植物生物學(xué)實(shí)驗(yàn)-二-2根系活力的測(cè)定a-萘胺氧化法省公開課金獎(jiǎng)全國賽課一等獎(jiǎng)微課獲獎(jiǎng)?wù)n件

試驗(yàn)二、根系活力測(cè)定

——a-萘胺氧化法

植物生物學(xué)試驗(yàn)(二)植物生理學(xué)基礎(chǔ)與綜合試驗(yàn)?zāi)暇煼洞髮W(xué)生命科學(xué)學(xué)院1/21一、試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)了解根系活力生理意義；掌握a-萘胺氧化法,測(cè)定根系活力原理與方法。掌握分光光度計(jì)使用過程和注意事項(xiàng)2/21二、試驗(yàn)原理（一）植物根系生理功效:

吸收：水分、無機(jī)鹽、CO2。輸導(dǎo)固著合成貯藏3/21根系吸收無機(jī)鹽過程：部位：根尖，根毛區(qū)最活躍。步驟1.呼吸釋放CO2；2.形成H2CO3；3.H+與HCO3-吸附在根表面。4.溶液中陰陽離子分別與HCO3-、H+交換。5.吸收，進(jìn)入根內(nèi)部。6.運(yùn)輸。4/21根系活力即根生長(zhǎng)情況和代謝水平。它直接影響植物地上部生長(zhǎng)和營養(yǎng)情況以及產(chǎn)量。植物根系中過氧化物酶能氧化α-萘胺，生成紅色α-羥基-1-萘胺，并沉淀于根表面，將根系染成紅色。普通來說根呼吸強(qiáng)度越大，即該酶活力越強(qiáng)，對(duì)α-萘胺氧化力也越強(qiáng)，染色也越深。能夠依據(jù)根系表面著色深淺，定性觀察并判斷根系活力大小，也可經(jīng)過測(cè)定溶液中未被氧化α-萘胺量，以定量測(cè)定根系活力。（二）根系活力意義與測(cè)定方法5/21定性觀察根系表面紅色越深，說明根系活力越強(qiáng)。6/21定量測(cè)定剩下α-萘胺在酸性環(huán)境中可與對(duì)氨基苯磺酸（sulfanil-amide）和亞硝酸鹽作用生成穩(wěn)定紅色偶氮染料。7/21定量測(cè)定對(duì)-苯磺酸-偶氮-α-萘胺生成紅色偶氮化合物在pH7.0時(shí)在510nm處有最大吸收峰，可用分光光度法測(cè)定光吸收值，從而利用此反應(yīng)來間接測(cè)定溶液中α-萘胺量。8/21注意：OD510越大→α-萘胺剩下越多→根系活力越弱反應(yīng)液酸度大則增加重氮化作用速度，但降低偶聯(lián)作用速度，顏色比較穩(wěn)定。增加溫度能夠增加反應(yīng)速度，但降低重氮鹽穩(wěn)定度，所以反應(yīng)需要在相同條件下進(jìn)行。9/21三、試驗(yàn)材料與儀器設(shè)備（一）試驗(yàn)材料水稻(OryzasativaL.)等水生植物須根系。（二）儀器與用具分光光度計(jì)、天平、恒溫培養(yǎng)箱、三角燒瓶、量筒、移液管、剪刀、玻棒。（三）試劑α-萘胺溶液：先用少許95%酒精溶解，然后加水定容。分別配制50μg/mL、25μg/mL溶液。0.1mol/L磷酸緩沖液，pH7.0。1%對(duì)氨基苯磺酸溶液：溶解于30%醋酸溶液中。0.01%亞硝酸鈉溶液。10/21四、試驗(yàn)步驟（一）定性觀察：處理：挖取處于不一樣生長(zhǎng)狀態(tài)須根系植株（如水稻、豌豆苗根系等）數(shù)株，洗凈根部后再用濾紙吸去根上附著水分。11/212.觀察將植株根系浸入盛有25μg/mLα-萘胺溶液并用黑紙包裹容器中，靜置24-36小時(shí)后觀察根系著色情況。比較不一樣植株根系活力大小，并與植物生長(zhǎng)勢(shì)比較，分析植物生長(zhǎng)勢(shì)與根系活力之間關(guān)系。12/21（二）定量測(cè)定取50μg/mLα-萘胺溶液和0.1mol/LpH7.0磷酸緩沖液各25mL，置于三角瓶中，混勻。稱取根系2g浸沒于三角瓶中溶液中。一樣地，取50μg/mLα-萘胺溶液和0.1mol/LpH7.0磷酸緩沖液各25mL，置于另一三角瓶中，混勻，不放根系作為對(duì)照。步驟1、試驗(yàn)處理13/21步驟2、試驗(yàn)初始值測(cè)定5min后，分別從兩瓶中各取2mL溶液，按照步驟4作第一次測(cè)定。統(tǒng)計(jì)OD（試驗(yàn)組）與OD0（對(duì)照組）。14/21步驟3、試驗(yàn)終了值測(cè)定將兩三角瓶置于25℃恒溫箱中避光保溫60min后，各取2mL，按照步驟4作第二次測(cè)定。統(tǒng)計(jì)OD’（試驗(yàn)組）與OD’0（對(duì)照組）。15/21步驟4、a-萘胺含量測(cè)定取2mL培養(yǎng)液加10mL水混勻，再順次加入1mL對(duì)氨基苯磺酸溶液與1mL亞硝酸鈉溶液，混勻，觀察溶液顏色改變，再定容至25mL。室溫25min后，于510nm處測(cè)定吸光度（OD）值。16/21步驟5．標(biāo)準(zhǔn)曲線制作：以50μg/mLα-萘胺溶液為母液，配置40、30、20、10、5、0μg/mL溶液各10mL。各取2mL，按照步驟3分別反應(yīng)，并測(cè)定OD值。以O(shè)D值為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制α-萘胺溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線?；蛘咭罁?jù)濃度與OD值關(guān)系直接計(jì)算回歸方程。17/216．換算濃度分別查對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線，或利用回歸方程直接計(jì)算出試驗(yàn)組與對(duì)照組溶液試驗(yàn)前后對(duì)應(yīng)α-萘胺濃度（C、C’與C0、C’0）。18/217．計(jì)算根系活力依據(jù)試驗(yàn)結(jié)果計(jì)算不一樣植株根系對(duì)α-萘胺生物氧化強(qiáng)度（mgα-萘胺/gFW·h），并與植物生長(zhǎng)勢(shì)比較，分析它們之間關(guān)系。

-萘胺生物氧化強(qiáng)度=48mL×（C-C′）-48mL×（C0-C0′）