中藥制劑的鑒別技術(shù)-理化鑒別法

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理化鑒別中藥制劑鑒別技術(shù)第三節(jié)理化鑒別法（四）薄層色譜鑒別法1.概述薄層色譜法是將適宜的吸附劑或載體涂布于玻璃板、塑料或鋁基片上，成一均勻薄層，在同一塊薄層板上點(diǎn)加供試品和對(duì)照品，在相同條件下展開，顯色劑顯色，檢出色譜斑點(diǎn)，對(duì)比供試品與對(duì)照品的色譜圖進(jìn)行定性鑒別。第三節(jié)理化鑒別法（四）薄層色譜鑒別法2.儀器與材料

薄層板及固定相涂布器點(diǎn)樣器展開箱顯色與檢測儀器（四）薄層色譜鑒別法2.儀器與材料（1）

薄層板具有一定機(jī)械強(qiáng)度、化學(xué)惰性、耐一定溫度、表面平整、厚度均勻，價(jià)格合理，常用為玻璃板。玻璃板的常用規(guī)格：5cm×20cm、10cm×20cm、20cm×20cm，要求光滑、平整、洗凈后不附水珠、干燥。第三節(jié)理化鑒別法（四）薄層色譜鑒別法2.儀器與材料（2）固定相

硅膠：常用極性吸附劑，具表面活性中心，略帶酸性；氧化鋁：常用極性吸附劑，具表面活性中心，略帶堿性；硅藻土：中性吸附劑；纖維素：液-液分配色譜擔(dān)體（水為固定液），具一定粘性；聚酰胺：特殊有機(jī)薄層材料。第三節(jié)理化鑒別法硅膠G(含粘合劑煅石膏)，GF254(含254nm熒光劑)，硅膠H(不含粘合劑)，硅膠HF254第三節(jié)理化鑒別法（四）薄層色譜鑒別法2.儀器與材料（3）涂布器有手工、半自動(dòng)、全自動(dòng)薄層涂布器第三節(jié)理化鑒別法（四）薄層色譜鑒別法2.儀器與材料（4）點(diǎn)樣器材

常用微升毛細(xì)管或手動(dòng)、半自動(dòng)、全自動(dòng)點(diǎn)樣器微升毛細(xì)管全自動(dòng)點(diǎn)樣器手動(dòng)點(diǎn)樣器第三節(jié)理化鑒別法（四）薄層色譜鑒別法2.儀器與材料（5）展開箱

上行展開可用適合薄層板大小的專用平底或雙槽展開缸，展開時(shí)須能密閉；水平展開用專用的水平展開缸。第三節(jié)理化鑒別法（四）薄層色譜鑒別法2.儀器與材料（6）顯色與檢測儀器顯色有噴霧法及浸漬法噴霧瓶薄層色譜數(shù)碼相機(jī)成像系統(tǒng)第三節(jié)理化鑒別法（四）薄層色譜鑒別法3.操作方法

制板供試液及對(duì)照液的制備點(diǎn)樣展開顯色與檢視第三節(jié)理化鑒別法（四）薄層色譜鑒別法3.操作方法（1）制板

市售薄層板：臨用前，110℃活化30min

聚酰胺薄膜不用活化自制薄層板一份固定相研磨混勻涂布器三份水（或含有黏合劑的水溶液）自然干燥用前活化鋪制薄層板第三節(jié)理化鑒別法（四）薄層色譜鑒別法3.操作方法（2）點(diǎn)樣注意：點(diǎn)樣時(shí)勿損傷薄層表面第三節(jié)理化鑒別法（四）薄層色譜鑒別法3.操作方法（3）展開

展開劑的制備：新鮮配制展開：點(diǎn)樣后的薄層板放入加有展開劑的層析缸中，密閉，一般上行展開，薄層板浸入展開劑深度一般要求溶劑最初的前沿距原點(diǎn)約5mm，展開至規(guī)定展距后立即將薄層板取出，晾干，以備檢測。展距：一般8～15cm，高效板5～8cm預(yù)吸附中展開中（四）薄層色譜鑒別法3.操作方法（4）顯色與檢視顯色：噴霧法或浸漬法第三節(jié)理化鑒別法噴霧顯色法熒光顯色法第三節(jié)理化鑒別法（四）薄層色譜鑒別法3.操作方法（4）顯色與檢視

熒光淬滅斑點(diǎn)熒光淬滅法的GF254薄層板日光檢視紫外光365nm或254nm下檢視第三節(jié)理化鑒別法（四）薄層色譜鑒別法4.注意事項(xiàng)

制備薄層板應(yīng)清潔干燥后制板；預(yù)制薄層板選擇符合要求的產(chǎn)品；使用新鮮溶劑配制展開劑；配制多元展開劑時(shí)，各種溶劑應(yīng)分別量取后再混合。

第三節(jié)理化鑒別法（四）薄層色譜鑒別法例：首烏丸的薄層色譜鑒別

提取方法：甲醇提取固定相：硅膠G+0.5%NaOH展開劑：甲苯-乙酸乙酯-甲酸（15:2:1）1大黃素2大黃素甲醚3-4何首烏對(duì)照藥材5首烏丸首烏丸的薄層色譜3

理化鑒別中藥制劑鑒別技術(shù)（六）液相色譜鑒別法1.概述高效液相色譜法主要是比較化合物與對(duì)照品在同一色譜條件下，供試品應(yīng)呈現(xiàn)與對(duì)照品保留時(shí)間相同的色譜峰，對(duì)樣品進(jìn)行定性鑒別；高速、高效、高靈敏度、應(yīng)用廣泛；較少單獨(dú)用于定性鑒別，多與含量測定結(jié)合進(jìn)行；指紋圖譜鑒別正在逐漸增多。第三節(jié)理化鑒別法（六）液相色譜鑒別法2.方法

利用保留值作為定性參數(shù)；利用在樣品中加入對(duì)照品，通過峰值增高來確認(rèn)；利用LC-MS聯(lián)用儀，通過被分離物的質(zhì)譜圖與譜庫的譜圖對(duì)比來定性；

利用二極管陣列檢測器給出UV光譜與對(duì)照品相比較，結(jié)合保留時(shí)間來確認(rèn)。第三節(jié)理化鑒別法（六）液相色譜鑒別法例：四君子丸中甘草酸和六味地黃丸中芍藥苷的鑒別第三節(jié)理化鑒別法甘草酸HPLC圖芍藥苷HPLC圖第三節(jié)理化鑒別法理化鑒別方法有：一般化學(xué)鑒別法、升華鑒別法、熒光鑒別法、分光光度法、薄層色譜法、氣相色譜法和高效液相色譜法?；瘜W(xué)鑒別法主要用于制劑中各類成分的鑒別。升華鑒別法適用于含有一定溫度下能升華的化學(xué)成分中藥制劑的鑒別，專屬性高。熒光鑒別法適用于在可見光或紫外光照射下可發(fā)射熒光或經(jīng)其他方法處理后可產(chǎn)生熒光的中藥制劑鑒別，專屬性較高。TLC是目前中藥制劑鑒別的主要方法。GC和HPLC主要是比較化合物與對(duì)照品在特定的色譜柱上的色譜行為，采用保留時(shí)間比較的方法。一般較少單獨(dú)用于定性鑒別，多與含量測定結(jié)合進(jìn)行。點(diǎn)滴積累3

理化鑒別中藥制劑鑒別技術(shù)第二章中藥制劑鑒別技術(shù)薄層色譜法（TLC）化學(xué)反應(yīng)鑒別法微量升華法分光光度法熒光鑒別法高效液相色譜法、氣相色譜法等儀器分析法ABCDEF理化鑒別法第三節(jié)理化鑒別法（一）化學(xué)鑒別法

1.定義

是利用化學(xué)試劑與制劑中的指標(biāo)成分發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，根據(jù)所產(chǎn)生的顏色、沉淀或氣體等現(xiàn)象，來判斷某些藥味或成分的有無，并以此鑒別制劑真?zhèn)蔚姆椒?。第三?jié)理化鑒別法（一）化學(xué)鑒別法2.操作方法（1）供試液的制備

固體制劑：適當(dāng)?shù)娜軇┨崛?；液體制劑：直接取樣檢識(shí)或經(jīng)有機(jī)溶劑萃取分離后再行檢測。（2）操作方法

試管反應(yīng)：取供試液于試管中，加入試劑或試藥進(jìn)行反應(yīng)；蒸發(fā)皿或坩堝：供試液置蒸發(fā)皿或坩堝中，揮去溶劑，滴加試劑于殘留物進(jìn)行檢識(shí)。第三節(jié)理化鑒別法（一）化學(xué)鑒別法3.注意事項(xiàng)

避免附加成分的干擾：如注射劑、顆粒劑及糖漿劑；

慎重使用專屬性不高的分析反應(yīng)：如泡沫反應(yīng)、三氯化鐵顯色反應(yīng)；

對(duì)樣品進(jìn)行分離、精制：除去干擾分析反應(yīng)的物質(zhì)，借此改善鑒別方法的專屬性；

采用陰性及陽性對(duì)照方式，對(duì)擬定的鑒別方法進(jìn)行反復(fù)驗(yàn)證：防止出現(xiàn)假陽性。第三節(jié)理化鑒別法（一）化學(xué)鑒別法4.實(shí)例——抗骨增生丸的鑒別

【處方】由熟地黃、肉蓯蓉(蒸)、狗脊(鹽制)、女貞子(鹽制)、淫羊藿、雞血藤、萊菔子(炒)、骨碎補(bǔ)、牛膝?！捐b別方法】（1）鑒別肉蓯蓉中的生物堿

（2）鑒別淫羊藿中的黃酮類成分：樣品酸性乙醇濾液蒸干5%硫酸溶解回流提取過濾取濾液紅棕色沉淀白色沉淀白色沉淀碘化鉍鉀碘化汞鉀硅鎢酸樣品濾液1ml甲醇浸提鹽酸3～4滴鎂粉紅棕色3

理化鑒別中藥制劑鑒別技術(shù)第三節(jié)理化鑒別法（七）氣相色譜鑒別法1.概述

（1）適應(yīng)范圍：

含有揮發(fā)油或揮發(fā)性成分的制劑；大分子或不揮發(fā)性成分可分解或制成衍生物。

（2）原理：利用保留值進(jìn)行鑒別，即在同一色譜條件下，供試品應(yīng)呈現(xiàn)與對(duì)照品保留時(shí)間相同的色譜峰，對(duì)樣品進(jìn)行定性鑒別。第三節(jié)理化鑒別法（七）氣相色譜鑒別法2.方法

分別以試樣和標(biāo)準(zhǔn)物進(jìn)樣分析——各自的色譜圖；對(duì)照：如果試樣中某峰的保留時(shí)間和標(biāo)樣中某峰重合，則可初步確定試樣中含有該物質(zhì)；通過在樣品中加入標(biāo)準(zhǔn)物，看試樣中哪個(gè)峰增加來確定。第三節(jié)理化鑒別法（七）氣相色譜鑒別法3.注意事項(xiàng)

先通載氣，再加熱；進(jìn)樣時(shí)，注射器操作應(yīng)快速；一般色譜圖應(yīng)于30分鐘內(nèi)記錄完畢；測試完畢，先關(guān)閉各加熱電源以及氫氣和空氣開關(guān)，待檢測器和柱箱溫度降100℃以下時(shí)，關(guān)閉載氣。第三節(jié)理化鑒別法（七）氣相色譜鑒別法例——安宮牛黃丸中麝香的鑒別

【處方】牛黃、水牛角濃縮粉、麝香、珍珠等11味藥材制備而成【鑒別方法】供試品：環(huán)己烷提取液對(duì)照品：麝香酮固定相：苯基（50％）甲基硅酮（OV-17）為，涂布濃度為9％柱長：2m柱溫：210℃3

理化鑒別中藥制劑鑒別技術(shù)第三節(jié)理化鑒別法（二）升華鑒別法1.概述

利用中藥制劑中所含的某些化學(xué)成分，在一定溫度下能升華的性質(zhì)，獲得升華物，根據(jù)升華物的理化性質(zhì)進(jìn)行鑒別的方法。升華物的鑒別方法主要有：

利用顯微鏡觀察晶型；

可見光下觀察顏色；紫外燈下觀察熒光；加入合適的試液與其發(fā)生顯色反應(yīng)或熒光反應(yīng)。第三節(jié)理化鑒別法（二）升華鑒別法2.操作方法：微量升華法、坩堝法或蒸發(fā)皿法

微量升華裝置微量升華法：金屬片上放一金屬圈，圈內(nèi)放置藥材粉末，圈上覆蓋載玻片，在石棉網(wǎng)下用酒精燈緩緩加熱，至載玻片上有升華物凝集。將載玻片反轉(zhuǎn)后，置顯微鏡下觀察結(jié)晶形狀、色澤，或取升華物加試液觀察反應(yīng)。第三節(jié)理化鑒別法

（二）升華鑒別法3.注意事項(xiàng)

制劑中若有2種以上的藥味都含有升華物，升華的溫度不同，可控制加熱的溫度分段收集升華物，分別進(jìn)行鑒定；樣品粉末用量一般約0.5g，過少不易產(chǎn)生足夠量的升華物；可在載玻片上滴加少量水降溫，促使升華物凝集析出；無金屬片，可用載玻片代替。第三節(jié)理化鑒別法

（二）升華鑒別法：4.實(shí)例——牛黃解毒片中冰片的鑒別

【處方】人工牛黃、雄黃、石膏、大黃、黃芩、桔梗、冰片、甘草。【鑒別方法】取本品1片，研細(xì)，進(jìn)行微量升華，所得白色升華物，加新配制的1%香草醛硫酸溶液1～2滴，液滴邊緣漸顯玫瑰紅色。冰片升華物冰片升華物顯微觀冰片升華物顯色3

理化鑒別中藥制劑鑒別技術(shù)第三節(jié)理化鑒別法（三）熒光鑒別法1.概述熒光鑒別法是利用制劑中某些成分在可見光或紫外光照射下可發(fā)射熒光或經(jīng)其他方法處理后產(chǎn)生熒光的特性進(jìn)行中藥制劑鑒別的方法。第三節(jié)理化鑒別法（三）熒光鑒別法2.操作方法取制劑的提取液點(diǎn)在濾紙上或加入蒸發(fā)皿中，置紫外光燈下觀察所產(chǎn)生的熒光。必要時(shí)可在供試品中加酸、堿或其他試劑，再觀察熒光及其變化。UV第三節(jié)理化鑒別法（三）熒光鑒別法

3.注意事項(xiàng)熒光強(qiáng)度較弱，故一般需在暗室中觀察熒光；供試液一般用毛細(xì)管吸取，少量多次點(diǎn)在濾紙上，使斑點(diǎn)集中且具有一定濃度；紫外光對(duì)人的眼睛和皮膚有損傷，操作者應(yīng)避免與紫外光較長時(shí)間接觸；試驗(yàn)時(shí)，一般將供試品置于紫外光燈下約10cm處觀察所產(chǎn)生的熒光。紫外光波長一般為365nm，如用254~265nm波長觀察熒光，應(yīng)加以說明。第三節(jié)理化鑒別法（三）熒光鑒別法4.實(shí)例——復(fù)方雞血藤膏

【處方】滇雞血藤膏粉、川牛膝、續(xù)斷、紅花、黑豆、糯米、飴糖?！捐b別方法】取本品粉末1g，加水l0ml，加熱10分鐘，濾過，濾液置紫外光燈（365nm）下觀察，顯淡藍(lán)色熒光。理化鑒別法（五）紫外-可見分光光度法1.概述中藥制劑中有些化學(xué)成