2025年北師大新版選擇性必修3生物下冊階段測試試卷

…………○…………內(nèi)…………○…………裝…………○…………內(nèi)…………○…………裝…………○…………訂…………○…………線…………○…………※※請※※不※※要※※在※※裝※※訂※※線※※內(nèi)※※答※※題※※…………○…………外…………○…………裝…………○…………訂…………○…………線…………○…………第=page22頁，總=sectionpages22頁第=page11頁，總=sectionpages11頁2025年北師大新版選擇性必修3生物下冊階段測試試卷658考試試卷考試范圍：全部知識點；考試時間：120分鐘學(xué)校：______姓名：______班級：______考號：______總分欄題號一二三四五六總分得分評卷人得分一、選擇題(共8題，共16分)1、某同學(xué)用帶蓋玻璃瓶制作果酒和果醋，以下做法中錯誤的是（）A.選擇新鮮的葡萄略加沖洗，除去枝梗后榨汁B.將玻璃瓶用酒精消毒后，裝約2/3滿的葡萄汁C.果酒發(fā)酵期間，根據(jù)發(fā)酵進(jìn)程適時擰松瓶蓋放氣D.由果酒發(fā)酵轉(zhuǎn)入果醋發(fā)酵時適當(dāng)調(diào)低了溫度2、科學(xué)家利用供體生物DNA中的無限增殖調(diào)控基因制備單克隆抗體過程如下。下列敘述錯誤的是（）

A.Ⅰ是經(jīng)特定抗原免疫過的B淋巴細(xì)胞B.經(jīng)限制酶處理后的目的基因與載體的黏性末端相同C.經(jīng)檢測和篩選后的Ⅱ，既能無限增殖又可分泌單克隆抗體D.此種制備單克隆抗體的方法涉及轉(zhuǎn)基因技術(shù)、核移植技術(shù)和動物細(xì)胞融合技術(shù)3、某興趣小組擬用組織培養(yǎng)繁殖一種名貴花卉，其技術(shù)路線為“取材→消毒→愈傷組織培養(yǎng)→出芽→生根→移栽”。下列有關(guān)敘述錯誤的是（）A.這條技術(shù)路線利用的原理是植物細(xì)胞的全能性B.生根時，培養(yǎng)基通常應(yīng)含2，4-D等生長素類調(diào)節(jié)劑C.出芽是細(xì)胞再分化的結(jié)果，受基因選擇性表達(dá)的調(diào)控D.在愈傷組織培養(yǎng)基中加入細(xì)胞融合的誘導(dǎo)劑，可獲得染色體加倍的細(xì)胞4、生物技術(shù)在食品加工中具有廣泛的應(yīng)用，如利用微生物釀制果酒。下列有關(guān)利用葡萄釀制果酒過程的敘述，錯誤的是（）A.適當(dāng)增加酵母菌的接種量，可以縮短發(fā)酵的時間B.酒精積累是導(dǎo)致發(fā)酵液中細(xì)菌數(shù)量降低的原因之一C.釀酒過程中發(fā)酵罐要始終處于密封狀態(tài)，以保證無氧的環(huán)境D.葡萄的品質(zhì)、酵母菌菌種的純度都會影響果酒的品質(zhì)5、圖1是制作果酒和果醋的簡易裝置，圖2是制作果酒或果醋過程中可能發(fā)生的物質(zhì)變化。下列相關(guān)敘述正確的是（）

A.果酒發(fā)酵階段，若開錯氣閥，則會導(dǎo)致發(fā)酵液溢出B.果醋發(fā)酵階段，醋酸菌進(jìn)行④過程時發(fā)酵液中糖類充足C.制作果酒的主要發(fā)酵菌進(jìn)行①和②過程的場所是線粒體D.制作果醋的主要發(fā)酵菌進(jìn)行④過程時不需要O2的參與6、下列關(guān)于基因工程的基本工具的說法中，正確的是（）A.基因工程中的工具酶有限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶和載體B.DNA連接酶可將任意的DNA片段通過形成磷酸二酯鍵而連接起來C.質(zhì)粒上必須有標(biāo)記基因才可作為載體D.限制性核酸內(nèi)切酶一般不僅僅能切割外源DNA，也能切割自身的DNA分子7、醬油是以大豆、小麥為原料，經(jīng)蒸煮、醬曲與鹽水混合發(fā)酵制成的。需要曲霉、酵母菌、乳酸菌等多種菌種參與，其中優(yōu)勢微生物是米曲霉，除米曲霉外，部分霉菌也能分泌蛋白酶參與發(fā)酵。多種微生物產(chǎn)生的醇、醛、酸、酯等代謝產(chǎn)物雖微量卻能構(gòu)成醬油復(fù)雜的香氣。下列敘述正確的是（）A.大豆中的蛋白質(zhì)可為菌種生長提供碳源、氮源B.若進(jìn)行分離純化霉菌，制備培養(yǎng)基宜調(diào)至堿性C.各種微生物的營養(yǎng)物質(zhì)都直接來自發(fā)酵原料D.醬油發(fā)酵是混菌發(fā)酵，發(fā)酵罐不需嚴(yán)格滅菌8、草甘膦是一種廣譜、內(nèi)吸、高效的滅生性除草劑，它通過與EPSPS（葉綠體中的一種酶）結(jié)合，抑制EPSPS的作用，阻斷芳香族氨基酸的合成，從而引起細(xì)胞死亡。為了提高普通煙草對草甘膦的抗性，科學(xué)家通過轉(zhuǎn)基因的方法將某外源EPSS基因轉(zhuǎn)入煙草的葉綠體中，使其產(chǎn)生更多的EPSPS，使得轉(zhuǎn)基因煙草對草甘膦的抗性可達(dá)5mmol/L（比野生型煙草高10倍）。下列說法錯誤的是（）A.利用PCR技術(shù)擴(kuò)增EPSPS基因所需的原料是dCTP、dAIP、dGTP、dTTPB.可利用基因槍法將EPSPS基因打入到葉綠體中C.EPSPS基因?qū)氤晒?，是否賦予了煙草對草甘膦的預(yù)期抗性，還需進(jìn)行鑒定D.從生物安全角度分析，把基因轉(zhuǎn)入細(xì)胞核比轉(zhuǎn)入葉綠體更安全評卷人得分二、多選題(共9題，共18分)9、熒光定量PCR技術(shù)可定量檢測樣本中DNA含量，也可用于RNA病毒的核酸檢測。其原理是：先由病毒的RNA逆轉(zhuǎn)錄得到cDNA，然后對得到的DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增。在PCR反應(yīng)體系中加入引物的同時，加入與某條模板鏈互補(bǔ)的熒光探針，當(dāng)Taq酶催化子鏈延伸至探針處會水解探針，使熒光監(jiān)測系統(tǒng)接受到熒光信號，即每個DNA分子擴(kuò)增一次，就有一個熒光分子生成（如圖）。Ct值（循環(huán)閾值）的含義為：每個反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號到達(dá)設(shè)定閾值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。下列說法錯誤的是（）

A.擴(kuò)增過程中引物先于探針結(jié)合到模板DNA上B.若最初該反應(yīng)體系中只有逆轉(zhuǎn)錄而來的一個DNA分子，經(jīng)n次循環(huán)后，需要消耗熒光探針2n-1個C.C值越大表示被檢測樣本中病毒數(shù)目越多D.若樣本被污染，RNA酶將病毒RNA降解，檢測結(jié)果可能為陰性10、蛋白質(zhì)工程就是通過對蛋白質(zhì)化學(xué)、蛋白質(zhì)晶體學(xué)和蛋白質(zhì)動力學(xué)的研究，獲得有關(guān)蛋白質(zhì)理化特性和分子特性的信息，在此基礎(chǔ)上對編碼蛋白質(zhì)的基因進(jìn)行有目的的設(shè)計和改造，通過基因工程技術(shù)獲得可以表達(dá)蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)基因生物，中華鱘是一種瀕危野生動物。研究者試圖通過蛋白質(zhì)工程改造中華鱘體內(nèi)的某些蛋白質(zhì)，使其更加適應(yīng)現(xiàn)在的水域環(huán)境。下列有關(guān)說法錯誤的是（）A.蛋白質(zhì)工程可定向改變蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)B.改造蛋白質(zhì)可通過改變基因結(jié)構(gòu)實現(xiàn)C.改造后的中華鱘和現(xiàn)有中華鱘不再是同一物種D.改造后的中華鱘的后代不具有改造的蛋白質(zhì)11、下列關(guān)于土壤中纖維素分解菌的分離與計數(shù)，敘述正確的是（）A.可從富含腐殖質(zhì)的林下土壤中篩選產(chǎn)纖維素酶菌B.培養(yǎng)基中應(yīng)含大量的葡萄糖或蔗糖提供生長營養(yǎng)C.培養(yǎng)微生物的試劑和器具都要進(jìn)行高壓蒸汽滅菌D.菌種分離和菌落計數(shù)都可以使用固體培養(yǎng)基12、基因敲除技術(shù)針對某個序列已知但功能未知的序列，通過改變生物的遺傳基因，令特定的基因功能喪失作用，從而使部分功能被屏蔽，并可進(jìn)一步對生物體造成影響，進(jìn)而推測出該基因的生物學(xué)功能。研究人員將某實驗動物的第5號染色體上的一段DNA敲除，結(jié)果發(fā)現(xiàn)培育出的實驗動物血液甘油三酯極高，具有動脈硬化的傾向，并可以遺傳給后代。下列有關(guān)敘述錯誤的是（）A.敲除的DNA片段具有遺傳效應(yīng)B.動脈硬化的產(chǎn)生與遺傳物質(zhì)發(fā)生基因重組有關(guān)C.控制甘油三酯合成的基因就位于第5號染色體上D.利用DNA片段的敲除技術(shù)可以研究相關(guān)基因功能13、基因工程在農(nóng)牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生和食品工業(yè)等多方面的應(yīng)用發(fā)展迅速，如圖表示利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)人血清白蛋白的兩條途徑。下列敘述錯誤的是（）

A.若某基因是從人的細(xì)胞內(nèi)提取mRNA經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄形成的，則該基因中不含啟動子序列B.擴(kuò)增目的基因時，利用耐高溫的DNA聚合酶從引物a、b的3'－端進(jìn)行子鏈合成C.導(dǎo)入人血清白蛋白基因的綿羊受體細(xì)胞是乳腺細(xì)胞D.利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法可將含有目的基因的重組質(zhì)粒整合到植物受體細(xì)胞的染色體DNA上14、欲探究1g土壤中有多少能分解尿素的細(xì)菌，需要用科學(xué)的方法測定微生物數(shù)量。下列相關(guān)敘述不正確的是（）A.利用以尿素作為唯一氮源的培養(yǎng)基，可從土壤中分離出分解尿素的細(xì)菌B.平板劃線法可以分離得到單菌落，也可用來測定樣品中的活菌數(shù)C.樣品的稀釋度直接影響平板上的菌落數(shù)目，因此稀釋度越大越好D.利用顯微鏡進(jìn)行直接計數(shù)，可快速直觀地測定樣品中的活菌數(shù)15、自生固氮菌是土壤中能獨立固定空氣中N2的細(xì)菌，將玉米種子用自身固氮菌拌種后播種，可顯著提高產(chǎn)量并降低化肥的使用量。科研人員進(jìn)行了土壤中自生固氮菌的分離和固氮能力測定的研究，部分實驗流程如圖。以下敘述正確的是（）

A.步驟①土樣應(yīng)取自當(dāng)?shù)乇韺油寥?；步驟③將土壤懸浮液稀釋了1000倍B.自生固氮菌是自養(yǎng)型生物，不可用血細(xì)胞計數(shù)板來計數(shù)土壤懸浮液中的菌體數(shù)C.步驟②需充分振蕩20min，主要目的是使土壤中的微生物充分釋放到無菌水中D.步驟④所用的接種工具是涂布器，該選擇培養(yǎng)基的特點是不添加氮源16、治療性克隆的做法是先從需要救治的患者身上提取細(xì)胞，然后將該細(xì)胞的遺傳物質(zhì)植入一個去除了細(xì)胞核的卵細(xì)胞中，該卵細(xì)胞開始自行分裂，直至形成一個早期胚胎，從早期胚胎中提取胚胎干細(xì)胞后將其培養(yǎng)成人們所需要的各種人體器官。下列有關(guān)說法正確的是（）A.可采用開放式培養(yǎng)的方式，置于CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)胚胎干細(xì)胞B.該早期胚胎發(fā)育始于受精卵，胚胎是由囊胚內(nèi)部的細(xì)胞團(tuán)不斷增殖分化而來C.治療性克隆中運(yùn)用胚胎移植技術(shù)，一般不選擇原腸胚進(jìn)行胚胎移植D.我國不贊成、不允許、不支持、不接受任何克隆性實驗17、原腸胚形成期被稱為人體胚胎發(fā)育的“黑匣子”時期。研究人員利用胚胎干細(xì)胞，在實驗室中制造出不能發(fā)育成完整胚胎的“擬原腸胚”模型，用來揭示人類早期胚胎發(fā)育的過程。下列說法正確的是（）A.滋養(yǎng)層細(xì)胞將來能發(fā)育成胎膜和胎盤B.利用核移植所得胚胎干細(xì)胞，可以誘導(dǎo)發(fā)育成適合移植的器官C.對原腸胚進(jìn)行胚胎分割，可以提高移植胚胎的利用率D.該模型可以研究酒精、藥物和病原體對胚胎發(fā)育的影響評卷人得分三、填空題(共5題，共10分)18、1.基因檢測引發(fā)的倫理問題。

（1）基因身份證：基因身份證指把個人的_____和_____檢測出來；記錄在磁卡上，而做成的個人基因身份證。

（2）基因檢測引發(fā)的爭論①_____②_____③_____④_____⑤_____⑥_____

。項目。

反對。

支持。

技術(shù)方面。

目前人類對①及基因間的相互作用尚缺乏足夠的認(rèn)識；通過基因檢測達(dá)到②的目的是很困難的；基因檢測結(jié)果會給受檢者帶來巨大的③。

通過基因檢測可以對遺傳性疾病及早采?、?；適時進(jìn)行治療，達(dá)到挽救患者生命的目的。

道德方面。

基因資訊的泄露造成⑤；如個人婚姻困難；人際關(guān)系疏遠(yuǎn)，更明顯的是造成一支遺傳性失業(yè)大軍。

對于基因歧視現(xiàn)象；可以通過正確的科學(xué)知識傳播；⑥教育和立法得以解決。

2.試管嬰兒與設(shè)計試管嬰兒的比較①_____②_____③_____④_____

。項目。

設(shè)計試管嬰兒。

試管嬰兒。

技術(shù)手段。

胚胎移植前①（填“需要”或“不需要”）進(jìn)行遺傳學(xué)診斷這一環(huán)節(jié)。

②（填“需要”或‘不需要”）進(jìn)行遺傳學(xué)診斷。

實踐應(yīng)用。

用于白血??；貧血病等遺傳性疾病的預(yù)測。

解決不孕不育問題。

聯(lián)系。

二者都是③受精；體外進(jìn)行早期胚胎發(fā)育，再進(jìn)行胚胎移植，從生殖方式上都為④

19、來源：主要是從______中分離純化出來的。20、概念：動物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動物機(jī)體中取出相關(guān)的______，將它分散成______，然后放在適宜的______中，讓這些細(xì)胞______。21、植物誘導(dǎo)融合的方法：物理法包括______等?；瘜W(xué)法一般是用_____作為誘導(dǎo)劑。22、在日常生活中，我們還遇到哪些有關(guān)生物技術(shù)安全與倫理問題？我們能基于所學(xué)生物學(xué)知識參與這些問題的討論嗎？嘗試舉一個實例加以說明______。評卷人得分四、判斷題(共2題，共6分)23、治療性克隆是指利用克隆技術(shù)產(chǎn)生特定的細(xì)胞、組織和器官，用它們來修復(fù)或替代受損的細(xì)胞、組織和器官，從而達(dá)到治療疾病的目的。（選擇性必修3P106）()A.正確B.錯誤24、生物武器包括致病菌類、病毒類和生化毒劑類等。()A.正確B.錯誤評卷人得分五、實驗題(共4題，共28分)25、為生產(chǎn)具有特定性能的α-淀粉酶；研究人員從某種海洋細(xì)菌中克隆了α-淀粉酶基因（1656個堿基對），利用基因工程大量制備琢α-淀粉酶，實驗流程見下圖。請回答下列問題：

（1）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增α-淀粉酶基因前；需先獲得細(xì)菌的_________。

（2）為了便于擴(kuò)增的DNA片段與表達(dá)載體連接；需在引物的____端加上限制性酶切位點，且常在兩條引物上設(shè)計加入不同的限制性酶切位點，主要目的是________________。

（3）進(jìn)行擴(kuò)增時；反應(yīng)的溫度和時間需根據(jù)具體情況進(jìn)行設(shè)定，下列選項中_______的設(shè)定與引物有關(guān)，________的設(shè)定與擴(kuò)增片段的長度有關(guān)。（填序號）

①變性溫度②退火溫度③延伸溫度④變性時間⑤退火時間⑥延伸時間。

（4）下圖表示篩選獲得的工程菌中編碼α-淀粉酶的mRNA的部分堿基序列：

圖中虛線框內(nèi)mRNA片段包含___個密碼子；如虛線框后的序列未知，預(yù)測虛線框后的第一個密碼子最多有__種。

（5）獲得工程菌表達(dá)的α-淀粉酶后；為探究影響酶活性的因素，以濃度為1%的可溶性淀粉為底物測定酶活性，結(jié)果如下：

。緩沖液。

50mmol/LNa2HPO4-KH2PO4

50mmol/LTris-HCl

50mmol/LGly-NaOH

pH

6．0

6．5

7．0

7．5

7．5

8．0

8．5

9．0

9．0

9．5

10．0

10．5

酶相對活性%

25．4

40．2

49．8

63．2

70．1

95．5

99．5

85．3

68．1

63．7

41．5

20．8

根據(jù)上述實驗結(jié)果，初步判斷該α-淀粉酶活性最高的條件為______。26、使用日益廣泛的手機(jī)；在方便人們通訊聯(lián)絡(luò)的同時也成為細(xì)菌等病原體傳播的途徑。為了解手機(jī)上細(xì)菌的情況，某興趣小組進(jìn)行了如下實驗，請回答相關(guān)問題：

(1)取附著在手機(jī)上細(xì)菌進(jìn)行取樣培養(yǎng)后，對菌液進(jìn)行系列梯度稀釋的目的是_______。

(2)A平板上生長的菌落有多種形態(tài)，說明附著在手機(jī)細(xì)菌有____種。若要使菌落能在A平板上生長，下列培養(yǎng)基組分中最合理的是_____(選填“甲、乙、丙”)，原因是_____。可采取____________來檢測培養(yǎng)基A制備是否合格。培養(yǎng)基編號培養(yǎng)基組分甲蔗糖、NaC1、瓊脂、水乙牛肉膏、蛋白胨、NaCl、瓊脂、水丙蛋白胨、NaCl、蔗糖、水

(3)初篩后將平板B的菌落通過“影印”方法接種到C培養(yǎng)基上培養(yǎng)，使C培養(yǎng)基對應(yīng)位置上出現(xiàn)相同菌落。然后用伊紅-美藍(lán)染液對C進(jìn)行染色，根據(jù)染色后D中出現(xiàn)的結(jié)果，可判斷平板B中______(選填圖中數(shù)字)是大腸桿菌的菌落。

(4)某同學(xué)采用平板劃線法進(jìn)一步純化大腸桿菌，接種培養(yǎng)一段時間后，發(fā)現(xiàn)第一劃線區(qū)不間斷長滿菌落，第二劃線區(qū)上幾乎無菌落，產(chǎn)生此情況的可能原因____________。27、進(jìn)行垃圾分類收集可以減少垃圾處理時間；降低處理成本?？蒲行〗M欲分離及培養(yǎng)若干種微生物用于處理濕垃圾，如剩菜剩飯；骨頭、菜根菜葉、果皮等食品類廢物。請分析回答：

(1)科研小組從土壤中篩選產(chǎn)脂肪酶的菌株時，配制的培養(yǎng)基需要以__________為唯一碳源。制備固體培養(yǎng)基的步驟是；計算→稱量→溶化→__________→__________。接種微生物最常用的方法是__________。

(2)獲得產(chǎn)脂肪酶的菌株后，在處理含油垃圾的同時，可獲得單細(xì)胞蛋白，實現(xiàn)污染物資源化?，F(xiàn)獲得可產(chǎn)脂肪酶的A、B兩種菌株，并進(jìn)行了培養(yǎng)研究，結(jié)果如圖1所示。據(jù)圖分析，應(yīng)選擇菌株__________進(jìn)行后續(xù)相關(guān)研究，理由是______________________________。

(3)科研小組從土壤中篩選淀粉分解菌時，加碘液染色后，選擇培養(yǎng)基上出現(xiàn)了A、B和C三種菌落（如圖2所示）。若要得到淀粉酶活力最高的菌株，應(yīng)選擇__________（填“A”“B”或“C”）菌落進(jìn)一步純化。經(jīng)檢測A菌落為硝化細(xì)菌，A菌落能在此培養(yǎng)基上生長且沒有形成透明圈的原因是____________________。

(4)在微生物分解處理垃圾的過程中，纖維素分解菌能夠分泌纖維素酶，該酶可將纖維素分解為葡萄糖。纖維素酶由三種復(fù)合酶組成，其中__________酶可將纖維二糖分解為葡萄糖。28、番茄果實在成熟的過程中；多聚半乳糖醛酸酶（PG）合成顯著增加，以降解果膠使細(xì)胞壁破損，從而使果實變紅變軟，但不利于保鮮?？茖W(xué)家利用基因工程得到轉(zhuǎn)基因番茄，大大延長果實保質(zhì)期。操作流程如下，回答下列問題：

（1）利用RT—PCR技術(shù)即逆轉(zhuǎn)錄—多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)制備PG基因，最好從番茄的_____細(xì)胞中提取mRNA，此技術(shù)所需要的酶主要有_____。

（2）據(jù)圖可知，轉(zhuǎn)基因番茄主要通過抑制PG基因的_____過程；使PG合成量減少，從而延長果實保質(zhì)期。

（3）圖中的農(nóng)桿菌。能夠在含_____的培養(yǎng)基中生存，而在含_____的培養(yǎng)基中不能生存的即為已轉(zhuǎn)化的所需農(nóng)桿菌。

（4）圖中將反向連接PC基因?qū)敕鸭?xì)胞的方法稱為_____。要檢測感染農(nóng)桿菌后的番茄細(xì)胞染色體DNA上是否插入了反向連接PC基因，_____（填“能”或“不能”）用標(biāo)記的PG基因的單鏈作為探針進(jìn)行檢測，理由是_____。

（5）在將轉(zhuǎn)化的番茄細(xì)胞通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)形成番茄幼苗過程中，培養(yǎng)基_____（填“要”或“不要”）添加有機(jī)營養(yǎng)物質(zhì)，原因是_____。評卷人得分六、綜合題(共4題，共12分)29、科學(xué)家利用RNA干擾原理發(fā)展出了寄主誘導(dǎo)的基因沉默（HIGS）技術(shù)；通過在植物細(xì)胞中產(chǎn)生小干擾RNA（siRNA）進(jìn)而靶向沉默病原菌的關(guān)鍵基因。當(dāng)病原菌侵染寄主植物時；植物寄主能將siRNA轉(zhuǎn)入病原菌細(xì)胞內(nèi)使其與靶基因的mRNA結(jié)合，并將后者進(jìn)行特異性的降解。由稻瘟菌引起的稻瘟病是水稻上危害最嚴(yán)重的病害之一，科研人員選取稻瘟菌的SEC11為靶基因（圖1），查找SEC11基因中最佳的干擾序列，并將該序列導(dǎo)入質(zhì)粒構(gòu)建SEC11基因的HIGS表達(dá)載體（圖2），然后將該載體導(dǎo)入水稻，檢測到轉(zhuǎn)基因水稻植株對稻瘟病菌的抗性水平顯著升高。相應(yīng)的限制酶識別序列及切點見圖3，請回答下列問題：

(1)siRNA轉(zhuǎn)入病原菌細(xì)胞內(nèi)可阻止目標(biāo)基因的__________過程。

(2)構(gòu)建基因表達(dá)載體時通常選用雙酶切，其好處是__________（至少答出兩點）。據(jù)圖可知，應(yīng)最好選擇__________切割質(zhì)粒，同時將兩種限制酶的識別序列分別加在引物1和引物2的__________端，經(jīng)過________次擴(kuò)增；在PCR體系中即可出現(xiàn)兩端帶上酶切序列的干擾序列。

(3)據(jù)圖可知，應(yīng)選SECl1基因中的__________區(qū)段作為干擾序列，原因是__________。

(4)通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法可將SECl1基因的HIGS表達(dá)載體導(dǎo)入水稻的愈傷組織，并用含有__________的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，由于__________，因此篩選出的愈傷組織不一定具有SEC11基因的干擾序列。30、幽門螺桿菌（Hp）是慢性胃炎；淋巴增生性胃淋巴瘤的主要致病菌；該菌的Ipp20基因能合成其特有的蛋白質(zhì)，據(jù)此，研究者利用基因工程制備Hp疫苗。已知Ipp20基因表達(dá)時，雙鏈DNA的一條鏈?zhǔn)蔷幋a鏈，另一條鏈?zhǔn)悄０彐湥鐖D1；四種限制酶及其識別序列如圖2；三種質(zhì)粒如圖3，箭頭表示限制酶的切割位點；操作步驟如圖4?；卮鹣铝袉栴}：

(1)Ipp20基因終止子序列位于圖1中的______區(qū)段，該基因轉(zhuǎn)錄時，編碼起始密碼子的序列位于圖1中的______區(qū)段。

(2)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的mRNA前8個堿基序列為______（方向為5′→3′）。若通過PCR技術(shù)大量擴(kuò)增Ipp20基因的編碼區(qū)段，則需要設(shè)計一對引物，其中結(jié)合到編碼鏈上的引物序列是____________（方向為5′→3′；寫出5′端8個堿基序列）。

(3)據(jù)圖1、2、3分析，構(gòu)建基因表達(dá)載體時，應(yīng)選用的限制酶是______，最適合用作載體的質(zhì)粒是______。

(4)圖4中為篩選出含有目的基因的大腸桿菌，通常采用影印法（使用無菌的線氈布壓在培養(yǎng)基A的菌落上，帶出少許菌種，平移并壓在培養(yǎng)基B上、結(jié)果如圖所示）。培養(yǎng)基A、B中應(yīng)分別添加______，符合實驗要求的菌落是______（填寫數(shù)字），判斷依據(jù)是_______________。31、心肌長期負(fù)荷過重引起的心肌細(xì)胞肥大；間質(zhì)纖維化等過程稱為心臟重塑；與基因Snhg5相關(guān)。Snhg5轉(zhuǎn)錄出的RNA并不翻譯產(chǎn)生蛋白質(zhì)，而是以RNA的形式發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。研究人員利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)建立了心肌細(xì)胞特異性Snhg5轉(zhuǎn)基因小鼠。

(1)Snhg5轉(zhuǎn)錄所需的原料是__________。

(2)研究人員利用PCR技術(shù)獲得了Snhg5基因，有關(guān)該過程正確的是__________。A．需要了解Sngh5基因的全部堿基序列B．新鏈的合成只能從3′→5′C．反應(yīng)體系加入的酶需要具有熱穩(wěn)定性D．需要構(gòu)建兩種不同的引物(3)通過PCR獲得的目的基因Snhg5和質(zhì)粒能用相應(yīng)的酶切割、連接形成重組質(zhì)粒（圖1）。研究人員在構(gòu)建重組質(zhì)粒時得到6株可能含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌，分別提取各菌株中的質(zhì)粒，使用限制性內(nèi)切核酸酶SalⅠ和HindⅢ切割后，經(jīng)DNA凝膠電泳技術(shù)檢測得到結(jié)果如圖2所示，其中含有重組質(zhì)粒的菌株編號是__________。

(4)根據(jù)圖1，為獲得α-MHC-Snhg5-hGH轉(zhuǎn)基因片段，研究人員應(yīng)使用限制性酶KpnⅠ和__________切割Snhg5重組質(zhì)粒。

(5)將α-MHC-Snhg5-hGH片段導(dǎo)入小鼠受精卵中可以構(gòu)建α-MHC-Snhg5-hGH轉(zhuǎn)基因小鼠。結(jié)合題干信息，以下說法合理的是__________。A．可以使用激素使雌鼠超數(shù)排卵B．可以用顯微注射法將α-MHC-Snhg5-hGH片段導(dǎo)入小鼠受精卵中C．轉(zhuǎn)基因小鼠可以成功表達(dá)出Snhg5蛋白D．一般需要多次雜交才可以獲得純合的轉(zhuǎn)基因小鼠32、養(yǎng)殖家禽的飼料中富含谷物；纖維素是谷物的重要成分，但家禽消化道中缺少能降解纖維素的酶，阻礙了家禽對飼料的吸收與利用。研究人員利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)改造乳酸桿菌，將其添加于飼料中，以提高家禽養(yǎng)殖效率。

（1）枯草芽孢桿菌分泌可降解纖維素的一種酶；這種酶由W基因編碼。為在乳酸桿菌中表達(dá)W基因，需使用圖1中質(zhì)粒為載體。圖2為克隆得到的含W基因的DNA片段，W基因以乙鏈為轉(zhuǎn)錄模板鏈，轉(zhuǎn)錄時mRNA自身延伸的方向為5'→3'。

①很多啟動子具有物種特異性，在圖1質(zhì)粒中插入W基因，其上游啟動子應(yīng)選擇___________（填正確選項前字母）。

A．枯草芽孢桿菌啟動子B．乳酸桿菌啟動子C．農(nóng)桿菌啟動子。

②下表是幾種限制酶識別序列及其切割位點；圖1；圖2中標(biāo)注了相關(guān)限制酶的酶切位點。

。限制酶。

EcoRI

BamHI

KpnI

MfeI

HindIII

識別序列及切割位點。

根據(jù)上述信息，應(yīng)使用限制酶___________切割圖1中質(zhì)粒，使用限制酶___________切割圖2中含W基因的DNA片段，以獲得能正確表達(dá)W基因的重組質(zhì)粒。所得重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化乳酸桿菌后，使用含抗生素_______的培養(yǎng)基篩選；以得到轉(zhuǎn)入W基因的乳酸桿菌。

（2）為確定導(dǎo)入重組質(zhì)粒的乳酸桿菌是否具有分解纖維素的能力；研究人員用液體培養(yǎng)基分別培養(yǎng)下表所示菌種。所得部分菌液接種于固體鑒定培養(yǎng)基上，另取部分菌液上清液測定酶活力，實驗方案及測定結(jié)果如下表所示。

。菌種酶活性相對值乳酸桿菌未檢出X未檢出導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的乳酸桿菌0．96表中的X應(yīng)為___________。若要檢測導(dǎo)入重組質(zhì)粒的乳酸桿菌是否合成了纖維素酶的方法是_____________。

（3）解決谷物中纖維素難以被消化吸收的另一思路是將W基因轉(zhuǎn)入家禽中，使轉(zhuǎn)基因家禽消化道特異表達(dá)能夠降解纖維素的酶。采用顯微注射的方法將重組質(zhì)粒導(dǎo)入_________細(xì)胞中，上述研究方法與該思路相比，有哪些優(yōu)點_________________（寫出2點）。參考答案一、選擇題(共8題，共16分)1、D【分析】【分析】

1；果酒的制作原理。

（1）菌種：酵母菌；其代謝類型為異養(yǎng)兼性厭氧。

（2）菌種來源：自然發(fā)酵過程中；來源于附著在葡萄皮上的野生型酵母菌。

（3）原理:有氧條件下；進(jìn)行有氧呼吸，大量繁殖。無氧條件下，進(jìn)行酒精發(fā)酵產(chǎn)生酒精。

2；果醋制作原理。

（1）菌種：醋酸菌；其代謝類型為異養(yǎng)需氧型。

（2）菌種來源：變酸酒表面的菌膜。

（3）原理：當(dāng)氧氣充足；糖源充足時；醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸。當(dāng)氧氣充足、缺少糖源時，醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰?，再將乙醛變?yōu)榇姿帷?/p>

【詳解】

A；選擇新鮮的葡萄略加沖洗；除去枝梗后榨汁，防止先去枝梗造成污染，A正確；

B；將玻璃瓶用酒精消毒后；裝約2/3滿的葡萄汁，防止防止發(fā)酵旺盛時汁液溢出，B正確；

C；果酒發(fā)酵期間；根據(jù)發(fā)酵進(jìn)程適時擰松瓶蓋放出二氧化碳?xì)怏w，防止氣體過多引起發(fā)酵瓶爆裂，C正確；

D；由果酒發(fā)酵最適溫度轉(zhuǎn)入果醋發(fā)酵時適當(dāng)調(diào)高了溫度；D錯誤。

故選D。2、D【分析】【分析】

據(jù)圖分析；采用基因工程的方法獲得單克隆抗體，用相同限制酶處理目的基因和運(yùn)載體使其具有相同的粘性末端，便于拼接，再導(dǎo)入到漿細(xì)胞或已免疫的B細(xì)胞或效應(yīng)B細(xì)胞中，Ⅱ是含有無限增殖調(diào)控基因的效應(yīng)B細(xì)胞，既能無限增殖又能分泌特異性抗體。

【詳解】

Ⅰ代表受體細(xì)胞，要具有分泌抗體的能力，則為已免疫的B淋巴細(xì)胞，A正確；在同一種限制性內(nèi)切酶作用，使無限增殖調(diào)控基因與質(zhì)粒具有相同的粘性末端，B正確；Ⅱ是含有無限增殖調(diào)控基因的效應(yīng)B細(xì)胞，既有無限增殖的能力，又能分泌特異性抗體，C正確；該過程涉及基因工程和動物細(xì)胞培養(yǎng)，但是沒有動物細(xì)胞融合技術(shù)，D錯誤。3、D【分析】【分析】

植物組織培養(yǎng)的過程為：離體的植物組織；器官或細(xì)胞經(jīng)過脫分化形成愈傷組織；愈傷組織經(jīng)過再分化過程形成胚狀體，進(jìn)一步發(fā)育形成植株，該過程受基因選擇性表達(dá)的調(diào)控。決定植物脫分化和再分化的關(guān)鍵因素是植物激素的種類和比例，特別是生長素和細(xì)胞分裂素的比例影響了細(xì)胞分化的方向。

【詳解】

A；這條技術(shù)路線是植物組織培養(yǎng)技術(shù)；利用的原理是植物細(xì)胞的全能性，A正確；

B；在植物組織培養(yǎng)中；當(dāng)生長素用量比細(xì)胞分裂素用量比例高時，有利于根的分化，B正確；

C；愈傷組織再分化形成胚狀體時；一般先形成芽，再形成根，而分化的實質(zhì)是基因的選擇性表達(dá)，C正確；

D；愈傷組織細(xì)胞含有細(xì)胞壁；加入細(xì)胞融合誘導(dǎo)劑不會誘導(dǎo)細(xì)胞融合，因此不會得到染色體加倍的細(xì)胞，D錯誤。

故選D。4、C【分析】【分析】

參與果酒制作的微生物是酵母菌；其新陳代謝類型為異養(yǎng)兼性厭氧型。

【詳解】

A；若適當(dāng)增加酵母菌的接種量；則可以縮短發(fā)酵的時間，A正確；

B；酵母菌無氧呼吸產(chǎn)生酒精；酒精具殺菌作用，發(fā)酵液中酒精積累是細(xì)菌數(shù)量降低的原因之一，B正確；

C、釀制果酒時，一般先通入空氣，以利于酵母菌大量繁殖。酒精發(fā)酵過程中會產(chǎn)生CO2；應(yīng)適時排放，C錯誤；

D；葡萄的品質(zhì)、酵母菌菌種的純度都會影響果酒的品質(zhì)；D正確。

故選C。5、A【分析】【分析】

1；果酒的制作離不開酵母菌；酵母菌是兼性厭氧微生物，在有氧條件下，酵母菌進(jìn)行有氧呼吸，大量繁殖，把糖分解成二氧化碳和水；在無氧條件下，酵母菌能進(jìn)行酒精發(fā)酵。故果酒的制作原理是酵母菌無氧呼吸產(chǎn)生酒精，酵母菌最適宜生長繁殖的溫度范圍是18～25℃；生產(chǎn)中是否有酒精的產(chǎn)生，可用酸性重鉻酸鉀來檢驗，該物質(zhì)與酒精反應(yīng)呈現(xiàn)灰綠色。

2；果醋制作中起到主要作用的微生物是醋酸菌；醋酸菌是一種好氧細(xì)菌，只有當(dāng)氧氣充足時，才能進(jìn)行旺盛的生理活動，其代謝類型屬于異養(yǎng)需氧型。當(dāng)氧氣、糖源都充足時，醋酸菌將葡萄汁中的糖分解為醋酸；當(dāng)缺少糖源時，醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰賹⒁胰┳優(yōu)榇姿?。醋酸菌的最適生長溫度為30～35℃。

【詳解】

A、果酒發(fā)酵階段，開氣閥的目的是排氣，而排氣時應(yīng)打開氣閥b；若錯開氣閥a，會導(dǎo)致發(fā)酵液從進(jìn)氣管溢出，A正確；

B；果醋發(fā)酵階段；醋酸菌在糖類匱乏時能利用酒精經(jīng)一系列化學(xué)反應(yīng)生成醋酸，B錯誤；

C；圖2中；①過程進(jìn)行的場所是細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)，C錯誤；

D；醋酸菌利用酒精生成醋酸時；需要氧氣的參與，D錯誤。

故選A。6、C【分析】【分析】

基因工程的工具：

（1）限制酶：能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列；并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂。

（2）DNA連接酶：連接的是兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵。

（3）運(yùn)載體：常用的運(yùn)載體：質(zhì)粒；噬菌體的衍生物、動植物病毒。

【詳解】

A；限制酶和DNA連接酶才是基因工程的工具酶；載體不是酶，A錯誤；

B；DNA連接酶只能催化具有互補(bǔ)黏性末端或平末端的DNA片段之間形成磷酸二酯鍵；B錯誤；

C；質(zhì)粒作為載體的必備條件之一就是要有標(biāo)記基因；C正確；

D；限制酶不切割自身DNA分子；只切割外源DNA，以保護(hù)自身DNA的安全，D錯誤。

故選C。7、A【分析】【分析】

培養(yǎng)基是人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)，培養(yǎng)基中一般都含有水、碳源、氮源和無機(jī)鹽等營養(yǎng)物質(zhì)。在提供上述幾種主要營養(yǎng)物質(zhì)的基礎(chǔ)上，培養(yǎng)基還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及O2的需求。例如；在培養(yǎng)乳酸桿菌時，需要在培養(yǎng)基中添加維生素；在培養(yǎng)霉菌時，一般需要將培養(yǎng)基調(diào)至酸性；在培養(yǎng)細(xì)菌時，一般需要將培養(yǎng)基調(diào)至中性或弱堿性；在培養(yǎng)厭氧微生物時，需要提供無氧的條件。

【詳解】

A；大豆中的蛋白質(zhì)含有碳元素和氮元素；可以為菌種生長提供碳源、氮源，A正確；

B；培養(yǎng)霉菌時一般需要將培養(yǎng)基調(diào)制酸性；B錯誤；

C；各種微生物的營養(yǎng)物質(zhì)可來源于發(fā)酵原料；也可能來源于其他微生物的代謝產(chǎn)物，C錯誤；

D；醬油的發(fā)酵利用多種微生物；是混菌發(fā)酵，為避免雜菌的污染，發(fā)酵罐需要嚴(yán)格滅菌，D錯誤。

故選A。8、D【分析】【分析】

1；PCR技術(shù)：（1）概念：PCR全稱為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)；是一項在生物體外復(fù)制特定DNA的核酸合成技術(shù)。（2）原理：DNA復(fù)制。（3）前提條件：要有一段已知目的基因的核苷酸序列以便合成一對引物。（4）條件：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）（5）過程：①高溫變性：DNA解旋過程（PCR擴(kuò)增中雙鏈DNA解開不需要解旋酶，高溫條件下氫鍵可自動解開）；②低溫復(fù)性：引物結(jié)合到互補(bǔ)鏈DNA上；③中溫延伸：合成子鏈。

2；基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟；基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因，可用DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，可用分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)，可用抗原-抗體雜交技術(shù)。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

【詳解】

A；利用PCR技術(shù)擴(kuò)增EPSPS基因所需的原料是dNTP（包含dATP、dCTP、dGTP、dTTP）；A正確；

B；將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；所以可利用基因槍法將EPSPS基因打入到葉綠體中，B正確；

C；EPSPS基因?qū)氤晒?；是否賦予了煙草對草甘膦的預(yù)期抗性，還需檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)，C正確；

D；由于葉綠體基因組不會隨花粉擴(kuò)散；有效避免了基因污染，所以從生物安全角度分析，把基因轉(zhuǎn)入葉綠體比轉(zhuǎn)入細(xì)胞核更安全，D錯誤。

故選D。二、多選題(共9題，共18分)9、A:B:C【分析】【分析】

多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增DNA片段：

1；PCR原理：在解旋酶作用下；打開DNA雙鏈，每條DNA單鏈作為母鏈，以4種游離脫氧核苷酸為原料，合成子鏈，在引物作用下，DNA聚合酶從引物3'端開始延伸DNA鏈，即DNA的合成方向是從子鏈的5'端自3'端延伸的。實際上就是在體外模擬細(xì)胞內(nèi)DNA的復(fù)制過程。DNA的復(fù)制需要引物，其主要原因是DNA聚合酶只能從3′端延伸DNA鏈。

2；PCR反應(yīng)過程是：變性→復(fù)性→延伸。

【詳解】

A；基因擴(kuò)增過程中需要特定的引物；該引物的作用是定位基因的位置，與模板鏈結(jié)合并為子鏈的延伸提供起點，擴(kuò)增過程中引物和探針應(yīng)同時結(jié)合到模板DNA上，A錯誤；

B、若最初該反應(yīng)體系中只有逆轉(zhuǎn)錄而來的一個DNA分子，每個DNA分子需要1個探針，擴(kuò)增n次，可得到2n個DNA分子，則共需要消耗2n-1個探針；B錯誤；

C；由題可知C值越大；該反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號到達(dá)設(shè)定閾值經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)越大，即每次循環(huán)出現(xiàn)的熒光信號越少。每次循環(huán)出現(xiàn)的熒光信號越少，代表被檢測樣本中的病毒數(shù)目越少，C錯誤；

D；如果樣本內(nèi)的病毒RNA被降解；會導(dǎo)致無法檢測出樣本內(nèi)的正確病毒數(shù)目，D正確。

故選ABC。10、C:D【分析】【分析】

蛋白質(zhì)工程是指以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其與生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ)；通過基因修飾或基因合成，對現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，或制造一種新的蛋白質(zhì)，以滿足人類的生產(chǎn)和生活的需求。也就是說，蛋白質(zhì)工程是在基因工程的基礎(chǔ)上，延伸出來的第二代基因工程，是包含多學(xué)科的綜合科技工程領(lǐng)域。

基本流程：從預(yù)期的蛋白質(zhì)功能出發(fā)→設(shè)計預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測應(yīng)有的氨基酸序列→找到相對應(yīng)的核糖核苷酸序列（RNA）→找到相對應(yīng)的脫氧核糖核苷酸序列（DNA）。

【詳解】

A；蛋白質(zhì)工程可以通過改造基因來定向改變蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)；A正確；

B；因為基因指導(dǎo)蛋白質(zhì)的合成；所以改造蛋白質(zhì)可通過改變基因結(jié)構(gòu)實現(xiàn)，B正確；

C；改造后的中華鱘具有新的性狀；但其和現(xiàn)有中華鱘之間沒有生殖隔離，仍是同一物種，C錯誤；

D；蛋白質(zhì)工程改造的是基因；可以遺傳給子代，因此改造后的中華鱘的后代也具有改造的蛋白質(zhì)，D錯誤。

故選CD。11、A:D【分析】【分析】

纖維素分解菌能合成和分泌纖維素酶，纖維素酶是一種復(fù)合酶，包括C1酶；Cx酶和葡萄糖苷酶；前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。用以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基可以篩選出纖維素分解菌。

【詳解】

A；木材、秸稈中富含纖維素；故可以從富含腐殖質(zhì)的林下土壤中篩選產(chǎn)纖維素酶菌，A正確；

B；應(yīng)該用以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基篩選纖維素分解菌；只有纖維素分解菌能夠存活，B錯誤；

C；接種室、接種箱等常用紫外線消毒法處理；接種環(huán)等常用灼燒滅菌法處理，吸管、培養(yǎng)皿等常用干熱滅菌法處理，培養(yǎng)基用高壓蒸汽滅菌法處理，C錯誤；

D；菌落只能在固體培養(yǎng)基中形成；菌種分離和菌落計數(shù)都可以使用固體培養(yǎng)基，D正確。

故選AD。12、B:C【分析】【分析】

根據(jù)題意；將某實驗動物的第5號染色體上的一段DNA敲除，結(jié)果發(fā)現(xiàn)培育出的實驗動物血液甘油三酯極高，具有動脈硬化的傾向，并可以遺傳給后代，說明該變異是一種可遺傳的變異。

【詳解】

A；DNA敲除后結(jié)果發(fā)現(xiàn)培育出的實驗動物血液甘油三酯極高；具有動脈硬化的傾向，并可以遺傳給后代，說明敲除的DNA片段具有遺傳效應(yīng)，A正確；

B；動脈硬化的產(chǎn)生與遺傳物質(zhì)發(fā)生可遺傳的變異有關(guān)；不能說明是基因重組，B錯誤；

C；上述信息只能表明敲除的DNA片段與甘油三酯代謝有關(guān)；不能表明控制甘油三酯合成的基因就位于第5號染色體上，C錯誤；

D；由題干信息可知；利用DNA片段的敲除技術(shù)可以研究相關(guān)基因功能，D正確。

故選BC。13、C:D【分析】【分析】

將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的T-DNA可整合到受體細(xì)胞的染色體DNA上?；虮磉_(dá)載體常包括目的基因；啟動子、終止子、標(biāo)記基因。標(biāo)記基因是為了鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來。

【詳解】

A；啟動子是位于DNA上RNA聚合酶的結(jié)合部位；mRNA是由基因啟動子后面的序列編碼而來的，若某基因是從人的細(xì)胞內(nèi)提取mRNA經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄形成的，則該基因中不含啟動子序列，A正確；

B、引物的延伸方向為3'端，擴(kuò)增目的基因時，利用耐高溫的DNA聚合酶從引物a、b的3'－端進(jìn)行子鏈合成；B正確；

C；導(dǎo)入人血清白蛋白基因的綿羊受體細(xì)胞不是乳腺細(xì)胞；而是受精卵或早期胚胎細(xì)胞，C錯誤；

D；農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞；并且整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上，根據(jù)農(nóng)桿菌的這一特點，將目的基因插入到Ti質(zhì)粒的T-DNA上，通過農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用，就可以把目的基因的T-DNA整合到植物細(xì)胞中染色體的DNA上，D錯誤。

故選CD。14、B:C:D【分析】【分析】

選擇培養(yǎng)基是用來將某種或某類微生物從混雜的微生物群體中分離出來的培養(yǎng)基。設(shè)計選擇培養(yǎng)基時；主要考慮某些微生物的特殊營養(yǎng)需求或它們對某些化學(xué)物質(zhì)具有的抗性。

【詳解】

A；以尿素作為唯一氮源的培養(yǎng)基為選擇培養(yǎng)基；可從土壤中分離出分解尿素的細(xì)菌，A正確；

B；平板劃線法能將單個微生物分散到培養(yǎng)基上；從而分離得到單菌落，但是不可以用來測定樣品中的活菌數(shù)，稀釋涂布平板法可以計數(shù)，B錯誤；

C；樣品的稀釋度太大；會導(dǎo)致微生物數(shù)量太少，一般要求稀釋后平板上的菌落數(shù)在30到300之間比較合適，C錯誤；

D；利用顯微鏡進(jìn)行直接計數(shù)；可快速直觀地測定樣品中的活菌數(shù)和死菌數(shù)，D錯誤。

故選BCD。15、A:C:D【分析】【分析】

微生物常見的接種的方法。

（1）平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板；接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落。

（2）稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后；均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落。

【詳解】

A；自生固氮菌是需氧型生物；步驟①土樣應(yīng)取自表層的土壤，步驟③中的稀釋梯度分別為10，100，1000倍，所以土壤懸浮液稀釋了1000倍，A正確；

B；自生固氮菌是異養(yǎng)型生物；可用血細(xì)胞計數(shù)板或稀釋涂布平板法來計數(shù)土壤懸浮液中的菌體數(shù)，B錯誤；

C；步驟②需充分振蕩20min；主要目的是使土壤中的微生物充分釋放到無菌水中，C正確；

D；步驟④為稀釋涂布平板法接種；所用的接種工具是涂布器，該選擇培養(yǎng)基的特點是不添加氮源，利用的是空氣中的氮氣，D正確。

故選ACD。16、C【分析】【分析】

治療性克隆是指利用克隆技術(shù)產(chǎn)生特定細(xì)胞和組織（皮膚；神經(jīng)或肌肉等）用于治療性移植。中國政府的態(tài)度是禁止生殖性克隆人；不反對治療性克隆。

【詳解】

A；開放式組織培養(yǎng)一般是指使組織培養(yǎng)脫離嚴(yán)格無菌的操作環(huán)境；在自然、開放的有菌環(huán)境中進(jìn)行操作。，動物細(xì)胞一般不能采用這種方式，A錯誤；

B；胚胎是由整個受精卵發(fā)育而來的；囊胚內(nèi)部的細(xì)胞不能發(fā)育為完整的胚胎，B錯誤；

C；胚胎移植技術(shù)；一般采用桑椹胚或囊胚進(jìn)行移植，C正確；

D；我國不贊成、不允許、不支持、不接受任何形式的生殖性克??；但是不反對治療性克隆，D錯誤。

故選C。17、A:B:D【分析】【分析】

胚胎干細(xì)胞：

1；哺乳動物的胚胎干細(xì)胞簡稱ES或EK細(xì)胞；來源于早期胚胎或從原始性腺中分離出來；

2；具有胚胎細(xì)胞的特性；在形態(tài)上表現(xiàn)為體積小，細(xì)胞核大，核仁明顯；在功能上，具有發(fā)育的全能性，可分化為成年動物體內(nèi)任何一種組織細(xì)胞；另外，在體外培養(yǎng)的條件下，可以增殖而不發(fā)生分化，可進(jìn)行冷凍保存，也可進(jìn)行遺傳改造。

【詳解】

A；滋養(yǎng)層細(xì)胞將來能發(fā)育成胎膜和胎盤；A正確；

B；利用核移植所得胚胎干細(xì)胞；可以誘導(dǎo)發(fā)育成適合移植的器官，可減少免疫排斥反應(yīng)，B正確；

C；胚胎分割時應(yīng)該選擇形態(tài)正常、發(fā)育良好的桑葚胚或囊胚；C錯誤；

D；“擬原腸胚”模型可以研究酒精、藥物和病原體對胚胎發(fā)育的影響；D正確。

故選ABD。三、填空題(共5題，共10分)18、略

【分析】【分析】

1.基因檢測可以把人體內(nèi)的致病基因和易感基因檢測出來；通過采取一定的預(yù)防措施預(yù)防遺傳病的發(fā)生，但同時可能會帶來基因歧視等倫理道德方面的問題。

2.設(shè)計試管嬰兒不同于試管嬰兒；試管嬰兒是為了解決不孕不育的問題，而設(shè)計試管嬰兒是為了解決器官移植方面的醫(yī)療問題。

【詳解】

1.（1）基因身份證是指把每個人的致病基因和易感基因都檢測出來；并記錄在磁卡上，這樣到醫(yī)院看病時，只要帶上這種身份證，醫(yī)生就可以“對證”治療。

（2）反對基因檢測的人認(rèn)為：目前人類對基因結(jié)構(gòu)及基因間相互作用尚缺乏足夠的認(rèn)識；要想通過基因檢測達(dá)到預(yù)防疾病的目的是困難的；況且人類的多基因病，既與基因有關(guān)，又與環(huán)境和生活習(xí)慣有關(guān)，有某種致病基因的人不見得就會患病。但是，基因檢測結(jié)果本身就已經(jīng)足以給受檢者帶來巨大的心理壓力。個人基因資訊的泄露所造成的基因歧視，勢必造成奇特的失業(yè)大軍，即遺傳性失業(yè)大軍。個人基因資訊被暴露之后，還會造成個人婚姻困難；人際關(guān)系疏遠(yuǎn)等嚴(yán)重后果。支持基因檢測的人認(rèn)為：通過基因檢測可以對遺傳性疾病及早采取預(yù)防措施，適時進(jìn)行治療，達(dá)到挽救患者生命的目的。對于基因歧視現(xiàn)象，可以通過正確的科學(xué)知識傳播、倫理道德教育和立法得以解決。

2.設(shè)計試管嬰兒需要因而具有特定的性別或遺傳性狀；因此胚胎移植前需要進(jìn)行遺傳學(xué)診斷這一環(huán)節(jié)，而試管嬰兒是為了解決不孕不育問題，不需要考慮嬰兒的性別等問題，不需要進(jìn)行遺傳學(xué)診斷。二者的共同點是：兩者都是體外受精，并進(jìn)行體外早期胚胎培養(yǎng)，都要經(jīng)過胚胎移植，都是有性生殖。

【點睛】

1.基因與疾病的關(guān)系：具有致病基因的個體不一定患遺傳??；因為生物的性狀還受到環(huán)境因素的影響；沒有致病基因也可能患病，因為基因表達(dá)的蛋白質(zhì)，在加工或修飾過程中出現(xiàn)錯誤，也會出現(xiàn)癥狀。

2.明確設(shè)計試管嬰兒和試管嬰兒目的的不同是解答本題的關(guān)鍵之一?！窘馕觥恐虏』蛞赘谢蚧蚪Y(jié)構(gòu)預(yù)防疾病心理壓力預(yù)防措施基因歧視倫理道德需要不需要體外有性生殖19、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】原核生物20、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】組織單個細(xì)胞培養(yǎng)基生長和繁殖21、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】離心、振動、電刺激聚乙二醇22、略

【分析】【詳解】

在日常生活中；我們遇到的有關(guān)生物技術(shù)安全與倫理問題有：生殖性克隆人倫理問題；試管嬰兒與設(shè)計試管嬰兒倫理問題、轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的安全性與倫理問題和生物武器的安全性等。

例如轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的安全性：轉(zhuǎn)基因技術(shù)的安全性的爭議；主要集中在兩個方面，一是對人是否安全，二是對環(huán)境的影響。

對人的安全方面；支持轉(zhuǎn)基因技術(shù)的人認(rèn)為投放市場的轉(zhuǎn)基因作物都是經(jīng)過充分實驗的，被改變的基因僅限于增加作物的抗?。豢篂?zāi)害能力，并且在北美地區(qū)轉(zhuǎn)基因食品已經(jīng)使用的很多年，可以說現(xiàn)在美國加拿大20歲左右的年輕人從小就是吃轉(zhuǎn)基因食品長大的；反對轉(zhuǎn)基因技術(shù)的人認(rèn)為轉(zhuǎn)基因食品有害，他們的證據(jù)主要是一位科學(xué)家的實驗證明，用轉(zhuǎn)基因食品喂養(yǎng)的小白鼠癌癥發(fā)病率明顯升高，但問題是這個實驗只成功過一次，后來別的科學(xué)家在相同的條件下都沒能再現(xiàn)這個實驗結(jié)果。

在環(huán)境方面對轉(zhuǎn)基因技術(shù)的爭議是最大的；也是歐洲人反對轉(zhuǎn)基因技術(shù)的重要依據(jù)，反對人持有的觀點是，通過改良基因創(chuàng)造出抵抗病蟲害和其他災(zāi)害的植物，這種技術(shù)如果失去控制可能會把農(nóng)作物改造成適應(yīng)性極強(qiáng)的超級植物，自然平衡使任何生物都不可能占絕對優(yōu)勢地位，但轉(zhuǎn)基因技術(shù)產(chǎn)生的超級植物可能會打破自然平衡而泛濫成災(zāi)。

倫理問題：由于轉(zhuǎn)基因技術(shù)創(chuàng)新打破了物種界限,使不同物種間的基因可以進(jìn)行前所未有的新組合,其可能造成的危害難以預(yù)見,這就使轉(zhuǎn)基因技術(shù)創(chuàng)新呈現(xiàn)前所未有的復(fù)雜性,并不可避免地會引發(fā)很多全新的社會倫理問題,引出種種有關(guān)生物科學(xué)家的道德責(zé)任和學(xué)術(shù)自由的哲學(xué)爭論。在轉(zhuǎn)基因植物技術(shù)創(chuàng)新中,功利主義的預(yù)設(shè)和學(xué)術(shù)自由的主張必須以人類的價值、尊嚴(yán)和社會公正為前提條件。相關(guān)領(lǐng)域的科學(xué)家必須擔(dān)當(dāng)起必要的道德責(zé)任,把握好倫理橫桿,以促使轉(zhuǎn)基因植物技術(shù)創(chuàng)新沿著科學(xué)的軌道健康發(fā)展?！窘馕觥吭谌粘Ｉ钪?；我們遇到的有關(guān)生物技術(shù)安全與倫理問題有：生殖性克隆人倫理問題；試管嬰兒與設(shè)計試管嬰兒倫理問題、轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的安全性與倫理問題和生物武器的安全性等。

例如轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的安全性：轉(zhuǎn)基因技術(shù)的安全性的爭議；主要集中在兩個方面，一是對人是否安全，二是對環(huán)境的影響。

對人的安全方面；支持轉(zhuǎn)基因技術(shù)的人認(rèn)為投放市場的轉(zhuǎn)基因作物都是經(jīng)過充分實驗的，被改變的基因僅限于增加作物的抗??；抗災(zāi)害能力，并且在北美地區(qū)轉(zhuǎn)基因食品已經(jīng)使用的很多年，可以說現(xiàn)在美國加拿大20歲左右的年輕人從小就是吃轉(zhuǎn)基因食品長大的；反對轉(zhuǎn)基因技術(shù)的人認(rèn)為轉(zhuǎn)基因食品有害，他們的證據(jù)主要是一位科學(xué)家的實驗證明，用轉(zhuǎn)基因食品喂養(yǎng)的小白鼠癌癥發(fā)病率明顯升高，但問題是這個實驗只成功過一次，后來別的科學(xué)家在相同的條件下都沒能再現(xiàn)這個實驗結(jié)果。

在環(huán)境方面對轉(zhuǎn)基因技術(shù)的爭議是最大的；也是歐洲人反對轉(zhuǎn)基因技術(shù)的重要依據(jù)，反對人持有的觀點是，通過改良基因創(chuàng)造出抵抗病蟲害和其他災(zāi)害的植物，這種技術(shù)如果失去控制可能會把農(nóng)作物改造成適應(yīng)性極強(qiáng)的超級植物，自然平衡使任何生物都不可能占絕對優(yōu)勢地位，但轉(zhuǎn)基因技術(shù)產(chǎn)生的超級植物可能會打破自然平衡而泛濫成災(zāi)。

倫理問題：由于轉(zhuǎn)基因技術(shù)創(chuàng)新打破了物種界限,使不同物種間的基因可以進(jìn)行前所未有的新組合,其可能造成的危害難以預(yù)見,這就使轉(zhuǎn)基因技術(shù)創(chuàng)新呈現(xiàn)前所未有的復(fù)雜性,并不可避免地會引發(fā)很多全新的社會倫理問題,引出種種有關(guān)生物科學(xué)家的道德責(zé)任和學(xué)術(shù)自由的哲學(xué)爭論。在轉(zhuǎn)基因植物技術(shù)創(chuàng)新中,功利主義的預(yù)設(shè)和學(xué)術(shù)自由的主張必須以人類的價值、尊嚴(yán)和社會公正為前提條件。相關(guān)領(lǐng)域的科學(xué)家必須擔(dān)當(dāng)起必要的道德責(zé)任,把握好倫理橫桿,以促使轉(zhuǎn)基因植物技術(shù)創(chuàng)新沿著科學(xué)的軌道健康發(fā)展。四、判斷題(共2題，共6分)23、A【分析】【詳解】

治療性克隆是指利用克隆技術(shù)產(chǎn)生特定的細(xì)胞、組織和器官，用它們來修復(fù)或替代受損的細(xì)胞、組織和器官，從而達(dá)到治療疾病的目的。本說法正確。24、A【分析】【詳解】

生物武器是利用生物戰(zhàn)劑殺傷人員、牲畜、毀壞植物的武器。生物武器種類包括致病菌、病毒、生化毒劑以及經(jīng)過基因重組的致病菌等，故正確。五、實驗題(共4題，共28分)25、略

【分析】【分析】據(jù)圖分析；圖示為利用基因工程大量制備α-淀粉酶的過程，目的基因是α-淀粉酶基因，與體構(gòu)建基因表達(dá)載體，然后將目的基因?qū)氪竽c桿菌，接著對目的基因進(jìn)行檢測與鑒定，最后利用工程菌培養(yǎng)獲得大量的α-淀粉酶產(chǎn)品。

【詳解】（1）α-淀粉酶基因來自于海洋細(xì)菌；因此為了利用PCR技術(shù)擴(kuò)增α-淀粉酶基因，必須先獲得細(xì)菌的基因組DNA。

（2）目的基因與運(yùn)載體結(jié)合前需要用限制酶對兩者進(jìn)行切割；延伸是在引物的3’端延伸，為了保證目的基因的完整性，因此需在引物的5’端加上限制性酶切位點，且為了使DNA片段能定向插入表達(dá)載體，減少自連，常在兩條引物上設(shè)計加入不同的限制性酶切位點。

（3）進(jìn)行擴(kuò)增時；退火溫度的設(shè)定與引物有關(guān)，延伸時間的設(shè)定與擴(kuò)增片段的長度有關(guān)。

（4）根據(jù)題意分析；虛線框內(nèi)mRNA片段內(nèi)含有24個堿基，每3個堿基構(gòu)成一個密碼子，因此包含24÷3=8個密碼子；構(gòu)成mRNA的堿基有4種，若虛線框后的序列未知，預(yù)測虛線框后的第一個密碼子最多有4×4-3=13種。

（5）根據(jù)表格數(shù)據(jù)分析可知，在pH為8.5，緩沖液為50mmol/LTris-HCl的條件下；α-淀粉酶相對活性為99.5%，活性最高。

【點睛】解答本題的關(guān)鍵是基因工程的四個基本步驟以及PCR技術(shù)的過程、條件，回憶相關(guān)知識點和注意事項，結(jié)合提示分析答題?！窘馕觥炕蚪MDNA5’使DNA片段能定向插入表達(dá)載體，減少自連②⑥813pH為8．5，緩沖液為50mmol/LTris-HCl26、略

【分析】【分析】

1、微生物常見的接種的方法：

（1）平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落。

（2）稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后；均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落。

2、實驗室常用的滅菌方法

①灼燒滅菌：將微生物的接種工具，如接種環(huán)、接種針或其他金屬工具，直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，可以迅速徹底地滅菌，此外，在接種過程中，試管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通過火焰燃燒來滅菌；

②干熱滅菌：能耐高溫的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培養(yǎng)皿）和金屬用具等，可以采用這種方法滅菌；

③高壓蒸汽滅菌：將滅菌物品放置在盛有適量水的高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)；為達(dá)到良好的滅菌效果，一般在壓力為100kPa，溫度為121℃的條件下，維持15～30min。

(1)

取附著在手機(jī)上細(xì)菌進(jìn)行取樣培養(yǎng)后；對菌液進(jìn)行系列梯度稀釋的目的是將微生物分散成單個細(xì)胞，進(jìn)而獲得單個的菌落。

(2)

A平板上生長的菌落有多種形態(tài)；說明附著在手機(jī)細(xì)菌種類較多。牛肉膏；蛋白胨提供的主要營養(yǎng)是氮源、維生素和生長因子。培養(yǎng)基乙含有碳源、氮源、水、無機(jī)鹽這幾類營養(yǎng)物質(zhì)，且加入了瓊脂作為凝固劑，可以達(dá)到實驗效果；培養(yǎng)基甲不含蛋白胨（氮源），菌落無法在該培養(yǎng)基上生長；培養(yǎng)基丙不含凝固劑（瓊脂），無法形成固體培養(yǎng)基，無法在培養(yǎng)基表面形成菌落。檢測培養(yǎng)基A制備是否合格，可將培養(yǎng)基置于適宜條件下培養(yǎng)一段時間，檢測其是否雜菌生成。

(3)

伊紅為酸性染料；美藍(lán)為堿性染料。當(dāng)大腸桿菌分解乳糖產(chǎn)酸時細(xì)菌帶正電荷被染成紅色，再與美藍(lán)結(jié)合形成紫黑色菌落，并帶有綠色金屬光澤。由圖可知3號菌落為大腸桿菌菌落。

(4)

采用平板劃線法接種培養(yǎng)一段時間后；發(fā)現(xiàn)第一劃線區(qū)域上都不間斷長滿菌落，第二劃線區(qū)域幾乎無菌落，原因可能是接種環(huán)灼燒后未冷卻就劃線或未從第一區(qū)域末端開始劃線。

【點睛】

本題考查微生物的分離和培養(yǎng)，要求考生識記微生物接種的方法、菌落計數(shù)、以及菌種保存等知識，意在考查考生對基礎(chǔ)知識的掌握和靈活運(yùn)用基礎(chǔ)知識的能力?！窘馕觥?1)將微生物分散成單個細(xì)胞；進(jìn)而獲得單個的菌落。

(2)多乙培養(yǎng)基乙含有碳源；氮源、水、無機(jī)鹽這幾類營養(yǎng)物質(zhì)；且加入了瓊脂作為凝固劑，可以達(dá)到實驗效果將培養(yǎng)基置于適宜條件下培養(yǎng)一段時間，檢測其是否雜菌生成。

(3)3

(4)第一次劃線后接種環(huán)灼燒后沒有冷卻；未從第一次劃線區(qū)開始劃線27、略

【分析】【分析】

分析圖1可知，菌株A的細(xì)胞密度增殖速率低于菌株B，脂肪剩余量菌株A高于菌株B。

從圖2中可知，ABC三種菌株中，BC菌落周圍出現(xiàn)透明圈，而A菌落周圍未出現(xiàn)透明圈。

【詳解】

（1）科研小組從土壤中篩選出產(chǎn)脂肪酶的菌株時，需設(shè)置只利于產(chǎn)脂肪酶的菌株生長，而其他雜菌生長受抑制的培養(yǎng)基，因此配制的培養(yǎng)基需要以脂肪為唯一碳源。制備固體培養(yǎng)基的步驟是：計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。微生物接種最常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法，其次還有穿刺接種和斜面接種。

（2）據(jù)圖1分析可知，菌株B增殖速度快，且脂肪剩余比例小，降解脂肪能力強(qiáng)，故應(yīng)選擇菌株B進(jìn)行后續(xù)相關(guān)研究。

（3）科研小組從土壤中篩選淀粉分解菌時，加碘液染色后，選擇培養(yǎng)基上出現(xiàn)了A、B和C三種菌落，淀粉遇碘液會變藍(lán)，而淀粉酶能夠分解淀粉，則不同產(chǎn)酶活力的菌株周圍會形成不同直徑的透明圈，淀粉酶活力越強(qiáng)的菌株周圍的透明圈越大，因此若要得到淀粉酶活力最高的菌株，應(yīng)選擇C菌落進(jìn)一步純化，這是因為C菌株的透明圈直徑與菌落直徑比值最大。經(jīng)檢測A菌落為硝化細(xì)菌，A菌落能在此培養(yǎng)基上生長且沒有形成透明圈的原因是硝化細(xì)菌為自養(yǎng)細(xì)菌，能夠利用空氣中的二氧化碳合成有機(jī)物，但硝化細(xì)菌不能產(chǎn)生淀粉酶，所以無透明圈。

（4）纖維素酶由三種復(fù)合酶組成，即C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。

【點睛】

本題考查微生物的分離和培養(yǎng)，要求考生識記相關(guān)知識，意在考查學(xué)生識記所學(xué)知識要點，把握知識間的內(nèi)在聯(lián)系，形成知識網(wǎng)絡(luò)的能力，同時獲取題圖信息準(zhǔn)確答題?！窘馕觥?1)脂肪滅菌倒平板稀釋涂布平板法和平板劃線法。

(2)B該菌株增殖速度快；且脂肪剩余比例小，降解脂肪能力強(qiáng)。

(3)C硝化細(xì)菌為自養(yǎng)細(xì)菌；能夠利用空氣中的二氧化碳合成有機(jī)物，但硝化細(xì)菌不能產(chǎn)生淀粉酶，所以無透明圈。

(4)葡萄糖苷28、略

【分析】【分析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：

（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@??；利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。

（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟；基因表達(dá)載體包括目的基因；啟動子、終止子和標(biāo)記基因等。

（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同；導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。

（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因??DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA??分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定；抗病鑒定、活性鑒定等。

【詳解】

（1）利用RT—PCR技術(shù)即逆轉(zhuǎn)錄—多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)制備PG基因；由于多聚半乳糖醛酸酶（PG）可降解果膠使細(xì)胞壁破損，從而使果實變紅變軟，說明PG基因在果肉中表達(dá)量較高，所以最好從番茄的果肉細(xì)胞中提取mRNA，此技術(shù)所需要的酶主要有逆轉(zhuǎn)錄酶和Taq酶（或熱穩(wěn)定DNA聚合酶）；

（2）據(jù)圖可知；轉(zhuǎn)基因番茄PG基因與反向連接PG基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNA1和mRNA2相結(jié)合形成雙鏈，從而抑制PG基因的翻譯過程，使PG合成量減少，從而延長果實保質(zhì)期；

（3）分析表達(dá)載體的構(gòu)建過程圖可知；目的基因插入到圖中農(nóng)桿菌的四環(huán)素抗性基因上，導(dǎo)致農(nóng)桿菌失去了四環(huán)素的抗性，所以圖中農(nóng)桿菌能夠在含卡那霉素的培養(yǎng)基中生存，而在含四環(huán)素的培養(yǎng)基中不能生存的即為已轉(zhuǎn)化的所需農(nóng)桿菌；

（4）圖中是利用農(nóng)桿菌將反向連接PC基因?qū)敕鸭?xì)胞的；此方法稱為農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法。不能用標(biāo)記的PG基因的單鏈作為探針進(jìn)行檢測番茄細(xì)胞染色體DNA上是否插入了反向連接PC基因，理由是番茄細(xì)胞內(nèi)原有的天然PG基因和插入的反向連接PG基因，均會與該探針形成雜交帶；

（5）將轉(zhuǎn)化的番茄細(xì)胞通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)形成番茄幼苗過程中；需要在培養(yǎng)基中添加有機(jī)營養(yǎng)物質(zhì)，原因是該培養(yǎng)過程中植物細(xì)胞不能進(jìn)行光合作用（或光合作用很弱）。

【點睛】

本題結(jié)合圖解，考查基因工程和植物組織培養(yǎng)的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟；識記植物組織培養(yǎng)的過程及應(yīng)用，能結(jié)合圖中信息準(zhǔn)確答題?！窘馕觥抗饽孓D(zhuǎn)錄酶和Taq酶（或熱穩(wěn)定DNA聚合酶）翻譯卡那霉素四環(huán)素農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法不能番茄細(xì)胞內(nèi)原有的天然PG基因和插入的反向連接PG基因，均會與該探針形成雜交帶要該培養(yǎng)過程中植物細(xì)胞不能進(jìn)行光合作用（或光合作用很弱）六、綜合題(共4題，共12分)29、略

【分析】【分析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@??；利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟；基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。（4）目的基因的檢測與鑒定。

【詳解】

（1）翻譯是以mRNA為模板合成蛋白質(zhì)的過程；分析題意可知，當(dāng)病原菌侵染寄主植物時，植物寄主能將siRNA轉(zhuǎn)入病原菌細(xì)胞內(nèi)使其與靶基因的mRNA結(jié)合，并將后者進(jìn)行特異性的降解，即該過程中siRNA會影響mRNA的作用，阻止目標(biāo)基因的翻譯過程。

（2）構(gòu)建基因表達(dá)載體時通常選用雙酶切；其好處是既能防止目的基因自身環(huán)化，還可避免反向連接；據(jù)圖可知，由于質(zhì)粒上的BamHI酶會破壞潮霉素抗性基因（標(biāo)記基因），不能選擇該酶，則選擇的是HindIII和BglII；由于PCR擴(kuò)增時子鏈只能從5'向3'延伸，為保證產(chǎn)物的正常延伸，需要將識別序列加在引物1和引物2的5'端；經(jīng)過1次擴(kuò)增可得到各帶有1種酶切序列的兩個DNA分子，第1次擴(kuò)增得到的產(chǎn)物又可作為模板進(jìn)行擴(kuò)增，則需要經(jīng)過2次擴(kuò)增，在PCR體系中即可出現(xiàn)兩端帶上酶切序列的干擾序列。

（3）由于質(zhì)粒所選的限制酶是HindIII和BglII；則為保證有相同的黏性末端，則應(yīng)選擇BglII和HindIII所在區(qū)段，即選擇I和III。

（4）結(jié)合題圖分析可知，圖2中含有潮霉素抗性基因，故可用含有潮霉素的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選；由于未轉(zhuǎn)化成功的質(zhì)粒也含有潮霉素抗性基因，能在該類培養(yǎng)基上生長，故篩選出的愈傷組織不一定具有SEC11基因的干擾序列?！窘馕觥?1)翻譯。

(2)防止目的基因自身環(huán)化；避免反向連接HindIII和BglII5'2

(3)I和III保證與質(zhì)粒有相同的黏性末端。

(4)潮霉素未轉(zhuǎn)化成功的質(zhì)粒也含有潮霉素抗性基因30、略

【分析】【分析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：

(1)目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@??；利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。

(2)基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟；基因表達(dá)載體包括目的基因；啟動子、終止子和標(biāo)記基因等。

(3)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同；導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是鈣離子處理法。

(4)目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個體水平上的鑒定:抗蟲鑒定；抗病鑒定、活性鑒定等；

【詳解】

（1）在真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)中；包括編碼區(qū)和非編碼區(qū)，其中編碼區(qū)又分為外顯子和內(nèi)含子，基因的非編碼區(qū)存在啟動子和終止子，啟動子和終止子都是一段特殊的DNA序列，屬于基因的非編碼區(qū)，分別位于編碼區(qū)的上游和下游，所以終止子位于非編碼區(qū)2，Ipp20基因特錄時，起始密碼子位于編碼區(qū)內(nèi)，緊接著5'端。

（2）根據(jù)堿基互補(bǔ)配對的原則；與模板連互補(bǔ)，所以轉(zhuǎn)錄前8個堿基序列為5'CUCGAGAU，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增過敏基因的編碼區(qū)段時，設(shè)計引物序列的主要依據(jù)是過敏基因編碼區(qū)兩端的部分核苷酸序列，按照堿基互補(bǔ)配對原則，與已知鏈對應(yīng)的應(yīng)為5'-TCTAGAGG

（3）基因表達(dá)載體的組成包括啟動子、終止子、目的基因和標(biāo)記基因