《中國(guó)藥典》2010版二部生化藥品增修訂概況與解讀課件

《中國(guó)藥典》2010版二部

生化藥品增修訂概況與解讀

梁翠榮

山東省藥品檢驗(yàn)所

《中國(guó)藥典》2010版二部生化藥品增修訂概況與解讀2010版藥典宗旨：提高藥典質(zhì)量，應(yīng)用高新技術(shù)，解決安全隱患，趕超國(guó)際水平?！吨袊?guó)藥典》2010版二部生化藥品增修訂概況與解讀生化藥的定義

生化藥主要從動(dòng)、植物及微生物發(fā)酵提取的、化學(xué)合成、生物-化學(xué)半合成或用現(xiàn)代生物重組技術(shù)制得的一類(lèi)藥品。

2010版藥典收載品種氨基酸及其衍生物核苷酸及其衍生物酶與輔酶多肽及蛋白類(lèi)多糖及脂類(lèi)《中國(guó)藥典》2010版二部生化藥品增修訂概況與解讀增修訂概況1.凡例:增加對(duì)制法的要求2.正文:收載標(biāo)準(zhǔn)189個(gè)，增加36個(gè)，修訂144個(gè),

刪除2個(gè)。3.附錄:增加2個(gè)

(1)蛋白質(zhì)含量測(cè)定法

(2)合成多肽中的醋酸測(cè)定法修訂1個(gè)電泳法增訂第六法等電聚焦水平板電泳法《中國(guó)藥典》2010版二部生化藥品增修訂概況與解讀凡例制定“制法要求”的準(zhǔn)則1.用于注射用的或直接與傷口接觸的提取類(lèi)原料(凝血酶凍干粉)，應(yīng)在原料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中增加“制法要求”。2.其他劑型不在其相應(yīng)原料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中增訂“制法要求”，而由凡例統(tǒng)一規(guī)范?！吨袊?guó)藥典》2010版二部生化藥品增修訂概況與解讀凡例制法項(xiàng)下主要記載藥品的重要工藝要求和質(zhì)量管理要求所有藥品的生產(chǎn)工藝應(yīng)經(jīng)驗(yàn)證,并經(jīng)國(guó)務(wù)院藥品監(jiān)督管理部門(mén)批準(zhǔn),生產(chǎn)過(guò)程均應(yīng)符合GMP的要求。來(lái)源于動(dòng)物組織提取的藥品，其所用動(dòng)物種屬要明確，所用臟器均應(yīng)來(lái)自經(jīng)檢疫的健康動(dòng)物，涉及牛源的應(yīng)取自無(wú)牛海綿狀腦病地區(qū)的健康牛群；來(lái)源于人尿提取的藥品，均應(yīng)取自健康人群。上述藥品均應(yīng)有明確的病毒滅活工藝要求以及質(zhì)量管理要求。直接用于生產(chǎn)的菌種、毒種、來(lái)自人和動(dòng)物的細(xì)胞、DNA重組工程菌及工程細(xì)胞,來(lái)源途徑應(yīng)經(jīng)國(guó)務(wù)院藥品監(jiān)督管理部門(mén)批準(zhǔn),并應(yīng)符合國(guó)家有關(guān)的管理規(guī)范?！吨袊?guó)藥典》2010版二部生化藥品增修訂概況與解讀附錄蛋白質(zhì)含量測(cè)定法凱氏定氮法福林酚法雙縮脲法2，2’-聯(lián)喹啉-4，4’-二羧酸法考馬斯亮藍(lán)法紫外-可見(jiàn)分光光度法《中國(guó)藥典》2010版二部生化藥品增修訂概況與解讀

附錄注意各測(cè)定法依據(jù)的蛋白質(zhì)反應(yīng)原理不同，線(xiàn)性范圍不同，同時(shí)由于各品種的蛋白質(zhì)性質(zhì)，結(jié)構(gòu)的迥異導(dǎo)致同品種采用不同的測(cè)定方法其結(jié)果有較大差異。不同品種應(yīng)針對(duì)自身蛋白質(zhì)特性選擇適宜的測(cè)定方法并做相應(yīng)的方法學(xué)驗(yàn)證。常用的對(duì)照品有牛血清白蛋白、人血白蛋白、酪蛋白、免疫球蛋白及各品種的自身對(duì)照品。應(yīng)盡可能選用與待測(cè)品種蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)相同或相近的蛋白質(zhì)作對(duì)照品?！吨袊?guó)藥典》2010版二部生化藥品增修訂概況與解讀附錄

合成多肽中的醋酸測(cè)定法

為合成多肽中的醋酸檢查，提供統(tǒng)一的方法。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：C18柱210nm檢測(cè)流動(dòng)相A:0.07%磷酸溶液(pH3.0)流動(dòng)相B:甲醇

理論板數(shù)按醋酸峰計(jì)算不低于2000

梯度洗脫1.2ml/mlin

時(shí)間(min)流動(dòng)相A(%)流動(dòng)相B(%)0～59555～10505010～20505020～2295522～30955《中國(guó)藥典》2010版二部生化藥品增修訂概況與解讀附錄注意對(duì)照品溶液：取冰醋酸適量，精密稱(chēng)定，用流動(dòng)相A-流動(dòng)相B(95:5)的混合溶液制成約0.1mg/ml（濃度可隨供試品中醋酸的含量適當(dāng)調(diào)整）供試品溶液：按各品種項(xiàng)下規(guī)定的方法制備。醋酸峰的保留時(shí)間約在3～4min，采用梯度洗脫，主要是讓多肽組分從色譜柱中洗脫出來(lái)?！吨袊?guó)藥典》2010版二部生化藥品增修訂概況與解讀附錄合成多肽醋酸限度生長(zhǎng)抑素3.0%～15.0%胸腺法新（胸腺肽α1）不得過(guò)5.0%鮭降鈣素4.0%～15.0%醋酸丙氨瑞林不得過(guò)7.5%醋酸奧曲肽5.0%～12.0%《中國(guó)藥典》2010版二部生化藥品增修訂概況與解讀2010版生化藥標(biāo)準(zhǔn)品種數(shù)匯總類(lèi)別2005版標(biāo)準(zhǔn)（品種）2010版標(biāo)準(zhǔn)（品種）增加標(biāo)準(zhǔn)（品種）標(biāo)準(zhǔn)（品種）增長(zhǎng)%刪除氨基酸及其衍生物42（22）52（25）10（3）23.8%（14%）核酸及其衍生物44（10）51（11）7（1）15.9%（10%）酶與輔酶28（11）34（14）6（3）21.4%（27%）多肽、蛋白26（11）30（13）8（3）30.8%（27%）2多糖15（5）19（6）3（1）20.0%（20%）脂2（1）4（2）2（1）100.0%（100.0%）總數(shù)157（61）189（71）36（12）22.9%（19.6%）2《中國(guó)藥典》2010版二部生化藥品增修訂概況與解讀氨基酸及其衍生物品種與劑型氨基酸收載品種（25個(gè)）較全，幾乎包含國(guó)內(nèi)外所有的氨基酸原料，包含的劑型有片劑、注射液、膠囊劑、滴眼液、顆粒劑、口服溶液劑及沖洗液。項(xiàng)目鑒別：?jiǎn)我话被崞贩N的標(biāo)準(zhǔn)中統(tǒng)一增訂了專(zhuān)屬性較強(qiáng)的TLC法，有的品種同時(shí)用紅外光譜法；氨基酸衍生物用紅外光譜法。檢查：其他AATLC法和HPLC法部分品種熱原修訂為細(xì)菌內(nèi)毒素滴眼液品種增訂滲透壓摩爾濃度含量測(cè)定：滴定法、比色法及HPLC法?！吨袊?guó)藥典》2010版二部生化藥品增修訂概況與解讀核苷酸及其衍生物品種與劑型收載品種（11個(gè)）和劑型較全，劑型有片劑（片、含片、咀嚼片）、注射劑（小針、輸液、粉針）膠囊劑、乳膏劑、滴眼液、滴鼻液、顆粒劑及口服溶液劑。項(xiàng)目檢查：溶液的澄清度與顏色有關(guān)物質(zhì)TLC法和HPLC法殘留溶劑、熾灼殘?jiān)容斠骸⒌窝垡浩贩N增訂滲透壓摩爾濃度復(fù)方葡萄糖輸液增訂5-羥甲基糠醛(HPLC法)

部分品種熱原修訂為細(xì)菌內(nèi)毒素含量測(cè)定：UV及HPLC法?！吨袊?guó)藥典》2010版二部生化藥品增修訂概況與解讀鹽酸阿糖胞苷上海所起草，天津所、廣東所復(fù)核，達(dá)到國(guó)外標(biāo)準(zhǔn)。增訂項(xiàng)目6項(xiàng)：

1.溶液的澄清度與顏色

2.含氯量（電位滴定法）：按無(wú)溶劑的干燥品計(jì)算，含氯量應(yīng)為

12.4%～12.9%。

3.有關(guān)物質(zhì)（HPLC法）

4.殘留溶劑（GC法）：甲醇（0.3%）、乙醇（0.5%）

5.熾灼殘?jiān)坏眠^(guò)0.5%6.重金屬（附錄ⅧH第二法）不得過(guò)百萬(wàn)分之二十。含量測(cè)定：由UV-E法修訂為HPLC法?！吨袊?guó)藥典》2010版二部生化藥品增修訂概況與解讀有關(guān)物質(zhì)（HPLC法）色譜條件：C18柱254nm檢測(cè)流動(dòng)相A:磷酸鹽緩沖液(pH7.0）-甲醇（98：2）流動(dòng)相B:磷酸鹽緩沖液(pH7.0）-甲醇（70：30測(cè)定方法：加校正因子的主成分自身對(duì)照法已知雜質(zhì)3個(gè)（尿嘧啶、尿苷、阿糖尿苷）對(duì)鹽酸阿糖胞苷峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為0.55、1.14、1.62；校正因子分別為2.9、1.72、1.54；未知雜質(zhì)2個(gè)，對(duì)鹽酸阿糖胞苷峰的相對(duì)保留時(shí)間約為0.38、0.43的校正因子均為1.72；其他雜質(zhì)峰的校正因子均按1.1計(jì)算。計(jì)算公式：限度：尿嘧啶、尿苷均不得過(guò)0.1%；阿糖尿苷不得過(guò)0.3%；其他單個(gè)雜質(zhì)不得過(guò)0.1%；所有雜質(zhì)總和不得過(guò)0.3%。

《中國(guó)藥典》2010版二部生化藥品增修訂概況與解讀酶與輔酶品種與劑型收載品種（14個(gè)），劑型有片劑（片、腸溶片）、注射劑(小針、粉針)、膠囊劑(軟膠囊、膠囊)、顆粒劑。

項(xiàng)目檢查：溶液的澄清度與顏色有關(guān)物質(zhì)(純度、高分子物質(zhì))HPLC法(分子排組色譜法)

部分品種熱原修訂為細(xì)菌內(nèi)毒素效價(jià)測(cè)定：每1mg的效價(jià)不得少于XX單位，修訂為每1mg中XX

酶的活力不得少于XX單位。如抑肽酶,按干燥品計(jì)算,每1mg的效價(jià)不得少于3.0單位,修訂為按無(wú)水物計(jì)算,每1mg抑肽酶的活力不得少于3.0單位。《中國(guó)藥典》2010版二部生化藥品增修訂概況與解讀抑肽酶該品種由上海藥檢所起草Chp2005、Bp2008/Ep6.0、USP32版均收載，本版繼續(xù)收載，但依據(jù)USP作了三個(gè)方面的修訂。有效控制抑肽酶產(chǎn)品的純度，使標(biāo)準(zhǔn)的制定達(dá)到或超過(guò)國(guó)外標(biāo)準(zhǔn)。1.檢查高分子蛋白（USP32）關(guān)鍵是采用三根串聯(lián)Gel色譜柱（TSK-G4000SWXL柱）柱溫35℃280nm檢測(cè)流動(dòng)相:3mol/L醋酸溶液流速1.0ml/min,

二聚體（112℃加熱2小時(shí))相對(duì)RT0.9，分離度＞1.0，拖尾因子≤2.5。限度：高分子蛋白（RT＜抑肽酶）峰的總量不得大于1.0%。2.檢查去丙aa-去甘aa-抑肽酶和有關(guān)物質(zhì)參照USP32采用新增附錄毛細(xì)管電泳法：我國(guó)第一個(gè)用該法上藥典的品種。3.檢查N-焦谷氨酰-抑肽酶和有關(guān)物質(zhì)（參照USP32）色譜柱：TSK-GELIC-Cation-SW柱溫40℃210nm檢測(cè)柱溫：40℃流動(dòng)相：A磷酸鹽緩沖液B磷酸鹽-硫酸銨緩沖液梯度洗脫相對(duì)RT0.9，分離度＞1.0，拖尾因子≤2.0。限度：不得大于1.0%；單個(gè)未知雜質(zhì)不得大于0.5%；未知雜質(zhì)總和不得大于1.0%《中國(guó)藥典》2010版二部生化藥品增修訂概況與解讀多肽及蛋白類(lèi)品種與劑型收載品種13個(gè)，少部分為臟器提取的激素、肽類(lèi)。安全性無(wú)法保障的品種如垂體后葉粉、注射液等刪除。合成肽類(lèi)藥品，純度較高、質(zhì)量?jī)?yōu)良，大部分質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與國(guó)際接軌。劑型多為注射劑。項(xiàng)目高分子蛋白有關(guān)物質(zhì)相關(guān)蛋白（蛋白質(zhì)就是由多個(gè)氨基酸殘基組成的多肽鏈。一般以51個(gè)aa殘基，分子量為5778的胰島素劃分,高于此分子量的稱(chēng)為蛋白,小于此的為肽)

含量測(cè)定：HPLC法，部分肽和小分子蛋白中的生物活性、生物鑒別由化學(xué)測(cè)定法代替。金屬離子：原子吸收光譜法安全性檢查：細(xì)菌內(nèi)毒素、異常毒性、微生物限度、過(guò)敏等?！吨袊?guó)藥典》2010版二部生化藥品增修訂概況與解讀胰島素ChP2010版依據(jù)USP33、EP6.0標(biāo)準(zhǔn)，參照2005版分別對(duì)來(lái)源、性狀、鑒別、檢查項(xiàng)下含量測(cè)定項(xiàng)、活性檢查作了修訂和補(bǔ)充（該品種江蘇所起草，中檢所復(fù)核）1.鑒別：由HPLC法改為肽圖分析,經(jīng)V8酶水解胰島素,對(duì)其分子碎片中的肽圖進(jìn)行分析,該法能確定不同種屬的胰島素,專(zhuān)屬性強(qiáng)。2相關(guān)蛋白：參照USP32、EP6.0由聚丙烯酰胺凝膠電泳改為分離度較好的HPLC法，214nm檢測(cè)梯度洗脫限度：A21脫酰胺胰島素<5.0%，其它相關(guān)蛋白<5.0%。3.高分子蛋白：將一般柱色譜改為分子排阻色譜，色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)均與ChP2005重組人胰島素標(biāo)準(zhǔn)一致。限度：保留時(shí)間小于胰島素的所有峰面積之和<1.0%。4.鋅檢查：由比色法該為原子吸收光譜法。5.增加細(xì)菌內(nèi)毒素、微生物限度檢查。6.含量測(cè)定：用HPLC法代替生物活性測(cè)定法?？紤]到胰島素生物活性的重要性，原料在檢查項(xiàng)中增加生物活性測(cè)定，參考USP32，動(dòng)物數(shù)減半，生物統(tǒng)計(jì)簡(jiǎn)化，作為限度實(shí)驗(yàn)，使該法常規(guī)測(cè)定時(shí)既能省時(shí)、省力、省成本，又能有效控制質(zhì)量。《中國(guó)藥典》2010版二部生化藥品增修訂概況與解讀多糖及脂類(lèi)糖類(lèi)主要分類(lèi)單糖(簡(jiǎn)單的多羥基醛或酮）如六碳糖(葡萄糖、果糖)、五碳糖(核糖)

聚糖(單糖縮合而成)，20個(gè)單糖結(jié)構(gòu)以下的為低聚糖,蔗糖、麥芽糖等,20個(gè)以上的為多糖。純多糖：右旋糖酐、香菇多糖；雜多糖：肝素、硫酸軟骨素、透明質(zhì)酸等。品種與劑型多糖類(lèi)硫酸軟骨素鈉、片、膠囊肝素鈉、注射液、乳膏右旋糖酐鐵、片、注射液右旋糖酐20、氯化鈉注射液、葡萄糖注射液右旋糖酐40、氯化鈉注射液、葡萄糖注射液右旋糖酐70、氯化鈉注射液、葡萄糖注射液脂類(lèi)前列地爾、注射用前列地爾多烯酸乙酯、軟膠囊《中國(guó)藥典》2010版二部生化藥品增修訂概況與解讀增修訂項(xiàng)目金屬離子：原子吸收光譜法有關(guān)物質(zhì)：HPLC比活肝素鈉150U/mg→170U/mg含量測(cè)定：HPLC、GC比旋度肝素鈉不小于+35°→不小于+50°殘留溶劑輸液品種增訂滲透壓摩爾濃度復(fù)方葡萄糖輸液增訂5-羥甲基糠醛（UV法）甲氧基苯胺值《中國(guó)藥典》2010版二部生化藥品增修訂概況與解讀硫酸軟骨素鈉中檢所起草該品種質(zhì)量指標(biāo)有顯著性提高,含量測(cè)定從原來(lái)比色法的40%左右，直提至90%（口服）。用專(zhuān)一性強(qiáng)且靈敏的酶解法，分解硫酸軟骨素成A、B、C，再用離子色譜法分離硫酸軟骨素成B、C和A，按外標(biāo)法，以峰面積之和計(jì)算，使硫酸軟骨素含量為90%～105%。靈敏度優(yōu)于USP和EP，光電滴定法，因無(wú)專(zhuān)屬性，其它多糖混雜