和綠色熒光蛋白基因（GFP）的融合基因轉(zhuǎn)入水稻基因組，以期增強水稻的抗鹽能力。下列敘述錯誤的是（）A．水稻通過轉(zhuǎn)運蛋白SOS1以主動運輸?shù)姆绞綄a+運輸?shù)郊毎?B．將SOS1基因插入到表達載體中不可選用限制酶SmaⅠ和EcoRⅠ C．檢測GFP基因是否以正確方向連接到質(zhì)?？捎靡颋1和R2進行擴增 D．檢測F2和R2的擴增結(jié)果能確定水稻是否為SOS1﹣GFP基因的純合子13．一個抗原往往有多個不同的抗原決定簇，一個抗原決定簇只能刺激機體產(chǎn)生一種抗體，由同一抗原刺激產(chǎn)生的不同抗體統(tǒng)稱為多抗。為研究巨噬細胞的作用機制，科研人員制備了抗巨噬細胞表面標(biāo)志蛋白CD14的單克隆抗體，具體方法如圖。下列說法正確的是（）A．注入小鼠體內(nèi)的抗原純度對單抗純度的影響比對多抗純度的影響大 B．篩選能分泌多種抗體的單個雜交瘤細胞 C．細胞膜的流動性是細胞融合的基礎(chǔ) D．③是用鑒別培養(yǎng)基對融合后的細胞進行篩選，獲得雜交瘤細胞14．生物技術(shù)運用于戰(zhàn)爭或恐怖活動，則后果將更為可怕，下列關(guān)于生物武器及相關(guān)約定的闡述中，錯誤的是（）A．生物武器與常規(guī)武器相比具有傳染性強、不易被發(fā)現(xiàn)、不受自然條件影響等特點 B．生物武器的類型包括致病菌類、病毒類和生化毒劑類等 C．轉(zhuǎn)基因微生物制成的生物武器具有目前人類難以預(yù)防和治療的特點 D．我國對于生物武器，采取的態(tài)度是不發(fā)展、不生產(chǎn)、不儲存生物武器、并反對生物武器及其技術(shù)和設(shè)備的擴散15．毛花貉猴桃為二倍體，果實大，維生素C含量高。軟棗貉猴桃為四倍體，極耐寒，在﹣40℃下可安全越冬。農(nóng)科所想利用如圖技術(shù)流程培育兼具這兩種猝猴桃優(yōu)點的新品種。下列敘述正確的是（）A．新品種是通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)獲得的 B．新品種的體細胞中含有三個染色體組 C．①處用相關(guān)酶的低滲溶液處理可獲得原生質(zhì)體 D．從愈傷組織到新品種的過程需要經(jīng)歷低溫篩選二．解答題（共5小題）16．生物合成基因簇（BGC）是一類非常重要的基因集合類型。普遍存在于各類生物基因組中，并且發(fā)揮著重要的代謝和調(diào)控作用。CRISPR/Cas介導(dǎo)的切割可以發(fā)生在任意的DNA位點。阿卡波糖為一種新型口服降血糖藥，在腸道內(nèi)競爭性抑制葡萄糖甙酶，可降低多糖的分解，減緩吸收。已知阿卡波糖生物合成基因簇全長大約41kb，克隆阿卡波糖生物合成基因簇過程如圖所示?；卮鹣铝袉栴}：（1）現(xiàn)在常用技術(shù)快速特異性地擴增目的基因，利用該方法進行擴增時所需的引物需要滿足的條件是。（2）圖1中Cas9酶能催化鍵水解，在構(gòu)建重組DNA時，通常選擇（填“改造”或“未改造”）的質(zhì)粒作為載體，經(jīng)過酶處理后形成重組DNA。為提高獲得重組DNA的效率，下列需要考慮的因素有（填序號）。A．適宜的外界條件B．目的基因簇和質(zhì)粒濃度C．DNA連接酶活性D．質(zhì)粒的純度（3）酵母菌的純培養(yǎng)一般采用（填培養(yǎng)基名稱）培養(yǎng)基。（4）步驟④進行篩選的方法是：。17．我國科學(xué)家經(jīng)多年研究，篩選出高產(chǎn)紫杉醇的細胞，通過植物細胞培養(yǎng)技術(shù)可獲得大量紫杉醇，實現(xiàn)紫杉醇的工廠化生產(chǎn)。為提高紅豆杉細胞培養(yǎng)物中紫杉醇的產(chǎn)量，研究人員構(gòu)建紫杉醇合成關(guān)鍵酶基因（Bapt基因）的超表達載體，并將其導(dǎo)入紅豆杉細胞，其具體流程如下：（1）Bapt基因的獲?。禾崛〖t豆杉的mRNA，并通過逆轉(zhuǎn)錄得到其cDNA，利用PCR技術(shù)以圖1中的cDNA片段為模板擴增Bapt基因，擴增的前提是，需要的引物有（從A、B、C、D四種引物中選擇）。上述過程中，用1個圖1所示片段產(chǎn)生2個雙鏈等長的子代Bapt基因片段至少要經(jīng)過次循環(huán)。（2）構(gòu)建Bapt基因的超表達載體并將其導(dǎo)入受體細胞：在超量表達Bapt基因載體的構(gòu)建中，所用DNA片段和Ti質(zhì)粒的酶切位點（注：圖中所示限制酶切割后形成的黏性末端各不相同）如圖2所示。強啟動子能被識別并結(jié)合，驅(qū)動基因持續(xù)轉(zhuǎn)錄。Ti質(zhì)粒中的T﹣DNA在培育轉(zhuǎn)基因紅豆杉中的作用是。為使DNA片段能定向插入T﹣DNA中，可用PCR技術(shù)在DNA片段的兩端添加限制酶識別序列，M、N端添加的序列所對應(yīng)的限制酶分別是。（3）構(gòu)建Bapt基因的超表達載體，需用到相應(yīng)限制酶和DNA連接酶，其中連接酶作用的底物為圖3中的（填“A”或“B”或“A和B”）。18．如圖1表示利用生物技術(shù)制備抗X的單克隆抗體的過程；圖2表示培育優(yōu)質(zhì)奶牛的過程。請據(jù)圖回答下列問題：（1）圖1所示過程所用的生物技術(shù)有和，將特定的抗原注入小鼠，需在一定時間內(nèi)間隔注射3次以上，其目的是。（2）將經(jīng)免疫處理后的B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合，獲得能分泌抗X的單克隆抗體的雜交瘤細胞的過程中，至少要進行兩次篩選，一次是通過培養(yǎng)基，篩選出雜交瘤細胞，另一次是通過檢測，篩選出能分泌抗X的單克隆抗體的雜交瘤細胞。（3）培養(yǎng)雜交瘤細胞的培養(yǎng)基提供氣體條件CO2的作用，雜交瘤細胞體外培養(yǎng)過程中，為避免細胞代謝產(chǎn)物積累對細胞自身造成危害，常采取的措施是。（4）圖2中的早期胚胎發(fā)育到階段才可以移植，在移植之前，需要進行質(zhì)量檢查，用某染料鑒定胚胎細胞是否為活細胞時，發(fā)現(xiàn)活胚胎細胞不能被染色，其原因是。為了獲得多個基因型相同的優(yōu)質(zhì)奶牛，可采用的技術(shù)手段是。19．細菌感染一直是食品藥品、生物醫(yī)療等研究領(lǐng)域函待解決的問題。金黃色葡萄球菌是一種常見的食源性致病菌，廣泛分布于自然界。某研究人員以金黃色葡萄球菌為指示菌，探究菌株A對金黃色葡萄球菌的抑菌（會出現(xiàn)抑菌圈）機理?；卮鹣铝袉栴}：（1）研究者制備的指示菌培養(yǎng)基、發(fā)酵培養(yǎng)基均需包含水、蛋白胨、NaCl等成分，其中蛋白胨主要為菌株A提供和維生素。在培養(yǎng)基制備過程中，對培養(yǎng)基進行滅菌常采用的方法是；使用該方法時，為了達到良好的滅菌效果，除了先要把滅菌鍋內(nèi)原有的冷空氣徹底排除外，還需注意的事項有。（2）若菌株A為好氧性微生物，為獲得足夠的發(fā)酵液，則需要采用（填“靜置”或“搖床震蕩”）培養(yǎng)。培養(yǎng)過程中，可采用稀釋涂布平板法計數(shù)活菌數(shù)量，其計數(shù)的原理是。（3）在探究菌株A對金黃色葡萄球菌的抑菌機理時，該研究人員作出了這樣的假設(shè)：菌株A通過分泌某種化學(xué)物質(zhì)來抑制金黃色葡萄球菌的生長繁殖。請利用以下材料設(shè)計實驗證明該假設(shè)成立。實驗材料設(shè)備：含菌株A的發(fā)酵液、無菌水、含金黃色葡萄球菌的指示培養(yǎng)基（已打有大小相同的兩個孔）、離心機等。①完善實驗思路：用離心機，取適量且等量的，分別接種到含有金黃色葡萄球菌的指示培養(yǎng)基的兩個孔中，一段時間后，觀察是否出現(xiàn)抑菌圈。②預(yù)期結(jié)果：。20．農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法存在單個Ti質(zhì)?？沙休d外源基因大小有限的不足，研究人員通過改進轉(zhuǎn)化過程，獲得了抗蟲牧草。表為實驗所用菌株和質(zhì)粒特性，如圖1為質(zhì)粒2的T﹣DNA片段基因和限制酶識別序列分布。實驗農(nóng)桿菌和質(zhì)粒特性菌株E含有利福平抗性基因質(zhì)粒1質(zhì)粒2含有鏈霉素抗性基因和Vir基因，無T﹣DNA片段含有卡那霉素抗性基因，無Vir基因，有T﹣DNA片段備注：利福平、鏈霉素和卡那霉素都是抗生素，Vir基因在特定物質(zhì)下表達，其產(chǎn)物是T﹣DNA片段轉(zhuǎn)入植物細胞的必需物質(zhì)。有無T﹣DNA片段不影響質(zhì)粒其他基因的表達。回答下列問題：（1）愈傷組織獲取。選取牧草種子后，剝?nèi)ネ鈿ぃ?0%乙醇消毒后，用沖洗，接種在培養(yǎng)基中，通過和細胞增殖，獲得愈傷組織。（2）構(gòu)建重組載體和轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌。選用限制酶對質(zhì)粒2進行酶切，目的是保留潮霉素抗性和。用處理農(nóng)桿菌后，將其與質(zhì)粒1和質(zhì)粒2共培養(yǎng)一段時間。將轉(zhuǎn)化后的農(nóng)桿菌接種到含有的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，一段時間后，挑取單克隆培養(yǎng)物，接種到不含抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)一段時間。采用雙質(zhì)粒轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌的優(yōu)點是。（3）轉(zhuǎn)基因愈傷組織的獲取。將重組農(nóng)桿菌分別接種至含乙酰丁香酮（AS）和不含AS的培養(yǎng)基中預(yù)培養(yǎng)，再與愈傷組織共培養(yǎng)3天，然后取少量愈傷組織接種到不同濃度潮霉素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)30分鐘，結(jié)果如表所示。表不同濃度潮霉素對愈傷組織存活率的影響潮霉素濃度（mg/L）020406080不含AS組存活率（%）93862300含AS組存活率（%）939077150由表2可知，AS的作用是，應(yīng)選用的潮霉素濃度作為篩選濃度對所有轉(zhuǎn)化后愈傷組織進行篩選。（4）抗蟲牧草的鑒定。將愈傷組織接種至分化培養(yǎng)基培養(yǎng)至幼苗，經(jīng)煉苗后，轉(zhuǎn)移至移植到土壤中培育，獲得抗蟲牧草甲、乙、丙。取三組牧草的適量葉片細胞，提取總DNA。以抗蟲基因的特異序列和葉肉細胞自身基因的特異序列分別做2對引物，PCR擴增后進行，結(jié)果顯示植株甲、丙成功導(dǎo)入抗蟲基因，組1和組2分別是陰性對照和陽性對照，請在電泳結(jié)果圖2上繪制組1和組2的電泳結(jié)果。植株甲和丙不能立即推廣種植，原因是。

2025年高考生物復(fù)習(xí)熱搜題速遞之生物技術(shù)與工程（2024年7月）參考答案與試題解析一．選擇題（共15小題）1．某研究小組利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)，將綠色熒光蛋白基因（GFP）整合到野生型小鼠Gta3基因一端，如圖1所示。實驗得到能正常表達兩種蛋白質(zhì)的雜合子雌雄小鼠各1只，交配以期獲得Gata3﹣GFP基因純合子小鼠。為了鑒定交配獲得的4只新生小鼠的基因型，設(shè)計了引物1和引物2用于PCR擴增，PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果如圖2所示。下列敘述不正確的是（）A．翻譯時先合成Gata3蛋白，再合成GFP蛋白 B．Gata3基因的啟動子可同時控制GFP基因的表達 C．若用引物1和引物3進行PCR，不利于區(qū)分雜合子和純合子 D．2號條帶的小鼠是野生型，4號條帶的小鼠是Gata3﹣GFP基因純合子【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定；遺傳信息的轉(zhuǎn)錄和翻譯．【專題】模式圖；PCR技術(shù)．【答案】D【分析】PCR技術(shù)是聚合酶鏈式反應(yīng)的縮寫，是一項根據(jù)DNA半保留復(fù)制的原理，在體外提供參與DNA復(fù)制的各種組分與反應(yīng)條件，對目的基因的核苷酸序列進行大量復(fù)制的技術(shù)?！窘獯稹拷猓篈、據(jù)圖可知，因啟動子在左側(cè)，轉(zhuǎn)錄從左向右，而翻譯方向從mRNA的5'﹣3'，Gata3蛋白在GFP蛋白的左側(cè)，所以翻譯時先合成Gata3蛋白，再合成GFP蛋白，A正確；B、分析圖中可知，啟動子在編碼區(qū)的左側(cè)，GFP基因整合Gata3基因的右側(cè)，啟動子啟動轉(zhuǎn)錄后，可以在Gata3基因轉(zhuǎn)錄后，使GFP基因轉(zhuǎn)錄，Gata3基因的啟動子也能控制GFP基因的表達，B正確；C、若用引物1和引物3進行PCR，雜合子和Gata3﹣GFP基因純合子都能擴增出相應(yīng)的片段則不能區(qū)分雜合子和純合子，C正確；D、整合GFP基因后，核酸片段變長，2號個體只有大片段，所以是Gata3﹣GFP基因純合子，4號個體只有小片段，是野生型，D錯誤。故選：D。【點評】本題主要考查PCR和基因表達的相關(guān)內(nèi)容，需要學(xué)生理解掌握PCR和基因表達的過程，并具有一定的識圖能力，屬于理解應(yīng)用層次的考查。2．某同學(xué)擬用限制酶（酶1、酶2、酶3和酶4）、DNA連接酶為工具，將目的基因（兩端含相應(yīng)限制酶的識別序列和切割位點）和質(zhì)粒進行切割、連接，以構(gòu)建重組表達載體。限制酶的切割位點如圖所示，下列分析合理的是（）A．可選擇酶3切割質(zhì)粒和目的基因，再用E.coliDNA連接酶連接 B．可選擇酶2和酶4切割質(zhì)粒和目的基因，再用E.coliDNA連接酶連接 C．可選擇酶2切割質(zhì)粒、酶4切割目的基因，再用E.coliDNA連接酶連接，連接后的片段仍能被酶2和酶4切割 D．為了讓重組表達載體的構(gòu)建合理且高效，可用酶1和酶2切割質(zhì)粒和目的基因，再用T4DNA連接酶連接【考點】基因表達載體的構(gòu)建．【專題】模式圖；基因工程．【答案】D【分析】DNA連接酶：（1）根據(jù)酶的來源不同分為兩類：E.coliDNA連接酶、T4DNA連接酶。這二者都能連接黏性末端，此外T4DNA連接酶還可以連接平末端，但連接平末端時的效率比較低。（2）DNA連接酶連接的是兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵。【解答】解：A、使用酶3切割出的末端為平末端，需用T4DNA連接酶連接，A錯誤；B、使用酶4切割質(zhì)粒和目的基因時會破壞質(zhì)粒上的抗性基因，B錯誤；C、酶2和酶4切割后得到的DNA片段，連接后不能被酶2和酶4識別，C錯誤；D、質(zhì)粒用酶3切割后得到平末端，不利于連接，酶4切割質(zhì)粒和目的基因，會破壞質(zhì)粒上的抗生素抗性基因，不便于篩選，所以質(zhì)粒和目的基因都用酶1和酶2切割后得到黏性末端，用T4DNA連接酶連接后，還能保證目的基因在質(zhì)粒上的連接方向，此重組表達載體的構(gòu)建方案最合理且高效，D正確。故選：D?！军c評】本題考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生理解識記有關(guān)技術(shù)的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節(jié)，能將教材中的知識結(jié)合題中信息進行遷移應(yīng)用。3．地膜的主要成分是聚乙烯，化學(xué)式是（C2H3）n。殘留在土壤中的地膜難以被降解，為篩選出高效降解地膜的細菌，研究人員進行了如圖所示操作。下列說法正確的是（）A．覆蓋地膜的土壤在富集培養(yǎng)前需要進行濕熱滅菌處理 B．X培養(yǎng)基以聚乙烯為唯一碳源，屬于選擇培養(yǎng)基 C．降解地膜最高效的是細菌①，可挑選①中的菌種接種到Y(jié)培養(yǎng)基上 D．Y培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基，其pH一般調(diào)至中性或弱酸性【考點】微生物的選擇培養(yǎng)（稀釋涂布平板法）；選擇培養(yǎng)基．【專題】模式圖；微生物的分離、培養(yǎng)和應(yīng)用．【答案】B【分析】在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基，稱為選擇培養(yǎng)基?！窘獯稹拷猓篈、所需菌種來自土壤，不可對覆蓋地膜的土壤進行濕熱滅菌處理，否則無法獲得菌種，A錯誤；B、結(jié)合題意可知，目標(biāo)菌種為能分解聚乙烯的菌種，故X培養(yǎng)基中以聚乙烯為唯一的碳源，屬于選擇培養(yǎng)基，B正確；C、透明圈越大，說明降解地膜的效果越好，故可挑選⑤中的單菌落接種到Y(jié)培養(yǎng)基上，C錯誤；D、在培養(yǎng)細菌時，一般需要將培養(yǎng)基調(diào)至中性或弱堿性，擴大培養(yǎng)一般用液體培養(yǎng)基，D錯誤。故選：B。【點評】本題主要考查微生物的選擇培養(yǎng)等相關(guān)知識點，意在考查學(xué)生對相關(guān)知識點的理解和掌握。4．下列對發(fā)酵工程及其應(yīng)用的敘述，正確的有幾項（）①發(fā)酵工程的產(chǎn)品主要包括微生物的代謝物、酶及菌體本身②發(fā)酵工程的中心環(huán)節(jié)是滅菌，特別是發(fā)酵罐必須進行嚴格滅菌③啤酒的工業(yè)化生產(chǎn)過程中，酒精的產(chǎn)生積累主要在后發(fā)酵階段完成④生產(chǎn)檸檬酸需要篩選產(chǎn)酸量高的黑曲霉⑤用單細胞蛋白制成的微生物飼料，可通過發(fā)酵工程從微生物細胞中提?、蘅刹捎没蚬こ痰姆椒▽⒀t蛋白基因轉(zhuǎn)入青霉菌中，提高其對氧的吸收和利用率A．2項 B．3項 C．4項 D．5項【考點】發(fā)酵工程在食品、醫(yī)藥、農(nóng)牧業(yè)等工業(yè)上的應(yīng)用；發(fā)酵工程的基本環(huán)節(jié)．【專題】正推法；微生物的分離、培養(yǎng)和應(yīng)用．【答案】B【分析】發(fā)酵工程是指利用微生物的特定功能，通過現(xiàn)代工程技術(shù)，規(guī)模化生產(chǎn)對人類有用的產(chǎn)品，主要包括微生物的代謝物、酶及菌體本身。發(fā)酵工程一般包括菌種的選育，擴大培養(yǎng)，培養(yǎng)基的配制、滅菌，接種，發(fā)酵、產(chǎn)品的分離、提純等方面。發(fā)酵過程一般來說都是在常溫常壓下進行，條件溫和、反應(yīng)安全，原料簡單、污染小，反應(yīng)專一性強，因而可以得到較為專一的產(chǎn)物。發(fā)酵工程在醫(yī)藥、食品、農(nóng)業(yè)、冶金、環(huán)境保護等許多領(lǐng)域都得到廣泛應(yīng)用。【解答】解：①發(fā)酵工程是指利用微生物的特定功能，通過現(xiàn)代工程技術(shù)，規(guī)?；a(chǎn)對人類有用的產(chǎn)品，主要包括微生物的代謝物、酶及菌體本身，①正確；②發(fā)酵工程的中心環(huán)節(jié)是發(fā)酵罐中發(fā)酵，為避免雜菌污染，特別是發(fā)酵罐必須進行嚴格滅菌，②錯誤；③啤酒發(fā)酵過程分為主發(fā)酵和后發(fā)酵兩個階段，酵母菌的繁殖、大部分糖的分解和代謝物的生成都是在主發(fā)酵階段完成的，故啤酒的工業(yè)化生產(chǎn)過程中，酒精的產(chǎn)生積累主要在主發(fā)酵階段完成，③錯誤；④檸檬酸可通過黑曲霉的發(fā)酵制得，生產(chǎn)檸檬酸需要篩選產(chǎn)酸量高的黑曲霉，④正確；⑤用單細胞蛋白制成的微生物飼料，其中的單細胞蛋白是微生物菌體，并不是通過發(fā)酵工程從微生物細胞中提取，⑤錯誤；⑥血紅蛋白具有很強的攜帶氧氣的能力，利用基因工程將血紅蛋白基因轉(zhuǎn)入青霉素生產(chǎn)菌來提高菌體對氧的吸收和利用率，⑥正確。故選：B。【點評】本題考查發(fā)酵工程的相關(guān)知識，要求考生識記發(fā)酵工程的概念和應(yīng)用，意在考查學(xué)生識記所學(xué)知識要點，把握知識間的內(nèi)在聯(lián)系，形成知識網(wǎng)絡(luò)的能力，同時獲取題干信息準確答題。5．用氨芐青霉素抗性基因（AmpR）、四環(huán)素抗性基因（TetR）作為標(biāo)記基因構(gòu)建的質(zhì)粒如圖所示。用含有目的基因的DNA片段和用不同限制酶酶切后的質(zhì)粒，構(gòu)建重組質(zhì)粒，并轉(zhuǎn)化到受體菌中。下列敘述不正確的是（）A．若用HindⅢ酶切，通過篩選可得到兩種目的基因連入方向的重組質(zhì)粒 B．若用PvuⅠ酶切，在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上形成的菌落一定不含目的基因 C．若用SphⅠ酶切，使用雙抗生素平板篩選即可獲得正確的重組質(zhì)粒 D．若用ScaⅠ酶切，可通過瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)鑒定重組質(zhì)粒構(gòu)建是否成功【考點】基因表達載體的構(gòu)建．【專題】模式圖；基因工程．【答案】C【分析】分析題圖，圖中質(zhì)粒內(nèi)，氨芐青霉素抗性基因（AmpR）內(nèi)含有ScaⅠ和PvuⅠ的酶切位點，四環(huán)素抗性基因（TetR）內(nèi)含有HindⅢ、SphⅠ和SalⅠ的酶切位點。【解答】解：A、若用HindⅢ酶切，由于形成的黏性末端相同，因此目的基因可正向連接到質(zhì)粒中，也可反向連接到質(zhì)粒中，即通過篩選可得到兩種目的基因連入方向的重組質(zhì)粒，A正確；B、氨芐青霉素抗性基因（AmpR）內(nèi)含有ScaⅠ和PvuⅠ的酶切位點，若用PvuⅠ酶切，目的基因的插入會破壞氨芐青霉素抗性基因，因此在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上形成的菌落一定不含目的基因，B正確；C、SphⅠ的酶切位點位于四環(huán)素抗性基因中，若用SphⅠ酶切，重組質(zhì)粒中含氨芐青霉素抗性基因（AmpR），而導(dǎo)入空質(zhì)粒的含有氨芐青霉素抗性基因和四環(huán)素抗性基因，因此攜帶目的基因的受體菌在含Amp（氨芐青霉素）的培養(yǎng)基中能形成菌落，在含Tet的培養(yǎng)基中不能形成菌落，故若用SphⅠ酶切，使用雙抗生素平板篩選即可獲得含有正確的重組質(zhì)粒的菌體，而非獲得正確的重組質(zhì)粒，C錯誤；D、若用SalⅠ酶切，目的基因可能正向插入，也可能反向插入，可通過瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)鑒定重組質(zhì)粒構(gòu)建成功與否，D正確。故選：C。【點評】本題考查基因工程的相關(guān)知識，意在考查學(xué)生的識記能力和判斷能力，具備運用所學(xué)知識綜合分析問題的能力是解答本題的關(guān)鍵。6．關(guān)于“DNA的粗提取與鑒定”（實驗Ⅰ）和“DNA片段的擴增及電泳鑒定”（實驗Ⅱ）的實驗操作，下列相關(guān)敘述正確的是（）A．實驗Ⅰ中，取洋蔥研磨液的上清液，加入等體積冷酒精后析出粗提取的DNA B．實驗Ⅰ中，將白色絲狀物直接加入二苯胺試劑中并進行沸水浴，用于鑒定DNA C．實驗Ⅱ中，PCR實驗所需的微量移液器、槍頭、蒸餾水等必須進行高壓滅菌處理 D．實驗Ⅱ中，采用瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR產(chǎn)物，加樣前應(yīng)先接通電源【考點】DNA的粗提取與鑒定；DNA片段的擴增與電泳鑒定．【專題】正推法；基因工程．【答案】A【分析】DNA粗提取和鑒定的原理：（1）DNA的溶解性：DNA和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精溶液，但細胞中的某些蛋白質(zhì)溶于酒精；DNA對酶、高溫和洗滌劑的耐受性。（2）DNA的鑒定：在沸水浴的條件下，DNA遇二苯胺會被呈現(xiàn)藍色。【解答】解：A、實驗Ⅰ中，DNA不溶于酒精溶液，取洋蔥研磨液的上清液，加入等體積冷酒精后析出粗提取的DNA，A正確；B、實驗Ⅰ中，將白色絲狀物溶解在NaCl溶液中，然后再加入二苯胺試劑中并進行沸水浴，用于鑒定DNA，B錯誤；C、微量移液器不需要高壓滅菌處理，C錯誤；D、采用瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR產(chǎn)物，應(yīng)先加樣后接通電源，D錯誤。故選：A。【點評】本題主要考查DNA的粗提取與鑒定和DNA片段的擴增及電泳鑒定等相關(guān)知識點，意在考查學(xué)生對相關(guān)知識點的理解和實際應(yīng)用的能力。7．黑豬具有耐粗飼、產(chǎn)仔率高、抗病力強等優(yōu)良特征，加之皮薄骨細、肉質(zhì)優(yōu)、口感佳，因此備受消費者喜愛。然而，由于黑豬生長速度慢，幾臨瀕危，急需進行種質(zhì)資源保護。體細胞核移植技術(shù)因具有繼承親本完整性狀、實驗周期短、保種效力強的優(yōu)點而備受關(guān)注。如圖表示培育克隆豬的流程。下列敘述錯誤的是（）A．甲豬卵母細胞去核前，需將其在體外培養(yǎng)至MⅡ期，有助于細胞核全能性的表達 B．過程①可用電刺激或Ca2+載體等方法激活重構(gòu)胚，重構(gòu)胚具有發(fā)育成完整個體的潛力 C．過程②表示胚胎移植，進行該過程前需對代孕乙豬進行同期發(fā)情處理，使生理狀態(tài)相似 D．幼仔豬細胞核遺傳物質(zhì)絕大部分來自黑豬，少部分來自甲豬【考點】動物細胞核移植技術(shù)；體外受精和胚胎移植．【專題】模式圖；胚胎工程．【答案】D【分析】動物細胞核移植技術(shù)是將動物一個細胞的細胞核移入去核的卵母細胞中，使這個重新組合的細胞發(fā)育成新胚胎，繼而發(fā)育成動物個體的技術(shù)。【解答】解：A、從甲豬獲取卵母細胞后，需將其在體外培養(yǎng)至MⅡ期，通常用顯微操作法去核，有助于細胞核全能性的表達，A正確；B、過程①可用用物理或化學(xué)方法（如電刺激、Ca2+載體、乙醇、蛋白酶合成抑制劑等）激活重構(gòu)胚，重構(gòu)胚具有發(fā)育成完整個體的潛力，B正確；C、將重構(gòu)胚培養(yǎng)至桑葚胚或囊胚期后，需經(jīng)胚胎移植至代孕母豬子宮內(nèi)進一步發(fā)育為個體。過程②表示胚胎移植，進行該過程前需對代孕乙豬進行同期發(fā)情處理，使生理狀態(tài)相似，C正確；D、幼仔豬細胞核遺傳物質(zhì)來自黑豬，細胞質(zhì)遺傳物質(zhì)來自甲豬，D錯誤。故選：D?！军c評】本題考查胚胎工程的相關(guān)知識，意在考查學(xué)生的識記能力和判斷能力，具備運用所學(xué)知識綜合分析問題的能力是解答本題的關(guān)鍵。8．科學(xué)家為了提高某種果實的儲藏時間，從該植物體內(nèi)提取Ers1基因（乙烯受體基因），按照如圖示的流程將Ers1基因重新導(dǎo)回該植物，使該植物原有Ers1基因的翻譯受到抑制。已知限制酶HpaⅠ切割后為平末端，XhoⅠ和BamHⅠ切割后露出的黏性末端堿基序列不同，據(jù)圖分析，提取的目的基因PCR時兩端需添加的限制酶識別序列為（）注：LB、RB分別為T﹣DNA的左邊界、右邊界A．目的基因A端添加HpaⅠ的識別序列，B端添加XhoⅠ的識別序列 B．目的基因A端添加XhoⅠ的識別序列，B端添加HpaⅠ的識別序列 C．目的基因A端添加XhoⅠ的識別序列，B端添加BamHⅠ的識別序列 D．目的基因A端添加BamHⅠ的識別序列，B端添加XhoⅠ的識別序列【考點】基因工程的操作過程綜合．【專題】模式圖；基因工程．【答案】B【分析】構(gòu)建基因表達載體前，需要運用PCR技術(shù)對含有目的基因的DNA片段進行擴增。【解答】解：由于質(zhì)粒的啟動子內(nèi)有BamHⅠ的切割位點，所以目的基因兩端不能添加BamHⅠ的識別序列；若要使插入的目的基因能抑制原有Ersl基因的表達，該目的基因應(yīng)反向插入T﹣DNA中，使其轉(zhuǎn)錄的mRNA與細胞中原有Ersl基因轉(zhuǎn)錄的mRNA互補而抑制其翻譯，再結(jié)合目的基因的轉(zhuǎn)錄方向，可確定目的基因A端添加XhoⅠ的識別序列，B端添加HpaⅠ的識別序列；目的基因A端添加HpaI的識別序列，B端添加HpaⅠ的識別序列，不能確保目的基因反向插入T﹣DNA中，ACD錯誤，B正確。故選：B?！军c評】本題主要考查基因工程等相關(guān)知識點，意在考查學(xué)生對相關(guān)知識點的理解和掌握。9．研究發(fā)現(xiàn)三特異性抗體可實現(xiàn)對小鼠多發(fā)性骨髓瘤細胞（MM）的選擇性殺傷，作用機理如圖所示。下列敘述錯誤的是（）A．用單克隆抗體技術(shù)制備的三種抗體融合可得到三特異性抗體 B．篩選該三特異性抗體時需使用制備三特異性抗體時所使用的3種抗原蛋白 C．三特異性抗體通過T細胞的活化并釋放細胞因子提高對MM的殺傷力 D．三特異性抗體與CD28結(jié)合抑制T細胞的死亡從而使T細胞維持一定數(shù)量【考點】單克隆抗體及其應(yīng)用．【專題】模式圖；克隆技術(shù)．【答案】A【分析】題圖顯示，三抗能結(jié)合MM細胞表面抗原CD38，同時結(jié)合T淋巴細胞表面受體CD38，抑制T細胞死亡，同時結(jié)合T淋巴細胞表面受體TCR，促進T細胞活化產(chǎn)生并釋放細胞因子，從而提高機體對MM細胞的殺傷力。【解答】解：A、三特異性抗體指的是一種抗體，通過蛋白質(zhì)工程構(gòu)建三特異性抗體的基因表達載體，然后獲得相應(yīng)的雜交瘤細胞，最終獲得三特異性抗體，不是三種單抗融合而成，A錯誤；B、篩選該三特異性抗體時需使用制備三特異性抗體時所使用的3種抗原蛋白，B正確；C、從圖中看出，三抗能促進促進T細胞活化產(chǎn)生并釋放細胞因子，細胞因子會促進T淋巴細胞的活化，從而提高機體對MM細胞的殺傷力，C正確；D、從圖中看出，一方面三特異性抗體與T細胞膜上的CD28結(jié)合，抑制T細胞死亡，另一方面特異性抗體與T細胞膜上的TCR結(jié)合，促進T細胞活化，所以三抗與TCR和CD28結(jié)合可保持較高的T細胞數(shù)量和活性，D正確。故選：A。【點評】本題主要考查單克隆抗體及其應(yīng)用等相關(guān)知識點，意在考查學(xué)生對相關(guān)知識點的理解和實際應(yīng)用的能力。10．雙層平板法是對噬菌體進行計數(shù)的常用方法。具體做法是：在無菌培養(yǎng)皿中倒入瓊脂含量為2%的培養(yǎng)基凝固成底層平板后，將瓊脂含量為1%的培養(yǎng)基熔化并冷卻至45～48℃，然后加入敏感指示菌和待測噬菌體稀釋懸液的混合液，充分混勻后立即倒入底層平板上形成雙層平板（如圖）。培養(yǎng)一段時間后，在雙層培養(yǎng)基的上層會出現(xiàn)透亮無菌圓形空斑——噬菌斑，根據(jù)噬菌斑的數(shù)目可計算原液中噬菌體的數(shù)量。判斷下列正確的是（）A．配置好的培養(yǎng)基滅菌后還需要添加緩沖液調(diào)節(jié)pH B．利用雙層平板法對T2噬菌體進行計數(shù)，選用的敏感指示菌為酵母菌 C．倒上層平板時需將培養(yǎng)基冷卻到45～48°C最主要的原因是防止下層固體培養(yǎng)基被液態(tài)化 D．與底層平板相比，上層培養(yǎng)基中瓊脂濃度較低的好處是形成的噬菌斑較大，有利于計數(shù)【考點】微生物的選擇培養(yǎng)（稀釋涂布平板法）．【專題】模式圖；微生物的分離、培養(yǎng)和應(yīng)用．【答案】D【分析】1、雙層平板法，先在培養(yǎng)皿中倒入底層固體培養(yǎng)基，凝固后再倒入含有宿主細菌和一定稀釋度噬菌體的半固體培養(yǎng)基。培養(yǎng)一段時間后，計算噬菌斑的數(shù)量。2、雙層平板法的優(yōu)點：①加了底層培養(yǎng)基后，可使原來底面不平的玻璃皿的缺陷得到了彌補；②所形成全部噬菌體斑都接近處于同一平面上，因此不僅每一噬菌斑的大小接近、邊緣清晰，而且不致發(fā)生上下噬菌斑的重疊現(xiàn)象；③因上層培養(yǎng)基中瓊脂較稀，故形成的噬菌斑較大，更有利于計數(shù)。【解答】解：A、為了防止雜菌污染，配制好的培養(yǎng)基應(yīng)當(dāng)先添加緩沖液調(diào)節(jié)pH再滅菌，A錯誤；B、T2噬菌體是專門寄生在大腸桿菌中的病毒，故T2噬菌體的宿主細菌是大腸桿菌，不能用其他細菌代替，B錯誤；C、高溫會破壞蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)，故將培養(yǎng)基冷卻至45～48℃最主要的原因是避免高溫殺死細菌和噬菌體，C錯誤；D、根據(jù)噬菌斑的數(shù)目可計算原液中噬菌體的數(shù)量，與底層平板相比，上層培養(yǎng)基中瓊脂濃度較低的好處是形成的噬菌斑較大，有利于計數(shù)，D正確。故選：D?！军c評】本題主要考查微生物的選擇培養(yǎng)，要求考生能夠結(jié)合所學(xué)知識準確判斷各選項，屬于識記和理解層次的考查。11．自然情況下，牛的生育率很低，畜牧業(yè)生產(chǎn)上可通過如圖兩種途徑實現(xiàn)良種牛的快速大量繁殖。下列相關(guān)敘述正確的是（）A．胚胎移植前需要用外源促性腺激素對雌性牛A與雌性牛B做同期發(fā)情處理 B．途徑1和途徑2過程中都有胚胎的形成，均為有性生殖 C．途徑2獲得的克隆牛的遺傳性狀完全由雌性牛C決定 D．兩個途徑中從雌性牛A卵巢內(nèi)取得的卵母細胞都需要先體外培養(yǎng)至MⅡ再進行操作【考點】體外受精和胚胎移植；動物細胞核移植技術(shù)．【專題】模式圖；胚胎工程．【答案】D【分析】試管動物技術(shù)是指通過人工操作使卵子和精子在體外條件下成熟和受精，并通過培養(yǎng)發(fā)育為早期胚胎后，再經(jīng)移植進行胚胎分割時，應(yīng)選擇發(fā)育良好、形態(tài)正常的桑葚胚或囊胚，對囊胚階段的胚胎進行分割時要注意將內(nèi)細胞團等分割，否則會影響分割后胚胎的恢復(fù)和進一步發(fā)育。【解答】解：A、胚胎移植前需要用雌激素（孕激素）對雌性牛A與雌性牛B做同期發(fā)情處理，A錯誤；B、途徑1獲得試管牛的技術(shù)流程中包括體外受精、體外胚胎培養(yǎng)和胚胎移植等技術(shù)，屬于有性生殖；途徑2獲得是試管牛是通過核移植技術(shù)獲得的，為無性生殖，B錯誤；C、途徑2獲得的克隆牛的遺傳性狀主要由雌性牛C決定，雌牛B在形成重構(gòu)胚的過程中，提供了細胞質(zhì)基因，所以也會影響克隆牛的性狀，C錯誤；D、兩個途徑中從雌性牛A卵巢內(nèi)取得的卵母細胞都需要先體外培養(yǎng)至MⅡ再進行操作，D正確。故選：D。【點評】本題考查胚胎工程的相關(guān)知識，意在考查學(xué)生的識記能力和判斷能力，運用所學(xué)知識綜合分析問題的能力是解答本題的關(guān)鍵。12．當(dāng)水稻處于高Na+環(huán)境時，細胞膜上的轉(zhuǎn)運蛋白SOS1可借助膜兩側(cè)的H+濃度梯度將Na+排到細胞外。某研究團隊擬構(gòu)建SOS1基因和綠色熒光蛋白基因（GFP）的融合基因轉(zhuǎn)入水稻基因組，以期增強水稻的抗鹽能力。下列敘述錯誤的是（）A．水稻通過轉(zhuǎn)運蛋白SOS1以主動運輸?shù)姆绞綄a+運輸?shù)郊毎?B．將SOS1基因插入到表達載體中不可選用限制酶SmaⅠ和EcoRⅠ C．檢測GFP基因是否以正確方向連接到質(zhì)?？捎靡颋1和R2進行擴增 D．檢測F2和R2的擴增結(jié)果能確定水稻是否為SOS1﹣GFP基因的純合子【考點】基因工程的操作過程綜合．【專題】模式圖；基因工程．【答案】D【分析】當(dāng)水稻處于高Na+環(huán)境時，細胞膜上的轉(zhuǎn)運蛋白SOS1可借助膜兩側(cè)的H+濃度梯度以主動運輸?shù)姆绞綄a+排到細胞外?！窘獯稹拷猓篈、由題意可知，當(dāng)水稻處于高Na+環(huán)境時，細胞膜上的轉(zhuǎn)運蛋白SOS1可借助膜兩側(cè)的H+濃度梯度以主動運輸?shù)姆绞綄a+排到細胞外，A正確；B、SOS1基因含有BanmHI、SmaI和EcoRI，所以將SOS1基因插入到表達載體中不可選用限制酶SmaI和EcoRI，B正確；C、檢測GFP基因是否以正確方向連接到質(zhì)粒可用引物F1和R2或F2和R1進行擴增，C正確；D、F2和R2為綠色熒光蛋白基因（GFP）的引物，無法檢測到是否含有SOS1基因，D錯誤。故選：D?！军c評】本題考查基因工程的相關(guān)知識，意在考查學(xué)生的識記能力和判斷能力，運用所學(xué)知識綜合分析問題的能力是解答本題的關(guān)鍵。13．一個抗原往往有多個不同的抗原決定簇，一個抗原決定簇只能刺激機體產(chǎn)生一種抗體，由同一抗原刺激產(chǎn)生的不同抗體統(tǒng)稱為多抗。為研究巨噬細胞的作用機制，科研人員制備了抗巨噬細胞表面標(biāo)志蛋白CD14的單克隆抗體，具體方法如圖。下列說法正確的是（）A．注入小鼠體內(nèi)的抗原純度對單抗純度的影響比對多抗純度的影響大 B．篩選能分泌多種抗體的單個雜交瘤細胞 C．細胞膜的流動性是細胞融合的基礎(chǔ) D．③是用鑒別培養(yǎng)基對融合后的細胞進行篩選，獲得雜交瘤細胞【考點】單克隆抗體及其應(yīng)用．【專題】模式圖；克隆技術(shù)．【答案】C【分析】單克隆抗體的制備：（1）制備產(chǎn)生特異性抗體的B淋巴細胞：向免疫小鼠體內(nèi)注射特定的抗原，然后從小鼠脾內(nèi)獲得相應(yīng)的B淋巴細胞。（2）獲得雜交瘤細胞：①將鼠的骨髓瘤細胞與脾細胞中形成的B淋巴細胞融合；②用特定的選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞，該雜種細胞既能夠增殖又能產(chǎn)生抗體。（3）克隆化培養(yǎng)和抗體檢測。（4）將雜交瘤細胞在體外培養(yǎng)或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖。（5）提取單克隆抗體：從細胞培養(yǎng)液或小鼠的腹水中提取?！窘獯稹拷猓篈、注入小鼠體內(nèi)的抗原純度對單抗純度的影響比對多抗純度的影響小，因為制作單克隆抗體過程會有篩選環(huán)節(jié)，最后得到產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞，抗體純度高，A錯誤；B、單個雜交瘤細胞只能產(chǎn)生單一抗體，B錯誤；C、細胞膜的流動性是細胞融合的基礎(chǔ)，C正確；D、③是用選擇培養(yǎng)基對融合后的細胞進行篩選，獲得雜交瘤細胞，D錯誤。故選：C?！军c評】本題主要考查單克隆抗體的制備等相關(guān)知識等相關(guān)知識，意在考查考生理解所學(xué)知識要點，把握知識間內(nèi)在聯(lián)系的能力。14．生物技術(shù)運用于戰(zhàn)爭或恐怖活動，則后果將更為可怕，下列關(guān)于生物武器及相關(guān)約定的闡述中，錯誤的是（）A．生物武器與常規(guī)武器相比具有傳染性強、不易被發(fā)現(xiàn)、不受自然條件影響等特點 B．生物武器的類型包括致病菌類、病毒類和生化毒劑類等 C．轉(zhuǎn)基因微生物制成的生物武器具有目前人類難以預(yù)防和治療的特點 D．我國對于生物武器，采取的態(tài)度是不發(fā)展、不生產(chǎn)、不儲存生物武器、并反對生物武器及其技術(shù)和設(shè)備的擴散【考點】生物武器對人類的威脅．【專題】正推法；生物技術(shù)的安全性和倫理問題．【答案】A【分析】1、生物武器種類：包括致病菌、病毒、生化毒劑，以及經(jīng)過基因重組的致病菌等。把這些病原體直接或者通過食物、生活必需品等散布到敵方，可以對軍隊和平民造成大規(guī)模殺傷后果。2、生物武器的特點：單位面積效應(yīng)大；有特定的傷害對象；具有傳染性；危害時間久；不易被發(fā)現(xiàn)和鑒定；使用者本身易受傷害；生物武器造價低，技術(shù)難度不大，隱秘性強，可以在任何地方研制和生產(chǎn)。3、生物武器的局限性：生物武器主要指病原微生物，所以它們的生存、繁殖、死亡易受環(huán)境條件（如溫度）的影響；還受地形、風(fēng)向等多種條件影響；生物武器使用時不易控制，使用不當(dāng)可危害本方安全?！窘獯稹拷猓篈、生物武器與常規(guī)武器相比具有傳染性強、不易被發(fā)現(xiàn)等特點，但容易受地形、風(fēng)向等多種自然條件影響，A錯誤；B、生物武器的類型包括致病菌、病毒、生物毒劑及基因重組的致病菌等，B正確；C、轉(zhuǎn)基因微生物制成的生物武器具有目前人類難以預(yù)防和治療的特點，C正確；D、我國對于生物武器采取的態(tài)度是不發(fā)展、不生產(chǎn)、不儲存生物武器、并反對生物武器及其技術(shù)和設(shè)備的擴散，D正確。故選：A?！军c評】本題考查了生物武器的相關(guān)知識，要求考生能夠識記生物武器的特點；明確生物武器的局限性，難度不大，屬于識記、理解層次的考查。15．毛花貉猴桃為二倍體，果實大，維生素C含量高。軟棗貉猴桃為四倍體，極耐寒，在﹣40℃下可安全越冬。農(nóng)科所想利用如圖技術(shù)流程培育兼具這兩種猝猴桃優(yōu)點的新品種。下列敘述正確的是（）A．新品種是通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)獲得的 B．新品種的體細胞中含有三個染色體組 C．①處用相關(guān)酶的低滲溶液處理可獲得原生質(zhì)體 D．從愈傷組織到新品種的過程需要經(jīng)歷低溫篩選【考點】植物的組織培養(yǎng)．【專題】模式圖；植物的組織培養(yǎng)．【答案】D【分析】1、植物體細胞雜交是指將不同種的植物體細胞，在一定條件下融合成雜種細胞，并把雜種細胞培育成新的植物體的技術(shù)。誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合的方法：物理法（離心、振動、電激等）和化學(xué)法（聚乙二醇等）。2、植物體細胞雜交的意義：克服遠緣雜交不親和的障礙，擴大親本范圍，培育作物新品種。【解答】解：A、新品種是通過植物體細胞雜交、植物組織培養(yǎng)技術(shù)獲得的，A錯誤；B、毛花獼猴桃為二倍體，軟棗獼猴桃為四倍體，兩者經(jīng)植物體細胞雜交后有6個染色體組，B錯誤；C、植物細胞壁主要成分為纖維素和果膠，可將植物細胞置于含纖維素酶和果膠酶的等滲溶液（維持細胞的正常形態(tài)）中以獲得原生質(zhì)體，C錯誤；D、農(nóng)科所想利用如圖技術(shù)流程培育果實大，維生素C含量高、極耐寒的新品種，因此從愈傷組織到新品種的過程需要經(jīng)歷低溫篩選，D正確。故選：D?！军c評】本題考查植物體細胞雜交和植物組織培養(yǎng)的相關(guān)知識，要求考生識記植物體細胞雜交的具體過程；識記植物組織培養(yǎng)的具體過程，能結(jié)合所學(xué)的知識準確答題。二．解答題（共5小題）16．生物合成基因簇（BGC）是一類非常重要的基因集合類型。普遍存在于各類生物基因組中，并且發(fā)揮著重要的代謝和調(diào)控作用。CRISPR/Cas介導(dǎo)的切割可以發(fā)生在任意的DNA位點。阿卡波糖為一種新型口服降血糖藥，在腸道內(nèi)競爭性抑制葡萄糖甙酶，可降低多糖的分解，減緩吸收。已知阿卡波糖生物合成基因簇全長大約41kb，克隆阿卡波糖生物合成基因簇過程如圖所示?；卮鹣铝袉栴}：（1）現(xiàn)在常用PCR技術(shù)快速特異性地擴增目的基因，利用該方法進行擴增時所需的引物需要滿足的條件是兩種引物分別與兩條模板鏈3'端的堿基序列互補配對。（2）圖1中Cas9酶能催化磷酸二酯鍵鍵水解，在構(gòu)建重組DNA時，通常選擇改造（填“改造”或“未改造”）的質(zhì)粒作為載體，經(jīng)過酶處理后形成重組DNA。為提高獲得重組DNA的效率，下列需要考慮的因素有ABCD（填序號）。A．適宜的外界條件B．目的基因簇和質(zhì)粒濃度C．DNA連接酶活性D．質(zhì)粒的純度（3）酵母菌的純培養(yǎng)一般采用馬鈴薯瓊脂（填培養(yǎng)基名稱）培養(yǎng)基。（4）步驟④進行篩選的方法是：抗藥性篩選法。【考點】基因工程的操作過程綜合；微生物的純培養(yǎng)．【專題】圖文信息類簡答題；基因工程．【答案】（1）PCR兩種引物分別與兩條模板鏈3'端的堿基序列互補配對（2）磷酸二酯鍵改造ABCD（3）馬鈴薯瓊脂（4）抗藥性篩選法【分析】基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成。（2）基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細胞：根據(jù)受體細胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。（4）目的基因的檢測與鑒定?！窘獯稹拷猓海?）現(xiàn)在常用PCR（聚合酶鏈式反應(yīng)）技術(shù)快速特異性地擴增目的基因，利用該方法進行擴增時所需的引物需要滿足的條件是兩種引物分別與兩條模板鏈3'端的堿基序列互補配對。（2）解：由圖可示，圖中Cas9酶的作用是切割基因，基因的基本組成單位是脫氧核糖核苷酸，脫氧核糖核苷酸通過磷酸二酯鍵連接，因此它能催化磷酸二酯鍵的水解。在構(gòu)建重組DNA時，通常選擇改造的質(zhì)粒作為載體，以去除質(zhì)粒中一些不必要的限制酶酶切位點并添加部分抗性基因位點用于后續(xù)的篩選。構(gòu)建重組DNA時，除了考慮適宜的外界條件、目的基因和質(zhì)粒的濃度和DNA連接酶活性外，還需考慮質(zhì)粒的純度、黏性末端的種類和長短、DNA連接酶濃度，ABCD正確。故選：ABCD。（3）培養(yǎng)酵母菌的培養(yǎng)基一般采用馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基，因為微生物不能分利用瓊脂，加入瓊脂不會改變培養(yǎng)基營養(yǎng)成分。（4）④是將獲得的重組質(zhì)粒經(jīng)過富集培養(yǎng)后進行抗性篩選，目的是獲得含有目標(biāo)基因的重組質(zhì)粒。使用的方法是抗藥性篩選法，具體步驟是將含有目標(biāo)質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化菌株接種在含有安普霉素的培養(yǎng)基上，只有含有目標(biāo)質(zhì)粒的菌株才能生長并形成菌落，從而實現(xiàn)篩選。故答案為：（1）PCR兩種引物分別與兩條模板鏈3'端的堿基序列互補配對（2）磷酸二酯鍵改造ABCD（3）馬鈴薯瓊脂（4）抗藥性篩選法【點評】本題考查了基因工程的相關(guān)知識，意在考查考生理解所學(xué)知識要點，把握知識間內(nèi)在聯(lián)系的能力；能運用所學(xué)知識，對生物學(xué)問題作出準確的判斷，難度適中。17．我國科學(xué)家經(jīng)多年研究，篩選出高產(chǎn)紫杉醇的細胞，通過植物細胞培養(yǎng)技術(shù)可獲得大量紫杉醇，實現(xiàn)紫杉醇的工廠化生產(chǎn)。為提高紅豆杉細胞培養(yǎng)物中紫杉醇的產(chǎn)量，研究人員構(gòu)建紫杉醇合成關(guān)鍵酶基因（Bapt基因）的超表達載體，并將其導(dǎo)入紅豆杉細胞，其具體流程如下：（1）Bapt基因的獲取：提取紅豆杉的mRNA，并通過逆轉(zhuǎn)錄得到其cDNA，利用PCR技術(shù)以圖1中的cDNA片段為模板擴增Bapt基因，擴增的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成引物，需要的引物有BC（從A、B、C、D四種引物中選擇）。上述過程中，用1個圖1所示片段產(chǎn)生2個雙鏈等長的子代Bapt基因片段至少要經(jīng)過3次循環(huán)。（2）構(gòu)建Bapt基因的超表達載體并將其導(dǎo)入受體細胞：在超量表達Bapt基因載體的構(gòu)建中，所用DNA片段和Ti質(zhì)粒的酶切位點（注：圖中所示限制酶切割后形成的黏性末端各不相同）如圖2所示。強啟動子能被RNA聚合酶識別并結(jié)合，驅(qū)動基因持續(xù)轉(zhuǎn)錄。Ti質(zhì)粒中的T﹣DNA在培育轉(zhuǎn)基因紅豆杉中的作用是將強啟動子和Bapt基因帶入紅豆杉細胞并整合到紅豆杉細胞染色體的DNA上。為使DNA片段能定向插入T﹣DNA中，可用PCR技術(shù)在DNA片段的兩端添加限制酶識別序列，M、N端添加的序列所對應(yīng)的限制酶分別是NotⅠ和SacⅠ。（3）構(gòu)建Bapt基因的超表達載體，需用到相應(yīng)限制酶和DNA連接酶，其中連接酶作用的底物為圖3中的B（填“A”或“B”或“A和B”）?！究键c】基因工程的操作過程綜合．【專題】模式圖；基因工程．【答案】（1）要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成引物BC3（2）RNA聚合酶將強啟動子和Bapt基因帶入紅豆杉細胞并整合到紅豆杉細胞染色體的DNA上NotⅠ和SacⅠ（3）B【分析】基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成。（2）基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細胞：根據(jù)受體細胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。（4）目的基因的檢測與鑒定。【解答】解：（1）利用PCR技術(shù)擴增Bapt基因，擴增的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成引物；由于DNA的合成方向總是從子鏈的5'端向3'端延伸，由圖1可知，5'端對應(yīng)的引物分別是B和C；設(shè)計的引物決定了擴增產(chǎn)物的長度，第一個循環(huán)，引物與模板互補，此時變成兩個模板，但因為模板很長，沒有什么終止擴增，所以第一個循環(huán)擴增出來的新片段很長，第二個循環(huán)以新的長片段為模板進行，但新片段的一端是引物開頭的，所以第二個循環(huán)得到的片段就是我們需要的長度，但只是一條鏈，所以還不能分離出目的基因，第三個循環(huán)，當(dāng)以第二個循環(huán)得到的新片段為模板時，因為這個片段的長度就是需要擴增的長度，所以當(dāng)?shù)谌齻€循環(huán)完成時，這個片段是需要的長度，且是雙鏈DNA，這就得到了需要的目的基因，所以至少要3個循環(huán)才能產(chǎn)生雙鏈等長子代Bapt基因；（2）RNA聚合酶識別并與啟動子結(jié)合，啟動轉(zhuǎn)錄；Ti質(zhì)粒中的T﹣DNA將強啟動子和Bapt基因帶入紅豆杉細胞并整合到紅豆杉細胞染色體的DNA上；分析目的基因可知，不可以使用EcoRⅠ、BamHⅠ以及HindⅢ，所以Ti質(zhì)粒使用SacⅠ和NotⅠ，為使DNA片段能定向插入T﹣DNA中，啟動子在前，所以在DNA片段的M、N端添加的序列所對應(yīng)的限制酶分別是NotⅠ和SacⅠ；（3）3’端為﹣OH端，5’端為磷酸基團端，因此DNA連接酶作用的底物應(yīng)為B。故答案為：（1）要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成引物BC3（2）RNA聚合酶將強啟動子和Bapt基因帶入紅豆杉細胞并整合到紅豆杉細胞染色體的DNA上NotⅠ和SacⅠ（3）B【點評】本題主要考查基因工程等相關(guān)知識點，意在考查學(xué)生對相關(guān)知識點的理解和掌握。18．如圖1表示利用生物技術(shù)制備抗X的單克隆抗體的過程；圖2表示培育優(yōu)質(zhì)奶牛的過程。請據(jù)圖回答下列問題：（1）圖1所示過程所用的生物技術(shù)有動物細胞融合技術(shù)和動物細胞培養(yǎng)技術(shù)，將特定的抗原注入小鼠，需在一定時間內(nèi)間隔注射3次以上，其目的是加強免疫，刺激小鼠機體產(chǎn)生更多的淋巴細胞。（2）將經(jīng)免疫處理后的B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合，獲得能分泌抗X的單克隆抗體的雜交瘤細胞的過程中，至少要進行兩次篩選，一次是通過選擇培養(yǎng)基，篩選出雜交瘤細胞，另一次是通過克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，篩選出能分泌抗X的單克隆抗體的雜交瘤細胞。（3）培養(yǎng)雜交瘤細胞的培養(yǎng)基提供氣體條件CO2的作用維持培養(yǎng)液的pH，雜交瘤細胞體外培養(yǎng)過程中，為避免細胞代謝產(chǎn)物積累對細胞自身造成危害，常采取的措施是定期更換培養(yǎng)液。（4）圖2中的早期胚胎發(fā)育到桑葚胚或囊胚階段才可以移植，在移植之前，需要進行質(zhì)量檢查，用某染料鑒定胚胎細胞是否為活細胞時，發(fā)現(xiàn)活胚胎細胞不能被染色，其原因是活細胞的細胞膜具有選擇透過性，染料不能進入細胞。為了獲得多個基因型相同的優(yōu)質(zhì)奶牛，可采用的技術(shù)手段是胚胎分割。【考點】單克隆抗體及其應(yīng)用；體外受精和胚胎移植．【專題】圖文信息類簡答題；克隆技術(shù)．【答案】（1）動物細胞融合技術(shù)動物細胞培養(yǎng)技術(shù)加強免疫，刺激小鼠機體產(chǎn)生更多的淋巴細胞（2）選擇克隆化培養(yǎng)和抗體（3）維持培養(yǎng)液的pH定期更換培養(yǎng)液（4）桑葚胚或囊胚活細胞的細胞膜具有選擇透過性，染料不能進入細胞胚胎分割【分析】1、圖1所示為單克隆抗體的制備過程．小鼠的B細胞經(jīng)過免疫，再與能無限增殖的骨髓瘤細胞融合，形成的雜交瘤細胞同時具備了分泌抗體和無限增殖的能力。2、圖2將基因?qū)氪菩阅膛Ｅ咛ゼ毎?，形成細胞①，該過程采用了基因工程技術(shù)，其原理是基因重組；取出細胞①的細胞核，注入去核牛卵母細胞中，形成細胞②，該過程采用了核移植技術(shù)，其原理是動物細胞的細胞核具有全能性；要形成轉(zhuǎn)基因克隆奶牛還需要采用早期胚胎培養(yǎng)技術(shù)和胚胎移植技術(shù)?！窘獯稹拷猓海?）圖1表示利用生物技術(shù)制備抗X的單克隆抗體的過程，所用的生物技術(shù)有動物細胞融合技術(shù)和動物細胞培養(yǎng)技術(shù)；為加強免疫，刺激小鼠機體產(chǎn)生更多的淋巴細胞，將特定的抗原注入小鼠時，需在一定時間內(nèi)間隔注射3次以上。（2）獲得能分泌抗X的單克隆抗體的雜交瘤細胞，至少要進行兩次篩選，一次是通過選擇培養(yǎng)基，篩選出雜交瘤細胞；另一次是通過抗體陽性檢測，篩選出能分泌抗X的單克隆抗體的雜交瘤細胞。（3）提供氣體條件CO2的作用維持培養(yǎng)液的pH；為避免細胞代謝產(chǎn)物積累對細胞自身造成危害，常采取定期更換培養(yǎng)液的措施。（4）早期胚胎發(fā)育到桑椹（葚）胚或囊胚階段才可以移植，在移植之前，用某染料鑒定胚胎細胞是否為活細胞時，發(fā)現(xiàn)活胚胎細胞不能被染色，其原因是活細胞的細胞膜具有選擇透過性，染料不能進入細胞；為了獲得多個基因型相同的優(yōu)質(zhì)奶牛，可采用的技術(shù)手段是胚胎分割。故答案為：（1）動物細胞融合技術(shù)動物細胞培養(yǎng)技術(shù)加強免疫，刺激小鼠機體產(chǎn)生更多的淋巴細胞（2）選擇克隆化培養(yǎng)和抗體（3）維持培養(yǎng)液的pH定期更換培養(yǎng)液（4）桑葚胚或囊胚活細胞的細胞膜具有選擇透過性，染料不能進入細胞胚胎分割【點評】本題考查了細胞工程和胚胎工程的基本操作，意在考查考生能理解所學(xué)知識的要點，把握知識間的內(nèi)在聯(lián)系；理論聯(lián)系實際，綜合運用所學(xué)知識解決自然界和社會生活中的一些生物學(xué)問題的能力。19．細菌感染一直是食品藥品、生物醫(yī)療等研究領(lǐng)域函待解決的問題。金黃色葡萄球菌是一種常見的食源性致病菌，廣泛分布于自然界。某研究人員以金黃色葡萄球菌為指示菌，探究菌株A對金黃色葡萄球菌的抑菌（會出現(xiàn)抑菌圈）機理?；卮鹣铝袉栴}：（1）研究者制備的指示菌培養(yǎng)基、發(fā)酵培養(yǎng)基均需包含水、蛋白胨、NaCl等成分，其中蛋白胨主要為菌株A提供碳源、氮源和維生素。在培養(yǎng)基制備過程中，對培養(yǎng)基進行滅菌常采用的方法是高壓蒸汽滅菌；使用該方法時，為了達到良好的滅菌效果，除了先要把滅菌鍋內(nèi)原有的冷空氣徹底排除外，還需注意的事項有在壓力為100kPa、溫度為121℃的條件下，維持15～30min來滅菌。（2）若菌株A為好氧性微生物，為獲得足夠的發(fā)酵液，則需要采用搖床振蕩（填“靜置”或“搖床震蕩”）培養(yǎng)。培養(yǎng)過程中，可采用稀釋涂布平板法計數(shù)活菌數(shù)量，其計數(shù)的原理是當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個單菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。（3）在探究菌株A對金黃色葡萄球菌的抑菌機理時，該研究人員作出了這樣的假設(shè)：菌株A通過分泌某種化學(xué)物質(zhì)來抑制金黃色葡萄球菌的生長繁殖。請利用以下材料設(shè)計實驗證明該假設(shè)成立。實驗材料設(shè)備：含菌株A的發(fā)酵液、無菌水、含金黃色葡萄球菌的指示培養(yǎng)基（已打有大小相同的兩個孔）、離心機等。①完善實驗思路：用離心機對含菌株A的發(fā)酵液進行離心，取適量且等量的上清液和無菌水，分別接種到含有金黃色葡萄球菌的指示培養(yǎng)基的兩個孔中，一段時間后，觀察是否出現(xiàn)抑菌圈。②預(yù)期結(jié)果：出現(xiàn)抑菌圈則證明菌株A通過分泌某種化學(xué)物質(zhì)來抑制金黃色葡萄球菌的生長繁殖?！究键c】微生物的選擇培養(yǎng)（稀釋涂布平板法）．【專題】正推法；微生物的分離、培養(yǎng)和應(yīng)用．【答案】（1）碳源、氮源高壓蒸汽滅菌在壓力為100kPa、溫度為121℃的條件下，維持15?30min來滅菌（2）搖床振蕩當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個單菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌（3）對含菌株A的發(fā)酵液進行離心上清液和無菌水出現(xiàn)抑菌圈則證明菌株A通過分泌某種化學(xué)物質(zhì)來抑制金黃色葡萄球菌的生長繁殖【分析】1、消毒是指使用較為溫和的物理、化學(xué)或生物等方法殺死物體表面或內(nèi)部一部分微生物。滅菌則是指使用強烈的理化方法殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。消毒和滅菌工作主要包括兩個方面：對操作的空間、操作者的衣著和手進行清潔和消毒；將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進行滅菌。常用的消毒方法有煮沸消毒、巴氏消毒等；滅菌方法有濕熱滅菌、干熱滅菌和灼燒滅菌等。2、稀釋涂布平板法除可以用于分離微生物外，也常用來統(tǒng)計樣品中活菌的數(shù)目。當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個單菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結(jié)果準確，一般選擇菌落數(shù)為30?300的平板進行計數(shù)。【解答】解：（1）蛋白胨含有蛋白質(zhì)，而蛋白質(zhì)主要含有C、H、O、N等元素，可見蛋白胨主要為菌株A提供碳源、氮源和維生素；滅菌方法有濕熱滅菌（常見的是高壓蒸汽滅菌）、干熱滅菌、灼燒滅菌等，在培養(yǎng)基制備過程中，對培養(yǎng)基進行滅菌常采用的方法是高壓蒸汽滅菌；使用該方法時，為了達到良好的滅菌效果，除了先要把滅菌鍋內(nèi)原有的冷空氣徹底排除外，還需注意的事項有在壓力為100kPa、溫度為121℃的條件下，維持15～30min來滅菌。（2）菌株A為好氧性微生物，為獲得足夠的發(fā)酵液，需要采用搖床震蕩培養(yǎng)，以增加溶氧量、并與營養(yǎng)物質(zhì)充分接觸；培養(yǎng)過程中，可采用稀釋涂布平板法計數(shù)活菌數(shù)量，其計數(shù)的原理是當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個單菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。（3）實驗?zāi)康尿炞C菌株A通過分泌某種化學(xué)物質(zhì)來抑制金黃色葡萄球菌的生長繁殖，可知，含菌株A的發(fā)酵液經(jīng)過離心后的上清液中含有菌株A分泌的某種化學(xué)物質(zhì)；實驗應(yīng)該遵循對照原則，單一變量原則和控制無關(guān)變量原則等；①完善實驗思路：用離心機對含菌株A的發(fā)酵液進行離心，取適量且等量的上清液和無菌水，分別接種到含有金黃色葡萄球菌的指示培養(yǎng)基的兩個孔中，一段時間后，觀察是否出現(xiàn)抑菌圈。②預(yù)期結(jié)果：出現(xiàn)抑菌圈則證明菌株A通過分泌某種化學(xué)物質(zhì)來抑制金黃色葡萄球菌的生長繁殖。故答案為：（1）碳源、氮源高壓蒸汽滅菌在壓力為100kPa、溫度為121℃的條件下，維持15～30min來滅菌（2）搖床振蕩當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個單菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌（3）對含菌株A的發(fā)酵液進行離心上清液和無菌水出現(xiàn)抑菌圈則證明菌株A通過分泌某種化學(xué)物質(zhì)來抑制金黃色葡萄球菌的生長繁殖【點評】本題考查微生物培養(yǎng)的相關(guān)知識，意在考查學(xué)生的識記能力和判斷能力，運用所學(xué)知識綜合分析問題的能力是解答本題的關(guān)鍵。20．農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法存在單個Ti質(zhì)粒可承載外源基因大小有限的不足，研究人員通過改進轉(zhuǎn)化過程，獲得了抗蟲牧草。表為實驗所用菌株和質(zhì)粒特性，如圖1為質(zhì)粒2的T﹣DNA片段基因和限制酶識別序列分布。實驗農(nóng)桿菌和質(zhì)粒特性菌株E含有利福平抗性基因質(zhì)粒1質(zhì)粒2含有鏈霉素抗性基因和Vir基因，無T﹣DNA片段含有卡那霉素抗性基因，無Vir基因，有T﹣DNA片段備注：利福平、鏈霉素和卡那霉素都是抗生素，Vir基因在特定物質(zhì)下表達，其產(chǎn)物是T﹣DNA片段轉(zhuǎn)入植物細胞的必需物質(zhì)。有無T﹣DNA片段不影響質(zhì)粒其他基因的表達。回答下列問題：（1）愈傷組織獲取。選取牧草種子后，剝?nèi)ネ鈿ぃ?0%乙醇消毒后，用無菌水沖洗，接種在培養(yǎng)基中，通過脫分化和細胞增殖，獲得愈傷組織。（2）構(gòu)建重組載體和轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌。選用限制酶NcoⅠ和BstEⅡ?qū)|(zhì)粒2進行酶切，目的是保留潮霉素抗性和確保目的基因與載體的正確連接（防止自身環(huán)化或防止反向拼接）。用（低濃度）CaCl2（氯化鈣）處理農(nóng)桿菌后，將其與質(zhì)粒1和質(zhì)粒2共培養(yǎng)一段時間。將轉(zhuǎn)化后的農(nóng)桿菌接種到含有利福平、鏈霉素和卡那霉素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，一段時間后，挑取單克隆培養(yǎng)物，接種到不含抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)一段時間。采用雙質(zhì)粒轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌的優(yōu)點是能導(dǎo)入長度更長的外源基因。（3）轉(zhuǎn)基因愈傷組織的獲取。將重組農(nóng)桿菌分別接種至含乙酰丁香酮（AS）和不含AS的培養(yǎng)基中預(yù)培養(yǎng)，再與愈傷組織共培養(yǎng)3天，然后取少量愈傷組織接種到不同濃度潮霉素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)30分鐘，結(jié)果如表所示。表不同濃度潮霉素對愈傷組織存活率的影響潮霉素濃度（mg/L）020406080不含AS組存活率（%）93862300含AS組存活率（%）939077150由表2可知，AS的作用是促使Vir基因表達，使T﹣DNA轉(zhuǎn)導(dǎo)到植物細胞中，應(yīng)選用40mg/L的潮霉素濃度作為篩選濃度對所有轉(zhuǎn)化后愈傷組織進行篩選。（4）抗蟲牧草的鑒定。將愈傷組織接種至分化培養(yǎng)基培養(yǎng)至幼苗，經(jīng)煉苗后，轉(zhuǎn)移至移植到土壤中培育，獲得抗蟲牧草甲、乙、丙。取三組牧草的適量葉片細胞，提取總DNA。以抗蟲基因的特異序列和葉肉細胞自身基因的特異序列分別做2對引物，PCR擴增后進行凝膠電泳，結(jié)果顯示植株甲、丙成功導(dǎo)入抗蟲基因，組1和組2分別是陰性對照和陽性對照，請在電泳結(jié)果圖2上繪制組1和組2的電泳結(jié)果。植株甲和丙不能立即推廣種植，原因是甲丙含有抗蟲基因，但不一定表達抗蟲性狀；甲丙抗蟲性狀不一定能穩(wěn)定遺傳；可能出現(xiàn)基因漂移；轉(zhuǎn)基因植株的存活能力可能較弱等?！究键c】植物的組織培養(yǎng)；DNA片段的擴增與電泳鑒定．【專題】圖文信息類簡答題；植物的組織培養(yǎng)；PCR技術(shù)．【答案】（1）無菌水；脫分化（2）NcoⅠ和BstEⅡ；確保目的基因與載體的正確連接（防止自身環(huán)化或防止反向拼接）；（低濃度）CaCl2（氯化鈣）；利福平、鏈霉素和卡那霉素；能導(dǎo)入長度更長的外源基因（3）促使Vir基因表達，使T﹣DNA轉(zhuǎn)導(dǎo)到植物細胞中；40mg/L（4）凝膠電泳；；甲丙含有抗蟲基因，但不一定表達抗蟲性狀；甲丙抗蟲性狀不一定能穩(wěn)定遺傳；可能出現(xiàn)基因漂移；轉(zhuǎn)基因植株的存活能力可能較弱等【分析】基因工程的操作步驟：1、目的基因的獲取方法。2、基因表達載體的構(gòu)建。3、將目的基因?qū)胧荏w細胞。4、目的基因的檢測與鑒定。【解答】解：（1）外植體消毒后，需要用無菌水清洗，一方面去除消毒劑，另一方面也避免病原微生物的污染。接種后，外植體需要通過脫分化，然后進行細胞增殖過程，才能形成愈傷組織。（2）依據(jù)圖1信息，T﹣DNA中的潮霉素抗性基因需保留，用于篩選轉(zhuǎn)基因愈傷組織，同時為了確保外源目的基因的正確連接，所以選用NcoI和BstEⅡ兩種酶進行酶切。為提高外源基因的轉(zhuǎn)化成功率，常使用低濃度的氯化鈣溶液處理細菌。根據(jù)表1信息，所用農(nóng)桿菌自帶利福平抗性基因，質(zhì)粒1帶有鏈霉素抗性基因，質(zhì)粒2帶有卡那霉素抗性基因，因此最后篩選導(dǎo)入了2種質(zhì)粒的農(nóng)桿菌時，需接種到含有利福平、鏈霉素和卡那霉素的培養(yǎng)基上。雖然具有抗生素抗性，但抗生素仍舊會對農(nóng)桿菌產(chǎn)生不利影響，因此需要將篩選出來的重組農(nóng)桿菌在不含抗生素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，恢復(fù)活性。依據(jù)題干和表格信息，質(zhì)粒1的作用是提供Vir蛋白，質(zhì)粒2的作用是提供T﹣DNA，因此質(zhì)粒2不需要Vir基因片段，從而增加了可承載的外源基因的長度。（3）依據(jù)題干和表2信息，潮霉素用于篩選轉(zhuǎn)基因愈傷組織，因此不抗潮霉素的愈傷組織即為未導(dǎo)入外源基因的愈傷組織。表中信息表示不含AS的愈傷組織只能在無潮霉素或較低潮霉素濃度下存活（說明植物自己有一點潮霉素抗性），說明未導(dǎo)入外源基因，而含有AS組的愈傷組織，在較高潮霉素濃度下也能存活，再結(jié)合表1備注的相關(guān)信息，可以得出AS的作用，即AS的作用是促使Vir基因表達，使T﹣DNA轉(zhuǎn)導(dǎo)到植物細胞中。同時潮霉素的作用是篩選導(dǎo)入外源基因的外植體，因此需要一定的濃度，但濃度也不能過高，避免轉(zhuǎn)基因愈傷組織也死亡，即應(yīng)選用40mg/L的潮霉素濃度作為篩選濃度對所有轉(zhuǎn)化后愈傷組織進行篩選。（4）鑒定轉(zhuǎn)基因牧草中是否含有目的基因，可以通過PCR的方式進行檢測，PCR的結(jié)果需用凝膠電泳的方式獲得。依據(jù)題目信息，甲乙丙三組都有葉肉細胞自身基因，甲丙兩組含有外源基因，因此電泳結(jié)果圖上方條帶為葉肉細胞自由基因，下方條帶為外源基因。陰性對照應(yīng)使用未導(dǎo)入外源基因的該植株細胞使用葉肉細胞自身引物進行PCR，所以應(yīng)該獲得一條上方的條帶，陽性對照應(yīng)使用含有目的基因的質(zhì)粒進行PCR，因此獲得的是下方的條帶。則組1和組2