高中生物2015-2024年10年高考真題專題分類匯編-專題21細胞工程考點2動物細胞工程

第第頁專題21細胞工程考點2動物細胞工程(2024黑、吉、遼，14，2分)從小鼠胚胎中分離獲取胚胎成纖維細胞進行貼壁培養(yǎng)，在傳代后的不同時間點檢測細胞數目，結果如圖。下列敘述正確的是()A.傳代培養(yǎng)時，培養(yǎng)皿需密封防止污染B.選取①的細胞進行傳代培養(yǎng)比②更合理C.直接用離心法收集細胞進行傳代培養(yǎng)D.細胞增長進入平臺期可能與細胞密度過大有關【答案】D傳代培養(yǎng)小鼠的胚胎成纖維細胞，應該將細胞置于含有95%空氣和5%CO2的混合氣體的CO2培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)，A錯誤；細胞通常在進入平臺期之前的指數增長期進行傳代，這樣可以提高細胞增長速率(該階段細胞代謝活性及酶活性高而穩(wěn)定，生活力強)并避免延遲期，①太接近延遲期(細胞數目少，還處于適應環(huán)境階段，未充分活化，不宜選)，故選?、诘募毎侠恚珺錯誤；貼壁生長的細胞需經胰蛋白酶等處理制成細胞懸液后才能進行傳代培養(yǎng)，C錯誤；圖中細胞增長進入平臺期后，細胞數目比較穩(wěn)定，可能受到細胞密度過大、營養(yǎng)物質有限等因素的制約，D正確。(2024江西，16，4分)（多選）某病毒顆粒表面有一特征性的大分子結構蛋白S(含有多個不同的抗原決定基，每一個抗原決定基能夠刺激機體產生一種抗體)。為了建立一種靈敏、高效檢測S蛋白的方法，研究人員采用雜交瘤技術制備了抗-S單克隆抗體(如圖)。下列說法正確的是()A.利用膠原蛋白酶處理，可分散貼壁生長的骨髓瘤細胞B.制備的單克隆抗體A和單克隆抗體B是相同的單克隆抗體C.用于生產單克隆抗體的雜交瘤細胞可傳代培養(yǎng)，但不能凍存D.單克隆抗體A和單克隆抗體B都能夠特異性識別S蛋白【答案】BD骨髓瘤細胞不會發(fā)生貼壁生長現象，不需要用膠原蛋白酶處理使其分散，A錯誤；單克隆抗體A和單克隆抗體B來自同一類型雜交瘤細胞，進行克隆化培養(yǎng)，體內和體外培養(yǎng)獲得的單克隆抗體相同，B正確；雜交瘤細胞可以大量增殖，當培養(yǎng)瓶中細胞密度太大時，可以進行傳代培養(yǎng)，也可冷凍保存，C錯誤；制備抗-S單克隆抗體時，注射的抗原為S蛋白，所得的單克隆抗體A和單克隆抗體B都能特異性識別S蛋白，D正確。(2024·浙江1月選考·13，2分)某動物細胞培養(yǎng)過程中，細胞貼壁生長至接觸抑制時，需分裝培養(yǎng)，實驗操作過程如圖。下列敘述錯誤的是()A.①加消化液的目的是使細胞與瓶壁分離B.②加培養(yǎng)液的目的是促進細胞增殖C.③分裝時需調整到合適的細胞密度D.整個過程需要在無菌、無毒條件下進行【答案】B②加培養(yǎng)液的目的是沖洗細胞，便于轉移。(2023海南，7，3分)某團隊通過多代細胞培養(yǎng)，將小鼠胚胎干細胞的Y染色體去除，獲得XO胚胎干細胞，再經過一系列處理，使之轉變?yōu)橛泄δ艿穆涯讣毎?。下列有關敘述錯誤的是()A.營養(yǎng)供應充足時，傳代培養(yǎng)的胚胎干細胞不會發(fā)生接觸抑制B.獲得XO胚胎干細胞的過程發(fā)生了染色體數目變異C.XO胚胎干細胞轉變?yōu)橛泄δ艿穆涯讣毎倪^程發(fā)生了細胞分化D.若某瀕危哺乳動物僅存雄性個體，可用該法獲得有功能的卵母細胞用于繁育【答案】A傳代培養(yǎng)的胚胎干細胞增殖到貼滿瓶壁時會發(fā)生接觸抑制，A錯誤；據題干“將小鼠胚胎干細胞的Y染色體去除，獲得XO胚胎干細胞”可知，該過程中發(fā)生了染色體數目變異，B正確；XO胚胎干細胞轉變?yōu)橛泄δ艿穆涯讣毎^程中，細胞的形態(tài)、結構和生理功能發(fā)生了變化，即發(fā)生了細胞分化，C正確；若某瀕危哺乳動物僅存雄性個體，可以通過去除胚胎干細胞的Y染色體等一系列處理獲得有功能的卵母細胞，用于繁殖后代，D正確。(2023廣東，3，2分)科學家采用體外受精技術獲得紫羚羊胚胎，并將其移植到長角羚羊體內，使后者成功妊娠并產仔，該工作有助于恢復瀕危紫羚羊的種群數量。此過程不涉及的操作是()A.超數排卵B.精子獲能處理C.細胞核移植D.胚胎培養(yǎng)【答案】C根據題干信息，題述過程主要涉及體外受精和胚胎移植技術，體外受精需要對精子進行獲能處理，同時需要對雌性個體使用外源促性腺激素進行超數排卵處理，A、B均有涉及；在進行胚胎移植前需要對早期胚胎進行培養(yǎng)，培養(yǎng)至桑葚胚或者囊胚階段進行胚胎移植，D有涉及；細胞核移植技術一般用于克隆動物，題述過程沒有涉及，故選C。(2023北京，12，2分)甲狀旁腺激素(PTH)水平是人類多種疾病的重要診斷指標。研究者制備單克隆抗體用于快速檢測PTH，有關制備過程的敘述不正確的是()A.需要使用動物細胞培養(yǎng)技術B.需要制備用PTH免疫的小鼠C.利用抗原—抗體結合的原理篩選雜交瘤細胞D.篩選能分泌多種抗體的單個雜交瘤細胞【答案】D制備單克隆抗體時，需利用B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合得到雜交瘤細胞，篩選獲得的雜交瘤細胞既能迅速大量增殖，又能產生足夠數量的特定抗體，制備過程中，需要對雜交瘤細胞、骨髓瘤細胞等動物細胞進行動物細胞培養(yǎng)，A正確；單克隆抗體制備過程中，給小鼠注射特定抗原(PTH)，使其發(fā)生免疫反應，從而獲得能產生特定抗體的B淋巴細胞，B正確；單克隆抗體制備過程中，利用抗原—抗體結合的原理進行第二次篩選，可獲得能分泌所需抗體的雜交瘤細胞，C正確；篩選出的單個雜交瘤細胞具有特異性，通常只能分泌一種抗體，D錯誤。(2023遼寧，7，2分)大量懸浮培養(yǎng)產流感病毒的單克隆細胞，可用于流感疫苗的生產。下列敘述錯誤的是()A.懸浮培養(yǎng)單克隆細胞可有效避免接觸抑制B.用于培養(yǎng)單克隆細胞的培養(yǎng)基通常需加血清C.當病毒達到一定數量時會影響細胞的增殖D.培養(yǎng)基pH不會影響單克隆細胞的病毒產量【答案】D流感病毒無細胞結構，需用動物細胞培養(yǎng)，培養(yǎng)的動物細胞具有接觸抑制的特點，懸浮培養(yǎng)可有效避免接觸抑制現象的發(fā)生，A正確；動物細胞培養(yǎng)液中需加血清，以補充細胞生長所必需的天然營養(yǎng)成分，B正確；流感病毒為胞內寄生，當細胞內病毒達到一定數量時，會對細胞的增殖和代謝產生嚴重影響，甚至會導致細胞裂解，C正確；病毒的增殖依賴宿主細胞，而培養(yǎng)基的pH會影響宿主細胞生長，故培養(yǎng)基pH會通過影響單克隆細胞的生長影響病毒產量，D錯誤。（2021山東，15，2分）一個抗原往往有多個不同的抗原決定簇，一個抗原決定簇只能刺激機體產生一種抗體，由同一抗原刺激產生的不同抗體統(tǒng)稱為多抗。將非洲豬瘟病毒衣殼蛋白p72注入小鼠體內，可利用該小鼠的免疫細胞制備抗p72的單抗，也可以從該小鼠的血清中直接分離出多抗。下列說法正確的是（）A.注入小鼠體內的抗原純度對單抗純度的影響比對多抗純度的影響大B.單抗制備過程中通常將分離出的漿細胞與骨髓瘤細胞融合C.利用該小鼠只能制備出一種抗p72的單抗D.p72部分結構改變后會出現原單抗失效而多抗仍有效的情況【答案】.D單抗制備過程中有多次的篩選和鑒定，注入小鼠體內的抗原純度對單抗的純度影響很小，注入小鼠體內的抗原純度越高，說明抗原的種類越少，多抗的純度就會越高，A錯誤；單抗制備過程中并不是分離出漿細胞與骨髓瘤細胞融合的，而是融合以后進行篩選，B錯誤；題干信息“也可以從該小鼠的血清中直接分離出多抗”可說明，非洲豬瘟病毒衣殼蛋白p72的表面有多種抗原決定簇，每種抗原決定簇都能刺激機體產生一種抗體，所以利用該小鼠能制備出多種抗p72的單抗，C錯誤；非洲豬瘟病毒衣殼蛋白p72是一種抗原，其表面有多種抗原決定簇，每種抗原決定簇都能刺激機體產生一種抗體，所以p72部分結構改變，會導致改變部位刺激產生的單抗失效，但未改變部位刺激產生的抗體仍然能起作用，所以多抗仍有效，D正確。(2022湖北，7，2分)某興趣小組開展小鼠原代神經元培養(yǎng)的研究，結果發(fā)現其培養(yǎng)的原代神經元生長緩慢，其原因不可能的是()A.實驗材料取自小鼠胚胎的腦組織B.為了防止污染將培養(yǎng)瓶瓶口密封C.血清經過高溫處理后加入培養(yǎng)基D.所使用的培養(yǎng)基呈弱酸性【答案】A來自小鼠胚胎的腦組織神經元細胞分化程度低，生長較快；將培養(yǎng)瓶密封會導致神經元細胞缺氧而生長緩慢；高溫會使血清含有的促進細胞生長和增殖所需要的營養(yǎng)物質失活，而使神經元細胞生長緩慢；人的細胞外液pH近中性，弱酸性的環(huán)境會導致神經元細胞生長緩慢，故A項不是導致培養(yǎng)的原代神經元生長緩慢的原因。(2022湖北，15，2分)納米氧化亞銅是一種納米材料。為了探究納米氧化亞銅對貼壁生長細胞活性的影響，研究者在培養(yǎng)基中添加一定量的納米氧化亞銅，8小時后觀察到細胞萎縮，體積變小，細胞核變大，細胞膜內側出現納米氧化亞銅富集現象，培養(yǎng)瓶中大量貼壁細胞脫落，出現細胞懸浮。根據該實驗現象，能得出的正確結論是()A.納米氧化亞銅改變了細胞的貼壁生長習性B.納米氧化亞銅對該細胞生長有抑制作用C.納米氧化亞銅能通過自由擴散進入細胞D.納米氧化亞銅不影響細胞的新陳代謝【答案】A細胞貼壁生長會使細胞由于不斷增殖產生接觸抑制，而納米氧化亞銅會使貼壁細胞脫落，出現細胞懸浮，因此納米氧化亞銅改變了細胞的貼壁生長習性，A正確；根據題意可知納米氧化亞銅促進了細胞的衰老，B錯誤；由此題干信息“細胞膜內側出現納米氧化亞銅富集現象”，說明納米氧化亞銅能進入細胞，但不能由此推斷是通過自由擴散進入細胞的，C錯誤；納米氧化亞銅會促進細胞衰老，即影響了細胞的新陳代謝，D錯誤。(2022江蘇，14，2分)航天員葉光富和王亞平在天宮課堂上展示了培養(yǎng)的心肌細胞跳動的視頻。下列相關敘述正確的是()A.培養(yǎng)心肌細胞的器具和試劑都要先進行高壓蒸汽滅菌B.培養(yǎng)心肌細胞的時候既需要氧氣也需要二氧化碳C.心肌細胞在培養(yǎng)容器中通過有絲分裂不斷增殖D.心肌細胞在神經細胞發(fā)出的神經沖動的支配下跳動【答案】B動物細胞培養(yǎng)液中的某些成分(如血清中的蛋白質)不耐高溫，A錯誤；O2是細胞代謝所必需的，CO2可維持培養(yǎng)液的pH，培養(yǎng)動物細胞的氣體環(huán)境為95%空氣和5%CO2，B正確；心肌細胞高度分化，高度分化的細胞一般不具有分裂能力，C錯誤；心肌細胞節(jié)律性收縮，受內臟運動神經控制，是不隨意的，在神經細胞釋放的神經遞質的作用下跳動，D錯誤。(2022江蘇，19，3分)(多選)如圖表示利用細胞融合技術進行基因定位的過程，在人—鼠雜種細胞中人的染色體會以隨機方式丟失，通過分析基因產物進行基因定位。現檢測細胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中人的4種酶活性，只有Ⅱ具有芳烴羥化酶活性，只有Ⅲ具有胸苷激酶活性，Ⅰ、Ⅲ都有磷酸甘油酸激酶活性，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ均有乳酸脫氫酶活性。下列相關敘述正確的有()A.加入滅活仙臺病毒的作用是促進細胞融合B.細胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ分別為人—人、人—鼠、鼠—鼠融合細胞C.芳烴羥化酶基因位于2號染色體上，乳酸脫氫酶基因位于11號染色體上D.胸苷激酶基因位于17號染色體上，磷酸甘油酸激酶基因位于X染色體上【答案】ACD誘導動物細胞融合的方法有滅活病毒誘導法，故加入滅活仙臺病毒的作用是促進動物細胞融合，A正確；題述三種融合細胞為雜種細胞，都保留了人的部分染色體，即Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ細胞均為人—鼠融合細胞，B錯誤；根據題干和題圖可知，只有Ⅱ具有芳烴羥化酶活性，只有Ⅲ具有胸苷激酶活性，Ⅰ、Ⅲ都有磷酸甘油酸激酶活性，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ均有乳酸脫氫酶活性，由三種融合細胞所保留的人類染色體可知，Ⅱ中特有的染色體為2號染色體，Ⅲ中特有的染色體為17號染色體，Ⅰ、Ⅲ中共有而Ⅱ中沒有的染色體為X染色體，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中共有的染色體為11號染色體，因此芳烴羥化酶基因位于2號染色體上，胸苷激酶基因位于17號染色體上，磷酸甘油酸激酶基因位于X染色體上，乳酸脫氫酶基因位于11號染色體上，C、D正確。(2022北京，11，2分)將黑色小鼠囊胚的內細胞團部分細胞注射到白色小鼠囊胚腔中，接受注射的囊胚發(fā)育為黑白相間的小鼠(Mc)。據此分析，下列敘述錯誤的是()A.獲得Mc的生物技術屬于核移植B.Mc表皮中有兩種基因型的細胞C.注射入的細胞會分化成Mc的多種組織D.將接受注射的囊胚均分為二，可發(fā)育成兩只幼鼠【答案】A核移植技術是將動物一個細胞的細胞核移入去核的卵母細胞中，使這個重新組合的細胞發(fā)育成新胚胎，繼而發(fā)育成動物個體的技術。故題干所述將黑色小鼠囊胚的內細胞團部分細胞注射到白色小鼠囊胚腔中，使之發(fā)育成嵌合鼠不屬于核移植，A錯誤。Mc為黑白相間的小鼠，其表皮中具有黑色和白色兩種基因型的細胞，B正確。內細胞團細胞將發(fā)育成胎兒的各種組織，C正確；利用胚胎分割技術將接受注射的囊胚均分為二，可發(fā)育成兩只幼鼠，D正確。(2020天津，1，4分)在克隆哺乳動物過程中，通常作為核移植受體細胞的是去核的()A.卵原細胞B.初級卵母細胞C.次級卵母細胞D.卵細胞【答案】CMⅡ時期的次級卵母細胞里含有促進細胞核全能性表達的物質，故克隆哺乳動物時常選用去核的MⅡ時期的次級卵母細胞作為核移植的受體細胞，C正確。(2020江蘇單科，23，3分)小鼠胚胎干細胞經定向誘導可獲得多種功能細胞，制備流程如圖所示。下列敘述錯誤的是(多選)()A.為獲得更多的囊胚，采用激素注射促進雄鼠產生更多的精子B.細胞a和細胞b內含有的核基因不同，所以全能性高低不同C.用胰蛋白酶將細胞a的膜蛋白消化后可獲得分散的胚胎干細胞D.胚胎干細胞和誘導出的各種細胞都需在CO2培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)【答案】ABC哺乳動物雄性精液中精子數量很多，不需要額外注射激素促進精子的產生，為獲得更多的囊胚，應采用激素注射促進雌鼠產生更多的卵細胞，A錯誤。細胞a、b都是由同一個受精卵經有絲分裂而來的，遺傳物質相同，兩者全能性高低不同并不是由遺傳物質不同導致的；細胞a為內細胞團細胞，分化程度較低，細胞全能性較高，將來發(fā)育成胎兒的各種組織，細胞b為滋養(yǎng)層細胞，分化程度較高，細胞全能性較低，將來發(fā)育成胎膜和胎盤，B錯誤。胰蛋白酶可以催化細胞之間的蛋白質分解，進而可獲得分散的胚胎干細胞，C錯誤。胚胎干細胞和誘導出的各種細胞需置于含95%空氣加5%CO2的混合氣體的培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)，O2是細胞代謝所必需的，CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH，D正確。(2020浙江7月選考，15，2分)下列關于病毒的敘述，錯誤的是()A.有的病毒經滅活處理后，可用于細胞工程中介導動物細胞的融合B.適當增加機體內參與免疫的細胞數量與活性，可提高對新型冠狀病毒的抵御能力C.在某人的分泌物中檢測到新型冠狀病毒，推測該病毒的增殖不依賴于宿主細胞D.用高溫高壓處理病毒使其失去感染能力，原因之一是病毒的蛋白質發(fā)生了熱變性【答案】C動物細胞工程中，可利用滅活的病毒誘導動物細胞融合，A正確；新型冠狀病毒作為病原體，可激發(fā)機體特異性免疫，適當增加機體內參與免疫的細胞數量和活性，例如注射免疫活性物質，刺激機體免疫細胞活化，可提高機體清除病原體的能力，B正確；病毒為專一性活細胞內寄生生物，只能在宿主細胞內進行增殖，C錯誤；高溫高壓滅菌的原理之一是蛋白質在高溫條件下變性，其空間結構被破壞，活性徹底喪失，使得病原體失去侵染、繁殖和致病的能力，D正確。(2018江蘇單科，22，3分)如圖為細胞融合的示意圖，下列敘述正確的是(多選)()A.若a細胞和b細胞是植物細胞，需先去分化再誘導融合B.a細胞和b細胞之間的融合需要促融處理后才能實現C.c細胞的形成與a、b細胞膜的流動性都有關D.c細胞將同時表達a細胞和b細胞中的所有基因【答案】BC植物細胞壁會阻礙細胞融合，故植物細胞融合前需先用酶解法除去細胞壁，A錯誤；細胞間的融合需在相應的誘導處理下才能完成(如電激、聚乙二醇等，動物細胞還可用滅活病毒誘導融合)，B正確；細胞融合過程出現了膜的變形，故細胞融合過程與細胞膜流動性有關，C正確；c細胞中具有a、b細胞的全部基因，但這些基因不一定能全部表達，D錯誤。(2017江蘇單科，11，2分)牛雄性胚胎中存在特異性H-Y抗原，可在牛早期胚胎培養(yǎng)液中添加H-Y單克隆抗體，篩選胚胎進行移植，以利用乳腺生物反應器進行生物制藥。下列相關敘述正確的是()A.H-Y單克隆抗體由骨髓瘤細胞分泌B.應選用原腸胚做雌雄鑒別C.鑒別后的雄性胚胎可直接做胚胎移植D.用H-Y抗原免疫母牛可獲得相應抗體【答案】D本題考查免疫調節(jié)、基因工程及胚胎工程的相關內容。單克隆抗體由雜交瘤細胞分泌，A錯誤；應選用囊胚期滋養(yǎng)層細胞做性別鑒定，B錯誤；因要利用乳腺生物反應器進行生物制藥，因此用于胚胎移植的應是鑒定后的雌性胚胎，C錯誤；用特定的抗原免疫母牛可獲得相應的抗體，D正確。知識拓展正確理解生物反應器生物反應器指用于合成藥物的轉基因動物器官。生物反應器有乳腺生物反應器、膀胱生物反應器等。乳腺生物反應器要求轉基因動物一定為雌性，膀胱生物反應器則對轉基因動物的性別無要求。(2016江蘇單科，9，2分)下列有關細胞工程的敘述，正確的是()A.PEG是促細胞融合劑，可直接誘導植物細胞融合B.用原生質體制備人工種子，要防止細胞破裂C.骨髓瘤細胞經免疫處理，可直接獲得單克隆抗體D.核移植克隆的動物，其線粒體DNA來自供卵母體【答案】D植物細胞融合前需先用酶解法去掉細胞壁，形成原生質體，再用PEG促進原生質體融合，A錯誤；人工種子是以植物組織培養(yǎng)得到的胚狀體、不定芽、頂芽和腋芽等為材料，經過人工薄膜包裝得到的種子，不用原生質體為材料，B錯誤；骨髓瘤細胞需與經免疫處理過的B淋巴細胞融合，再經篩選培養(yǎng)才能獲得單克隆抗體，C錯誤；動物核移植是將動物的一個細胞的細胞核取出，移入已經去掉細胞核的卵母細胞中，核移植克隆動物的線粒體DNA來自供卵母體。解題關鍵仔細審讀抓“關鍵詞”及相關知識的掌握是解題的關鍵。如A項植物細胞需要去細胞壁，不能“直接”融合；B項“人工種子”是用組織培養(yǎng)得到的胚狀體來制備的；C項“免疫處理”處理的不是骨髓瘤細胞。(2024廣東，17，11分)某些腫瘤細胞表面的PD-L1與細胞毒性T細胞(CTL)表面的PD-1結合能抑制CTL的免疫活性，導致腫瘤免疫逃逸。免疫檢查點療法使用單克隆抗體阻斷PD-L1和PD-1的結合，可恢復CTL的活性，用于腫瘤治療。為進一步提高療效，研究者以黑色素瘤模型小鼠為材料，開展該療法與化療的聯合治療研究。部分結果見圖。回答下列問題:(1)據圖分析，療法的治療效果最佳，推測其原因是。

(2)黑色素瘤細胞能分泌吸引某類細胞靠近的細胞因子CXCL1。為使CTL響應此信號，可在CTL中導入基因后再將其回輸小鼠體內，從而進一步提高治療效果。該基因的表達產物應定位于CTL的(答位置)，且基因導入后不影響CTL的能力。

(3)某興趣小組基于現有抗體—藥物偶聯物的思路提出了兩種藥物設計方案。方案一:將化療藥物與PD-L1單克隆抗體結合在一起。方案二:將化療藥物與PD-1單克隆抗體結合在一起。你認為方案(填“一”或“二”)可行，理由是。

【答案】(1)聯合聯合療法中活化的細胞毒性T細胞(活化的CTL)的數量最多(2)CXCL1受體表面裂解靶細胞(3)一可以使化療藥物定向作用于腫瘤細胞，實現對腫瘤細胞的選擇性殺傷解析(1)通過圖a分析得出，聯合療法腫瘤體積最小，根據圖b分析得出，聯合療法中活化的CTL數量最多，且CTL參與細胞免疫，可以作用于腫瘤細胞，因此綜合分析得出聯合療法的治療效果最佳。(2)黑色素瘤細胞能分泌細胞因子CXCL1吸引某類細胞靠近，在CTL中導入CXCL1受體基因，該基因表達后，表達產物應定位于CTL的表面，且不影響CTL裂解靶細胞的能力，這樣可以增大CTL與腫瘤細胞接近的機會，從而進一步提高治療效果。(3)將PD-L1單克隆抗體與化療藥物結合在一起，該抗體會與腫瘤細胞表面的PD-L1特異性結合，把藥物定向地帶到靶細胞所在位置，實現對腫瘤細胞的選擇性殺傷。(2023重慶，16，10分)妊娠與子宮內膜基質細胞的功能密切相關。某研究小組通過如圖所示的實驗流程獲得了子宮內膜基質細胞，以期用于妊娠相關疾病的研究。(1)手術獲得的皮膚組織需在低溫下運至實驗室，低溫對細胞中各種蛋白質的作用為。

(2)過程①中，誘導形成iPS細胞時，需提高成纖維細胞中4個基因的表達量，可采用技術將這些基因導入該細胞。這4個基因的主要作用為:M基因促進增殖，S基因和C基因控制干細胞特性，K基因抑制凋亡和衰老。若成纖維細胞形成腫瘤細胞，最有可能的原因是基因過量表達。

(3)培養(yǎng)iPS細胞時，應對所處環(huán)境定期消毒以降低細胞被污染風險?？捎米贤饩€進行消毒的是(多選)。

A.培養(yǎng)基B.培養(yǎng)瓶C.細胞培養(yǎng)室D.CO2培養(yǎng)箱(4)過程②中，iPS細胞經歷的生命歷程為。PCR技術可用于檢測子宮內膜基質細胞關鍵基因的mRNA水平，mRNA需經過才能作為PCR擴增的模板。

【答案】(1)抑制酶的活性(降低蛋白質或酶的活性)，防止蛋白質變性(維持蛋白質的結構，抑制蛋白質變性)(2)轉基因(顯微注射、病毒介導、基因工程。但是答農桿菌介導、侵染，基因槍均不對)M(3)CD(4)增殖分化(分裂分化)逆轉錄解析(1)低溫可以抑制酶的活性，防止蛋白質變性，皮膚組織在低溫下運至實驗室，可使細胞中的蛋白質維持正常的結構。(2)將外源基因導入iPS細胞(動物受體細胞)內，通常采用顯微注射法，腫瘤細胞能無限增殖，根據題干“M基因促進增殖”推測，可能是M基因過量表達，造成成纖維細胞無限增殖形成腫瘤細胞。(3)根據無菌技術要求，對細胞培養(yǎng)室和CO2培養(yǎng)箱可以采用紫外線進行消毒，而對培養(yǎng)基和培養(yǎng)瓶需要進行滅菌處理，C、D正確。(4)由圖可知，過程②中，人iPS細胞形成了體腔上皮，該過程細胞數量增加，并且細胞的形態(tài)結構和功能發(fā)生改變，所以該過程發(fā)生了細胞的分裂分化(或者增殖分化)；PCR是一項根據DNA半保留復制的原理，在體外適宜條件下，對目的基因的核苷酸序列進行大量復制的技術，其擴增的模板為DNA，若想利用PCR技術檢測子宮內膜基質細胞關鍵基因的mRNA水平，mRNA需經過逆轉錄過程形成DNA后，才可作為PCR擴增的模板。(2023湖北，22，16分)某病毒對動物養(yǎng)殖業(yè)危害十分嚴重。我國學者擬以該病毒外殼蛋白A為抗原來制備單克隆抗體，以期快速檢測該病毒，其主要技術路線如圖所示。回答下列問題:(1)與小鼠骨髓瘤細胞融合前，已免疫的脾細胞(含漿細胞)(填“需要”或“不需要”)通過原代培養(yǎng)擴大細胞數量；添加脂溶性物質PEG可促進細胞融合，該過程中PEG對細胞膜的作用是

。

(2)在雜交瘤細胞篩選過程中，常使用特定的選擇培養(yǎng)基(如HAT培養(yǎng)基)，該培養(yǎng)基對和生長具有抑制作用。

(3)單克隆抗體篩選中，將抗體與該病毒外殼蛋白進行雜交，其目的是。

(4)構建重組質粒需要使用DNA連接酶。下列屬于DNA連接酶底物的是。

【答案】(1)不需要改變細胞膜結構，使兩個細胞接觸處細胞膜的脂類分子發(fā)生疏散和重組，從而導致細胞膜相互親和，促進融合(2)未融合的親本細胞融合的具有同種核的細胞(3)篩選能分泌抗病毒外殼蛋白A單克隆抗體的雜交瘤細胞(4)④解析(1)已免疫脾細胞(含漿細胞)不需要通過原代培養(yǎng)擴大細胞數量；PEG可以改變細胞膜結構，使兩個細胞接觸處細胞膜的脂類分子發(fā)生疏散和重組，從而導致細胞膜相互親和，促進融合。(2)誘導細胞融合后，會出現雜交瘤細胞、未融合的親本細胞和融合的具有同種核的細胞，后兩種細胞在HAT培養(yǎng)基中不能生長，雜交瘤細胞可以生長。(3)雜交瘤細胞有多種，需用抗體陽性檢測篩選出能分泌抗病毒外殼蛋白A單克隆抗體的雜交瘤細胞。(4)DNA連接酶催化磷酸二酯鍵的形成，可催化一個DNA片段3'端的羥基與另一個DNA片段5'端的磷酸基團連接起來。[2022福建，21（二）]美西螈具有很強的再生能力。研究表明，美西螈的巨噬細胞在斷肢再生的早期起重要作用。為研究巨噬細胞的作用機制，科研人員制備了抗巨噬細胞表面標志蛋白CD14的單克隆抗體，具體方法如下。回答下列問題:(二)抗CD14單克隆抗體的制備流程如圖2所示:(1)步驟①和步驟⑤分別向小鼠注射和。

(2)步驟②所用的SP2/0細胞的生長特點是。

(3)吸?、壑械纳锨逡旱舰艿呐囵B(yǎng)孔中，根據抗原—抗體雜交原理，需加入進行專一抗體檢測，檢測過程發(fā)現有些雜交瘤細胞不能分泌抗CD14抗體，原因是。

(4)步驟⑥從中提取到大量的抗CD14抗體，用于檢測巨噬細胞。

【答案】(二)(1)CD14蛋白/CD14抗原分泌抗CD14抗體的雜交瘤細胞(2)能在體外無限增殖(3)CD14蛋白參與形成雜交瘤細胞的B淋巴細胞種類多，有的不能分泌抗CD14抗體(4)小鼠腹水解析(二)(1)步驟①要注射CD14蛋白(CD14抗原)可產生能分泌抗CD14抗體的已免疫的B細胞；步驟⑤向小鼠注射能分泌抗CD14抗體的雜交瘤細胞。(2)步驟②所用的SP2/0細胞為骨髓瘤細胞，其特點是能在體外無限增殖。(3)專一抗體檢測是檢測其中是否含有抗CD14蛋白的抗體，因此用CD14蛋白檢測。由于形成雜交瘤細胞的B淋巴細胞種類多，因此，有些雜交瘤細胞并不能分泌抗CD14抗體。(4)步驟⑥需從小鼠的腹水中提取抗CD14抗體。(2022海南，20，13分)以我國科學家為主的科研團隊將OSNL(即4個基因Oct4/Sox2/Nanog/Lin28A的縮寫)導入黑羽雞胚成纖維細胞(CEFs)，誘導其重編程為誘導多能干細胞(iPS)，再誘導iPS分化為誘導原始生殖細胞(iPGCs)，然后將iPGCs注射到孵化2.5天的白羽雞胚血管中，最終獲得具有黑羽雞遺傳特性的后代，實驗流程如圖?；卮鹣铝袉栴}。(1)CEFs是從孵化9天的黑羽雞胚中分離獲得的，為了獲得單細胞懸液，雞胚組織剪碎后需用處理。動物細胞培養(yǎng)通常需要在合成培養(yǎng)基中添加等天然成分，以滿足細胞對某些細胞因子的需求。

(2)體外獲取OSNL的方法有(答出1種即可)。若要在CEFs中表達外源基因的蛋白，需構建基因表達載體，載體中除含有目的基因和標記基因外，還須有啟動子和等。啟動子是識別和結合的部位，有了它才能驅動。(3)iPS細胞和iPGCs細胞的形態(tài)、結構和功能不同的根本原因是。

(4)誘導iPS細胞的技術與體細胞核移植技術的主要區(qū)別是

。(5)該實驗流程中用到的生物技術有(答出2點即可)。

【答案】(1)胰蛋白酶、膠原蛋白酶血清(2)基因文庫法、PCR技術、人工合成法(任答1種)終止子RNA聚合酶目的基因轉錄出mRNA，最終表達出所需要的蛋白質(3)基因的選擇性表達(4)誘導iPS細胞的技術是將已分化的細胞誘導為類似胚胎干細胞的一種細胞(iPS)，再誘導iPS分化為誘導原始生殖細胞(iPGCs)的技術；體細胞核移植技術是將動物一個細胞的細胞核移入去核的卵母細胞中，使這個重新組合的細胞發(fā)育成新胚胎，繼而發(fā)育成動物個體的技術(5)基因工程、動物細胞培養(yǎng)解析(1)動物細胞培養(yǎng)時，動物組織剪碎后需要用胰蛋白酶、膠原蛋白酶處理一段時間，以便獲得單個細胞。使用合成培養(yǎng)基培養(yǎng)動物細胞時，通常需要添加血清等天然成分，以滿足細胞對某些細胞因子的需求。(2)體外獲取目的基因的方法有多種，如基因文庫法、PCR技術、人工合成法?；虮磉_載體的組成包括目的基因、標記基因、啟動子、終止子等結構，啟動子是RNA聚合酶識別和結合的部位，有了啟動子才能驅動目的基因轉錄出mRNA，最終獲得所需要的蛋白質。(3)iPGCs細胞是由iPS細胞增殖、分化而來的，兩者在形態(tài)、結構和功能方面不同的根本原因是基因的選擇性表達。(4)誘導iPS細胞的技術與體細胞核移植技術存在明顯的區(qū)別，主要表現在誘導iPS細胞的技術是將已分化的細胞誘導為類似胚胎干細胞的一種細胞(iPS)，再誘導iPS分化為誘導原始生殖細胞(iPGCs)的技術；而體細胞核移植技術是將動物一個細胞的細胞核移入去核的卵母細胞中，使這個重新組合的細胞發(fā)育成新胚胎，繼而發(fā)育成動物個體的技術。(5)分析題意可知，該實驗流程中用到的生物技術有基因工程、動物細胞培養(yǎng)等技術。(2022遼寧，24，10分)某抗膜蛋白治療性抗體藥物研發(fā)過程中，需要表達N蛋白胞外段，制備相應的單克隆抗體，增加其對N蛋白胞外段特異性結合的能力。Ⅰ.N蛋白胞外段抗原制備，流程如圖1圖1(1)構建重組慢病毒質粒時，選用氨芐青霉素抗性基因作為標記基因，目的是。用脂質體將重組慢病毒質粒與輔助質粒導入病毒包裝細胞，質粒被包在脂質體(填“雙分子層中”或“兩層磷脂分子之間”)。

(2)質粒在包裝細胞內組裝出由組成的慢病毒，用慢病毒感染海拉細胞進而表達并分離、純化N蛋白胞外段。

Ⅱ.N蛋白胞外段單克隆抗體制備，流程如圖2圖2(3)用N蛋白胞外段作為抗原對小鼠進行免疫后，取小鼠脾組織用酶處理，制成細胞懸液，置于含有混合氣體的中培養(yǎng)，離心收集小鼠的B淋巴細胞，與骨髓瘤細胞進行融合。

(4)用選擇性培養(yǎng)基對融合后的細胞進行篩選，獲得雜交瘤細胞，將其接種到96孔板，進行培養(yǎng)。用技術檢測每孔中的抗體，篩選既能產生N蛋白胞外段抗體，又能大量增殖的單克隆雜交瘤細胞株，經體外擴大培養(yǎng)，收集，提取單克隆抗體。

(5)利用N蛋白胞外段抗體與藥物結合，形成，實現特異性治療。

【答案】(1)便于重組DNA分子的篩選雙分子層中(2)包膜、衣殼、N蛋白胞外段mRNA(3)胰蛋白酶、膠原蛋白CO2培養(yǎng)箱(4)克隆化抗原—抗體雜交細胞培養(yǎng)液(5)抗體—藥物偶聯物(ADC)解析(1)重組質粒中的標記基因是用來篩選重組DNA分子的。質粒DNA為極性分子，需包在脂質體雙分子層中。(2)題述慢病毒由包膜、衣殼、N蛋白胞外段mRNA組成。(3)制備雜交瘤細胞時，需取已免疫的小鼠脾組織，并用胰蛋白酶、膠原蛋白酶處理，制成細胞懸液，在含有混合氣體的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，離心收集B淋巴細胞，再與骨髓瘤細胞進行融合。(4)用選擇性培養(yǎng)基對融合后的細胞進行篩選，獲得雜交瘤細胞，將其接種到多孔板上進行克隆化培養(yǎng)。用抗原—抗體雜交技術檢測每孔中的抗體，篩選既能產生N蛋白胞外段抗體，又能大量增殖的單克隆雜交瘤細胞株，經體外擴大培養(yǎng)，從細胞培養(yǎng)液中提取單克隆抗體。(5)利用N蛋白胞外段抗體與藥物結合，形成抗體—藥物偶聯物(ADC)，實現特異性治療。(2021湖南，22，15分)M基因編碼的M蛋白在動物A的肝細胞中特異性表達?，F設計實驗，將外源DNA片段F插入M基因的特定位置，再通過核移植、胚胎培養(yǎng)和胚胎移植等技術獲得M基因失活的轉基因克隆動物A，流程如圖所示?；卮鹣铝袉栴}:(1)在構建含有片段F的重組質粒過程中，切割質粒DNA的工具酶是，這類酶能將特定部位的兩個核苷酸之間的斷開。

(2)在無菌、無毒等適宜環(huán)境中進行動物A成纖維細胞的原代和傳代培養(yǎng)時，需要定期更換培養(yǎng)液，目的是。

(3)與胚胎細胞核移植技術相比，體細胞核移植技術的成功率更低，原因是。從早期胚胎中分離獲得的胚胎干細胞，在形態(tài)上表現為(答出兩點即可)，功能上具有。

(4)鑒定轉基因動物:以免疫小鼠的淋巴細胞與骨髓瘤細胞進行融合，篩選融合雜種細胞，制備M蛋白的單克隆抗體。簡要寫出利用此抗體確定克隆動物A中M基因是否失活的實驗思路

。

【答案】(1)限制酶(限制性核酸內切酶)磷酸二酯鍵(2)清除代謝產物，防止細胞代謝產物積累對細胞自身造成危害(3)體細胞分化程度高，恢復其全能性十分困難細胞體積小，細胞核大，核仁明顯發(fā)育的全能性(4)B提取此克隆動物的肝臟蛋白，作為抗原，與M蛋白的單克隆抗體進行抗原—抗體雜交，若未出現雜交帶，證明M基因已失活解析(1)限制酶識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸間的磷酸二酯鍵斷開。(2)動物細胞體外培養(yǎng)需要無菌、無毒等適宜環(huán)境，因此動物細胞培養(yǎng)的培養(yǎng)液及所有培養(yǎng)用具使用前應進行無菌處理；通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素，以防培養(yǎng)過程中的污染。此外，應定期更換培養(yǎng)液，以便清除代謝產物，防止代謝產物積累對細胞自身造成危害。(3)哺乳動物核移植分為胚胎細胞核移植和體細胞核移植，其中胚胎細胞核移植較易成功，因為與胚胎細胞相比，動物體細胞分化程度高，恢復其全能性十分困難。胚胎干細胞簡稱ES細胞，是由早期胚胎或原始性腺中分離出來的一類細胞。ES細胞具有胚胎細胞的特性，在形態(tài)上表現為體積小、細胞核大、核仁明顯；在功能上具有發(fā)育的全能性。(4)制備單克隆抗體時，應將從免疫小鼠中得到的B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合并篩選出可大量產生M蛋白抗體的雜交瘤細胞。為確定克隆動物A中M基因是否失活，可利用抗原—抗體特異性結合的原理，將制備的M蛋白的單克隆抗體與轉基因動物肝臟中提取的蛋白質混合，觀察是否產生雜交帶，若未出現雜交帶，說明M基因已失活。(2020課標全國Ⅰ，38，15分)為研制抗病毒A的單克隆抗體，某同學以小鼠甲為實驗材料設計了以下實驗流程?；卮鹣铝袉栴}:(1)上述實驗前必須給小鼠甲注射病毒A，該處理的目的是。

(2)寫出以小鼠甲的脾臟為材料制備單細胞懸液的主要實驗步驟:。

(3)為了得到能產生抗病毒A的單克隆抗體的雜交瘤細胞，需要進行篩選。圖中篩選1所采用的培養(yǎng)基屬于，使用該培養(yǎng)基進行細胞培養(yǎng)的結果是。圖中篩選2含多次篩選，篩選所依據的基本原理是。

(4)若要使能產生抗病毒A的單克隆抗體的雜交瘤細胞大量增殖，可采用的方法有(答出2點即可)。

【答案】(1)誘導小鼠甲產生能夠分泌抗病毒A抗體的B淋巴細胞(2)取小鼠甲脾臟剪碎，用胰蛋白酶處理使其分散成單個細胞，加入培養(yǎng)液制成單細胞懸液(3)選擇培養(yǎng)基只有雜交瘤細胞能夠生存抗原與抗體的反應具有特異性(4)將雜交瘤細胞注射到小鼠腹腔內增殖；將雜交瘤細胞在體外培養(yǎng)解析(1)結合題干信息分析題圖可推斷，給小鼠甲注射病毒A的目的是讓小鼠甲產生免疫反應，以獲得能夠分泌抗病毒A抗體的B淋巴細胞。(2)以小鼠甲的脾臟為材料制備單細胞懸液的主要實驗步驟:取小鼠甲脾臟，用剪刀剪碎，加入胰蛋白酶處理，使其分散成單個細胞，加入培養(yǎng)液制成單細胞懸液。(3)分析題圖可知，圖中篩選1所采用的培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基，使用該培養(yǎng)基進行細胞培養(yǎng)的結果是未融合的親本細胞和融合的具有同種細胞核的細胞都會死亡，只有融合的雜種細胞才能生存，即由B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合的雜交瘤細胞才能生存。圖中篩選2所依據的基本原理是抗原與抗體的反應具有特異性。(4)若要使能產生抗病毒A的單克隆抗體的雜交瘤細胞大量增殖，可將雜交瘤細胞注射到小鼠腹腔內增殖，也可以將雜交瘤細胞在體外培養(yǎng)。(2018課標全國Ⅲ，38，15分)2018年《細胞》期刊報道，中國科學家率先成功地應用體細胞對非人靈長類動物進行克隆，獲得兩只克隆猴——“中中”和“華華”。回答下列問題:(1)“中中”和“華華”的獲得涉及核移植過程，核移植是指。通過核移植方法獲得的克隆猴，與核供體相比，克隆猴體細胞的染色體數目(填“減半”“加倍”或“不變”)。

(2)哺乳動物的核移植可以分為胚胎細胞核移植和體細胞核移植，胚胎細胞核移植獲得克隆動物的難度(填“大于”或“小于”)體細胞核移植，其原因是。

(3)在哺乳動物核移植的過程中，若分別以雌性個體和雄性個體的體細胞作為核供體，通常，所得到的兩個克隆動物體細胞的常染色體數目(填“相同”或“不同”)，性染色體組合(填“相同”或“不同”)。

【答案】(1)將動物的一個細胞核，移入一個已去掉細胞核的卵母細胞不變(2)小于胚胎細胞分化程度低，恢復全能性相對容易(3)相同不同解析(1)核移植是指將動物的一個細胞核，移入一個已經去掉細胞核的卵母細胞中，使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎，并最終發(fā)育為動物個體?？寺『矬w細胞的染色體數等于重組細胞中的染色體數，等于供核細胞中的染色體數。(2)哺乳動物胚胎細胞分化程度低，恢復全能性相對容易，而哺乳動物體細胞分化程度高，恢復全能性十分困難，因此，動物體細胞核移植獲得克隆猴的難度也就明顯高于胚胎細胞核移植。(3)哺乳動物雌性個體和雄性個體的體細胞中常染色體數目相同，雌性性染色體組成為XX，雄性性染色體組成為XY，因此題中所得的兩個克隆動物體細胞常染色體數目相同，性染色體組合不同。(2017課標全國Ⅲ，38，15分)編碼蛋白甲的DNA序列(序列甲)由A、B、C、D、E五個片段組成，編碼蛋白乙和丙的序列由序列甲的部分片段組成，如圖1所示?；卮鹣铝袉栴}:(1)現要通過基因工程的方法獲得蛋白乙，若在啟動子的下游直接接上編碼蛋白乙的DNA序列(TTCGCTTCT……CAGGAAGGA)，則所構建的表達載體轉入宿主細胞后不能翻譯出蛋白乙，原因是。

(2)某同學在用PCR技術獲取DNA片段B或D的過程中，在PCR反應體系中加入了DNA聚合酶、引物等，還加入了序列甲作為，加入了作為合成DNA的原料。

(3)現通過基因工程方法獲得了甲、乙、丙三種蛋白，要鑒定這三種蛋白是否具有刺激T淋巴細胞增殖的作用，某同學做了如下實驗:將一定量的含T淋巴細胞的培養(yǎng)液平均分成四組，其中三組分別加入等量的蛋白甲、乙、丙，另一組作為對照，培養(yǎng)并定期檢測T淋巴細胞濃度，結果如圖2。①由圖2可知:當細胞濃度達到a時，添加蛋白乙的培養(yǎng)液中T淋巴細胞濃度不再增加，此時若要使T淋巴細胞繼續(xù)增殖，可采用的方法是。細胞培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)箱中通常要維持一定的CO2濃度，CO2的作用是。

②僅根據圖1、圖2可知，上述甲、乙、丙三種蛋白中，若