微生物培養(yǎng)省公開課一等獎全國示范課微課金獎?wù)n件

考點1微生物應(yīng)用第1頁

1.方法：平板劃線法和稀釋涂布平板法

2.原理：在培養(yǎng)基上將細菌稀釋(稀釋涂布平板法)或分散(平板劃線法)成單個細胞，使其成長成單個菌落，這個菌落就是一個純化細菌菌落。

【稀釋涂布平板法中培養(yǎng)皿中菌落數(shù)目就代表稀釋對應(yīng)倍數(shù)后菌

體個體數(shù)，所以稀釋涂布平板法能夠用來計數(shù)，但平板劃線法不行】

3.注意事項：①灼燒接種環(huán)后要冷卻;②接著上次劃線末端劃線;③不要將最終一區(qū)劃線與第一區(qū)相連;④涂布平板時，涂布器應(yīng)用70%酒精消毒。

4.平板劃線法中每次灼燒接種環(huán)目標(biāo)：第一次灼燒：防止接種環(huán)上可能存在微生物污染培養(yǎng)基每次劃線前灼燒：殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留菌種，使每次劃線菌種均來自上次劃線末端。劃線結(jié)束灼燒：殺死接種環(huán)上殘留菌種，防止細菌污染環(huán)境和感染操作者。微生物分離第2頁平板劃線操作【問題1】在作第二次以及其后劃線操作時，為何總是從上一次劃線末端開始劃線？

答：劃線后，線條末端細菌數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線末端開始，能使細菌數(shù)目伴隨劃線次數(shù)增加而逐步降低，最終能得到由單個細菌繁殖而來菌落?！締栴}2】平板冷凝后，為何要將平板倒置？

答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后培養(yǎng)基表面濕度也比較高，將平板倒置，既能夠使培養(yǎng)基表面水分更加好地?fù)]發(fā)，又能夠預(yù)防皿蓋上水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。第3頁微生物與病毒關(guān)系1、關(guān)于病毒增殖敘述中，正確是（）A．病毒侵入宿主細胞后，合成一個蛋白質(zhì)B．病毒繁殖只在宿主活細胞中進行C．病毒繁殖以核衣殼為單位D．在普通培養(yǎng)基上能培養(yǎng)病毒【解析】解答此題需從以下幾方面入手分析：首先，病毒是營寄生方式生活，必須生活在活細胞內(nèi)，不能獨立生活，所以在普通培養(yǎng)基上不能生活。第二，繁殖時，病毒核酸進入宿主細胞，利用宿生成份合成子代個體，除了核衣殼，還應(yīng)包含該病毒其它結(jié)構(gòu)。合成蛋白質(zhì)不只是一個，應(yīng)該是各種，包含各種結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)及物質(zhì)合成時所需各種酶?！敬鸢浮緽第4頁培養(yǎng)基種類2、要從各種細菌中分離某種細菌，培養(yǎng)基要用（）A．加入青霉素培養(yǎng)基B．加入高濃度食鹽培養(yǎng)基C．固體培養(yǎng)基D．液體培養(yǎng)基【解析】微生物分離需使用固體培養(yǎng)基，因為某種細菌種類不明，所以難以使用選擇培養(yǎng)基，如加入青霉素培養(yǎng)基能夠分離到酵母菌和霉菌，加入高濃度食鹽培養(yǎng)基能夠分離到金黃色葡萄球菌。【答案】C第5頁原油選擇強干熱滅菌法高壓蒸汽滅菌法火焰第6頁專題4酶研究與應(yīng)用果膠酶在果汁生產(chǎn)中作用探討加酶洗衣粉洗滌效果酵母細胞固定化第7頁一、果膠酶半乳糖醛酸

1．作用：能夠分解果膠成為可溶性①_____________，使渾濁果汁變得澄清。2．組成果膠果膠分解酶(1)并不特指某一個酶，而是分解②____一類酶總稱。(2)包括多聚半乳糖醛酸酶、③______________和④_________。果膠酯酶第8頁3．起源霉菌酵母菌細菌植物、⑤______、⑥________和⑦_____均能產(chǎn)生果膠酶。4．應(yīng)用細胞壁胞間層果膠酶能夠分解果膠，瓦解植物⑧_______及⑨_______，使榨取果汁變得更輕易⑩____和?_____。過濾澄清第9頁二、加酶洗衣粉蛋白酶脂肪酶淀粉酶

1．常用種類：?______、?______、?______和?_________，其中應(yīng)用最廣泛、效果最顯著是堿性?_______蛋白酶脂肪酶和堿性?______。

2．去污機制蛋白質(zhì)

(1)堿性蛋白酶能將血漬、奶漬等含有大分子?_______水解成可溶性?_______或小分子肽，使污物從衣物上脫落。纖維素酶氨基酸第10頁

(2)脂肪酶、淀粉酶和纖維素酶也能將大分子?_____、21_____和22_______水解為小分子物質(zhì)。淀粉纖維素

3.酶制劑特點：能夠耐酸、耐堿、忍受23_____________和較高24_____，而且經(jīng)過特殊化學(xué)物質(zhì)將酶層層包裹，與洗衣粉其它成份隔離。表面活性劑溫度脂肪第11頁探究果膠酶用量1．試驗原理果膠在果膠酶催化下形成半乳糖醛酸。(可用于植物體細胞雜交，也可使榨取果汁更輕易且使果汁澄清)第12頁2．試驗流程

(1)準(zhǔn)確稱取純果膠酶1mg、2mg、3mg、4mg、5mg、6mg、7mg、8mg、9mg，配制成相等體積酶水溶液，取等量放入9支試管中，依次編號為1～9號【也可只配制一個濃度酶液，只是使用體積(量)不一樣】。制取蘋果泥并稱45g蘋果泥，分裝入9支試管中，每支試管中裝5g，依次編號為1～9號。(2)將上述試管放入37℃恒溫水浴中平衡內(nèi)外溫度。

(3)一段時間后將不一樣濃度果膠酶分別快速與各試管蘋果泥混合，然后再放入恒溫水浴中，約20min。第13頁(4)過濾后測量統(tǒng)計果汁體積。(5)試驗結(jié)果分析說明①試驗中所用果膠酶盡可能使用其純酶制劑或不含抑制物粗酶制劑，以免影響對酶用量估算。

②假如伴隨酶濃度增加，過濾到果汁體積也增加，說明酶用量不足；當(dāng)酶濃度增加到某個值后，再增加酶用量，過濾到果汁體積不再改變，說明酶用量已經(jīng)足夠，這個值就是酶最適用量。第14頁【突破題1】在用果膠酶處理果泥時，為了使果膠酶能夠充分地催化反應(yīng)，應(yīng)采取辦法是()

A．加大蘋果泥用量

B.加大果膠酶用量

C．深入提升溫度

D．用玻璃棒不時地攪拌反應(yīng)混合物

【解題指導(dǎo)】攪拌能夠使酶與底物充分接觸而提升反應(yīng)效率，使反應(yīng)更充分。

【答案】D第15頁酶活力測定及不一樣加酶洗衣粉洗滌效果試驗1．酶簡單制作方法

(1)對于細胞內(nèi)酶：用搗碎機、研磨器等機械將生物組織細胞破碎，使酶從活細胞中釋放出來，進入細胞外溶液中，經(jīng)過濾、離心制備成粗酶液。

(2)對于分泌到細胞外酶：直接從分泌物或細胞外組織間隙中提取，提取過程中注意溫度、pH等各種環(huán)境原因?qū)γ富钚杂绊憽５?6頁2．酶活力測定普通原理和方法

酶活力通常以單位時間內(nèi)底物消耗量或者在單位時間內(nèi)產(chǎn)物生成量來表示。比如，經(jīng)過測定單位時間內(nèi)麥芽糖生成量來檢測淀粉酶活力。另外，還能夠經(jīng)過測定單位時間內(nèi)淀粉消耗量來檢測淀粉酶活力。第17頁種類洗滌原理洗滌實例蛋白酶可將蛋白質(zhì)水解為易溶解或分散于洗滌液中小分子肽或氨基酸血漬、奶漬及各種 食品類蛋白質(zhì) 污垢脂肪酶把脂肪水解為較易溶解甘油和游離脂肪酸食品油漬、人體皮脂、口紅淀粉酶能使淀粉快速分解為可溶性麥芽糖、葡萄糖等來自面條、巧克力等污垢纖維素酶使纖維結(jié)構(gòu)變得蓬松，從而使?jié)B透到纖維深處塵土和污垢能夠與洗衣粉充分接觸，抵達愈加好去污效果3．慣用酶制劑種類及洗滌原理第18頁4.探究加酶洗衣粉洗滌效果(1)試驗原理①加酶洗衣粉中含有酶制劑(蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纖維素酶)。②污漬中蛋白質(zhì)、脂肪、淀粉、纖維素在酶制劑分解下形成小分子物質(zhì)。③溫度、pH、表面活性劑會影響酶活性。第19頁(2)試驗變量控制

①比較普通洗衣粉與加酶洗衣粉洗滌效果：自變量為洗衣粉種類，其余變量為無關(guān)變量，應(yīng)嚴(yán)格控制，以免造成干擾。②探究加酶洗衣粉最適溫度：水溫為自變量，水溫梯度應(yīng)較小。③不一樣種類加酶洗衣粉洗滌效果：洗衣粉種類為自變量。第20頁【突破題2】以下驗證某種加酶洗衣粉需要最適溫度，試驗正確是()

A．取一系列不一樣溫度，其它條件相同水，加入相同污物及等量加酶洗衣粉，看哪一個溫度中效果最好

B．在不一樣溫度水中，加入不等量洗衣粉，看哪種效果好

C．將加酶洗衣粉加入30℃水中不如加到45℃水中洗滌效果好，說明45℃為最適溫度

D．將加酶洗衣粉與普通洗衣粉分別加入37℃水中洗滌同樣污物，發(fā)覺加酶洗衣粉效果好，說明加酶洗衣粉最適溫度為37℃第21頁【解題指導(dǎo)】驗證某種加酶洗衣粉最適溫度試驗，變量只能是溫度，其余情況應(yīng)遵照單一變量標(biāo)準(zhǔn)?！敬鸢浮緼第22頁組成本質(zhì)作用果膠酶

多聚半乳糖醛酸酶、果膠分解酶、 果膠酯酶蛋白質(zhì)催化水解果膠成為可 溶性半乳糖醛酸纖維素 酶C1

酶、CX

酶、葡萄糖苷酶蛋白質(zhì)果膠酶與纖維素酶比較第23頁【演繹題】關(guān)于果膠酶敘述中錯誤是()

A．組成植物細胞壁主要成份是果膠和纖維素，果膠主要分布在細胞初生壁和胞間層

B．果膠有各種，果膠酶也有各種，如多聚半乳糖醛酸酶、果膠分解酶等

C．果膠酶在食品工業(yè)中有廣泛用途，在其它方面則無用處，表達了酶專一性

D．果膠酶、纖維素酶配合使用，可分解植物細胞壁中果膠和纖維素，促使淀粉、脂質(zhì)、維生素和蛋白質(zhì)釋放，以提高飼料營養(yǎng)價值第24頁

【解題指導(dǎo)】果膠酶作用是分解細胞壁中果膠，有多聚半乳糖醛酸酶、果膠分解酶和果膠酯酶等；在食品工業(yè)如制作果汁、提升葡萄酒質(zhì)量等方面作用很大，也常與纖維素酶等共同使用，提升飼料營養(yǎng)和降低飼料黏度，促進飼料在動物消化道內(nèi)消化等作用?！敬鸢浮緾第25頁1.(屆惠州調(diào)研)以下關(guān)于生物工程中酶作用敘述不正確是()A．纖維素酶可用于體細胞雜交B．胰蛋白酶可用于動物細胞培養(yǎng)C．限制性核酸內(nèi)切酶只用于提取目標(biāo)基因D．DNA連接酶可用于DNA拼接【答案】C第26頁2．(屆廣州調(diào)研)關(guān)于生物大分子結(jié)構(gòu)或功效說法，正確是()

A．DNA分子特異性主要取決于堿基特定排列次序

B．纖維素酶能除去細胞壁，果膠酶可分解細胞膜

C．一個tRNA只能識別一個密碼子，但能攜帶各種氨基酸

D．肽鏈盤曲和折疊被解開，蛋白質(zhì)特定功效不會發(fā)生改變

【答案】A第27頁3．(年廣東文基)嫩肉粉是以蛋白酶為主要成份食品)添加劑，就酶作用特點而言，以下使用方法中最正確是( A．炒肉過程中加入

B．肉炒熟后起鍋前加入

C．先用沸水溶解后與肉片混勻，炒熟

D．室溫下與肉片混勻，放置一段時間，炒熟第28頁

【解析】本題考查酶使用方法，酶活性輕易受到溫度，酸堿度影響而失活，所以要保持酶活性，才能使之發(fā)揮作用。ABC在反應(yīng)之前都經(jīng)高溫處理了，所以酶失去活性，只有D，先讓酶反應(yīng)，后炒熟，不影響酶作用發(fā)揮?！敬鸢浮緿第29頁直接使用酶、固定化酶和固定化細胞催化優(yōu)缺點以下表所表示：類型優(yōu)點不足直接使用酶催化效率高，低耗能、低污染等。對環(huán)境條件非常敏感，輕易失活；溶液中酶極難回收，不能被再次利用，提升了生產(chǎn)成本；反應(yīng)后酶會混在產(chǎn)物中，可能影響產(chǎn)品質(zhì)量。固定化酶酶既能與反應(yīng)物接觸，又能與產(chǎn)物分離，同時，固定在載體上酶還能夠被重復(fù)利用。一個酶只能催化一個化學(xué)反應(yīng)，而在生產(chǎn)實踐中，很多產(chǎn)物形成都經(jīng)過一系列酶促反應(yīng)才能得到。固定化細胞成本低，操作更輕易。固定后酶或細胞與反應(yīng)物不輕易靠近，可能造成反應(yīng)效果下降等。第30頁1.灼燒滅菌：接種用具和接種過程中試管口或瓶口放在酒精燈火焰充分燃燒層中進行灼燒滅菌（如教材16頁圖2-2所表示）。慣用消毒與滅菌方法2.干熱滅菌：將玻璃器皿、金屬用具等能耐高溫并需要保持干燥物品放到干熱滅菌箱內(nèi)，在160～170OC中加熱1～2h即可。3.高壓蒸汽滅菌：將需滅菌物品放到盛有水高壓滅菌鍋內(nèi)（見教材16頁圖2-4）煮沸，待冷空氣排盡后，密閉繼續(xù)加熱至鍋內(nèi)壓力到100kPa，溫度到121OC后，維持15～30min即可。第31頁纖維素分解菌篩選——剛果紅染色法

原理：剛果紅是一個染料，它能夠與像纖維素這么多糖物質(zhì)形成紅色復(fù)合物，但并不和水解后纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。當(dāng)我們在含有纖維素培養(yǎng)基中加入剛果紅時，剛果紅能與培養(yǎng)基中纖維素形成紅色復(fù)合物。當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅－纖維素復(fù)合物就無法形成，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心透明圈。這么，我們就能夠經(jīng)過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。第32頁純化大腸桿菌①原理：在培養(yǎng)基上將細菌稀釋或分散成單個細胞，使其長成單個菌落，這個菌落就是一個純化細菌菌落。

②方法：平板劃線法、稀釋涂布平板法?！@微鏡直接計數(shù)法

①原理：利用特定細菌計數(shù)板或血細胞計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積樣品中微生物數(shù)量。

②方法：用計數(shù)板計數(shù)。

③缺點：不能區(qū)分死菌與活菌統(tǒng)計菌落數(shù)目標(biāo)方法統(tǒng)計菌落數(shù)目時，慣用來統(tǒng)計樣品中活菌數(shù)目標(biāo)方法是稀釋涂布平板法。除此之外，顯微鏡直接計數(shù)也是測定微生物數(shù)量慣用方法第33頁【練習(xí)1】以下關(guān)于生物學(xué)研究方法及技術(shù)敘述，錯誤是（）

A．用稀釋涂布平板法可經(jīng)過統(tǒng)計菌落數(shù)來推測樣品中活菌數(shù)B．進行胚胎分割移植時應(yīng)選取發(fā)育及形態(tài)正常桑椹胚或囊胚C．利用試管嬰兒技術(shù)培育新個體過程屬于無性繁殖D．利用PCR技術(shù)進行DNA擴增時不需要加入解旋酶【練習(xí)2】分離土壤中纖維素分解菌用到方法（）①稀釋倒平板法 ②涂布平板法③單細胞挑取法 ④選擇培養(yǎng)分離A．①② B．②③④Ｃ．②③ D．①③④【解析】分離土壤中纖維素分解菌，先進行選擇培養(yǎng)，增大纖維素分解菌濃度，梯度稀釋，涂布平板、培養(yǎng)，單細胞挑取以取得純培養(yǎng)。稀釋倒平板法是先進行梯度稀釋，然后分別取不一樣稀釋液少許，與已溶化并冷卻至50℃左右瓊脂培養(yǎng)基混合、搖勻后，傾人滅菌培養(yǎng)皿中，制成可能含菌瓊脂平板，保溫一定時間即可出現(xiàn)菌落。涂布平板法是先將溶化培養(yǎng)基倒人無菌培養(yǎng)皿，制成無菌平板，冷卻凝固后，將一定量某一稀釋度樣品液涂布在整個子板表面，經(jīng)培養(yǎng)后形成單個菌落。答案：B。第34頁【練習(xí)3】在微生物群體生長規(guī)律測定中，種內(nèi)斗爭最顯著最激烈時期是A．調(diào)整期B．對數(shù)期C．穩(wěn)定時D．衰亡期【解析】種內(nèi)斗爭是一個生態(tài)原因。種內(nèi)斗爭反應(yīng)了種內(nèi)生物對生存空間和生活資源爭奪。在生活空間充裕，營養(yǎng)充分時候，種內(nèi)斗爭程度是比較低。伴隨微生物個體數(shù)目標(biāo)增加，每個個體生存空間越來越少，營養(yǎng)物質(zhì)也越來越少，每個個體對生存空間和資源爭奪也越來越激烈，種內(nèi)斗爭就越來越激烈。由此可知，在穩(wěn)定時種內(nèi)斗爭最激烈。在衰亡期，微生物數(shù)目已經(jīng)開始降低，PH已經(jīng)極度不適于微生物生存，次級代謝產(chǎn)物積累到很高程度，這時微生物生存斗爭主要是與無機環(huán)境斗爭。答案：C【練習(xí)4】

要從各種細菌中分離某種細菌，培養(yǎng)基要用(

)

A．固體培養(yǎng)基B．液體培養(yǎng)基C．加入青霉素培養(yǎng)基D．加入高濃度食鹽培養(yǎng)基

【解析】固體培養(yǎng)基主要用于