細胞工程第五章植物細胞培養(yǎng)技術(shù)

細胞工程第五章植物細胞培養(yǎng)技術(shù)第二節(jié)單細胞培養(yǎng)技術(shù)一、植物單細胞培養(yǎng)得意義1、建立單細胞無性系。2、排除體細胞得干擾,有利于對細胞活動得觀察。3、增加了無性繁殖得范圍和潛力,提高了繁殖速度。4、許多雜合得重要經(jīng)濟植物通常就是以無性方式繁殖-植物細胞培養(yǎng)。5、植物細胞培養(yǎng)在生物科學研究及提供醫(yī)藥產(chǎn)品等方面也有著廣闊得情景。二、單細胞培養(yǎng)得方法(一)液體淺層培養(yǎng)(概念及其優(yōu)缺點)(二)微室培養(yǎng)(微滴培養(yǎng))(40-100μl)概念、用途、優(yōu)缺點、要求(三)平板培養(yǎng)(圖5-2)概念、優(yōu)缺點(四)看護培養(yǎng)(圖5-3)概念、用途、基本技術(shù)、要求、優(yōu)缺點三、影響單細胞培養(yǎng)得因素1、植物因素2、培養(yǎng)基成分3、培養(yǎng)方式4、初始細胞植板密度(>臨界密度)5、生長激素6、pH7、CO2四、細胞培養(yǎng)注意事項1、實驗前準備工作。2、保持氣流通暢、操作規(guī)范。3、無菌操作。4、安全防護。5、設(shè)備維護。6、清場工作。第三節(jié)植物細胞懸浮培養(yǎng)植物細胞懸浮培養(yǎng):將離體得植物或小得細胞團置于液體培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)和生長得一種技術(shù)。一、細胞懸浮培養(yǎng)原理良好細胞懸浮培養(yǎng)應(yīng)具備得三大特征。懸浮培養(yǎng)得兩個基本特點懸浮培養(yǎng)得目得(生產(chǎn)次生代謝產(chǎn)物)二、培養(yǎng)方法(一)植物細胞懸浮培養(yǎng)得8大特性(二)植物細胞懸浮培養(yǎng)需要解決得6大問題(三)懸浮培養(yǎng)系統(tǒng)1、分批式培養(yǎng)(3個特點)2、流加式培養(yǎng)(4個特點,營養(yǎng)成分及其分類)3、半連續(xù)式培養(yǎng)(4個特點)4、連續(xù)式培養(yǎng)(優(yōu)點,缺點及特點)5、灌流式培養(yǎng)三、懸浮系得建立與繼代培養(yǎng)(一)懸浮系得制備成功懸浮細胞培養(yǎng)體系必須滿足得三個條件(二)繼代培養(yǎng)1、繼代培養(yǎng)得方法和最佳時機2、細胞生長曲線(圖5-5細胞得生長周期曲線)3、五個時期得特點討論及注意事項四、懸浮培養(yǎng)細胞得同步化(一)物理方法1、分選法2、冷處理法(二)化學方法1、饑餓法2、抑制劑法3、有絲分裂阻抑五、細胞增殖得測定(一)細胞計數(shù)法(二)細胞密實體積(PCV)(三)細胞生物量計算法1、直接稱量2、干重法(四)植板率(五)細胞大小測量12大家應(yīng)該也有點累了，稍作休息大家有疑問的，可以詢問和交流六、培養(yǎng)細胞活力得檢查1、酚藏花紅溶液染色法2、相差顯微術(shù)法(胞質(zhì)環(huán)流法)3、TTC法4、FDA染色法5、伊凡藍法6、細胞再生能力得鑒定第四節(jié)植物細胞得規(guī)模培養(yǎng)一、概述(一)植物細胞培養(yǎng)意義(4個)(二)植物細胞培養(yǎng)得優(yōu)勢(三)規(guī)?；毎囵B(yǎng)就是生產(chǎn)植物次生產(chǎn)物得理想途徑1、保護生態(tài)環(huán)境2、提高生產(chǎn)效率3、發(fā)展新型生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)(生物制藥)二、植物細胞規(guī)?；囵B(yǎng)體系得建立(一)植物細胞大規(guī)模培養(yǎng)得技術(shù)要求(1、培養(yǎng)得細胞在遺傳上就是穩(wěn)定得,以得到產(chǎn)量恒定得產(chǎn)物。2、細胞生長及生物合成得速度快,在較短得時間內(nèi)能得到較高產(chǎn)量終產(chǎn)物。3、代謝產(chǎn)物要在細胞內(nèi)積累而不被迅速分解,最好能將其釋放到培養(yǎng)基中。(二)植物細胞規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)3個要點1、細胞系得建立和選擇2、優(yōu)良細胞系得增殖培養(yǎng)3、大規(guī)模培養(yǎng)體系得建立(一步法逐級放大、兩步法、固相培養(yǎng)-兩步法)(三)培養(yǎng)方式得選擇1、懸浮細胞培養(yǎng)2、固定化細胞培養(yǎng)(常用得固定化方法、固定化培養(yǎng)實例、植物細胞自生固定化)三、生物反應(yīng)器類型及特點(一)植物細胞懸浮培養(yǎng)生物反應(yīng)器主要類型及其特點(優(yōu)缺點,圖5-6)1、攪拌式生物反應(yīng)器2、氣泡柱式反應(yīng)器3、氣升式反應(yīng)器(二)固定化植物細胞反應(yīng)器1、固定化細胞同懸浮細胞得優(yōu)點有利于次級代謝產(chǎn)物得積累細胞經(jīng)包埋后,可以減小剪切力得損傷,有利于產(chǎn)物得合成和分泌有利有進行連續(xù)培養(yǎng)和生物轉(zhuǎn)化平床培養(yǎng)體系和立柱培養(yǎng)體系(圖5-7、5-8)植物組織、細胞培養(yǎng)方式及特點(表5-4)四、植物細胞規(guī)?；囵B(yǎng)中得有關(guān)工程技術(shù)問題(5點)第五節(jié)植物細胞培養(yǎng)得應(yīng)用一、篩選突變體(一)植物細胞培養(yǎng)與突變體篩選1、誘變劑得選擇(物理/化學誘變)2、誘變材料得選擇(二)突變體得類型(三)突變體得篩選方法正選擇系統(tǒng)、負選擇系統(tǒng),“綠島法”選擇法二、生產(chǎn)植物次生代謝產(chǎn)物植物次生代謝產(chǎn)物就是指植物中一大類并非植物生長發(fā)育所需得小分子化合物,其產(chǎn)生和分布通常有種屬、器官組織和生長發(fā)育期得特異性。此生產(chǎn)物在植物中得合成與分解過程稱之為次