第二章天然藥物化學(xué)成分的提取分離方法第三節(jié)色譜分離法講解

第二章天然藥物化學(xué)成分的提取分離方法

第三節(jié)色譜分離法課前回顧1.采用乙醇沉淀法除去水提取液中多糖等雜質(zhì)，應(yīng)使乙醇濃度達(dá)到（

）A50%以上B60%以上C70%以上D80%以上2.在醇提取濃縮液中加入水，可沉淀（

）A樹膠B蛋白質(zhì)C樹脂D鞣質(zhì)3.提取化學(xué)成分常用的方法是（

）A溶劑法B蒸餾法C升華法D分餾法教學(xué)目的和要求1、掌握各種色譜法的基本原理2、熟悉影響各種色譜法的因素3、了解各種色譜的分離條件第三節(jié)色譜分離法一、色譜法的分類：色譜法根據(jù)分離原理可分為：吸附色譜、分配色譜、凝膠色譜與離子交換色譜等；根據(jù)分離方法又可分為：薄層色譜法、柱色譜法、紙色譜法、高效液相色譜法和氣相色譜法等根據(jù)物質(zhì)吸附力差別可將吸附色譜分為以下幾類：物理吸附：無選擇性，吸附與解吸可逆，如硅膠、氧化鋁2.化學(xué)吸附：有選擇性，吸附牢固3.半化學(xué)吸附：介于上述二者之間，

如聚酰胺（一）、吸附色譜1、物理吸附：（1）基本規(guī)律：“相似者易于吸附”（2）基本特點(diǎn)：無選擇性、可逆吸附、快速（3）吸附力三要素：溶質(zhì)極性；溶劑極性

吸附劑活性（4）吸附過程：

吸附再吸附解吸再解吸直至分離2、吸附劑：

（1）硅膠：弱酸性極性吸附劑；具有硅醇基，可形成氫鍵吸附；活性隨含水量增大而降低（活化105℃30min）。適用于中性或弱酸性成分分離。

（2）氧化鋁吸附力較強(qiáng)的極性吸附劑，可分為：堿性氧化鋁：生物堿、甾體類中性氧化鋁：萜類、皂苷、醛酮酸性氧化鋁：有機(jī)酸、氨基酸（3）活性炭吸附力較強(qiáng)的非極性吸附劑。3、半化學(xué)吸附：聚酰胺（氫鍵締合）（1）、影響因素：a、溶質(zhì)的影響b、溶劑的影響洗脫能力：水<甲醇<丙酮<氫氧化鈉水溶液<甲酰胺<二甲基酰胺<尿素水溶液4、化學(xué)吸附

（1）基本特點(diǎn)：有選擇性、不可逆吸附（2）基本原理：產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)

1)酸性物質(zhì)與Al2O3發(fā)生化學(xué)反應(yīng)

2)堿性物質(zhì)與硅膠發(fā)生化學(xué)反應(yīng)

3)Al2O3容易發(fā)生結(jié)構(gòu)的異構(gòu)化（3）應(yīng)盡量避免（二）、分配色譜

1、原理：利用物質(zhì)在固定相和流動相之間分配系數(shù)不同而達(dá)到分離。被分離物質(zhì)兩相溶劑中相對作逆流移動。載體主要有：硅膠、硅藻土、纖維素粉等。正相反相分類依據(jù)固定相極性大于流動相固定相極性小于流動相固定相水、緩沖溶液氰基鍵合相氨基鍵合相液狀石蠟C18鍵合相C8鍵合相流動相氯仿、乙酸乙酯、丁醇水、甲醇適用范圍水溶性或極性較大的成分脂溶性成分常用色譜硅膠、紙色譜RP-2、RP-8、RP-18洗脫順序極性小的先洗脫極性大的先洗脫（三）、離子交換色譜根據(jù)物質(zhì)解離程度不同進(jìn)行分離1、基本原理：利用酸、堿化合物在解離狀態(tài)時與陰、陽離子樹脂產(chǎn)生離子交換的原理達(dá)到分離的方法。2、三要素：固定相(離子交換樹脂)、溶質(zhì)(被分離物)、洗脫劑3、分離物質(zhì)范圍：酸、堿類化合物

中藥堿性成分用陽離子交換樹脂；酚、酸性成分用陰離子交換樹脂，將交換后的樹脂通過調(diào)整酸堿使吸附物游離，選擇適當(dāng)溶劑將吸附物溶解出即可。OH-陰離子交換樹脂Cl-陰離子交換樹脂NaCl強(qiáng)堿性（-N+(CH3)3Cl-）弱堿性（-NH2,-NH-）強(qiáng)酸性（-SO3-H+）弱酸性（-COOH）H+陽離子交換樹脂Na+陽離子交換樹脂（四）、大孔吸附樹脂1、結(jié)構(gòu)與組成：

大孔吸附樹脂為白色或淡黃色球形顆粒狀，粒度多為20~60目。組成為苯乙烯，二乙烯苯，或а-甲基丙烯酸酯型。其中苯乙烯，二乙烯苯型為非極性樹脂，2-甲基丙烯酸酯型為中極性樹脂。

2、特性：（1）、理化性質(zhì)穩(wěn)定，不溶于酸、

堿及有機(jī)溶劑。（2）、對有機(jī)物選擇性較好。（3）、吸附速度快。

（4）、再生處理方便。

3、吸附原理：（1）、吸附性：大孔吸附樹脂本身具有吸附性，是由范德華力或氫鍵吸附的結(jié)果。（2）、篩性原理：是由大孔吸附樹脂本身的多孔性所決定的。

4、影響大孔吸附樹脂分離效果的因素：（1）、化合物分子極性大小：一般來說，大孔樹脂的色譜行為具有反相的性質(zhì)。被分離物質(zhì)的極性大先流出色譜柱。（2）、分子體積大?。涸谝欢l件下，化合物體積越大，吸附力越強(qiáng)。

預(yù)處理95%EtOH浸泡→濕法裝柱→95%EtOH洗脫→水洗至無醇味上樣濕法上樣洗脫水/酸堿液/低濃度醇除雜質(zhì)→依據(jù)吸附力選擇洗脫液再生5%NaOH浸泡→洗至中性→5%HCl浸泡→洗至中性丙酮浸泡/回流5、大孔吸附樹脂的使用流程（五）、凝膠色譜法

凝膠色譜法又稱分子排阻色譜法、凝膠濾過色譜法、分子篩色譜法等。是一種以凝膠為固定相分離分子大小不同成分的色譜方法。具有設(shè)備簡單，操作方便，結(jié)果準(zhǔn)確，凝膠可反復(fù)使用等優(yōu)點(diǎn)，成為天然藥物化學(xué)和生物化學(xué)研究中的常規(guī)分離分析方法。

課堂論述題：簡述大孔吸附樹脂的吸附原理？

小結(jié)吸附原理吸附性應(yīng)用硅膠物理吸附化學(xué)吸附——堿性化合物極性吸附劑各類成分氧化鋁化學(xué)吸附——酸性化合物堿性或中性親脂性成分活性炭非極性吸附劑水溶性成分聚酰胺半化學(xué)吸附氫鍵酚、醌測評1．吸附色譜常用的吸