2025年滬科版選擇性必修3生物上冊階段測試試卷

…………○…………內(nèi)…………○…………裝…………○…………內(nèi)…………○…………裝…………○…………訂…………○…………線…………○…………※※請※※不※※要※※在※※裝※※訂※※線※※內(nèi)※※答※※題※※…………○…………外…………○…………裝…………○…………訂…………○…………線…………○…………第=page22頁，總=sectionpages22頁第=page11頁，總=sectionpages11頁2025年滬科版選擇性必修3生物上冊階段測試試卷695考試試卷考試范圍：全部知識點；考試時間：120分鐘學校：______姓名：______班級：______考號：______總分欄題號一二三四五六總分得分評卷人得分一、選擇題(共7題，共14分)1、下列有關(guān)基因工程、細胞工程、胚胎工程的敘述，錯誤的是（）A.植物基因工程主要用于提高農(nóng)作物的抗逆能力，改良農(nóng)作物品質(zhì)等B.植物組織培養(yǎng)過程中將愈傷組織包埋在人工種皮中，就形成了人工種子C.牛胚胎移植時可用囊胚期滋養(yǎng)層細胞進行性別鑒定D.制備單克隆抗體時，常用滅活的病毒和聚乙二醇等進行細胞融合2、如圖表示基因工程中目的基因的獲取示意圖，相關(guān)敘述不正確的是（）

A.①過程的完成需要逆轉(zhuǎn)錄酶B.②過程需用限制性核酸內(nèi)切酶C.目前獲取目的基因的方法只有，上圖所示的兩種D.cDNA的構(gòu)建需要提前了解目的基因的有關(guān)信息3、家庭釀制的紅葡萄酒味道純正，無任何添加劑和防腐劑，干凈沒有毒性。下列有關(guān)敘述正確的是（）A.為了清洗葡萄表皮殘留的農(nóng)藥，應用自來水反復沖洗B.為了增加葡萄酒的量，需向釀制容器內(nèi)多加入些白糖C.為了防止環(huán)境中雜菌污染，發(fā)酵時應在容器口置一紗布D.釀制時，容器應放在陰涼處保存，不要隨意打開蓋子4、大腸桿菌經(jīng)溶菌酶和陰離子去垢劑（SDS）處理后；擬核DNA就會纏繞在細胞壁碎片上，靜置一段時間，質(zhì)粒分布在上清液中。利用上述原理可初步獲得質(zhì)粒DNA。下列關(guān)于質(zhì)粒的粗提取和鑒定的分析錯誤的是（）

A.DNA不溶于酒精，而某些蛋白質(zhì)溶于酒精，可以用冷酒精析出上清液中的DNAB.DNA能溶于2mol/L的NaCl溶液，可用二苯胺試劑在沸水加熱條件下鑒定DNAC.用限制酶I和Ⅱ處理提取的產(chǎn)物，電泳出現(xiàn)圖結(jié)果，說明未提取到質(zhì)粒D.用瓊脂糖凝膠電泳鑒定質(zhì)粒，被染色的質(zhì)粒還需要通過紫外燈照射才能看到結(jié)果5、從土壤中篩選纖維素分解菌的實驗設(shè)計，正確的是（）A.土壤取樣→梯度稀釋→稀釋涂布平板→挑選菌落B.土壤取樣→選擇培養(yǎng)→稀釋涂布平板→挑選菌落C.土壤取樣→梯度稀釋→選擇培養(yǎng)→挑選菌落D.土壤取樣→梯度稀釋→稀釋涂布平板→選擇培養(yǎng)→挑選菌落6、大腸桿菌經(jīng)溶菌酶和洗滌劑處理后，擬核DNA就會纏繞在細胞壁碎片上，靜置一段時間，質(zhì)粒分布在上清液中，利用上述原理可初步獲得質(zhì)粒DNA。用三種限制酶處理提取的產(chǎn)物，電泳結(jié)果如圖所示。下列關(guān)于質(zhì)粒的粗提取和鑒定的敘述不正確的是（）

A.提取DNA時可加入酒精，使溶于酒精的蛋白質(zhì)等物質(zhì)溶解B.將提取的DNA溶于2mol/LNaCl溶液后；可用二苯胺試劑進行鑒定C.電泳鑒定DNA利用了DNA在電場中會向著它所帶電荷相反的電極移動的原理D.根據(jù)電泳結(jié)果，質(zhì)粒上一定沒有限制酶I和II的切割位點，而有限制酶III的切割位點7、某課題組為得到青蒿素產(chǎn)量高的新品系，通過一定的技術(shù)，使青蒿素合成過程的某一關(guān)鍵酶基因fps在野生青蒿中得到了過量表達，其過程如圖所示。下列敘述錯誤的是（）

A.PCR過程中，溫度需要控制在90℃以上的目的是破壞氫鍵B.構(gòu)建重組質(zhì)粒過程中，目的基因需插入Ti質(zhì)粒的T-DNA上C.基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止密碼子和標記基因等D.用熒光標記的fps基因作為探針可以檢測目的基因是導入成功評卷人得分二、多選題(共9題，共18分)8、利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)羧酸酯酶（CarE）制劑的流程如圖所示；下列敘述正確的是（）

A.過程①需使用逆轉(zhuǎn)錄酶B.過程②需使用解旋酶和PCR獲取目的基因C.過程③使用的感受態(tài)細胞可用NaCl溶液制備D.過程④可利用DNA分子雜交鑒定目的基因是否已導入受體細胞9、2012年6月29日，中國首例設(shè)計嬰兒誕生。這個嬰兒的父母均為地中海貧血基因的攜帶者。此前，二人曾育有一女，患有重度地中海貧血，為了再生一個健康的孩子，用他的臍帶血幫助姐姐進行造血干細胞移植，設(shè)計了這個嬰兒。下列有關(guān)說法正確的是（）A.“設(shè)計試管嬰兒”利用體外受精、胚胎移植、植入前胚胎遺傳學診斷技術(shù)等B.“設(shè)計試管嬰兒”與“試管嬰兒”均為有性生殖C.“設(shè)計試管嬰兒”與“試管嬰兒”都要進行胚胎選擇，二者選擇的目的相同D.設(shè)計嬰兒性別是“設(shè)計試管嬰兒”的第一步10、從藍光到紫外線都能使綠色熒光蛋白（GFP）激發(fā)；發(fā)出綠色螢光。研究人員將某病毒的外殼蛋白（L1）基因與GFP基因連接，獲得了L1-GFP融合基因，并將其插入質(zhì)粒PO，構(gòu)建了重組質(zhì)粒P1。下圖為P1部分結(jié)構(gòu)和限制酶酶切位點的示意圖，相關(guān)敘述正確的是（）

A.將L1-GFP融合基因插入質(zhì)粒PO時，使用了E1、E2和E4三種限制性核酸內(nèi)切酶B.可借助基因工程、核移植技術(shù)、早期胚胎培養(yǎng)及胚胎移植技術(shù)獲得轉(zhuǎn)基因的克隆牛C.可采用抗原-抗體雜交技術(shù)檢測該融合基因是否存在于轉(zhuǎn)基因牛的不同組織細胞中D.若在某轉(zhuǎn)基因牛皮膚細胞中觀察到綠色熒光，則說明L1基因在該細胞中完成表達11、廚余垃圾是指居民日常生活及食品加工、飲食服務(wù)、單位供餐等活動中產(chǎn)生的垃圾。廢液中的淀粉、蛋白質(zhì)、脂肪等微溶性物質(zhì)，易腐爛變質(zhì)，滋生病原微生物等。若處理不當，可能造成嚴重的污染。圓褐固氮菌和巨大芽孢桿菌組合可以將有機廚余垃圾迅速分解成水和二氧化碳，減輕環(huán)境污染。為制備分解有機廚余垃圾的微生物菌劑，某科研小組對兩菌種進行了最佳接種量比的探究實驗，并得出下圖的實驗結(jié)果。下面敘述錯誤的是（）

A.巨大芽孢桿菌生長過程中需要氮源，圓褐固氮菌生長過程中不需要氮源B.要統(tǒng)計活菌數(shù)量可采用平板劃線法和稀釋涂布平板法C.將1mL菌液稀釋100倍，在3個平板上分別接0．1mL稀釋液；經(jīng)適當培養(yǎng)后，3個平板上的菌落數(shù)分別為42、39和36。據(jù)此可得出每升菌液中的活菌數(shù)為3．9×105D.處理該類廚余垃圾廢液，兩菌種的最佳接種量比為1：112、土壤被稱為“微生物的天然培養(yǎng)基”?？茖W工作者要從土壤中分離或鑒定需要的微生物，需要配制選擇培養(yǎng)基，再通過接種、培養(yǎng)、純化、篩選等技術(shù)獲得微生物。下列關(guān)于培養(yǎng)基對微生物的分離或鑒定的敘述，正確的是（）A.從土壤中分離出酵母菌和霉菌，需要配制含青霉素的培養(yǎng)基，在滅菌后將培養(yǎng)基調(diào)至酸性B.從土壤中分離出纖維素的分解菌，需要配制含纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基且加剛果紅C.以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基，采用稀釋涂布平板法可分離出分解尿素的分解菌D.從土壤中分離固氮微生物需要配制不含氮源的培養(yǎng)基，且培養(yǎng)條件要適宜13、據(jù)人民網(wǎng)報道，“一對名為露露和娜娜的基因編輯嬰兒于2018年11月在中國健康誕生。這對雙胞胎的一個基因經(jīng)過修改，使她們出生后即能天然抵抗艾滋病。這是世界首例免疫艾滋病的基因編輯嬰兒”。下列有關(guān)說法不正確的是（）A.基因編輯制造人類的行為是符合倫理道德的B.基因編輯技術(shù)，可改變?nèi)祟愡M化的速度和方向，有利于人類的進化C.通過基因編輯技術(shù)改變了人類的遺傳物質(zhì)，使人類進化成新物種D.基因編輯技術(shù)可用于疾病預防領(lǐng)域研究，但不能用于編輯嬰兒14、如圖是青蛙的胚胎細胞核移植的過程，下列敘述錯誤的是（）

A.過程1代表對體細胞采用顯微操作去核B.青蛙囊胚除了可以作為核移植的供體細胞外，也可以直接進行胚胎移植C.胚胎細胞核移植成功率遠低于成體細胞核移植D.我國支持治療性克隆，反對生殖性克隆15、農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒上的T-DNA可以轉(zhuǎn)移并隨機插入到被侵染植物的染色體DNA中。研究者將下圖中被侵染植物的DNA片段連接成環(huán)；并以此環(huán)為模板，利用PCR技術(shù)擴增出T-DNA插入位置兩側(cè)的未知序列，以此可確定T-DNA插入的具體位置。下列說法正確的是（）

A.進行PCR擴增的依據(jù)是DNA分子雙鏈復制的原理B.進行PCR擴增需要的酶有解旋酶和熱穩(wěn)定DNA聚合酶C.利用圖中的引物②、③組合可擴增出兩側(cè)的未知序列D.通過與受體細胞的基因組序列比對，可確定T-DNA的插入位置16、已知蘇云金芽孢桿菌中的毒蛋白基因B和豇豆中的胰蛋白酶抑制劑基因D均可導致棉鈴蟲死亡，棉花的短果枝由基因A控制，基因A所在的染色體有片段缺失，含片段缺失染色體的雄配子致死?？蒲腥藛T將抗蟲基因B和D導入棉花的同一條染色體上獲得了基因型為AaBD的多個短果枝抗蟲棉植株，讓其自交得到F1（不考慮減數(shù)分裂時的染色體互換）。下列說法正確的是（）A.若抗蟲基因與控制果枝的基因位于兩對同源染色體上，則基因型為AaBD的短果枝抗蟲棉植株產(chǎn)生的配子基因型為AAaaDB.若基因D與a位于同一條染色體上，則F1中短果枝抗蟲:短果枝不抗蟲:長果枝抗蟲＝2:1:1C.若F1中短果枝抗蟲:長果枝不抗蟲＝1:1，則基因型為AaBD的短果枝抗蟲棉植株產(chǎn)生雌配子的基因型為ABD和aD.若F1中短果枝抗蟲:短果枝不抗蟲:長果枝抗蟲:長果枝不抗蟲＝3:1:3:1，則果枝基因和抗蟲基因可能位于兩對同源染色體上評卷人得分三、填空題(共5題，共10分)17、（1）致病菌：第二次世界大戰(zhàn)期間，侵華日軍在中國領(lǐng)土上修建了幾十座_____工廠，曾用數(shù)千名中國人做實驗，還曾在中國20多個地區(qū)使用了_____；造成了幾十萬中國老百姓死亡。日本戰(zhàn)敗投降時，侵華日軍又一次把培養(yǎng)的細菌釋放出來，在中國造成傳染病大流行。

（2）生化毒劑：如_____分子可以阻滯神經(jīng)末梢釋放_____；從而引起肌肉麻痹。

（3）病毒：如_____病毒；在年輕人普遍都沒有接種天花疫苗的情況下，若有人用天花病毒或某些動物的痘病毒作為生物武器，后果不堪設(shè)想。

（4）基因重組致病菌：這些致病菌是人類的_____致病菌，可讓大批受感染者突然發(fā)病，而又無藥可醫(yī)。18、動物細胞融合的意義：克服了______，成為研究_____、_____、腫瘤和生物新品種培育的重要手段。19、DNA粗提取與鑒定實驗中，二苯胺要___________。20、在___________條件下，DNA與___________反應呈現(xiàn)______________，因此_____________可以作為鑒定DNA的試劑。21、科學家采用定點誘變的方法構(gòu)建T4溶菌酶的新蛋白質(zhì)，發(fā)現(xiàn)其中一種新蛋白質(zhì)的第9和第164位氨基酸殘基被轉(zhuǎn)換為半胱氨酸殘基，并形成一個二硫鍵。這種新蛋白質(zhì)的熱穩(wěn)定性會有什么變化？這項技術(shù)的要點是什么？_________評卷人得分四、判斷題(共3題，共30分)22、理性看待轉(zhuǎn)基因技術(shù)，就是聽之任之，不管不問（______）A.正確B.錯誤23、植物細胞培養(yǎng)的原理是植物細胞的全能性。()A.正確B.錯誤24、蛋白質(zhì)工程是一項難度很大的工程，主要是因為蛋白質(zhì)發(fā)揮功能必須依賴于正確的高級結(jié)構(gòu)，而這種高級結(jié)構(gòu)往往十分復雜。（選擇性必修3P95）()A.正確B.錯誤評卷人得分五、實驗題(共4題，共28分)25、學校開展以“利用傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)制作食品”為主題的相關(guān)活動。小余同學興致勃勃地回家；發(fā)現(xiàn)冰箱中可用的原材料有草莓；豆腐、白蘿卜、牛奶等。請回答下列問題：

（1）傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)一般是指直接利用原材料中天然存在或前一次發(fā)酵保存下來的發(fā)酵物中的______進行發(fā)酵；制作食品的技術(shù)。

（2）小余同學將草莓洗凈、切塊，裝入瓶中。加入原漿醋（經(jīng)糧食直接釀制，不經(jīng)勾兌）少許、白糖兩勺，置于保溫箱中，每隔一段時間擰開瓶蓋換氣，兩周后得到草莓醋。小余同學加入原漿醋的目的是接種更多的______，加入糖并經(jīng)常開蓋換氣的目的是保證______都充足。保溫箱溫度應保持在______℃。

（3）小余同學還打算制作一些腐乳和蘿卜泡菜給住宿生作早餐。從豆腐到腐乳，多種微生物參與了豆腐的發(fā)酵，其中起主要作用的是_______，屬于______（填“真核”或“原核”）生物。豆腐中的成分也會發(fā)生一定的變化，其中蛋白質(zhì)被分解成______，脂肪被分解成______；用白蘿卜制作泡菜的過程中，能達到縮短腌制時間的操作有______（填下面的序號）。

①將白蘿卜切成小塊②用沸水短時間處理白蘿卜塊。

③添加陳泡菜汁④向容器中通入無菌空氣。

（4）小余同學欲從泡菜汁中分離制作酸奶的乳酸菌，首先對陳泡菜汁進行過濾，然后取濾液用無菌水進行充分______，再用涂布器接種到特定的______培養(yǎng)基中進行初步篩選。26、金黃色葡萄球菌是一種常見的食源性致病微生物；該菌具耐高鹽的特性。哥倫比亞血平板含無菌脫纖維羊血，金黃色葡萄球菌可破壞菌落周圍的紅細胞，產(chǎn)生透明的溶血圈。如圖為檢測鮮牛奶中是否存在金黃色葡萄球菌的操作流程，請回答：

（1）從功能上看7．5％NaCl（高鹽）肉湯培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基，用該培養(yǎng)基對金黃色葡萄球菌進行培養(yǎng)的主要目的是提高___________。

（2）從培養(yǎng)過程分析，振蕩培養(yǎng)可以____________________________；更有利于微生物的生長。

（3）在配制哥倫比亞血平板時，添加無菌脫纖維羊血是在高壓蒸汽滅菌________（填“之前”或“之后”），原因是________________________。

（4）圖中血平板上的接種方法是________________。經(jīng)規(guī)范操作并多次重復，血平板上均出現(xiàn)__________的菌落，初步證明鮮牛奶中存在金黃色葡萄球菌。但牛奶供應商仍認為此菌并非牛奶所攜帶，因此需要對本次操作進行完善，具體方案是________________。27、科研人員利用營養(yǎng)菌（只能利用乳糖；但不能降解四環(huán)素）和抗性菌（不能利用乳糖，但能降解四環(huán)素）對細菌間的相互作用進行了探究。

(1)將兩種菌液分別用______法單獨接種于加入含四環(huán)素并以乳糖為唯一碳源的______（選填“固體”或“液體”）培養(yǎng)基中，培養(yǎng)一段時間后，培養(yǎng)皿中均未出現(xiàn)菌落，推測兩種菌______（填“發(fā)生”或“未發(fā)生”）可遺傳變異。

(2)將兩種菌混合后接種在與上述成分相同的培養(yǎng)基中，培養(yǎng)一段時間后，培養(yǎng)基中兩種菌落均有生長，推測兩種菌實現(xiàn)了“互利共生”，其原因最可能是：抗性菌增殖，______，為營養(yǎng)菌存活提供保障；營養(yǎng)菌增殖，______；代謝產(chǎn)物為抗性菌生長提供碳源。

(3)為進一步驗證上述現(xiàn)象；科研人員設(shè)計了如圖所示裝置進行實驗。

①實驗操作：在接種了營養(yǎng)菌和抗性菌混合菌液的培養(yǎng)板，左側(cè)加入以乳糖為唯一碳源的培養(yǎng)基，右側(cè)加入含______的培養(yǎng)基；培養(yǎng)基可從與兩側(cè)逐漸擴散到混合菌液培養(yǎng)板上。一段時間后檢測混合菌液培養(yǎng)板上兩種菌的數(shù)量情況。

②預期結(jié)果：左側(cè)______；右側(cè)______。28、使用日益廣泛的手機；在方便人們通訊聯(lián)絡(luò)的同時也成為細菌等病原體傳播的途徑。為了解手機上細菌的情況，某興趣小組進行了如下實驗，請回答相關(guān)問題：

(1)取附著在手機上細菌進行取樣培養(yǎng)后，對菌液進行系列梯度稀釋的目的是_______。

(2)A平板上生長的菌落有多種形態(tài)，說明附著在手機細菌有____種。若要使菌落能在A平板上生長，下列培養(yǎng)基組分中最合理的是_____(選填“甲、乙、丙”)，原因是_____?？刹扇___________來檢測培養(yǎng)基A制備是否合格。培養(yǎng)基編號培養(yǎng)基組分甲蔗糖、NaC1、瓊脂、水乙牛肉膏、蛋白胨、NaCl、瓊脂、水丙蛋白胨、NaCl、蔗糖、水

(3)初篩后將平板B的菌落通過“影印”方法接種到C培養(yǎng)基上培養(yǎng)，使C培養(yǎng)基對應位置上出現(xiàn)相同菌落。然后用伊紅-美藍染液對C進行染色，根據(jù)染色后D中出現(xiàn)的結(jié)果，可判斷平板B中______(選填圖中數(shù)字)是大腸桿菌的菌落。

(4)某同學采用平板劃線法進一步純化大腸桿菌，接種培養(yǎng)一段時間后，發(fā)現(xiàn)第一劃線區(qū)不間斷長滿菌落，第二劃線區(qū)上幾乎無菌落，產(chǎn)生此情況的可能原因____________。評卷人得分六、綜合題(共3題，共9分)29、pUC質(zhì)粒載體如圖所示；目的基因插入到Amp'或LacZ'中均會導致相應基因失活。篩選含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌可采用藍白斑法，機制如下：LacZ'基因在IPTG誘導下表達的α-肽可與大腸桿菌自身編碼的β-肽互補從而產(chǎn)生有活性的β-半乳糖苷酶，該酶能夠水解X-gal使菌落呈藍色，否則呈白色。某科研人員利用LacZ'基因與目的基因構(gòu)建基因表達載體A后再轉(zhuǎn)化大腸桿菌?；卮鹣铝袉栴}。

（1）1967年科學家發(fā)現(xiàn)質(zhì)粒能自我復制；并可以在細菌細胞間轉(zhuǎn)移，這一發(fā)現(xiàn)為_______找到了一種運載工具。

（2）目的基因主要是指編碼蛋白質(zhì)的基因；也可以是一些具有_______的因子。若需快速得到大量目的基因，可采用PCR技術(shù)，該技術(shù)一般由_______三個基本反應步驟構(gòu)成。

（3）作為基因表達載體除了需要有復制原點；標記基因、目的基因外；還需要具有_______。為了避免目的基因的自身環(huán)化，寫出構(gòu)建基因表達載體A的主要實驗步驟：_______

（4）轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌需放在含有氨芐青霉素、_______的培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，篩選出白色的菌落即為含有______的大腸桿菌。30、I：如圖所示是畜牧業(yè)生產(chǎn)上培育某種優(yōu)良種牛的兩種方法；請分析回答下列問題：

（1）方法Ⅰ和方法Ⅱ均用到的生物技術(shù)有________________和________________。

（2）用激素處理的目的是使B牛____________，從B牛體內(nèi)獲得的卵母細胞需要培養(yǎng)到____________（填細胞分裂時期）才能與精子結(jié)合。

（3）在自然受精情況下，A牛的精子必須在B牛的生殖道中經(jīng)過相應的生理變化后，才能與B牛的卵子結(jié)合，完成受精作用，這個過程叫做_______。卵子受精的標志是___________。將方法Ⅰ中的受精卵移入到____________中繼續(xù)培養(yǎng)；待胚胎培養(yǎng)至囊胚期，可取滋養(yǎng)層細胞進行性別鑒定。

II：如圖所示為用基因工程與胚胎工程培育良種牛的過程；請據(jù)圖回答下列問題：

（1）③表示基因工程中________________________過程。

（2）用促性腺激素處理良種母牛的目的是________________________。

（3）如果轉(zhuǎn)基因牛D的牛奶中含有________________________，則說明人血清白蛋白基因在個體水平已表達成功。31、圖1為培育轉(zhuǎn)AFPs基因（抗凍基因）番茄的示意圖；外源DNA和質(zhì)粒上均標出了酶切位點及相關(guān)抗性基因，其中Ap為氨芐青霉素抗性基因，Tc為四環(huán)素抗性基因。請分析并回答下列問題：

(1)據(jù)圖分析，若需使用插入滅活法篩選并鑒定重組質(zhì)粒，應優(yōu)先選用限制酶____________對目的基因和質(zhì)粒切割。在形成的重組質(zhì)粒上，能被RNA聚合酶識別且結(jié)合的部位稱為____________。

(2)圖2中的A鏈和B鏈來自于AFPs基因。欲利用PCR技術(shù)對AFPs基因擴增4次循環(huán)，應選取的引物是____________，需要的引物數(shù)量是___________個。在這個過程中，還需要添加___________酶。

(3)為提高導入成功率，常利用____________處理農(nóng)桿菌，Ti質(zhì)粒含有的____________可將目的基因整合到番茄細胞的染色體DNA上，采用___________技術(shù)將番茄細胞培育成轉(zhuǎn)基因番茄。若要獲得抗凍能力更強的抗凍番茄，可以對AFPs基因進行改造，最終得到相應的蛋白質(zhì)，該過程需用到__________工程。檢測轉(zhuǎn)基因番茄是否產(chǎn)生抗凍蛋白，所用的方法是__________。

(4)用插入滅活法篩選出的含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌在含氨芐青霉素培養(yǎng)基和含四環(huán)素培養(yǎng)基上的存活情況分別是___________。參考答案一、選擇題(共7題，共14分)1、B【分析】【分析】

1；植物細胞工程的應用：

（1）植物繁殖的新途徑微型繁殖：保持優(yōu)良品種的遺傳特性；高效快速地實現(xiàn)大量繁殖：

①作物脫毒：利用分生區(qū)附近（如莖尖）組織培養(yǎng)獲得脫毒苗；

②人工種子：胚狀體；不定芽、頂芽和腋芽等包上人工種皮制成；

（2）作物新品種的培育：單倍體育種；突變體的利用；

（3）細胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)：培養(yǎng)到愈傷組織階段；

2；誘導動物細胞融合的常用方法有聚乙二醇（PEG）融合法、電融合法和滅活病毒誘導法等。

【詳解】

A；植物基因工程主要用于提高農(nóng)作物的抗逆能力；改良農(nóng)作物品質(zhì)等，A正確；

B；人工種子中包埋的是頂芽、腋芽、不定芽或胚狀體；而不是愈傷組織，B錯誤；

C；囊胚期的滋養(yǎng)層細胞與內(nèi)細胞團具有相同的遺傳物質(zhì)；因此可用來進行性別鑒定，C正確；

D；制備單克隆抗體需要制備雜交瘤細胞；誘導動物細胞融合的過程常用滅活的病毒和聚乙二醇（PEG）等，D正確。

故選B。2、C【分析】【分析】

題圖分析；圖中顯示了兩種獲取目的基因的方法。圖中①表示逆轉(zhuǎn)錄過程，②表示用限制酶切割DNA分子得到一定大小范圍DNA，③表示獲取目的基因。

【詳解】

A；①為逆轉(zhuǎn)錄過程；完成該過程需要逆轉(zhuǎn)錄酶，A正確；

B；②表示將DNA分子切割；因此需用限制性核酸內(nèi)切酶，B正確；

C；目前獲取目的基因的方法除了從基因文庫中獲取外；還可利用PCR技術(shù)擴增和人工化學合成，C錯誤；

D；cDNA的構(gòu)建需要首先獲得相應的mRNA；因此，cDNA的構(gòu)建需要提前了解目的基因的有關(guān)信息，D正確。

故選C。

【點睛】3、D【分析】【分析】

在葡萄酒自然發(fā)酵的過程中；起主要作用的是附著在葡萄皮表面的野生型酵母菌。在發(fā)酵過程中,隨著酒精濃度的提高，紅葡萄皮的色素也進入發(fā)酵液，使葡萄酒呈現(xiàn)深紅色。在缺氧呈酸性的發(fā)酵液中，酵母菌可以生長繁殖，而絕大多數(shù)其他微生物都因無法適應這一環(huán)境而受到制約。

20℃左右最適宜酵母菌繁殖酒精發(fā)酵時一般將溫度控制在18℃-25℃。

【詳解】

A；為了清洗葡萄表皮殘留的農(nóng)藥；應用自來水浸泡和沖洗，但是不要反復沖洗，這樣會洗點葡萄皮自帶的酵母菌，A錯誤；

B；為了增加葡萄酒的量；需向釀制容器內(nèi)加適量白糖，加太多白糖可能會使發(fā)酵液滲透壓增大，酵母菌失水而死，B錯誤；

C；發(fā)酵過程需要嚴格無氧；所以最好密封瓶口，而且定期排氣，C錯誤；

D；釀制時；容器應放在陰涼處保存，因為酵母菌的最適溫度在18℃-25℃，不要隨意打開蓋子以免雜菌污染，D正確。

故選D。4、C【分析】【分析】

DNA的鑒定：在沸水浴條件下；DNA遇二苯胺會被染成藍色，因此二苯胺可以作為鑒定DNA的試劑。

DNA不容易酒精溶液；細胞中的某些蛋白質(zhì)可以溶解于酒精，利用這一原理可以將蛋白質(zhì)和DNA進一步分離。

【詳解】

A；通過分析可知；DNA不溶于酒精，而某些蛋白質(zhì)溶于酒精，可以用冷酒精析出上清液中的DNA，A正確；

B；DNA能溶于2mol/L的NaCl溶液；這樣可以去除DNA中的某些雜質(zhì)，提取的DNA可用二苯胺試劑在沸水加熱條件下生成藍色，B正確；

C；限制性酶Ⅰ和限制性酶Ⅱ處理提取的產(chǎn)物；只得到一條帶，說明提取物是環(huán)狀DNA，即提取物為質(zhì)粒，C錯誤；

D；用瓊脂糖凝膠電泳鑒定質(zhì)粒；被染色的質(zhì)粒還需要通過紫外燈照射才能看到結(jié)果，D正確。

故選C。

【點睛】5、B【分析】【分析】

從土壤中分離纖維素分解菌的一般步驟是：土壤取樣→選擇培養(yǎng)→梯度稀釋→涂布培養(yǎng)和篩選菌株．篩選纖維素分解菌需要用以纖維素為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基；纖維素分解菌可以用剛果紅染液進行鑒別，在培養(yǎng)基中加入剛果紅染液，在其菌落周圍會出現(xiàn)透明圈。

【詳解】

從從土壤中分離纖維素分解菌的一般步驟是：土壤取樣→選擇培養(yǎng)→梯度稀釋→涂布培養(yǎng)和篩選菌株。

故選B。

【點睛】6、D【分析】【分析】

DNA的粗提取和鑒定：利用DNA不溶于酒精；某些蛋白質(zhì)溶于酒精，以及DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同，可以將DNA與蛋白質(zhì)分離開；在一定溫度下，DNA遇二苯胺試劑會呈現(xiàn)藍色，因此二苯胺試劑可以作為鑒定DNA的試劑。

【詳解】

A；DNA在冷酒精中溶解度很低；提取DNA時加入酒精，是為了讓DNA析出，蛋白質(zhì)等物質(zhì)溶解，A正確；

B；將提取的DNA溶于2mol/LNaCl溶液后；可用二苯胺試劑在沸水條件進行鑒定，DNA遇二苯胺試劑會呈現(xiàn)藍色，B正確；

C；DNA帶負電；電泳鑒定DNA利用了DNA在電場中會向著它所帶電荷相反的電極移動的原理，C正確；

D；因為質(zhì)粒的本質(zhì)是環(huán)狀的DNA；限制酶Ⅰ和Ⅱ處理后電泳只有一條條帶，可能是該質(zhì)粒上有一個切割位點，也可能沒有切割位點，D錯誤。

故選D。7、C【分析】【分析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@?。焕肞CR技術(shù)擴增和人工合成。基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟；基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等。將目的基因?qū)胧荏w細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣。目的基因的檢測與鑒定。

【詳解】

A；利用PCR技術(shù)擴增目的基因時；使反應體系中的模板DNA解旋為單鏈的條件是加熱至90℃以上，目的是破壞DNA分子中的氫鍵，A正確；

B；構(gòu)建重組Ti質(zhì)粒的過程中；需將目的基因插入Ti質(zhì)粒的T-DNA上，B正確；

C；基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等；終止密碼子位于mRNA上，C錯誤；

D；檢驗目的基因是否格合到青蒿基因組中；可用DNA分子雜交法，即將fps基因制成基因探針，與青蒿基因組DNA雜交，而檢測目的基因是否表達，常用抗原-抗體雜交法，D正確。

故選C。二、多選題(共9題，共18分)8、A:D【分析】【分析】

過程①是以mRNA為模板合成DNA的過程；即逆轉(zhuǎn)錄過程；過程②表示利用PCR擴增目的基因；過程③表示將重組質(zhì)粒導入大腸桿菌；過程④培養(yǎng)并篩選轉(zhuǎn)基因大腸桿菌，級工程菌。

【詳解】

A；過程①是以mRNA為模板合成DNA的過程；即逆轉(zhuǎn)錄過程，需要逆轉(zhuǎn)錄酶的催化，故A正確；

B；過程②表示利用PCR擴增目的基因；在PCR過程中，不需要解旋酶，是通過控制溫度來達到解旋的目的，故B錯；

C；利用氯化鈣處理大腸桿菌；使之成為感受態(tài)細胞，故C錯；

D；檢測目的基因是否成功導入受體細胞的染色體DNA中；可以采用DNA分子雜交技術(shù)，故D正確。

故選AD。

【點睛】9、A:B【分析】【分析】

1；試管嬰兒技術(shù)是指通過人工操作使卵子和精子在體外條件下成熟和受精；并通過培養(yǎng)發(fā)育為早期胚胎后，再經(jīng)移植后產(chǎn)生后代的技術(shù)。

2；設(shè)計試管嬰兒技術(shù)是通過體外受精獲得許多胚胎；然后從中選擇符合要求的胚胎，再經(jīng)移植后產(chǎn)生后代的技術(shù)。

【詳解】

A；“設(shè)計試管嬰兒”利用體外受精、胚胎移植、植入前胚胎遺傳學診斷技術(shù)等；A正確；

B；“設(shè)計試管嬰兒”與“試管嬰兒”均利用了體外受精技術(shù)；均為有性生殖，B正確；

C；“設(shè)計試管嬰兒”與“試管嬰兒”都要進行胚胎選擇；但二者選擇的目的不同，C錯誤；

D；體外受精獲得許多胚胎是“設(shè)計試管嬰兒”的第一步；D錯誤。

故選AB。

【點睛】10、B:D【分析】【分析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：

（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@??；利用PCR技術(shù)擴增和人工合成。

（2）基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟；基因表達載體包括目的基因；啟動子、終止子和標記基因等。

（3）將目的基因?qū)胧荏w細胞：根據(jù)受體細胞不同；導入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛毎姆椒ㄓ修r(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱游锛毎钣行У姆椒ㄊ秋@微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛毎姆椒ㄊ歉惺軕B(tài)細胞法。

（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定；抗病鑒定、活性鑒定等。

【詳解】

A；將L1-GFP融合基因插入質(zhì)粒P0時；使用了El和E4兩種限制性核酸內(nèi)切酶，A錯誤；

B；可借助基因工程、核移植技術(shù)、早期胚胎培養(yǎng)及胚胎移植技術(shù)獲得轉(zhuǎn)基因的克隆牛；B正確；

C；可采用DNA分子雜交技術(shù)檢測該融合基因是否存在于轉(zhuǎn)基因牛的不同組織細胞中；抗原-抗體雜交技術(shù)用于檢測目的基因是否成功表達，C錯誤；

D；若在某轉(zhuǎn)基因牛皮膚細胞中觀察到綠色熒光；則說明L1基因在該細胞中完成表達，D正確。

故選BD。11、A:B:C:D【分析】【分析】

微生物接種的方法很多；最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法。若要對微生物進行取樣計數(shù)，接種方法只能是稀釋涂布平板法。稀釋涂布平板法則是將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進行培養(yǎng)。

【詳解】

A；微生物的生長需要碳源、氮源、無機鹽等物質(zhì)；只是有些固氮菌由于能利用氮氣作為氮源，不需要在培養(yǎng)基中添加氮源，A錯誤；

B；平板劃線法不能用于計數(shù)；B錯誤；

C、將1mL菌液稀釋100倍，在3個平板上分別接0．1mL稀釋液；經(jīng)適當培養(yǎng)后，3個平板上的菌落數(shù)分別為42、39和36。據(jù)此可得出每升菌液中的活菌數(shù)為（42+39+36）÷3÷0．1×100×1000=3．9×107；C錯誤；

D；根據(jù)圖示可知；兩菌種的接種量比為1:1時比兩菌種的接種量比為2:1時效果好，但由于該實驗設(shè)置的兩菌種的接種量比例的組數(shù)過少，所以無法判斷處理該類廚余垃圾廢液的兩菌種的最佳接種量比，D錯誤。

故選ABCD。12、B:C:D【分析】【分析】

選擇培養(yǎng)基是指一類根據(jù)特定微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某理化因素抗性的原理而設(shè)計的培養(yǎng)基。具有只允許特定的微生物生長；而同時抑制或阻止其他微生物生長的功能。

【詳解】

A；青霉素能殺死細菌；對真菌無影響，因此，從土壤中分離出酵母菌和霉菌，需要配制含青霉素的培養(yǎng)基，且調(diào)試pH需要在滅菌前，A錯誤；

B；纖維素分解菌含纖維素水解酶能利用纖維素；其他微生物不能利用纖維素，剛果紅和纖維素形成紅色復合物，纖維素被分解后出現(xiàn)透明圈，所以能分離和篩選纖維素的分解菌，B正確；

C、分解尿素的分解菌能合成脲酶，把尿素分解成NH3，NH3再轉(zhuǎn)化NO3-、NH4+被植物利用；其他微生物細胞中不能合成脲酶，不能利用尿素，在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上不能生長，C正確；

D、固氮菌能利用空氣中N2；其他微生物不能利用，因此需要配制不含氮源的培養(yǎng)基進行篩選，且培養(yǎng)條件要適宜，D正確。

故選BCD。13、A:B:C【分析】【分析】

基因編輯技術(shù)屬于基因工程；而對于人體胚胎的操作又涉及胚胎工程，所有對于人體的操作都應經(jīng)過安全性審查，要符合倫理道德；但用于疾病預防領(lǐng)域的研究又具有進步意義。

【詳解】

A；基因編輯制造人類的行為不符合倫理道德；A錯誤；

B；基因編輯技術(shù)；只是對個別人個別基因進行編輯，不一定改變?nèi)祟愡M化的速度和方向，B錯誤；

C；基因編輯技術(shù)改變了人類的遺傳物質(zhì)；但并沒有出現(xiàn)生殖隔離，即沒有形成新物種，C錯誤；

D；基因編輯技術(shù)可用于疾病預防領(lǐng)域研究；具有進步意義，但不能用于編輯嬰兒，D正確。

故選ABC。14、A:B:C【分析】【分析】

我國政府一再重申四不原則：不贊成；不允許、不支持、不接受任何生殖性克隆人實驗。原因如下：1克隆人只是某些人出于某種目的制造出的“產(chǎn)品”；沒有“父母”，這可能導致他們在心理上受到傷害；2由于技術(shù)問題，可能孕育出有嚴重生理缺陷的克隆人；3克隆人的家庭地位難以認定，這可能使以血緣為紐帶的父子、兄弟和姐妹等人倫關(guān)系消亡；4生殖性克隆人沖擊了現(xiàn)有的一些有關(guān)婚姻、家庭和兩性關(guān)系的倫理道德觀念；5生殖性克隆人是對人類尊嚴的侵犯；6生殖性克隆人破壞了人類基因多樣性的天然屬性，不利于人類的生存和進化。

【詳解】

A；過程1代表對卵母細胞或卵細胞采用顯微操作去核；而不是對體細胞去核，也可以采用紫外線照射去除細胞核，A錯誤；

B；青蛙屬于體外受精；體外發(fā)育不需要進行胚胎移植，B錯誤；

C；胚胎細胞分化程度低；移植成功率遠高于成體細胞核移植，C錯誤；

D；我國政府不贊成、不允許、不支持、不接受任何生殖性克隆人實驗；但是支持治療性克隆，D正確。

故選ABC。15、A:D【分析】【分析】

PCR技術(shù)：

1；概念：PCR全稱為聚合酶鏈式反應；是一項在生物體外復制特定DNA的核酸合成技術(shù)。

2；原理：DNA復制。

3；前提條件：要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一對引物。

4；條件：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）。

5；過程：①高溫變性：DNA解旋過程（PCR擴增中雙鏈DNA解開不需要解旋酶；高溫條件下氫鍵可自動解開）；低溫復性：引物結(jié)合到互補鏈DNA上；③中溫延伸：合成子鏈。

【詳解】

A；PCR擴增依據(jù)的是DNA分子雙鏈復制的原理；A正確；

B；進行PCR擴增需要熱穩(wěn)定DNA聚合酶（TaqDNA聚合酶）；但不需要解旋酶，B錯誤；

C；DNA的兩條鏈反向平行；子鏈從引物的3′端開始延伸，則利用圖中的引物①、④組合可擴增出兩側(cè)的未知序列，C錯誤；

D；通過與受體細胞的基因組序列比對；即可確定T-DNA的插入位置，D正確。

故選AD。

【點睛】16、C:D【分析】【分析】

由題意知；B；D位于一條染色體上，因此不遵循自由組合定律?；駻所在的染色體有片段缺失，含片段缺失染色體的雄配子致死，如果A（a）與BD分別位于兩對同源染色體上，則遵循自由組合定律，基因型為AaBD產(chǎn)生的配子的類型及比例是ABD：a：aBD：A=1：1：1：1；如果A（a）與BD位于一對同源染色體上，則A（a）與BD也不遵循自由組合定律，基因型為AaBD的個體產(chǎn)生的配子的類型是ABD：a=1：1或者是aBD：A=1：1。

【詳解】

A；由于抗蟲基因B和D位于棉花的同一條染色體上；若抗蟲基因與控制果枝的基因位于兩對同源染色體上，則基因型為AaBD的短果枝抗蟲棉植株產(chǎn)生的配子基因型為ABD、A、aBD、a，A錯誤；

B、若基因B、D與a位于同一條染色體上，則該植株產(chǎn)生的雌配子有A、aBD兩種，雄配子只有aBD一種，則F1中AaBD（短果枝抗蟲）：aaBD（長果枝抗蟲）＝1:1；B錯誤；

C、若F1中短果枝抗蟲（A_BD）:長果枝不抗蟲（aa）＝1:1；則可推測親本產(chǎn)生的雄配子為a，故親本產(chǎn)生雌配子的基因型為ABD和a，C正確；

D、若F1中短果枝抗蟲（A_BD）:短果枝不抗蟲（A_）:長果枝抗蟲（aaBD）:長果枝不抗蟲（aa）＝3:1:3:1；則可推測雄配子有a和aBD兩種，即A/a基因與BD基因沒有連鎖關(guān)系，故果枝基因和抗蟲基因可能位于兩對同源染色體上，D正確。

故選CD。三、填空題(共5題，共10分)17、略

【分析】【詳解】

（1）早在第二次世界大戰(zhàn)中；侵華日軍就組建了從事細菌戰(zhàn)的731部位和100部隊，并在中國領(lǐng)土上修建了幾十座細菌武器工廠，大量培養(yǎng)鼠疫；霍亂、傷寒、炭疽和菌痢等一系列能使人致命的傳染性疾病。曾用數(shù)千名中國人做實驗，還曾在中國20多個地區(qū)使用了細菌武器，造成了幾十萬中國老百姓死亡。日本戰(zhàn)敗投降時，侵華日軍又一次把培養(yǎng)的細菌釋放出來，在中國造成傳染病大流行。

（2）某些國家或恐怖組織大量生產(chǎn)肉毒桿菌毒素；肉毒桿菌毒素分子可以阻滯神經(jīng)末梢釋放乙酰膽堿，從而引起肌肉麻痹。

（3）1978年天花就已經(jīng)在地球上消滅；但是某些國家至今保留著天花病毒菌株，今天，在年輕人普遍都沒有接種天花疫苗的情況下，若有人用天花病毒或某些動物的痘病毒作為生物武器，后果不堪設(shè)想。

（4）目前，有一些國家對重組基因技術(shù)制造全新的致病菌表現(xiàn)了極大的興趣，這些人類從來沒有接觸過的致病菌，可以讓大批受感染者突然發(fā)病，而又無藥可醫(yī)。【解析】①.細菌武器②.細菌武器③.肉毒桿菌毒素④.乙酰膽堿⑤.天花⑥.從未接觸過18、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】遠緣雜交的不親和性細胞遺傳細胞免疫、19、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】現(xiàn)配現(xiàn)用20、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】沸水浴二苯胺藍色二苯胺21、略

【分析】【詳解】

蛋白質(zhì)形成二硫鍵，使蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)更加穩(wěn)定，因此T4溶菌酶的熱穩(wěn)定性會提高。這項技術(shù)屬于蛋白質(zhì)工程技術(shù)，其步驟為從預期的蛋白質(zhì)功能出發(fā)→設(shè)計預期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測應有的氨基酸序列→找到并改變相對應的脫氧核苷酸序列（基因）或合成新的基因→獲得所需的蛋白質(zhì)?！窘馕觥繒岣逿4溶菌酶的耐熱性。這項技術(shù)屬于蛋白質(zhì)工程技術(shù)，該技術(shù)的要點是從預期的蛋白質(zhì)功能出發(fā)→設(shè)計預期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測應有的氨基酸序列→找到并改變相對應的脫氧核苷酸序列（基因）或合成新的基因→獲得所需的蛋白質(zhì)。四、判斷題(共3題，共30分)22、B【分析】【詳解】

理性看待轉(zhuǎn)基因技術(shù)，正確的做法是趨利避害，而不能因噎廢食，所以本題錯誤。23、B【分析】【詳解】

植物組織培養(yǎng)是指將離體的植物器官、組織或細胞等，培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上，給予適宜的培養(yǎng)條件，誘導其形成完整植株的技術(shù)，最終獲得了完整的植株，體現(xiàn)了植物細胞的全能性，而植物細胞培養(yǎng)的目的使獲得大量的植物細胞，從而獲得次生代謝物，利用的原理是細胞增殖，故錯誤。24、A【分析】【詳解】

蛋白質(zhì)工程是一項難度很大的工程，主要是因為蛋白質(zhì)發(fā)揮功能必須依賴于正確的高級結(jié)構(gòu)，而這種高級結(jié)構(gòu)往往十分復雜，并且蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)具有多樣性，這也在一定程度上增加了蛋白質(zhì)工程的難度，故說法正確。五、實驗題(共4題，共28分)25、略

【分析】【分析】

醋酸菌是好氧性細菌；當缺少糖源和有氧條件下，可將乙醇（酒精）氧化成醋酸；當氧氣；糖源都充足時，醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸。當缺少糖源時，醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰?，再將乙醛變?yōu)榇姿?。腐乳的制作利用的微生物主要是毛霉，多種微生物參與了豆腐的發(fā)酵，如青霉、酵母、曲霉、毛霉等，其中起主要作用的是毛霉，毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶能將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可將脂肪水解為甘油和脂肪酸，這些小分子物質(zhì)有利于人體的消化和吸收。

【詳解】

（1）傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)一般是指直接利用原材料中天然存在或前一次發(fā)酵保存下來的發(fā)酵物中的微生物進行發(fā)酵；制作食品的技術(shù)；一般不需要嚴格滅菌。

（2）原漿醋中含有發(fā)酵產(chǎn)生醋酸的醋酸菌；加入原漿醋的目的是接種更多的醋酸菌，加入糖并經(jīng)常開蓋換氣的目的是保證糖源；氧氣都充足，當氧氣、糖源都充足時，醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸。醋酸菌適宜的發(fā)酵溫度為30~35℃，故保溫箱溫度應保持在30~35℃。

（3）腐乳的制作利用的微生物主要是毛霉；毛霉屬于真核生物，毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶能將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可將脂肪水解為甘油和脂肪酸，這些小分子物質(zhì)有利于人體的消化和吸收。①將白蘿卜切成小塊可以擴大白蘿卜與腌料的接觸面積，縮短腌制時間，①正確；②用沸水短時處理，可抑制某些微生物的繁殖，提高泡菜品質(zhì)，也可縮短腌制時間，②正確；③泡菜汁中含有一定量的發(fā)酵菌種，所以在腌制過程中，加入一些已經(jīng)腌制過泡菜汁可縮短腌制時間，③正確；④泡菜制作所需菌種為乳酸菌，制作過程中應保持無氧環(huán)境，向容器中通入無菌空氣不利于腌制，④錯誤；綜上分析，①②③操作能達到縮短腌制時間。

（4）從泡菜汁中可分離制作酸奶的乳酸菌；首先對經(jīng)多次發(fā)酵的泡菜汁進行過濾，然后取濾液用無菌水進行稀釋，再用涂布分離的方法在特定的熱選擇培養(yǎng)基中進行初步篩選乳酸菌。

【點睛】

本題考查傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應用，意在考查考生對發(fā)酵原理、發(fā)酵過程的識記和應用能力?！窘馕觥课⑸锎姿峋窃础⒀鯕?0~35毛霉真核小分子肽和氨基酸甘油和脂肪酸①②③稀釋選擇26、略

【分析】【分析】

1；選擇培養(yǎng)基：人為提供有利于目的菌株生長的條件；同時抑制或阻止其他微生物生長的培養(yǎng)基。

2；根據(jù)題意分析；金黃色葡萄球菌可破壞哥倫比亞血平板上菌落周圍的紅細胞，產(chǎn)生透明的溶血圈。

【詳解】

（1）金黃色葡萄球菌具耐高鹽的特性；可用7.5％NaCl（高鹽）肉湯培養(yǎng)基進行選擇培養(yǎng)，可進一步提高金黃色葡萄球菌的濃度。

（2）振蕩培養(yǎng)的目的是使微生物與營養(yǎng)物質(zhì)充分接觸，增加O2濃度；更有利于微生物生長。

（3）因為無菌脫纖維羊血上有紅細胞；而高溫會破壞紅細胞。故添加無菌脫纖維羊血是在高壓蒸汽滅菌之后。

（4）根據(jù)圖中最右邊的圖示可知；接種方法是平板劃線法。已知金黃色葡萄球菌可破壞菌落周圍的紅細胞，產(chǎn)生透明的溶血圈。故若要初步證明鮮牛奶中存在金黃色葡萄球菌，則血平板上要均出現(xiàn)周圍出現(xiàn)透明溶血圈的菌落。本實驗缺乏對照組，實驗不完善，還需要設(shè)置不加（鮮）牛奶但其他操作和培養(yǎng)條件均相同的對照組。

【點睛】

本題旨在考查學生理解選擇培養(yǎng)基的原理和應用、平板劃線法的使用要點，把握知識的內(nèi)在聯(lián)系并應用相關(guān)知識綜合解決問題的能力?！窘馕觥窟x擇金黃色葡萄球菌的濃度使微生物與營養(yǎng)物質(zhì)充分接觸/增加O2之后防止高溫破壞紅細胞平板劃線法周圍出現(xiàn)透明溶血圈設(shè)置不加（鮮）牛奶但其他操作和培養(yǎng)條件均相同的對照組27、略

【分析】【分析】

接種最常用的方法是平板劃線法和稀擇涂布平板法；接種的目的是使聚集在一起的微生物分散成單個細胞，并在培養(yǎng)甚表面形成單個細菌繁殖而成的子細胞群體菌落。

【詳解】

（1）為了觀察菌落；需用固體培養(yǎng)基，接種方法為平板劃線法或稀釋涂布平板均可，培養(yǎng)皿中均未出現(xiàn)菌落，說明未發(fā)生可遺傳變異。

（2）混合接種能形成菌落的原因是相互產(chǎn)生或創(chuàng)造了各自所需的物質(zhì)或條件；所以推測兩種菌最可能是：抗性菌增殖，降解了四環(huán)素，為營養(yǎng)菌存活提供保障；營養(yǎng)菌增殖，分解了乳糖，代謝產(chǎn)物為抗性菌生長提供營養(yǎng)所需。

（3）①由題意可知；營養(yǎng)菌只能利用乳糖，但不能降解四環(huán)素，抗性菌不能利用乳糖，但能降解四環(huán)素，故在接種了營養(yǎng)菌和抗性菌混合菌液的培養(yǎng)板，左側(cè)加入以乳糖為唯一碳源的培養(yǎng)基，右側(cè)應加入四環(huán)素但不含乳糖的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基可從與兩側(cè)逐漸擴散到混合菌液培養(yǎng)板上。

②根據(jù)兩種菌能實現(xiàn)了“互利共生”，左側(cè)添加以乳糖為唯一碳源的培養(yǎng)基后營養(yǎng)菌和抗性菌都能生長。右側(cè)加入含四環(huán)素的培養(yǎng)基，因沒有碳源則兩種菌都不能生長?！窘馕觥?1)（稀釋）涂布平板或平板劃線固體未發(fā)生。

(2)降解了四環(huán)素分解了乳糖。

(3)四環(huán)素但不含乳糖營養(yǎng)菌和抗性菌都能生長兩種菌都不能生長28、略

【分析】【分析】

1、微生物常見的接種的方法：

（1）平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落。

（2）稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后；均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落。

2、實驗室常用的滅菌方法

①灼燒滅菌：將微生物的接種工具，如接種環(huán)、接種針或其他金屬工具，直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，可以迅速徹底地滅菌，此外，在接種過程中，試管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通過火焰燃燒來滅菌；

②干熱滅菌：能耐高溫的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培養(yǎng)皿）和金屬用具等，可以采用這種方法滅菌；

③高壓蒸汽滅菌：將滅菌物品放置在盛有適量水的高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)；為達到良好的滅菌效果，一般在壓力為100kPa，溫度為121℃的條件下，維持15～30min。

(1)

取附著在手機上細菌進行取樣培養(yǎng)后；對菌液進行系列梯度稀釋的目的是將微生物分散成單個細胞，進而獲得單個的菌落。

(2)

A平板上生長的菌落有多種形態(tài)；說明附著在手機細菌種類較多。牛肉膏；蛋白胨提供的主要營養(yǎng)是氮源、維生素和生長因子。培養(yǎng)基乙含有碳源、氮源、水、無機鹽這幾類營養(yǎng)物質(zhì)，且加入了瓊脂作為凝固劑，可以達到實驗效果；培養(yǎng)基甲不含蛋白胨（氮源），菌落無法在該培養(yǎng)基上生長；培養(yǎng)基丙不含凝固劑（瓊脂），無法形成固體培養(yǎng)基，無法在培養(yǎng)基表面形成菌落。檢測培養(yǎng)基A制備是否合格，可將培養(yǎng)基置于適宜條件下培養(yǎng)一段時間，檢測其是否雜菌生成。

(3)

伊紅為酸性染料；美藍為堿性染料。當大腸桿菌分解乳糖產(chǎn)酸時細菌帶正電荷被染成紅色，再與美藍結(jié)合形成紫黑色菌落，并帶有綠色金屬光澤。由圖可知3號菌落為大腸桿菌菌落。

(4)

采用平板劃線法接種培養(yǎng)一段時間后；發(fā)現(xiàn)第一劃線區(qū)域上都不間斷長滿菌落，第二劃線區(qū)域幾乎無菌落，原因可能是接種環(huán)灼燒后未冷卻就劃線或未從第一區(qū)域末端開始劃線。

【點睛】

本題考查微生物的分離和培養(yǎng)，要求考生識記微生物接種的方法、菌落計數(shù)、以及菌種保存等知識，意在考查考生對基礎(chǔ)知識的掌握和靈活運用基礎(chǔ)知識的能力?！窘馕觥?1)將微生物分散成單個細胞；進而獲得單個的菌落。

(2)多乙培養(yǎng)基乙含有碳源；氮源、水、無機鹽這幾類營養(yǎng)物質(zhì)；且加入了瓊脂作為凝固劑，可以達到實驗效果將培養(yǎng)基置于適宜條件下培養(yǎng)一段時間，檢測其是否雜菌生成。

(3)3

(4)第一次劃線后接種環(huán)灼燒后沒有冷卻；未從第一次劃線區(qū)開始劃線六、綜合題(共3題，共9分)29、略

【分析】【分析】

1；基因表達載體的構(gòu)建是基因工程的核心步驟；基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等：

（1）啟動子在基因的首段；它是RNA聚合酶的結(jié)合位點，能控制著轉(zhuǎn)錄的開始；

（2）終止子在基因的尾端；它控制著轉(zhuǎn)錄的結(jié)束；

（3）標記基因便于目的基因的鑒定和篩選；標記基因可以是多種抗性基因。

2；PCR技術(shù)基本反應步驟：變性、復性、延伸。

3；在基因表達載體構(gòu)建過程中；為了避免目的基因和運載體自身環(huán)化以及目的基因與運載體反方向連接，一般用不同的限制酶對目的基因和運載體進行切割，即雙酶切割；然后再利用DNA連接酶將兩部分末端的序列進行連接。

【詳解】

（1）質(zhì)粒能自我復制；并可以在細菌細胞間轉(zhuǎn)移，所以質(zhì)?？梢宰鳛榛蜣D(zhuǎn)移的一種運載工具。

（2）目的基因主要是指編碼蛋白質(zhì)的基因；也可以是一些具有調(diào)控作用的因子。PCR技術(shù)一般由變性；復性、延伸三個基本反應步驟構(gòu)成。

（3）作為基因表達載體除了需要有復制原點；標記基因、目的基因外；還需要具有啟動子和終止子，以便目的基因表達。在基因表達載體構(gòu)建過程中，為了避免目的基因和運載體自身環(huán)化以及目的基因與運載體反方向連接，一般用不同的限制酶對目的基因和運載體進行切割，即雙酶切割；然后再利用DNA連接酶將兩部分末端的序列進行連接，所以為了避免目的基因的自身環(huán)化，構(gòu)建基因表達載體A的主要實驗步驟為用MstI和BgII雙酶切pUC質(zhì)粒載體，與用MstI和BgII雙酶切獲得的目的基因混合，加入DNA連接酶進行連接反應。

（4）根據(jù)題干“目的基因插入到Amp'或LacZ'中均會導致相應基因失活”和藍白斑法的機制可知；科研人員利用LacZ'基因與目的基因構(gòu)建基因表達載體A，目的基因插入LacZ'基因中，導致LacZ'基因失活，Amp'基因正常表達，所以轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌能對氨芐青霉素具有抗性，且使菌落呈現(xiàn)白色，如果目的基因若不是于LacZ'基因結(jié)合，則該基因會表達，位置結(jié)合不對的重組質(zhì)粒就會使菌落呈現(xiàn)藍色。所以需要加入氨芐青霉素；IPTG和X-gal篩選出轉(zhuǎn)化成功的含有重組質(zhì)粒（基因表達載體A）大腸桿菌。

【點睛】

該題需要掌握PCR技術(shù)的基本步驟、基因載體需要滿足的條件，以及對題干信息（如藍白斑法）作出正確的分析。【解析】基因轉(zhuǎn)移調(diào)控作用變性→復性（退火）→延伸啟動子和終止子用MstI和BgII雙酶切pUC質(zhì)粒載體，與用MstI和Bg