臨床PCR檢測的標準化教學教材

臨床PCR檢測的標準化衛(wèi)生部臨床檢驗中心李金明標準化(standardization)的概念Standard:文字Standards:物質Standardization:通過對測定方法和檢測程序的規(guī)范化，使測定結果的量值可溯源至同一標準物質或參考方法，從而使測定結果在不同方法、不同試劑及不同的實驗間具有可比性。標準物質、測定方法和檢測程序標準化之間的關系標準化的先決條件檢測物的同一性標準品的同一性標準化組織世界衛(wèi)生組織（WHO）生物學標準化專家委員會（TheExpertCommitteeonBiologicalStandardisation,ECBS）：負責建立生物物質的國際標準及參比材料。國家生物學標準和質控物研究所（NationalInstituteforBiologicalStandardsandControl,NIBSC）：WHO通過其提供國際標準品。一些區(qū)域和地區(qū)性組織：美國CDC、CAP、NIH國際性科學協(xié)會：IFCC、國家臨床實驗室標準化委員會（NationalCommitteeofClinicalLaboratoryStandardisation,NCCLS）以及美國和加拿大臨床化學協(xié)會（AmericanSocietiesforClinicalChemistryandCanadianSocietiesforClinicalChemistryandCanadian,AACC和CSCC）等：組織編寫一些臨床檢驗的導則等文件

標準品和質控品（1）可提供標準品的國際標準化組織有：WHO生物學標準化專家委員會（ECBS）、英國國家生物學標準和質控物研究所(NationalInstituteforBiologicalStandardsandControl,NIBSC)、美國CDC和CAP、國家衛(wèi)生研究所（NIH）、IFCC等；國內有中國藥品生物制品檢定所、衛(wèi)生部臨床檢驗中心標準品和質控品（2）在美國臨床PCR檢驗試劑方法用于臨床必須有FDA批準；在德國監(jiān)督機構為INSTAND；在國內試劑批準文號由SFDA負責。僅使用標準品并不能保證PCR測定結果的可比性，但其在保證PCR測定質量中的重要性卻是不可替代的。標準品和質控品（3）標準品和質控品的功能:可用作臨床檢測的校準物;可用來評價試驗的有效性;作為室內質控樣本;作為室間質評樣本.國際標準品分級:可分為第一,第二和第三等三個等級.一級標準數(shù)量有限,可使用10-20年,是凍干品,內含載體蛋白.一級標準可用來校準第二和第三級標準.國際標準品(IS)中作為第一級標準,二級標準可用來維持校準.國內標準品分級：一級和二級。標準品和質控品（4）標準品的單位:病毒核酸國際標準品均以IU/L表示。有關標準品單位和溯源的問題長度單位的確定和溯源舉例標準品定值的測定方法:參考方法決定性方法（Definitivemethod）:是一個具有高精密度及沒有系統(tǒng)偏差的參考方法。參考方法:(Referencemethod）:應有低測定下限、不受非特異干擾及不與相關的化合物發(fā)生交叉反應，同時還應該容易得到。為保持參考方法的有效性,有必要建立一個參考實驗室的網絡.國際單位(InternationalUnits)的由來國際單位（Internationalunits,IU）定義:國際標準的應用目的是為測定提供一個通用的標準單位,使用相同的測定生物學單位來指定標準品或工作校準品的單位.核酸檢測國際標準

項目研制者發(fā)布年編號濃度HBVDNANIBSC199997/746106IU/mlHCVRNANIBSC199796/790105IU/mlNIBSC200596/798105IU/mlHIV-1RNANIBSC199897/656105IU/瓶HAVRNANIBSC200300/560105IU/mlB19DNANIBSC200099/800106IU/ml病毒核酸檢測國家標準

項目研制者發(fā)布年編號濃度HBVDNANCCL2005GBW(E)0900311.03

106IU/mlNCCL2007GBW09151HCVRNANCCL2005GBW(E)0900321.29

105IU/ml

NCCL2007GBW09152測定方法的標準化

一個測定方法的組成

（1）核酸提取方法；（2）擴增及產物分析方法；（3）如果靶核酸，還有反轉錄過程。核酸提取方法

對抑制物去除的有效性；簡便性。

擴增及產物分析方法

實時熒光PCRPCR-ELISA等。擴增檢測條件（循環(huán)條件、試劑等）的理想化。內標的設置：假陰性質控的最有效