《輸水工程 沼蛤監(jiān)測(cè)技術(shù)導(dǎo)則》

T/CHESXXX—20XX

ICS編號(hào)

CCS編號(hào)

團(tuán)?體?標(biāo)?準(zhǔn)

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輸水工程沼蛤監(jiān)測(cè)技術(shù)導(dǎo)則

TechnicalguidelineforLimnopernafortuneimonitoringinwater

transferproject

（征求意見稿）

20XX-XX-XX發(fā)布20XX-XX-XX實(shí)施

中國(guó)水利學(xué)會(huì)?發(fā)布

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輸水工程沼蛤監(jiān)測(cè)技術(shù)導(dǎo)則

1范圍

本文件規(guī)定了沼蛤潛在適生區(qū)內(nèi)的輸水工程及其水源地、受水區(qū)沼蛤樣品的采集、處

理、保存及分析工作。

本文件適用于對(duì)工程的沼蛤入侵風(fēng)險(xiǎn)、水源地的沼蛤引入風(fēng)險(xiǎn)和受水區(qū)的沼蛤擴(kuò)散風(fēng)

險(xiǎn)的評(píng)估，以及對(duì)沼蛤防治措施效果的評(píng)估。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期

的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括

所有的修改單）適用于本文件。

GB/T20001.4-2015標(biāo)準(zhǔn)編寫規(guī)則第4部分：試驗(yàn)方法標(biāo)準(zhǔn)

GB/T40226-2021環(huán)境微生物宏基因組檢測(cè)高通量測(cè)序法

SL219-2013水環(huán)境監(jiān)測(cè)規(guī)范

SL733-2016內(nèi)陸水域浮游植物監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)程

SC/T9402-2010淡水浮游生物調(diào)查技術(shù)規(guī)范

T/CHES55-2021技術(shù)供水系統(tǒng)沼蛤防治導(dǎo)則

T/CHES56-2021輸水工程沼蛤防治系統(tǒng)技術(shù)導(dǎo)則

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

3.1

輸水工程沼蛤入侵Limnopernafortuneiinvasioninwatertranferproject

沼蛤由原生存地隨輸工程侵入到另一個(gè)新的環(huán)境，并對(duì)工程的輸水效能、水質(zhì)以及受水

區(qū)的生態(tài)系統(tǒng)造成危害的現(xiàn)象。

注：輸水工程沼蛤入侵過程包括從水源地的引入、在工程中的定植和在受水區(qū)的擴(kuò)散。

3.2

沼蛤潛在適生區(qū)PotentialinhabitingregionsofLimnopernafortunei

氣候、水文、水動(dòng)力等條件可適宜沼蛤生存、繁殖、擴(kuò)張的地區(qū)。

3.3

沼蛤幼蟲密度Limnopernafortuneilaval/veligerdensity

某一時(shí)間內(nèi)單位水體中現(xiàn)存浮游沼蛤幼蟲的數(shù)量，用個(gè)體數(shù)表示。

注：沼蛤幼蟲密度的單位為個(gè)/m3。

3.4

沼蛤成貝密度Limnopernafortuneimusseldensity

某一時(shí)間內(nèi)單位面積上附著的沼蛤成貝的數(shù)量，用個(gè)體數(shù)表示。

注：沼蛤成貝密度的單位為個(gè)/m2。

3.5

沼蛤體長(zhǎng)Limnopernafortuneishelllength

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沼蛤個(gè)體的長(zhǎng)度，指沼蛤個(gè)體表面兩點(diǎn)之間的最長(zhǎng)長(zhǎng)度。

注：沼蛤體長(zhǎng)的單位為mm。

3.6

沼蛤伴生菌落BacterialcommunitiesassociatedwithLimnopernafortuneicolonization

附著在沼蛤表面及周圍的微生物群落。

3.7

沼蛤環(huán)境DNA（eDNA）EnvironmentalDNA（eDNA）ofLimnopernafortunei

水體樣品中存在的沼蛤的遺傳物質(zhì)，包括細(xì)胞內(nèi)外的DNA。

3.8

實(shí)時(shí)熒光定量PCRQuantitativeReal-timePCR

一種在DNA擴(kuò)增反應(yīng)中，以熒光化學(xué)物質(zhì)測(cè)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）循環(huán)后產(chǎn)物總量

的方法。

4總體要求

4.1對(duì)沼蛤潛在適生區(qū)內(nèi)的輸水工程及其水源地、受水區(qū)的沼蛤宜進(jìn)行監(jiān)測(cè)。

4.2輸水工程宜進(jìn)行沼蛤成貝監(jiān)測(cè)。成貝監(jiān)測(cè)宜在典型工程段進(jìn)行。成貝監(jiān)測(cè)包括工程或結(jié)

構(gòu)停水后的常規(guī)監(jiān)測(cè)和工程通水期間的水下機(jī)器人監(jiān)測(cè)。兩種成貝監(jiān)測(cè)方法的選擇原則為：

（a）對(duì)有條件停水檢修的工程段宜采用常規(guī)監(jiān)測(cè)；

（b）對(duì)無(wú)條件停水檢修的工程段宜參考附錄A選擇水下機(jī)器人監(jiān)測(cè)。

4.3輸水工程及其水源地、受水區(qū)宜開展沼蛤幼蟲、eDNA監(jiān)測(cè)。

4.4輸水工程停水期間宜進(jìn)行沼蛤伴生菌落監(jiān)測(cè)。

4.5監(jiān)測(cè)完成后宜評(píng)估沼蛤的入侵風(fēng)險(xiǎn)和沼蛤防治措施的效果。

4.5.1入侵風(fēng)險(xiǎn)應(yīng)包括輸水工程的沼蛤入侵風(fēng)險(xiǎn)、水源地的沼蛤引入風(fēng)險(xiǎn)及受水區(qū)的沼蛤擴(kuò)

散風(fēng)險(xiǎn)。

4.5.2應(yīng)通過比較沼蛤防治措施實(shí)施前后的沼蛤密度來(lái)評(píng)估防治效果。

5監(jiān)測(cè)斷面布設(shè)

5.1一般規(guī)定

5.1.1應(yīng)充分考慮項(xiàng)目監(jiān)測(cè)的目的和需求。

5.1.2應(yīng)與水質(zhì)監(jiān)測(cè)站等已有監(jiān)測(cè)斷面相結(jié)合。

5.1.3應(yīng)符合經(jīng)濟(jì)、便捷和長(zhǎng)期監(jiān)測(cè)的要求。

5.1.4應(yīng)具有較好的代表性，能反映一定范圍內(nèi)水體中沼蛤的實(shí)際分布狀況。

5.1.5應(yīng)具有較好的整體性，能反映工程沿線沼蛤的整體分布情況。

5.2監(jiān)測(cè)斷面

5.2.1成貝

成貝監(jiān)測(cè)斷面應(yīng)覆蓋從工程首部到尾部的不同結(jié)構(gòu)段及重要分水口。

停水渠段或結(jié)構(gòu)均應(yīng)進(jìn)行常規(guī)監(jiān)測(cè)。針對(duì)常規(guī)監(jiān)測(cè)，應(yīng)根據(jù)結(jié)構(gòu)沿線的成貝密度分

布情況確定斷面間距、數(shù)量，具體規(guī)定如下：

（a）沿線最高密度和最低密度比小于1.5倍時(shí)，宜在結(jié)構(gòu)進(jìn)口、中間、出口位置設(shè)置3

個(gè)監(jiān)測(cè)斷面；

（b）沿線最高密度和最低密度比大于1.5倍時(shí)，應(yīng)按照變化梯度加密監(jiān)測(cè)斷面，并在

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密度突變、過渡處設(shè)置監(jiān)測(cè)斷面，監(jiān)測(cè)斷面數(shù)量根據(jù)需要可設(shè)置5-7個(gè)。

水下機(jī)器人監(jiān)測(cè)應(yīng)根據(jù)工程實(shí)際情況和需求確定監(jiān)測(cè)斷面。

5.2.2幼蟲

工程內(nèi)部幼蟲監(jiān)測(cè)斷面應(yīng)與成貝監(jiān)測(cè)斷面對(duì)應(yīng)。

應(yīng)選擇水流穩(wěn)定的斷面采樣。

應(yīng)充分考慮水體類型特點(diǎn)與監(jiān)測(cè)的目的、需求，斷面布設(shè)應(yīng)具有代表性，能反映斷

面整體的情況。

水面寬度小于50m，可在中心布設(shè)1條采樣垂線（點(diǎn)）；水面寬度為50-100m的，應(yīng)

布設(shè)左右2條采樣垂線（點(diǎn)）；水面寬度大于100m的，采樣垂線（點(diǎn)）不得少于左、中、

右3條（個(gè)）。

根據(jù)水深的不同，應(yīng)進(jìn)行分層采樣，具體要求如下：

（a）對(duì)于水深小于1.5m的水體，可在水面0.5m以下采集1個(gè)樣本；

（b）當(dāng)水深大于1.5m且小于3m時(shí)，應(yīng)在水面以下0.5、1.5、2.5m處分別采集1個(gè)

樣本；

（c）當(dāng)水深大于3m且小于5m時(shí)，應(yīng)在水面以下0.5、1.5、2.5、3.5、4.5m處分別

采集1個(gè)樣本；

（d）當(dāng)水深大于5m時(shí)，應(yīng)在水面以下0.5、1.5、2.5、3.5、4.5m處分別采集1個(gè)樣

本。

分層采樣應(yīng)滿足水體類型特點(diǎn)及項(xiàng)目監(jiān)測(cè)目的與需求,可根據(jù)實(shí)際情況適當(dāng)調(diào)整垂

線上的樣本數(shù)。

5.2.3伴生菌落

伴生菌落采樣斷面應(yīng)與停水期間成貝采樣斷面對(duì)應(yīng)。

5.2.4環(huán)境DNA

沼蛤eDNA采樣點(diǎn)可根據(jù)前期研究及水體類型特點(diǎn)、實(shí)際需求等確定。

6成貝

6.1主要器具

（a）數(shù)碼相機(jī)；

（b）皮尺；

（c）油灰刀；

（d）鋼卷尺；

（e）自封袋；

（f）體式顯微鏡；

（g）醫(yī)用手套；

（h）水下機(jī)器人。

6.2監(jiān)測(cè)頻率與采樣時(shí)間

6.2.1常規(guī)監(jiān)測(cè)應(yīng)與工程停水檢修結(jié)合。

6.2.2水下機(jī)器人監(jiān)測(cè)頻率宜不少于每3個(gè)月1次。

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6.3樣品采集

6.3.1常規(guī)成貝采集

確定采樣斷面，斷面信息（結(jié)構(gòu)形式、采樣斷面環(huán)境、附著情況等）應(yīng)記錄在表B.1。

拍照留存樣點(diǎn)信息，具體包括整體環(huán)境照片、樣方照片、細(xì)部照片等，拍照應(yīng)放上尺子，從

不同方位拍攝3-6張照片。

選定采樣位置后劃定1個(gè)樣方。樣方面積應(yīng)根據(jù)成貝附著密度判斷，應(yīng)保證最后采

集到的成貝數(shù)量不少于200個(gè)。用油灰刀將樣方內(nèi)的成貝刮下，用封口袋收集，貼上標(biāo)簽，

記錄日期和編號(hào)。

每個(gè)斷面應(yīng)至少采集3個(gè)樣本，覆蓋淡水殼菜附著的高密度區(qū)、中密度區(qū)與低密度

區(qū)。

應(yīng)用游標(biāo)卡尺測(cè)量沼蛤?qū)λ啾诿娴母g坑深度，將信息記錄附表B.1中。

6.3.2水下機(jī)器人監(jiān)測(cè)圖像采集

采用水下機(jī)器人監(jiān)測(cè)應(yīng)保證每個(gè)斷面采集的圖像帶標(biāo)尺，圖像格式為.jpeg且清晰。

圖像采集信息應(yīng)計(jì)入附表B.2中。

6.4樣品分析

6.4.1成貝常規(guī)監(jiān)測(cè)

應(yīng)將采集的成貝樣本帶回實(shí)驗(yàn)室對(duì)體長(zhǎng)進(jìn)行測(cè)量和分析，體長(zhǎng)測(cè)量結(jié)果記入附表B.3。

應(yīng)對(duì)成貝樣本進(jìn)行計(jì)數(shù)，且計(jì)算成貝最大附著密度Dmax和成貝平均附著密度Dmean，按

公式（1）和（2）計(jì)算：

（）（1）

（2）

?max=????1,?2……,?n

式中：

?mean=?1×?1+?2×?2+…+?n×??

2

Dmax——成貝最大附著密度，個(gè)/m；

2

Dmean——成貝平均附著密度，個(gè)/m；

2

Di——第i個(gè)樣方的成貝密度，個(gè)/m；

pi——密度為Di的成貝附著面積占斷面總面積的比例，%；

n——樣方數(shù)量，個(gè)。

6.4.2成貝水下機(jī)器人監(jiān)測(cè)

應(yīng)用基于圖像自動(dòng)識(shí)別的軟件系統(tǒng)（基于圖像識(shí)別軟件BASEGRAIN二次開發(fā)，網(wǎng)址：

https://basement.ethz.ch/download/tools/basegrain.html）對(duì)水下機(jī)器人采集的圖像進(jìn)行辨識(shí)、

計(jì)數(shù)和測(cè)量，該軟件輸入的為.jpeg格式的圖片，輸出的為每個(gè)沼蛤成貝的長(zhǎng)軸長(zhǎng)（體長(zhǎng)）

和短軸長(zhǎng)，進(jìn)而可計(jì)算沼蛤的附著密度，相關(guān)結(jié)果可記入附表B.2。

7幼蟲

7.1試劑

4%甲醛溶液：體積分?jǐn)?shù)為4%。

7.2主要器具

（a）數(shù)碼相機(jī)；

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（b）浮游生物網(wǎng)：25號(hào)、200目；

（c）直流泵；

（d）蓄電池；

（e）定容水桶：50L；

（f）麻繩：直徑5mm，長(zhǎng)度10m；

（g）樣品瓶：50mL、100mL；

（h）滴管；

（i）醫(yī)用手套。

7.3監(jiān)測(cè)頻率與采樣時(shí)間

7.3.1宜對(duì)各監(jiān)測(cè)斷面幼蟲密度進(jìn)行不少于1年的監(jiān)測(cè)，監(jiān)測(cè)頻率為每月1次。

7.3.2應(yīng)根據(jù)幼蟲密度實(shí)測(cè)結(jié)果，判斷繁殖高峰季節(jié)及繁殖間歇期。

7.3.3在繁殖間歇期內(nèi)，采樣監(jiān)測(cè)頻率可為每月1次；在繁殖高峰期，采樣頻率宜為每周1

次。

7.4樣品采集

7.4.1針對(duì)目標(biāo)水深，采用便攜式直流水泵抽取500-1000L水樣，浮游生物量越少、水樣量

越大。經(jīng)25號(hào)浮游生物網(wǎng)過濾，濾液體積宜為5-10mL。濾液收集在樣品管（容積20-50mL）

中。

7.4.2樣品管貼好標(biāo)簽后，應(yīng)放入便攜式冰箱中保存并帶回實(shí)驗(yàn)室鏡檢計(jì)數(shù)（24h內(nèi)處理）

或加入甲醛溶液固定后帶回實(shí)驗(yàn)室鏡檢計(jì)數(shù)（可24h后處理）。

7.4.3與沼蛤棲息相關(guān)的現(xiàn)場(chǎng)測(cè)試項(xiàng)目如水溫、pH、溶解氧、化學(xué)需氧量等的測(cè)定應(yīng)按SL

219-2013的規(guī)定進(jìn)行，結(jié)果記入附表C.1。

7.4.4采樣完成后應(yīng)填寫沼蛤幼蟲采樣表（見附表C.2）。

7.5樣品分析

7.5.1水樣的沉淀與濃縮

將樣品管中水樣移至50ml離心管中，且靜置4h后，吸去上清液保留5ml。如果藻類太

多，可根據(jù)情況定濃縮后的體積。

7.5.2發(fā)育階段鑒定及計(jì)數(shù)

應(yīng)將濃縮后的離心管內(nèi)水樣搖勻，用滴管吸取1ml溶液置于計(jì)數(shù)框內(nèi)，在顯微鏡下

觀察沼蛤幼蟲發(fā)育階段和數(shù)量。如果藻類很多，可吸取0.25ml置于計(jì)數(shù)框內(nèi)，再加清水稀

釋后觀察。觀察完成后，應(yīng)用清水對(duì)計(jì)數(shù)框進(jìn)行清洗，然后吸取一定體積的溶液繼續(xù)觀察，

依次完成對(duì)濃縮后溶液的觀測(cè)。

沼蛤幼蟲的發(fā)育階段包括D型期幼蟲、前期面盤幼蟲、后期面盤幼蟲和躑行期幼蟲

（附圖C.1），應(yīng)將檢測(cè)結(jié)果記錄在幼蟲檢測(cè)結(jié)果記錄表中（附表C.3）。

應(yīng)按公式（3）計(jì)算每個(gè)發(fā)育階段的幼蟲密度：

（3）

?

式中：?=?×1000

D——每個(gè)發(fā)育階段的幼蟲密度，個(gè)/m3；

C——鏡檢觀測(cè)到的每個(gè)發(fā)育階段的幼蟲的數(shù)量，個(gè)；

V——經(jīng)浮游生物網(wǎng)過濾的水體體積，L。

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幼蟲的總密度應(yīng)為每個(gè)發(fā)育階段幼蟲密度之和。

8環(huán)境DNA

8.1試劑

（a）STE：10mMTris-HCl(pH=8.0)、1mMEDTA(pH=8.0)、100mMNaCl的混合溶液；

（b）TE緩沖液:10mMTris-HCl(pH=8.0)、1mMEDTA(pH=8.0)；

（c）1%SDS（十二烷基磺酸鈉）溶液；

（d）蛋白酶K；

（e）Tris飽和酚(pH=8.0)；

（f）PCI：酚-氯仿-異戊醇（25：24：1）；

（g）冰無(wú)水乙醇（-20℃冷凍）；

（h）2M乙酸銨溶液；

（i）DNA提取試劑盒；

（j）預(yù)混實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)體系（mix）；

（k）沼蛤特異性引物（F:AGAACCCCAGCAGTTGACATAG;R:

CCACCTAGAACTGGTAGTGAAACTAAC）；

（l）雙蒸水；

（m）70%酒精。

8.2主要器具

（a）采樣瓶；

（b）抽濾泵；

（c）硝酸纖維素膜，0.45μm；

（d）冰箱；

（e）離心管；

（f）水浴鍋；

（g）烘箱；

（h）離心機(jī)；

（i）振蕩混勻器；

（j）分光光度計(jì)；

（k）熒光定量PCR儀；

（l）移液槍。

8.3監(jiān)測(cè)頻率與采樣時(shí)間

監(jiān)測(cè)頻率宜與幼蟲監(jiān)測(cè)頻率一致。

8.4樣品采集

8.4.1應(yīng)在水體表面10cm以下采集水樣550-2000mL，應(yīng)4℃冷藏保存，時(shí)間不應(yīng)超過48h，

采樣相關(guān)信息應(yīng)計(jì)入附表D.1。

8.4.2應(yīng)利用抽濾裝置將水體中沼蛤的eDNA及泥沙等抽濾到硝酸纖維素膜上，并-20℃冷

凍保存至試驗(yàn)，保存時(shí)間不應(yīng)超過1年，若保存時(shí)間超過一年，應(yīng)-80℃冷凍保存。

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8.5樣品分析

8.5.1環(huán)境DNA提取

濾膜中的eDNA可通過酚氯仿抽提，具體步驟如下：

a）將濾膜剪碎放入2ml的離心管中，加入700μlSTE+1%SDS溶液和50μl蛋白酶K，

56℃水浴3小時(shí)。

b）水浴后，加入400μlTris飽和酚，振蕩均勻，并13000r/min離心10分鐘?；厥?00μl

上清液到新的離心管，并加入600μlPCI下層溶液，振蕩均勻，13000r/min離心10

分鐘，回收400μl上清液到新的離心管。

c）在回收的上清液中加入2倍體積的冰無(wú)水乙醇和50μl乙酸銨溶液。在4℃環(huán)境下冷

藏15分鐘后，并在4℃環(huán)境下13000r/min離心10分鐘。此時(shí)DNA已沉淀至離心

管底部，緩慢倒掉管內(nèi)液體。

d）加入1000μl70%酒精溶液，來(lái)回顛倒離心管后4℃13000r/min離心10分鐘，緩慢倒

掉管內(nèi)液體。

e）50℃烘干后得到DNA樣品用于下一步試驗(yàn)。

以沼蛤成貝閉殼肌為提取材料，重復(fù)的步驟，得到陽(yáng)性對(duì)照樣品。以未使用

的濾膜為提取材料，重復(fù)上述步驟，得到陰性對(duì)照樣品。如采用商用試劑盒提取，提取步驟

應(yīng)按說明書進(jìn)行。

8.5.2實(shí)時(shí)熒光定量PCR

將得到的DNA樣品溶解至50μl的TE緩沖液中用作模板，同時(shí)利用分光光度計(jì)給出的

吸光度比值A(chǔ)260/A280、A260/A230檢測(cè)所提取DNA的質(zhì)量：純凈的DNA樣品

A260/A280應(yīng)大于1.8，A260/A230的比值應(yīng)大于2.0。質(zhì)量滿足要求后在體系中加入1μl

模板、正反引物各1μl、10μlmix、7μl水，用于實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)。反應(yīng)設(shè)置為：95℃

預(yù)變性10min；50個(gè)擴(kuò)增循環(huán)，每個(gè)循環(huán)95℃10s，62℃20s，72℃30s；熔解。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)完成后，可獲得熔解曲線與擴(kuò)增曲線。試驗(yàn)樣品熔解曲線熔解

峰與陽(yáng)性對(duì)照樣品熔解峰匹配，可判斷為特異性擴(kuò)增，擴(kuò)增DNA為沼蛤的DNA；否則為

引物二聚體等產(chǎn)物。從發(fā)生了特異性擴(kuò)增的樣品擴(kuò)增曲線中可得到Ct值（也稱Cq值），為

反應(yīng)體系中熒光信號(hào)強(qiáng)度達(dá)到閾值時(shí)所經(jīng)歷的擴(kuò)增循環(huán)數(shù)。

8.5.3數(shù)據(jù)分析

定性分析

Ct值小于40表明樣點(diǎn)可能存在沼蛤，作為早期預(yù)警標(biāo)準(zhǔn)。

定量分析

利用附錄E所述步驟可得每個(gè)樣品中的沼蛤DNA濃度，原水中沼蛤DNA濃度用下式

計(jì)算：

（4）

??×50

式中：?=?×1000

C——原水中的沼蛤DNA濃度，ng/μl；

C1——樣品中提取的沼蛤DNA濃度，ng/μl；

V——過濾到濾膜上的水體體積，ml。

9伴生菌落

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9.1試劑

干冰。

9.2主要器具

（a）冰箱；

（b）50ml無(wú)菌離心管;；

（c）無(wú)菌蒸餾水；

（d）無(wú)菌手套；

（e）無(wú)菌棉簽；

（f）無(wú)菌采樣袋。

9.3監(jiān)測(cè)頻率與采樣時(shí)間

9.3.1菌落采樣宜與工程或結(jié)構(gòu)停水檢修后的沼蛤成貝常規(guī)監(jiān)測(cè)頻率一致。

9.3.2菌落采樣宜在停水后4-7天進(jìn)行。

9.4樣品采集

9.4.1確定采樣樣點(diǎn)，記錄樣點(diǎn)斷面信息，拍攝現(xiàn)場(chǎng)照片。用無(wú)菌蒸餾水潤(rùn)濕滅菌棉簽（如

果環(huán)境濕潤(rùn)可省略此步驟）后，用棉簽擦拭沼蛤表面及足絲附近發(fā)育的菌絲，并保存在無(wú)菌

離心管中。每個(gè)樣點(diǎn)應(yīng)采集至少5根棉簽樣。在無(wú)沼蛤附著的壁面重復(fù)上述操作，作為環(huán)境

對(duì)照組。采樣過程中，應(yīng)設(shè)置1組棉簽作為陰性對(duì)照。

9.4.2離心管上記錄樣點(diǎn)編號(hào)、采樣時(shí)間。將樣品放于冰箱內(nèi)-20℃保存，并在24h內(nèi)進(jìn)行測(cè)

序處理。

9.4.3將樣點(diǎn)編號(hào)、采樣時(shí)間和樣點(diǎn)環(huán)境描述等信息記入附表F.1。

9.5樣品分析

9.5.1樣品處理

樣品采集完成后，按《GB/T40226-2021環(huán)境微生物宏基因組檢測(cè)高通量測(cè)序法》依

次進(jìn)行提取基因組DNA、PCR擴(kuò)增和產(chǎn)物純化、測(cè)序文庫(kù)構(gòu)建、雙端測(cè)序。此部分工作可

交由商業(yè)測(cè)序公司完成。

9.5.2數(shù)據(jù)分析

原始測(cè)序數(shù)據(jù)經(jīng)序列拼接、嵌合體去除等質(zhì)控流程后，應(yīng)以97%相似度聚類為OTU單

元，與silva128/16s_bacteria對(duì)比，進(jìn)行物種注釋。根據(jù)OTU注釋結(jié)果識(shí)別其中潛在的致病

微生物，致病微生物可參考國(guó)家病原微生物資源庫(kù)（/#/）。

10監(jiān)測(cè)報(bào)告

10.1監(jiān)測(cè)工作完成后應(yīng)完成監(jiān)測(cè)報(bào)告。

10.2監(jiān)測(cè)報(bào)告應(yīng)評(píng)估沼蛤的入侵風(fēng)險(xiǎn)和沼蛤防治措施效果中的至少1項(xiàng)。根據(jù)要求的監(jiān)測(cè)

范圍，沼蛤入侵風(fēng)險(xiǎn)應(yīng)至少包括水源地的引入風(fēng)險(xiǎn)、工程中的定植風(fēng)險(xiǎn)、受水區(qū)的擴(kuò)散風(fēng)險(xiǎn)

3項(xiàng)中的1項(xiàng)。

10.3監(jiān)測(cè)報(bào)告應(yīng)至少包括下列內(nèi)容：

a）監(jiān)測(cè)機(jī)構(gòu)名稱、聯(lián)系方式和地址、檢測(cè)員、樣品接收時(shí)間、樣品監(jiān)測(cè)時(shí)間及報(bào)告時(shí)

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間；

b）工程概況、監(jiān)測(cè)范圍、監(jiān)測(cè)方法、監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)、結(jié)果及建議。

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附錄A

（資料性）

水下機(jī)器人選用原則

A.1水下機(jī)器人攝像頭應(yīng)能高分辨率成像，拍攝圖片應(yīng)有標(biāo)尺。

A.2水下機(jī)器人應(yīng)具有很好的抗逆流及障礙回避能力，且能適應(yīng)復(fù)雜環(huán)境。

A.3水下機(jī)器人應(yīng)具有長(zhǎng)期續(xù)航能力。

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附錄B

（資料性）

成貝記錄表

表B.1~表B.3給出了成貝采樣和分析用到的記錄表。

表B.1成貝常規(guī)采樣記錄表

采樣時(shí)間斷面（照片）編號(hào)

斷面樁號(hào)斷面結(jié)構(gòu)類型

腐蝕坑1深度腐蝕坑1深度

（mm）（mm）

腐蝕坑n深度

……

（mm）

樣方1距離結(jié)構(gòu)樣方1距離渠樣方1采樣面

入口距離（m）底深度（m）積（m2）

樣方2距離結(jié)構(gòu)樣方2距離渠樣方2采樣面

入口距離（m）底深度（m）積（m2）

……

樣方n距離結(jié)構(gòu)樣方n距離渠樣方n采樣面

入口距離（m）底深度（m）積（m2）

備注

檢測(cè)人員簽字：

分析人員簽字：

校核人員簽字：

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表B.2成貝水下機(jī)器人監(jiān)測(cè)記錄表

圖像采集時(shí)間斷面（照片）編號(hào)

斷面樁號(hào)斷面結(jié)構(gòu)類型

樣方1距離結(jié)構(gòu)樣方1距離渠底

入口距離（m）深度（m）

樣方2距離結(jié)構(gòu)樣方2距離渠底

入口距離（m）深度（m）

……

樣方n距離結(jié)構(gòu)樣方n距離渠底

入口距離（m）深度（m）

備注

檢測(cè)人員簽字：

分析人員簽字：

校核人員簽字：

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表B.3成貝體長(zhǎng)結(jié)果記錄表

樣點(diǎn)（樣方）編號(hào)：采樣日期：

個(gè)體號(hào)體長(zhǎng)（mm）個(gè)體號(hào)體長(zhǎng)(mm)

1#19#

2#20#

3#21#

4#22#

5#23#

6#……

7#

8#

9#

10#

11#

12#

13#

14#

15#

16#

17#

18#

密度

檢測(cè)人員簽字：

分析人員簽字：

校核人員簽字：

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附錄C

（資料性）

幼蟲記錄表及鑒定圖

表C.1~表C.3給出了成貝采樣和分析用到的記錄表。圖C.1給出了幼蟲不同發(fā)育階段的

鑒定圖。

表C.1環(huán)境參數(shù)記錄表

樣點(diǎn)溶解氧化學(xué)需氧量生化需氧量氨氮大腸桿菌數(shù)硫酸根濃度

水溫（℃）pH總氮（mg/L）

編號(hào)（mg/L）（mg/L）（mg/L）（mg/L）（MPN/mL）（mg/L）

1

2

3

4

5

……

n

檢測(cè)人員簽字：

分析人員簽字：

校核人員簽字：

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表C.2幼蟲現(xiàn)場(chǎng)采樣記錄表

樣點(diǎn)編采樣時(shí)間樣點(diǎn)位置采樣深度采樣體積樣品濃縮體積備注

號(hào)

1

2

3

4

5

……

n

檢測(cè)人員簽字：

分析人員簽字：

校核人員簽字：

18

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表C.3幼蟲密度記錄表

樣點(diǎn)編號(hào)：采樣日期：?jiǎn)挝唬簜€(gè)/m3

樣點(diǎn)編號(hào)D型期幼蟲前期面盤幼蟲后期面盤幼蟲躑行期期幼蟲全部幼蟲

1

2

3

4

5

……

n

檢測(cè)人員簽字：

分析人員簽字：

校核人員簽字：

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（a）D-型幼蟲（b）前期殼頂幼蟲

（c）過渡期殼頂幼蟲（d）后期殼頂幼蟲

（e）躑行幼蟲

圖C.1沼蛤幼蟲不同發(fā)育階段鑒定圖

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附錄D

（資料性）

環(huán)境DNA記錄表

表D.1給出了eDNA記錄表。

表D.1eDNA記錄表

樣點(diǎn)編采樣時(shí)間樣點(diǎn)位置采樣體積抽濾體積樣點(diǎn)環(huán)境描述備注

號(hào)（水深、流速、

水溫）

1

2

3

4

5

……

n

檢測(cè)人員簽字：

分析人員簽字：

校核人員簽字：