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文檔簡介
ICS
CCS
CI
團體標準
T/CIXXX-2023
人參制品中天然人參皂苷及稀有人參皂苷
的含量指標與檢查方法
Indexanddeterminationmethodsoftotalginsenosidecontentandeachginsenoside
contentratioinmainginsengprocessingofGinsenggenus
(征求意見稿)
2023-X-X發(fā)布2023-X-X實施
?中國國際科技促進會?發(fā)布
目錄
前言......................................................................II
引言.......................................................................IV
人參制品中天然人參皂苷及稀有人參皂苷的含量指標與檢查方法.....................5
1范圍.......................................................................1
2規(guī)范性引用文件.............................................................1
3術語與定義.................................................................1
4原理.......................................................................2
5試劑和材料.................................................................2
6儀器和設備.................................................................3
7分析步驟...................................................................3
8檢測精密度................................................................15
附件........................................................................16
附件-I人參皂苷標準品(純度,98%以上)......................................16
附件-2人參原料總皂苷高效液相色譜圖.........................................17
A、人參根部皂苷高效液相色譜圖...............................................17
B、西洋參根部皂苷高效液相色譜圖.............................................17
C、三七主根部皂苷高效液相色譜圖.............................................18
D、人參莖葉皂苷高效液相色譜圖...............................................18
E、西洋參莖葉皂苷高效液相色譜圖.............................................18
F、市銷的三七莖葉皂苷(一種產品)高效液相色譜圖.............................19
附件-3紅參浸出膏(一種產品)的各人參皂苷高效液相色譜圖.....................19
附件-4市銷的一種人參酒的人參皂苷高效液相圖譜...............................19
III
引言
人參是公認的百草之王,具有補元氣、調氣養(yǎng)血、安神益智、提高免疫、抗疲勞、滋補
強身功效。人參屬(Panaxgenus)植物有十余種(species)。我國主要栽培和應用的人參屬
(Panaxgenus)植物、有三個種(Species):即、人參(Ginseng,PanaxginsengC.A.Mayer,
包括數(shù)量龐大的林下參)、西洋參(Americanginseng,Panaxquinquefolius)和三七
(Notoginseng,Panaxnotoginseng)等;已經廣泛地應用于中醫(yī)藥、醫(yī)藥、食品和保健食品、
化妝品;已形成產值上千億的很大產業(yè)體系。
人參的主要功效成分是人參皂苷;人參和西洋參根部含4%~7%皂苷,人參根的近90%皂
苷是Rg1、Re、Rf、Rb1、Rb2、Rc、Rd,西洋參根的近90%皂苷是以Rb1和Re為主還有Rb2、
Rc、Rd、Rg1。三七根含有8%以上的皂苷,近90%皂苷為以Rb1和Rg1為主還有Re、Rd和R1。
人參、西洋參和三七莖葉各含略5%人參皂苷:人參莖葉的皂苷以Rd和Re為主,還含有Rg1、
Rf、Rb1、Rc和Rb2;西洋參莖葉的皂苷以Rb3和Rd為主,還含有Re、Rb2、Rc、Rb1和Rg1;三
七莖葉皂苷是Rb3、C-Mx1為主還含有Fa、Rc和Rb1等。
人參或西洋參或三七主根或須根或莖葉原料,以外觀形態(tài)可以判斷;但是,破壞外形的
人參加工產品中,采用的是否采用人參或西洋參或三七主根或須根或莖葉皂苷、很難判斷,
必須用總皂苷中的各人參皂苷含量比例來判斷。
在紅參及其提取物或者人參熬制加工過程中,在人參自身物質的作用下,其原料人參的
二醇類(PPD)Rb1、Rb2、Rc、Rd和人參三醇類(PPT)Re、Rg1皂苷的20-O-糖基被水解,
生成20(S)-Rg3和20(R)-Rg3、以及其20-O-羥基脫水生產轉不飽和鍵20(22)-烯的Rg5和
20(21)-烯的Rk1;生成20(S)-Rg2和20(R)-Rg2、Rg6和Rg4;生成其糖基水解的20(S)-Rh2和
20(R)-Rh2、Rk2和Rh3,20(S)-Rh1和20(R)-Rh1、Rk3和Rh4、C-K等稀有皂苷(附件-3、4)。
這些稀有皂苷帶糖基數(shù)量少、人體易吸收,具有良好的抗癌、抗血栓、抗糖尿、抗疲勞、促
進血液循環(huán)的功能。因此,市場上出現(xiàn)了紅參浸膏、人參熬制浸出物,以及用其浸出物配置
的、很多人參制品、人參飲品、人參酒等產品。為了規(guī)范化紅參浸膏或人參熬制加工產品質
量,有必要規(guī)定這些產品的總皂苷含量,規(guī)定其總皂苷中原人參皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re
和Rg1,和其原皂苷轉化生成的稀有皂苷20(S)-Rg3和20(R)-Rg3、Rg5和Rk1,20(S)-Rg2和
20(R)-Rg2、Rg6和Rg4,20(S)-Rh2和20(R)-Rh2、Rk2和Rh3,20(S)-Rh1和20(R)-Rh1、Rk3
和Rh4等含量比例。
但目前還沒有《人參、西洋參、三七根部和莖葉的人參總皂苷含量及總皂苷中各人參皂
IV
苷含量比例指標與測定方法》的標準,還沒有《紅參浸出物等人參煎制制品中總皂苷含量及
總皂苷中原人參皂苷與轉化生成的稀有皂苷的含量比例指標與測定方法》的標準,有必要建
立其指標與測定方法;本標準就是建立其指標與測定方法。
V
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人參制品中天然人參皂苷及稀有人參皂苷的含量指標與檢
查方法
1范圍
本文件規(guī)定了人參、西洋參、三七根部和莖葉等總人參皂苷質量含量測定方法,規(guī)定了
用高效液相色譜法測定總皂苷中各皂苷質量含量比例方法及指標。
本文件適用于人參主根和須根的Rg1、Re、Rf、Rb1、Rb2、Rc和Rd質量含量區(qū)別;適
用于西洋參主根和須根的Rb1、Re、Rb2、Rc、Rd、Rg1皂苷;三七主根和須根的Rg1、Rb1、
R1、Re、Rd皂苷質量含量區(qū)別;也適用于人參莖葉的Re、Rd、Rg1、Rb1、Rc、Rb2、Rf皂
苷,西洋參莖葉的Rb3、Rd、Re、Rb2、Rc、Rb1和Rg1皂苷,三七莖葉的Rb3、C-Mx1、Rc、
Fc、Fa、Rb1和Rd皂苷質量含量區(qū)別。提供人參、西洋參、三七主根和須根以及莖葉總皂
苷中各皂苷質量含量比例的區(qū)別點,以便可檢出人參產品中所采用的原料是否人參或西洋參
或三七主根和須根,或者采用其莖葉皂苷。
本文件規(guī)定了紅參浸出物等人參煎制制品以及用其配制的保健食品、酒類中總皂苷質量
含量測定方法及指標,規(guī)定了人參煎制制品總皂苷中,原人參皂苷Rg1、Re、Rf、Rb1、Rb2、
Rc和Rd和其原皂苷轉化生成的20(S)-Rg3和20(R)-Rg3、Rg5和Rk1,20(S)-Rg2和20(R)-Rg2、
Rg6和Rg4,20(S)-Rh2和20(R)-Rh2、Rk2和Rh3,20(S)-Rh1和20(R)-Rh1、Rk3和Rh4以
及C-K等二十余種人參稀有皂苷的含量比例的測定方法及指標,規(guī)范化其產品中主要皂苷和
原皂苷轉化生成的稀有皂苷含量比例,以便規(guī)范化產品質量。
2規(guī)范性引用文件
下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,僅所注日期的版本
適用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。
《中華人民共和國藥典》
GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法
3術語與定義
人參制品中天然人參皂苷及稀有人參皂苷的含量指標與檢查方法,包括了:
3.1
主要人參屬植物加工中總皂苷含量,指主要參類人參、西洋參、三七主根和須和其莖葉
1
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等原料,包括了紅參浸出物或人參煎制制品、人參酒等加工產品中的總人參皂苷質量含量。
3.2
總皂苷中各皂苷比例,用高效液相色譜法,測定總皂苷中各皂苷峰面積比例、摩爾含量
比例和質量含量比例。
3.3
紅參浸出物或人參煎制制品或人參酒等人參加工產品的總皂苷中,不僅含有原人參皂苷
Rg1、Re、Rf、Rb1、Rb2、Rc、Rb2、Rd等,還含有其原皂苷轉化生成的20(S)-Rg3和20(R)-Rg3、
Rg5和Rk1,20(S)-Rg2和20(R)-Rg2、Rg6和Rg4,20(S)-Rh2和20(R)-Rh2、Rk2和Rh3,
20(S)-Rh1和20(R)-Rh1、Rk3和Rh4,以及F2、F1和C-K等稀有皂苷。因此其總皂苷中,
原人參皂苷和稀有皂苷等、各皂苷峰面積比例、摩爾含量比例和質量含量比例。
4原理
人參原料及其加工產品中的總皂苷含量測定:用甲醇分別提取人參或西洋參或三七根部
或其莖葉或紅參及其提取物的人參總皂苷,減壓濃縮,用石油醚進行脫脂,干燥、溶于少量
的水、經大孔吸附樹脂柱和大孔脫色樹脂柱凈化,減壓濃縮、干燥衡重,分別得到人參或西
洋參或三七根部或其莖葉或紅參及其提取物的人參總皂苷含量。
人參酒總皂苷含量,取200mL在60-70℃水浴鍋中干燥、經大孔吸附樹脂柱和大孔脫
色樹脂柱凈化,減壓濃縮、干燥衡重,得到總皂苷含量。市銷的莖總葉皂苷含量,經大孔吸
附樹脂柱和大孔脫色樹脂柱凈化,減壓濃縮、干燥衡重,得到總皂苷質量含量。
上述總皂苷做高效液相色譜,分別得到各總皂苷的峰面積色譜圖;然后分別得到各皂苷
的6個不同濃度的各人參皂苷標準品的高效液相色譜“峰面積、摩爾濃度和質量濃度”標準
曲線,核對總皂苷色譜圖中,各皂苷峰面積比例、摩爾含量比例和質量含量比例;分別得到
人參或西洋參或三七主根和須根或其莖葉等原料,以及紅參浸出物等人參煎制制品、人參酒
等人參加工產品中的總皂苷中各皂苷峰面積比例、摩爾含量比例和質量含量比例。
5試劑和材料
5.1石油醚(60-90):分析純。
5.2甲醇、乙腈:色譜純。
5.3水:GB/T6682,一級水
5.4大孔樹脂和脫色大孔樹脂:根據廠家規(guī)定方法,預先處理好的大孔樹脂
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5.5人參皂苷標準品:詳見附錄-1(內容包括標準品名稱、CAS號、分子式)
6儀器和設備
6.1索氏提取器
6.2高效液相色譜儀:配紫外檢測器,符合GB/T26792的規(guī)定
6.3色譜柱C18(十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑),5μm,4.6mm×250mm
6.4微孔濾膜(有機相):13mm×0.45μm
6.5分析天平:感量0.00001g
6.6減壓旋轉蒸發(fā)儀
6.7恒重的旋轉蒸發(fā)瓶,25mL,50mL
6.8恒溫干燥箱
6.9分液漏斗
6.10恒溫水浴鍋
7分析步驟
7.1人參或西洋參或三七的主根或須根部或其莖葉以及其紅參浸膏等人參加工產品的
總人參皂苷質量含量的測定
7.1.1樣品的處理及粗總皂苷的提取
1)將人參或西洋參或三七的主根或須根,分別粉碎為25目以下,分別人參或西洋參準
確稱取1g,準確稱取三七主根或須根0.5g(精確至0.0001g),加入15mL石油醚脫脂1
h、移去石油醚,重復3次;揮干樣品中的石油醚,再加入甲醇回流8小時提取皂苷,減壓
濃縮,得到粗皂苷提取物。
2)準確稱取1g的紅參浸膏或人參煎熬制品,在60℃恒溫箱干燥,加入15mL石油醚
脫脂1h、移去石油醚,重復3次;揮干樣品中的石油醚,再加入甲醇回流8小時提取皂苷,
減壓濃縮,分別得到粗皂苷提取物。
3)準確取100mL人參酒,在60-70℃水浴鍋中揮發(fā)干燥,加入15mL石油醚脫脂1h、
移去石油醚,重復3次;揮干樣品中的石油醚,得到粗皂苷提取物。
7.1.2粗皂苷凈化
上述樣品各粗皂苷(或準確稱取50mg的市銷的人參或西洋參或三七莖葉皂苷),分別
加20-30mL水溶解后,上預先處理好的15mL大孔吸附樹脂柱上,加水反復吸附皂苷,待
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皂苷被完全吸附后,用90mL水洗掉大孔樹脂柱上的糖類的雜質,然后用75mL的80%(v/v)
乙醇進行洗脫;其乙醇洗脫液再經10mL脫色大孔樹脂柱脫色、再用20mL的80%乙醇(v/v)
洗脫脫色柱上殘留的皂苷;將其皂苷脫色液,在旋轉蒸發(fā)器上減壓濃縮干燥后,在恒溫干燥
箱(80-90℃)中,將其旋轉蒸發(fā)瓶干燥至恒重,稱重,分別計算各樣品總皂苷質量含量。
7.1.3計算總皂苷質量含量C(%)的計算式:
%(1)
M1?M2
計算式?中=:M×100
C:樣品中總苷質量含量(%)
M1:含有皂苷的旋轉蒸發(fā)瓶恒質量(g)
M2:空旋轉蒸發(fā)瓶恒質量(g)
M:樣品原料質量(g)
7.2用高效液相色譜法,測定人參、西洋參、三七的主根或須根和莖葉峰原料及其加工
產品總皂苷中各皂苷含量比例
以高效液相色譜法,測定上述人參、西洋參、三七的根部和莖葉等原料及人參加工產品
總皂苷中的各皂苷含量比例。
7.2.1高效液相色譜參考條件
a)色譜柱:C18柱(十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑)(5μm,φ4.6mm×250mm)
b)流動相:乙腈、水
c)柱溫:35℃
d)流速:0.6mL/min
e)檢測波長:203nm
f)進樣量:10μL
1)測定人參、西洋參、三七的根部和莖葉等原料總皂苷的高效液相色譜流動相、乙腈-
水梯度洗脫
時間乙腈水
0~35min19%等度81%
35~55min19%至29%線性梯度81%至71%
55~65min29%至40%線性梯度71%至60%
65~95min40%至100%乙腈線性梯度60%至0%
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2)測定人參加工產品、紅參浸膏或人參煎熬制品或人參酒的總皂苷(原人參皂苷轉化
為很多種人參稀有皂苷)高效液相色譜的流動相、乙腈-水梯度洗脫
時間乙腈水
0~5min20%~40%80%~60%
5~10min40%~60%60%~40%
10~70min60%~100%40%~0%
7.2.2用高效液相色譜法,測定人參或西洋參或三七的主根或須根或其莖葉等原料,以
及人參加工產品紅參浸出物、煎制人參制品、人參酒等的總皂苷中各皂苷峰面積比例與含量
比例
用高效液相色譜法測定各樣品總皂苷中的各皂苷色譜圖和峰面積比;再分別測定6個不
同濃度的各相關人參皂苷標準品的高液相色譜,繪制標準峰面積和摩爾和質量濃度曲線,分
別確定每個樣品中的各皂苷峰面積比例、摩爾含量比例和質量含量比例。
7.2.2.1人參或西洋參或三七的主根或須根或莖葉等原料總皂苷中的各皂苷峰面積比
例、摩爾含量比例和質量含量比例。
分別準確稱取15mg的上述人參或西洋參或三七的主根或須根或其莖葉的總皂苷,分別
放于5mL容量瓶中,用色譜純甲醇定容、配制3mg/mL的人參或西洋參或三七的主根或須
根或其莖葉總皂苷溶液,微孔濾膜過濾、進樣體積10μL、做高效液相色譜圖,分別記錄
各樣品總皂苷中各人參皂苷的峰面積和其峰面積比例。
樣品總皂苷中、對應各人參皂苷標準品,每個分別配制成6個不同濃度。準確分別稱取
15mg人參皂苷標準品R1、Rg1、Re、Rf、Rb1、Rb2、Rc、Rd、Rb2、R1、Rb3、Gyp17、C-Mc1、
C-Mx1或Fa,分別放于5mL容量瓶中,用色譜純甲醇定容至刻度,分別配制1.5mg/mL的
各皂苷標準溶液;將其標準人參皂苷標準品液,分別取0.05mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、
3.0mL分別置于5mL容量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,分別配制成0.015mg/mL、0.075mg/mL、
0.15mg/mL、0.30mg/mL、0.90mg/mL和原1.50mg/mL等、6個不同濃度的各人參皂苷標
準品溶液,進樣體積10μL,分別做高效液相色譜,分別繪制各皂苷標準品的質量濃度、
摩爾濃度和峰面積的標準曲線,分別核對確定原樣品高效液相色譜圖中的各皂苷峰面積比例、
摩爾含量比例、質量含量比例。
結果,樣品總皂苷中,各皂苷峰面積比例和摩爾含量比例是一致的;樣品總皂苷中,各
皂苷質量含量比例,用計算式(2)可計算。
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7.2.2.2紅參浸出物、煎制人參制品、人參酒等的總皂苷中,各皂苷高效液相色譜峰面
積比例與含量比例的測定
分別準確稱取15mg的紅參浸出物或煎制人參制品或人參酒總皂苷,分別放于5mL容
量瓶中,用色譜純甲醇定容、分別配制3mg/mL的參浸出物或煎制人參制品或人參酒總皂苷
溶液,微孔濾膜過濾、進樣體積10μL、做高效液相色譜圖,記錄樣品總皂苷中各人參皂
苷的峰面積圖和其峰面積比例。
人參皂苷標準品高效液相色譜標準曲線繪制:分別準確稱取15mg人參皂苷標準品Rg1、
Re、Rf、Rb1、Rc、20(S)-Rg2、20(R)-Rg2、Rb2、20(S)-Rh1、20(R)-Rh1、Rd、Rg6、Rg4、
Rk3、Rh4、20(S)-Rg3、20(R)-Rg3、Rk1、Rg5、C-K、20(S)-Rh2、20(R)-Rh2、Rk2或Rh3,
分別放于10mL容量瓶中,用色譜純甲醇定容至刻度,分別配制1.5mg/mL的各皂苷標準溶
液。將1.5mg/mL標準人參皂苷標準品液,分別取0.05mL、0.1mL、0.5mL、1.0mL、2.0
mL、4.0mL分別置于5mL容量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,分別配制成0.035mg/mL、0.15mg/mL、
0.3mg/mL、0.30mg/mL、0.72mg/mL和原1.5mg/mL等,6個不同濃度的各人參皂苷標準
品溶液,進樣體積10μL,做高效液相色譜,分別繪制各皂苷標準品的制質量濃度、摩爾
濃度和峰面積的標準曲線,核對確定原樣品高效液相色譜圖中的各皂苷峰面積比例、摩爾含
量比例、質量含量比例。
結果,樣品總皂苷中,各皂苷峰面積比例和摩爾含量比例是一致的;樣品總皂苷中,各
皂苷質量含量比例,用計算式(2)可計算。
7.2.3實驗結果:
用高效液相色譜法,測定“人參或西洋參或三七的主根或須根或其莖葉等原料以及人參
加工產品紅參浸出物、煎制人參制品及人參酒等”的總皂苷的結果:各樣品人參皂苷出峰順
序:
人參主根和須根各主要人參皂苷出峰順序為Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd(附件-2,A);
西洋參主根和須根各主要人參皂苷出峰順序:Rg1、Re、Rb1、RcRb2、Rd(附件-2,B);
三七主根和須根各主要人參皂苷出峰順序:R1、Rg1、Re、Rb1、Rd(附件-2,C);
人參莖葉各人參皂苷出峰順序:Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd(附件-2,D);
西洋參莖葉各皂苷出峰順序:Rg1、Re、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd(附件-2,E);
三七莖葉各皂苷(一種產品)出峰順序:Fa、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd、Gyp17、C-Mc1、
C-Mx1(附件-2,E);
紅參浸膏(一種產品)各皂苷出峰順序:Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、20(S)-Rg2、20(R)-Rg2、
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Rb2、20(S)-Rh1、20(R)-Rh1、Rd、Rg6、Rg4、Rk3、Rh4、20(S)-Rg3、20(R)-Rg3、Rk1、Rg5、
C-K、20(S)-Rh2、20(R)-Rh2、Rk2、Rh3(附件-3);
人參酒(一種產品)各皂苷出峰順序:Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、20(S,R)-Rg2、Rb2、20(S,R)-Rh1、
Rd、Rg6、20(S)-Rg3、20(R)-Rg3、Rk1、Rg5、Rk2、Rh3等(附件-4)。
用高效液相色譜法,分別測定6個不同濃度的各人參皂苷標準品溶液、記錄峰面積,分
別繪制標準品各皂苷質量濃度、摩爾濃度及峰面積標準曲線。根據其標準曲線,分別確定各
樣品總皂苷色譜圖中各皂苷峰面積比例、摩爾濃度及質量濃度關系;結果,人參或西洋參或
三七的根部或其莖葉以及紅參浸出物、煎制人參制品及人參酒等總皂苷中,各皂苷高效液相
色譜峰面積比例(%)與各人參皂苷摩爾濃度積比例(%)基本一致。
根據每個人參皂苷標準品的質量濃度與峰面積標準曲線圖,參考各人參皂苷分子量,確
定了每個樣品總皂苷中各皂苷峰面積與質量濃度關系;得到在各樣品總皂苷中出峰順序為n
皂苷的質量含量比例與峰面積比例關系(通式)計算式(%):
‥)×100%(2)
C計n算=式Fn中×:Mn÷(F1×M1+F2×M2+F3×M3++Fn×Mn
Cn:人參或西洋參或三七的根部及莖葉、紅參浸出膏或人參酒總皂苷中各皂苷出峰順序
n號人參皂苷質量含量比例(%)
Mn:出峰順序n號人參皂苷峰面積在總皂苷面積中所占的比例(%)
Fn:出峰順序n號人參皂苷分子量
M1、M2、M3,…,Mn:在人參或西洋參或三七根部及莖葉、紅參浸出膏或人參酒總人參
皂苷中,出峰順序1、2、3、…、n號人參皂苷峰面積比例(%)
F1、F2、F3、…、Fn:人參或西洋參或三七根部或其莖葉的總皂苷中,按照出峰順序1、
2、3、…、n號人參皂苷的分子量。
例-1:以人參根總皂苷例,色譜中人參皂苷出峰順序為Rg1、Re、Rf、Rb1、Rb2、Rc、
Rb2、Rd;出峰順序1號皂苷的Rg1在人參根總皂苷中質量含量比(%)
‥)×100%
C出1峰=順F1序×2M號1皂÷苷(F的1×ReM在1+人F參2根×總M皂2+苷F中3質×量M3含+量比+(F%8)×M8
‥)×100%
C等2等=。F2×M2÷(F1×M1+F2×M2+F3×M3++F8×M8
例-2:紅參浸膏(一種產品)各皂苷出峰順序:Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、20(S)-Rg2、
20(R)-Rg2、Rb2、20(S)-Rh1、20(R)-Rh1、Rd、Rg6、Rg4、Rk3、Rh4、20(S)-Rg3、20(R)-Rg3、
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Rk1、Rg5、C-K、20(S)-Rh2、20(R)-Rh2、Rk2、Rh3;
其中17號出峰的20(S)-Rg3在紅參浸膏總皂苷中質量含量比(%):
‥)×100%
C等1等7=。F17×M17÷(F1×M1+F2×M2+F3×M3++Fn×Mn
由此可見,用高效液相色譜法,測定“人參或西洋參或三七的根部或其莖葉等原料,以
及人參加工產品紅參浸出物、煎制人參制品或人參酒等總皂苷”各人參皂苷色譜峰面積及其
峰面積比例,測定對應各人參皂苷標準品的質量濃度與峰面積標準曲線圖,根據各人參皂苷
分子量,確定各皂苷峰面積比例與含量比例。結果,總皂苷中各人參皂苷峰面積比例與摩爾
含量比例基本一致;每個樣品總皂苷中,出峰順序為n皂苷質量含量比例與峰面積比例關系
的(通式)計算式(%):
‥)×100%(2)
C如n下=,F(xiàn)n以×試M驗n實÷例(F,1×進M一1步+說F明2×。M2+F3×M3++Fn×Mn
7.3人參或西洋參或三七的主根和須根及莖葉、紅參浸出膏或人參酒總皂苷中各皂苷峰
面積比與含量比例關系實例
7.3.1人參或西洋參或三七的主根和須根及莖葉(一種產品)總皂苷中各皂苷峰面積比
與質量含量比例關系
分別準確配制3mg/mL的人參或西洋參或三七的根部或其莖葉總皂苷,進樣體積10μ
L,做高效液相色譜圖,記錄各人參皂苷的高效液相色譜峰面積色譜圖。
7.3.1.1人參、西洋參和三七根部總皂苷中各皂苷的高效液相色譜峰面積比例與質量
含量比例關系:
人參主根和須根總皂苷(附件-2A):在高效液相色譜中,人參根的主要人參皂苷出峰
順序為Rg1、Re、Rf、Rb1、Rb2、Rc、Rb2、Rd;人參根部各皂苷色譜圖中的峰面積,用6
個濃度的皂苷標準品Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd質量濃度、摩爾濃度標準曲線核對
結果,其色譜圖和各皂苷峰面積比例與摩爾含量比例基本一致;各皂苷質量濃度含量比例以
計算式(2)的計算結果,如表1所示。
表1、高效液相色譜中人參主根和須根的總皂苷的各主要皂苷峰面積比例及質量含量比例(%)
皂苷出峰順序Rg1ReRfRb1RcRb2Rd
人參主根峰面積比(%)38.011.87.8621.97.816.765.87
質量含量比(%)32.612.06.7326.09.027.805.95
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人參須根峰面積比(%)10.916.95.2123.116.714.212.9
質量含量比(%)8.716.04.1725.618.015.312.2
由此可見,人參根部的特征皂苷為Rf;總皂苷高效液相色譜圖中的各皂苷峰面積比例,
就是人參皂苷摩爾含量比例;各皂苷峰面積比例與質量含量比例差異5%以內。
人參主根和須根最大區(qū)別為;主根的人參三醇類皂苷Rg1、Re和Rf含量為總皂苷的
50%-55%;須根中人參三醇類皂苷Rg1、Re和Rf含量為總皂苷的34%左右。主根的人參二醇
類皂苷Rb1、Rc、Rb2和Rd含量為45%左右,而須根的參二醇類皂苷接近60%-70%;由此、
可以區(qū)別人參主根和須根。
西洋參主根和須根總皂苷(附件-2B):在總皂苷中,各皂苷峰面積比例與質量含量比
例:主要人參皂苷出峰順序為Rg1、Re、Rb1、Rc、Rb2、Rd;其色譜圖和各皂苷峰面積比例
和質量含量比例,如下圖3所示:
表3、西洋參主根和須根主要皂苷在高效液相色譜圖中組成(各皂苷峰面積比例及質量含量
比例)(%)
皂苷出峰順序Rg1ReRb1RcRb2Rd
西洋參主根峰面積比(%)9.6733.838.165.492.4410.6
質量含量比(%)7.6931.842.045.882.6210.0
西洋參須根峰面積比(%)4.3234.424.812.44.3120.4
質量含量比(%)3.4332.327.313.34.6119.1
由此可見,總皂苷高效液相色譜圖中的各皂苷峰面積比例與摩爾含量比例一致;各皂苷
峰面積比例與質量含量比例差異4%以內。西洋參主根和須根的最大區(qū)別,總皂苷中主根的
主要皂苷Re和Rb1含量為總皂苷70%以上,須根為60%以下。沒有人參特征皂苷Rf和三七
特征皂苷R1。
三七主根和須根總皂苷(附件-2C):三七主根和須根各總皂苷中,各皂苷峰面積比例
與質量含量比例:主要人參皂苷出峰順序為R1、Rg1、Re、Rb1、Rd;各皂苷峰面積比例與
質量含量比例,如下表4所示:
表4、三七主根和須根主要皂苷在高效液相色譜圖中峰面積比例及質量含量比例(%)
皂苷出峰順序R1Rg1ReRb1Rd
三七主根峰面積比(%)11.944.55.2927.510.9
質量含量比(%)12.038.55.4132.911.1
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10.6
三七須根峰面積比(%)10.151.16.1722.3
質量含量比(%)10.445.06.4227.211.0
由此可見,總皂苷高效液相色譜圖中的各皂苷峰面積比例與摩爾含量比例基本一致;各
皂苷峰面積比例與質量含量比例差異5%左右。三七根部主要皂苷為Rg1和Rb1,含量近70%,
特征皂苷為R1。
從上述試驗得知。人參、西洋參和三七各部總皂苷中各皂苷的峰面積比例與質量含量比
例差異5%以內。說明,用高效液相色譜法一般測定人參或西洋參或三七的根部總皂苷的峰
面積比例,近似代表各皂苷的質量含量比例。
7.3.1.2莖葉各總皂苷中,各皂苷峰面積比例與質量含量比例(%):
人參莖葉皂苷出峰順序:Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd(附件-2D);人參皂苷Re
和Rd在總皂苷中含量接近60%,遠高于人參根部,如表5所示。
表5、人參莖葉各皂苷峰面積比例及質量含量比例(%)
皂苷出峰順序Rg1ReRfRb1RcRb2Rd
人參莖葉峰面積比(%)16.932.34.487.446.496.6525.8
質量含量比(%)14.332.33.798.737.417.5925.8
西洋參莖葉各皂苷出峰順序:Rg1、Re、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd(附件-2E);在總皂
苷中Rb3和Rd含量60%以上,遠高于根部總皂苷,如表6所示。
表6、西洋參莖葉各皂苷峰面積比例及質量含量比例(%)
皂苷出峰順序Rg1ReRb1RcRb2Rb3Rd
西洋參莖葉峰面積比(%)3.8716.52.074.729.8735.827.3
質量含量比(%)3.0615.42.275.0310.5238.225.5
三七莖葉各皂苷出峰順序:Fa、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd、Gyp17、C-Mc1、C-Mx1;(附
件-2F)在總皂苷中Rb3和C-Mx1含量50%,與三七根部皂苷組成決然不同
表7、市銷的三七莖葉(一種產品)各皂苷峰面積比例及質量含量比例(%)
皂苷出峰順序FaRb1RcRb2Rb3RdGyp17C-Mc1C-Mx1
三七峰面積比(%)6.752.2613.511.333.92.711.796.6018.8
莖葉質量含量比(%)8.292.4614.312.035.92.521.65.916.9
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7.3.1.3歸納人參或西洋參或三七的根部和其莖葉人參皂苷特征指標及區(qū)別
a.原料人參皂苷含量:人參和西洋參;主根皂苷質量含量≥3.5%;須根皂苷含量≥5%。
三七主根皂苷質量含量,≥7%。市銷的人參皂苷、包括人參或西洋參或三七根部皂苷和莖葉
皂苷,總皂苷質量含量,≥80%;
b.在高效液相色譜中,人參或西洋參或三七的主根或須根或其莖葉總皂苷中各人參皂
苷峰面積比與摩爾含量摩爾比例一致。人參或西洋參或三七的根部總皂苷中各皂苷的峰面積
比例與質量含量比例差異5%以內;用人參或西洋參或三七的根部總皂苷中各人參皂苷峰面
積比例,可近似代表其人參皂苷質量含量比例:其主要區(qū)別:
(1)人參或西洋參或三七的根部總皂苷的區(qū)別:在高效液相色譜圖譜中,人參根部特
征皂苷為Rf,主要含Rg1、Re、Rf、Rb1、Rb2、Rc、Rb2、Rd;西洋參根部,主要60%以上
Re和Rb1,還含Rg1、Rb2、Rc、Rb2、Rd;三七根部特征皂苷為R1,主要含70%Rg1和Rb1
還含有Re和Rd。由此,可以區(qū)別產品中采用原料是人參或西洋參或三七根部;
(2)人參主根、須根和莖葉總皂苷區(qū)別(均含有特征皂苷Rf);
人參主根和須根總皂苷最大區(qū)別為;主根的人參三醇類皂苷Rg1、Re和Rf含量為總皂
苷的50%-55%;須根中人參三醇類皂苷Rg1、Re和Rf含量為總皂苷的34%左右。主根的人參
二醇類皂苷Rb1、Rc、Rb2和Rd含量為45%左右,而須根的參二醇類皂苷接近60%-70%;由
此可以區(qū)別人參主根和足夠。人參根部與莖葉總皂苷大區(qū)別:莖葉總皂苷中Rb1含量只有
4%左右,人參根部Rb1含量26%;莖葉總皂苷Rd含量26%,人參根部總皂苷Rd含量只有10%
左右。由此,可以區(qū)別人參產品中所用的原料是,人參主根、還是須根或者是莖葉皂苷。
(3)西洋參主根、須根和莖葉總皂苷區(qū)別:西洋參總皂苷中主根的主要皂苷Re和Rb1
含量為總皂苷70%以上,須根為60%以下;西洋參莖葉皂苷中Rb1皂苷含量只有2%,而Rb3
和Rd皂苷含量高達60%;由此可以區(qū)別產品中采用的原料是西洋參主根、須根和莖葉總皂
苷
(4)三七主根和莖葉總皂苷區(qū)別:三七根主要皂苷為R1、Rg1、Re、Rb1和Rd,三七
莖葉主要皂苷中為Rb3和C-Mx1皂苷,其含量高達50%;而R1、Rg1、Rb1皂苷含量很低,
由此可以區(qū)別產品中原料采用的是三七主根或莖葉。
(5)人參、西洋參和三七莖葉總皂苷的區(qū)別:人參莖葉總皂苷中Re和Rd含量接近60%;
西洋參莖葉總皂苷中Rb3和Rd含量60%以上;三七總皂苷中Rb3和C-Mx1含量50%左右;
不僅表示人參、西洋參和三七莖葉總皂苷之間的區(qū)別,也表示人參、西洋參和三七根部與莖
葉的區(qū)別。
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總之,根據上述人參或西洋參或三七的根部和莖葉皂苷組成指標的特點,可區(qū)別一種人
參產品中采用原料釋是否、人參或西洋參主根或者須根總皂苷,或者采用人參或西洋參或三
七根部或者莖葉皂苷;這對人參產業(yè)很有指導意義。
7.3.2用高效液相色譜法得到紅參浸膏(一種產品)總皂苷中各人參皂苷面積比與根
據計算式(2)所得到的質量含量比例
按照7.1、7.2和7.3。1方法測定,紅參浸膏產品中:干物質量含量≥60%,水不溶性
物質量含量2%以下;總人參皂苷質量含量,≥70mg/g;從干燥參紅參浸膏質量得率≥65%。
將3mg/mL的紅參浸膏總皂苷,進樣體積10μL,做高效液相色譜,記錄各人參皂苷
的高效液相色譜峰面積及其比例。紅參浸膏總皂苷中各人參皂苷出峰順序為:Rg1、Re、Rf、
Rb1、Rc、20(S)-Rg2、20(R)-Rg2、Rb2、20(S)-Rh1、20(R)-Rh1、Rd、Rg6、Rg4、Rk3、Rh4、
20(S)-Rg3、20(R)-Rg3、Rk1、Rg5、C-K、20(S)-Rh2、20(R)-Rh2、Rk2、Rh3(附件-3)。
制作6個不同濃度的上述各人參皂苷標準品的峰面積、質量濃度、摩爾濃度標準曲線,
與紅參經總皂苷高效液相色譜圖(附件-3)核對結果,其色譜圖和各皂苷峰面積比例與摩爾
含量比例基本一致;各皂苷質量濃度含量比例以計算式(2)的計算結果和峰面積比例,如
表8所示:
表8、紅參浸膏各人參皂苷在功效液相色譜圖中峰面積比和質量濃度比(%)
人參皂苷人參皂苷總皂苷中總皂苷中
出峰順序名稱峰面積比(%)質量含量比(%)
1Rg11.561.53
2Re2.332.70
3Rf2.432.38
4Rb17.5910.30
5Rc6.268.27
620(S,R)-Rg24.484.31
7Rb25.857.72
820(S)-Rh11.331.04
920(R)-Rh11.070.84
10Rd5.105.91
11Rg65.014.71
12Rg42.552.40
13Rk32.672.03
14Rh45.854.44
1520(S)-Rg310.910.5
1620(R)-Rg38.648.31
17Rk17.316.87
18Rg58.357.85
19C-K1.831.39
2020(S)-Rh22.521.92
12
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2120(R)-Rh21.521.16
22Rk22.051.52
23Rh32.621.94
由此得到:
紅參浸膏或人參煎制加工過程中,20(S)-原人參皂苷Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd
的20-O-糖鏈,分別被水解為稀有皂苷20(S)-和20(R)-羥基的Rg3、Rh2、Rg2、Rh1;其20-
羥脫水成Rg6、Rg4、Rk3、Rh4、Rk1、Rg5、Rk2、Rh3;其化學結構式為:
紅參浸膏指標:
a.紅參浸膏的干物質量含量≥60%,水不溶性物質量含量2%以下;總人參皂苷質量含
量≥60-70mg/g;從干參的產品質量得率≥65%:
b.紅參浸膏總皂苷中含有原人參皂苷Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd和其原皂苷轉化
生成的20(S)-和20(R)-羥基的Rg3、Rh2、Rg2、Rh1;其20-羥脫水成Rg6、Rg4、Rk3、Rh4、
Rk1、Rg5、Rk2、Rh3皂苷等,數(shù)量多,很難做產品指標。因次簡化產品指標:產品指標可
定為:
(1)以峰面積計算,50%以上原人參皂苷Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2和Rd、轉化成
20(S)-和20(R)-羥基的Rg3、Rh2、Rg2、Rh1;其20-羥脫水成Rg6、Rg4、Rk3、Rh4、Rk1、
Rg5、Rk2、Rh3等稀有皂苷;
(2)紅參浸膏中,明顯地檢出Rg1、Rb1、20(S)-Rg3、20(R)-Rg3、Rk1、Rg5色譜峰;
其6種特征皂苷質量含量為,≥20mg/g。
(3)用讓人參浸膏配制的制品或經人參煎熬制備的人參制品中總人參皂苷質量含量與
13
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總皂苷各皂苷含量比例,可參考紅參浸膏的測定方法,可以確定。
上述方法也適用于其他煎制人參制品以及用紅參浸膏配置的人參制品等;其指標:根據
廠家的具體產品的不同,可以建立具體產品的人參總皂苷含量及總皂苷中原人參皂苷和其原
皂苷轉化成稀有皂苷的含量比例。
7.3.3用高效液相色譜法得到人參酒(一種產品)總皂苷中各人參皂苷面積比與根據
計算式(2)所得到的質量含量比例
一種人參酒產品,酒度為51vol%,人參總皂苷質量含量為36.0mg/100mL酒。將3mg/mL
的人參酒總皂苷,進樣體積10μL,做高效液相色譜圖,記錄各人參皂苷的高效液相色譜
圖(附件-4)。各皂苷出峰順序為Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、20(S,R)-Rg2、Rb2、20(S,R)-Rh1、
Rd、0.14Rg6、20(S)-Rg3、20(R)-Rg3、Rk1、Rg5、Rk2、Rh3等(附件-4)。
0.12制作6個不同濃度的上述各人參皂苷Rb標1準品的峰面積、質量濃度、摩爾濃度標準曲線,
0.10
3
3Rg1,Re
9
0
.
.
0
1
8
4
0
與人0.08參酒總皂苷高效液相3色譜圖(附件-4)R核b2對結果,其色譜圖和各皂苷峰面積比例與摩爾
Rg2Rc
AR-Rg3
U
0.064Rh3
6
Rf0S-Rg3
2
.
3Rg5
7
.
5
9
4
含量比例基本一致;各皂苷質量濃度含量比例以計算式(2)的計算結果和峰面積比例5,如
1
1
.
2
2
9
9
4
.
.
0
5
7
2
0
0.047
0
3
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