微生物檢驗理論課 08腸桿菌科 學習資料

腸桿菌科

Enterobactericaeae

南方醫(yī)院檢驗系

陳晶

2017-03-24Tel:61642145Superbugs大腸桿菌屬克雷伯菌屬陰溝腸桿菌變異體等如何診斷治療？病原學依據(jù)在哪？腸桿菌科細菌的檢驗棲居在人和動物腸道內(nèi)的一大群革蘭陰性桿菌數(shù)量巨大,分布廣泛引起醫(yī)院感染的重要病原菌（占80%G-桿菌）所致疾?。?0%敗血癥，70%泌尿道感染等）

耐藥菌株極少xx耐藥菌株為主抗生素暴露xxxxxxxxxx耐藥性增強

致病性強：鼠疫耶爾森菌和傷寒沙門菌常引起人類腹瀉與腸道感染：沙門菌屬、志賀菌屬、埃希菌屬、耶爾森菌屬與醫(yī)院感染有關(guān)：克雷伯菌、沙雷菌屬、變形桿菌菌屬等

主要內(nèi)容腸桿菌科細菌的共性埃希菌屬和克雷伯菌屬沙門菌屬和志賀菌屬腸桿菌屬變形桿菌屬腸桿菌科細菌共同特性形態(tài)與染色

革蘭陰性桿狀或球桿狀

多數(shù)有鞭毛（運動）致病株多數(shù)有菌毛（侵襲力）培養(yǎng)特性

營養(yǎng)要求不高、兼性厭氧、液體培養(yǎng)基中混濁生長常用培養(yǎng)基：普通營養(yǎng)瓊脂平板、麥康凱培養(yǎng)基。鑒別與選擇培養(yǎng)基的必要性生化反應

發(fā)酵葡萄糖（產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣）、氧化酶陰性、可將硝酸鹽還原為亞硝酸鹽。

克氏雙糖鐵（KIA）復合試驗產(chǎn)酸并產(chǎn)氣：黃色，固體培養(yǎng)基裂開產(chǎn)酸：黃色產(chǎn)H2S：培養(yǎng)基變黑不產(chǎn)酸：紅色抗原構(gòu)造

O抗原：脂多糖

H抗原：蛋白質(zhì)抗原

表面抗原：（大腸埃希菌K抗原、傷寒沙門菌Vi抗原、志賀菌B抗原）抵抗力

不強，60℃30min殺死，不耐干燥，對一般化學消毒劑均敏感。能耐膽鹽，并在一定程度上抵抗染料的抑菌作用。所致疾病腸道感染腹瀉、食物中毒、腸熱癥腸道外感染鼠疫（烈性傳染病）、泌尿道感染、肺炎、腦膜炎、傷口化膿、菌血癥鑒定原則科間鑒別屬、種、群、型的區(qū)分腸桿菌科細菌綜合鑒定流程直接檢查（涂片鏡檢）MAC,SS選擇培養(yǎng)基鑒定（生化，血清學，補充試驗）標本血平板或其他培養(yǎng)基腸道腸道外可疑菌落KIA藥敏鑒定流程腸桿菌科常見菌屬

埃希菌屬和克雷伯菌屬沙門菌屬和志賀菌屬腸桿菌屬變形桿菌屬大腸埃希菌屬

細菌特性臨床意義

微生物學檢驗細菌特性形態(tài)特征培養(yǎng)特性生化反應形態(tài)特征

大腸埃希菌革蘭染色G-短桿菌，多數(shù)有鞭毛，部分有微莢膜和周身菌毛培養(yǎng)特性兼性厭氧，營養(yǎng)要求不高，在普通瓊脂上生長良好，形成較大的圓形、光滑、濕潤、灰白色的菌落，在血瓊脂上某些菌株可以溶血SS腸道選擇性培養(yǎng)基上可以發(fā)酵乳糖，形成粉紅色菌落；在MAC培養(yǎng)基上形成紅色和粉紅色落SSBAPMACBAPSS生化反應埃希菌屬能發(fā)酵多種糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣；KIA，發(fā)酵葡萄糖和乳糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣，H2S陰性；IMVC，吲哚、甲基紅、V-P和枸櫞酸鹽，++--；MIU，動力-吲哚-脲酶，++-臨床意義腸道外感染：可見于各個部位，最多見于泌尿系感染，多見于女性，如尿道炎、膀胱炎、腎盂腎炎及其他化膿性炎癥。是條件致病菌，易產(chǎn)超廣譜β內(nèi)酰胺酶、多重耐藥臨床意義腸道內(nèi)感染：（1）腸產(chǎn)毒型大腸埃希菌（ETEC）：致嬰兒和旅游者腹瀉。

（2）腸致病型大腸埃希菌（EPEC）：主要致嬰幼兒腹瀉。

（3）腸侵襲型大腸埃希菌（EIEC）：主要侵犯較大兒童和成人，

可致腹瀉、里急后重和膿血便。

（4）腸出血型大腸埃希菌（EHEC）：可引起出血性結(jié)腸炎和溶血性尿毒綜合征。（O157：H7需血清學鑒定，毒力強）

（5）腸集聚型大腸埃希菌（EaggEC）:引起嬰兒持續(xù)性腹瀉、脫水、偶有血便。

大腸埃希菌檢驗程序克雷伯菌屬細菌特性臨床意義

微生物學檢驗細菌特性

形態(tài)特征培養(yǎng)特性生化反應形態(tài)特征G-桿菌，無鞭毛，無芽孢，直接涂片或在營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基上可見菌體外有明顯的莢膜；肺炎克雷伯菌革蘭染色培養(yǎng)特性在MAC或SS平板上，可形成較大的粘液型、紅色菌落，紅色可擴散至周圍的培養(yǎng)基中

兼性厭氧，營養(yǎng)要求不高，在初次分離培養(yǎng)基上可形成較大、凸起、灰白色、粘液型的菌落，用接種環(huán)挑取可挑出長絲

肺炎克雷伯菌粘絲試驗MACBAP生化反應氧化酶陰性；動力陰性KIA，發(fā)酵葡萄糖和乳糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣H2S陰性賴氨酸+，精氨酸-，鳥氨酸-DNA酶-，明膠酶-吲哚，肺炎克雷伯菌-，產(chǎn)酸克雷伯菌+臨床意義克雷伯菌屬的細菌多感染免疫力低下的人群，是醫(yī)院感染中最重要的條件致病菌。所致疾病：肺炎、腦膜炎、腹膜炎、泌尿系統(tǒng)感染、敗血癥肺炎克雷伯菌易產(chǎn)生超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBL）肺炎克雷伯菌檢驗程序沙門菌屬

傷寒是個古老的世界性傳染病，1874年發(fā)現(xiàn)，傷寒存在至少幾個世紀一種急性腸道傳染病，屬于我國法定的乙類傳染病近３年來我國每年的傷寒和副傷寒的發(fā)病人數(shù)在３萬－６萬沙門菌屬有2200多種血清型傷寒和副傷寒A、B沙門菌引起胃腸炎、菌血癥和腸熱癥（傷寒或副傷寒）豬霍亂沙門菌引起胃腸炎和敗血癥，兒童多見沙門菌屬血液、骨髓、尿液中均可分離出沙門菌；胃腸道患者的糞便標本接種SS；一般健康體檢也常檢測糞便中有無沙門菌和志賀菌。細菌特性形態(tài)特征培養(yǎng)特性生化反應形態(tài)特征傷寒沙門菌革蘭染色電鏡圖G-細長桿菌，多具周鞭毛，無芽孢，無莢膜生物學性狀

電鏡下沙門菌沙門菌鞭毛沙門菌革蘭染色細菌培養(yǎng)血培養(yǎng)：第1-2周陽性率最高骨髓培養(yǎng)：陽性率高，持續(xù)時間長，已抗菌治療尤適糞尿培養(yǎng)：第3-4周，陽性率最高培養(yǎng)特性

MAC，BAP平板上形態(tài)類似大腸埃希菌等腸桿菌科細菌SS等腸道選擇性培養(yǎng)基上，小至中等，透明或半透明，乳糖不發(fā)酵，菌落中心黑色SSBAPMAC生化反應SS平板可疑菌落接種KIA平板發(fā)酵葡萄糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣不發(fā)酵乳糖有動力產(chǎn)H2S，培養(yǎng)基呈黑色傷寒沙門菌KIA（KA－＋）MIU（＋－－）抗原構(gòu)造

O抗原：脂多糖

H抗原：蛋白質(zhì)

表面抗原：傷寒沙門菌Vi抗原檢測方法(抗體檢測)肥達反應

應用傷寒沙門菌的O與H抗原，副傷寒菌甲、乙、丙的鞭毛抗原A、B、C，通過凝集反應檢測患者血清中相應的抗體1周左右出現(xiàn)抗體，3～4周陽性率可達70%。O抗體≥1:80，H或其他鞭毛抗體≥1:160抗體滴度4倍增高者更有意義。臨床意義傷寒和副傷寒急性胃腸炎或食物中毒菌血癥，敗血癥

傷寒與副傷寒

（腸熱癥）

由傷寒或副傷寒沙門菌感染所致，表現(xiàn)為持續(xù)發(fā)熱、相對緩脈、脾大、玫瑰疹、白細胞減少等。

食物中毒

由鼠傷寒沙門菌、豬霍亂沙門菌、腸炎沙門菌所致。表現(xiàn)為惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉和發(fā)熱等

敗血癥

主要由豬霍亂沙門菌、鼠傷寒沙門菌、腸炎沙門菌和希氏沙門菌所致。表現(xiàn)為高熱、寒戰(zhàn)、厭食和貧血等。沙門菌檢驗程序志賀菌屬志賀菌引起人類細菌性痢疾；分4個血清群：A群痢疾志賀菌、B群福氏志賀菌、C群鮑特志賀菌、D群宋內(nèi)志賀菌。細菌特性形態(tài)特征培養(yǎng)特性生化反應鮑氏志賀菌電鏡下形態(tài)（負染色）生物學性狀形態(tài)特征志賀菌革蘭染色G-短小桿菌，無芽孢、無莢膜、無鞭毛，有菌毛細菌培養(yǎng)膿血粘液便及時送檢檢驗培養(yǎng)特性SS等腸道培養(yǎng)基上為乳糖不發(fā)酵、中等大小、無色半透明的菌落SS生化反應SS平板可疑菌落接種KIA平板發(fā)酵葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣不發(fā)酵乳糖無動力不產(chǎn)H2S志賀菌KIA（KA－－）MIU（－－－）臨床意義

急性細菌性痢疾慢性菌痢帶菌者急性細菌性痢疾

起病急，常有發(fā)熱、腹痛、腹瀉、膿血粘液便和里急后重等癥。傳染性強。中毒型細菌性痢疾

兒童常見，多表現(xiàn)高熱、驚厥、昏迷、休克、DIC、多器官功能衰竭等。慢性細菌性痢疾

病程持續(xù)兩個月以上，反復發(fā)作，腹部不適，腹瀉次數(shù)不定，以粘液便為主。志賀菌檢驗程序沙門菌屬、志賀菌屬檢驗糞便標本接種SS平板水樣便需再接種血平板或TCBS弧菌臨床懷疑菌群失調(diào)，再接種血平板SS平板發(fā)現(xiàn)可疑菌落，取單菌落接種KIAKIA可疑，血清鑒定，再藥敏試驗。腸桿菌屬腸道正常菌叢，為條件致病菌；常見為陰溝腸桿菌和產(chǎn)氣腸桿菌；G-短粗桿菌，有周身鞭毛、無芽孢，部分有莢膜；菌落大、濕潤、粘液狀。生化反應KIA，發(fā)酵葡萄糖和乳糖，產(chǎn)酸，產(chǎn)或不產(chǎn)氣，H2S，有動力IMVC試驗為--++，而大腸埃希菌為++--G-桿菌、氧化酶陰性，腸桿菌科生化及KIA，K-B藥敏變形桿菌屬

條件致病菌G-桿菌，多形性，周身鞭毛、無芽孢、無莢膜在SS培養(yǎng)基上形成，圓形、扁平、無色半透明外斐試驗：變形桿菌X19、X2、XK的菌體抗原與某些立克次體有共同抗原，能出現(xiàn)交叉凝集反應臨床利用這些變形桿菌代替立克次體與患者血清進行凝集反應以輔助診斷

生化反應G-桿菌、氧化酶陰性，腸桿菌科生化及KIA，K-B藥敏產(chǎn)H2S、不發(fā)酵乳糖、有動力，苯丙氨酸+、脲酶+普通變形桿菌（吲哚+），奇異變形桿菌（吲哚-）

藥敏試驗藥物分類簡介青霉素類：干擾細菌細胞壁合成而殺菌頭孢菌素類：第一代頭孢噻吩（先鋒霉素I）第二代頭孢西丁（美福仙）第三代頭孢曲松（羅氏芬）第四代頭孢吡肟（馬斯平）單環(huán)類：氨曲南碳青霉烯類硫霉素：亞胺培南+西司丁鈉（泰能）

B內(nèi)酰胺酶抑制劑：阿莫西林+克拉維酸（奧格門?。┌被擒疹悾簯c大霉素阿米卡星大環(huán)內(nèi)酯類：紅霉素四環(huán)素肽類抗生素：桿菌肽萬古霉素替考拉寧

磷酸抗生素：磷霉素喹諾酮類：環(huán)丙沙星硝基呋喃類：呋喃妥因厭氧菌治療：甲硝唑抗真菌類：AMB制霉菌素抗病毒類：阿昔洛韋超廣譜β-內(nèi)酰胺酶革蘭陰性桿菌(extendedspectrumβ-lactamasegram-negativebacillus，ESBLs)：該酶水解青霉素、頭孢菌素及單胺類的超廣譜β-酶，主要由肺炎克雷伯菌和大腸埃希菌、腸桿菌等細菌產(chǎn)生；CLSI規(guī)定，ESBL確認試驗（+）：則對青霉素類、頭孢菌素類和氨曲南均應報告耐藥，而不考慮體外藥敏結(jié)果，建議用碳青霉烯類抗生素。?-內(nèi)酰胺酶中最重要的2種酶ESBL-質(zhì)粒酶（超廣譜酶）AMPC-染色體酶（頭孢菌素酶）

ESBL酶檢測方法雙紙片協(xié)同試驗紙片確證試驗

MIC確證試驗雙紙片協(xié)同試驗：頭孢他啶特美丁頭孢噻肟

紙片確證試驗：頭孢他啶—頭孢他啶/棒酸頭孢噻肟—頭孢噻肟/棒酸ESBL酶（+）判斷標準含克拉維酸復合制劑的抑菌圈較單藥的抑菌圈擴大5mm以上（紙片法）含克拉維酸復合制劑的MIC較單藥的MIC降低8倍以上（MIC法）非發(fā)酵革蘭陰性桿菌

非發(fā)酵G-桿菌共同特點假單胞菌屬不動桿菌屬非發(fā)酵G-桿菌的共同特點不發(fā)酵葡萄糖，或僅以氧化形式利用葡萄糖，需氧或兼性厭氧、無芽孢的G-桿菌多為條件致病菌大多數(shù)（銅綠假單胞菌）氧化酶陽性，少數(shù)（不動桿菌屬和嗜麥芽窄食單胞菌）為陰性涂片，革蘭染色G-桿菌嗜麥芽窄食單胞菌，菌落淡黃色不動桿菌屬，G-球桿菌檢驗共同特點氧化發(fā)酵試驗產(chǎn)堿型發(fā)酵型氧化型假單胞菌屬為需氧、有鞭毛、無芽孢、無莢膜的G-桿菌，氧化酶陽性廣泛分布于自然環(huán)境，大多為條件致病菌；是醫(yī)院感染的重要病原菌，占非發(fā)酵菌的70%-80%。假單胞菌屬分類按rRNA同源性分為5群，臨床常見如下：I群銅綠、熒光、惡臭、產(chǎn)堿假單胞菌II群洋蔥伯克霍爾德菌、III群睪丸酮假單胞菌、V群嗜麥芽窄食單胞菌、未確定群的假單胞菌DCD群1。培養(yǎng)特點專性需氧，生長溫度范圍廣，