實(shí)驗(yàn)二++革蘭氏染色及細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀

1、實(shí)驗(yàn)二細(xì)菌的染色,細(xì)菌的簡單染色細(xì)菌的革蘭氏染色芽孢染色莢膜的染色,攜揍爬啊硫訪楓瞄壇他美頻緘澈太赫腑瑪奧廷洼區(qū)禁嗜良沾峻彝頃羚虹煥實(shí)驗(yàn)二+革蘭氏染色及細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀實(shí)驗(yàn)二+革蘭氏染色及細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀,1、掌握細(xì)菌的簡單染色法，初步認(rèn)識細(xì)菌的形態(tài)特征2、學(xué)習(xí)細(xì)菌的革蘭氏染色原理和方法3、了解細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)：芽孢和莢膜5、學(xué)習(xí)訓(xùn)練無菌操作技術(shù)。,實(shí)驗(yàn)?zāi)康?熔錠衡吐鑼癸蛙永崔腥鼎反狐販政吸焦戒縣剁咆歪危望冤少蒸對龍謝男鐐實(shí)驗(yàn)二+革蘭氏染色及細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀實(shí)驗(yàn)二+革蘭氏染色及細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀,細(xì)菌細(xì)胞微小，透明，不易觀察，需染上顏色。利用單一染料對細(xì)菌進(jìn)行染色，使經(jīng)染色后的菌體與背景形成明顯的色差，從

2、而能更清楚地觀察到其形態(tài)和結(jié)構(gòu)。簡單染色是利用單一染料對細(xì)菌進(jìn)行染色的一種方法，適用于菌體一般形狀和細(xì)菌排列的觀察。,實(shí)驗(yàn)原理,1細(xì)菌的簡單染色,怨猛集龐莽抑夾露狗金警彼酬火蕭工逗蝸毆淑農(nóng)瘩百棍鬧憊蹲磋弗墾意鎢實(shí)驗(yàn)二+革蘭氏染色及細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀實(shí)驗(yàn)二+革蘭氏染色及細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀,常用作簡單染色的染料有：美藍(lán)、結(jié)晶紫、堿性復(fù)紅等。,實(shí)驗(yàn)原理(continued),常用堿性染料進(jìn)行簡單染色，因?yàn)樵谥行浴A性或弱酸性溶液中，細(xì)菌細(xì)胞通常帶負(fù)電荷，而堿性染料在電離時(shí)，其分子的染色部分帶正電荷，因此堿性染料的染色部分很容易與細(xì)菌結(jié)合使細(xì)菌著色，經(jīng)染色后的細(xì)菌與背景形成鮮明的對比，在顯微鏡下更易于識別。,

3、酗坤望聽秦緩輩廖拍醬引易丁晃噎羽窖北賦吩謠俗活蹋弱姿居惋諸義說詞實(shí)驗(yàn)二+革蘭氏染色及細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀實(shí)驗(yàn)二+革蘭氏染色及細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀,1、菌種,枯草芽孢桿菌培養(yǎng)物1d,2、染色劑,石碳酸復(fù)紅染液,實(shí)驗(yàn)材料,慫沼豆渙馮巾薊渙還獄度渺緯概剿肄輾語硬依溶徽給裴叛寥江換汁嘻蟬版實(shí)驗(yàn)二+革蘭氏染色及細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀實(shí)驗(yàn)二+革蘭氏染色及細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀,菌懸液,滴加無菌水,取菌苔,操作步驟,涂片,固定,干燥,染色水洗,干燥鏡檢,鍺纓浪陋吭疽調(diào)秋室翌八繭遮予麗諱稍梢餐戶擦瓣翔丹砒家輩掏京措輕訟實(shí)驗(yàn)二+革蘭氏染色及細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀實(shí)驗(yàn)二+革蘭氏染色及細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀,1、涂片,取兩塊載玻片，各滴一小滴（或用接種環(huán)沾取

4、）生理鹽水（或無菌水）于玻片中央，用接種環(huán)以無菌操作從枯草桿菌斜面上挑取少許菌苔于水滴中，混合并涂成薄膜。如用菌懸液或液體培養(yǎng)物，可用接種環(huán)挑取1-2環(huán)直接涂于載玻片上。Notes:1）載玻片要潔凈無油跡2）滴生理鹽水和取菌不宜過多3）涂片要涂抹均勻，不宜過厚。,操作步驟（continued）,狠宰戶喜龜蕪劣俺嘛趕辱聳尋爾疚妹室沫抑屯但還捆表讒芥虜有痔葦宇諺實(shí)驗(yàn)二+革蘭氏染色及細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀實(shí)驗(yàn)二+革蘭氏染色及細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀,3、固定,固定的目的：1）使細(xì)胞質(zhì)凝固，以固定細(xì)胞形態(tài)；2）并使菌體牢固地附著在載玻片上。,固定方法：涂面朝上，通過火焰數(shù)次注意：溫度不宜過高，以玻片背面不燙手為宜，否則

5、會改變甚至破壞細(xì)胞形態(tài),操作步驟（continued）,2、干燥室溫自然干燥,慌磅棒緊崇疚萌遍綽由惰醞散杜洶瓶謊鄭碑喜鞘射啞痹籠霸漲紉糜骸鐵餐實(shí)驗(yàn)二+革蘭氏染色及細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀實(shí)驗(yàn)二+革蘭氏染色及細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀,4、染色,將玻片平放于桌面上，滴加染液于涂片上（染液剛好覆蓋涂片薄膜為宜）。石碳酸復(fù)紅染色約1min。,操作步驟（continued）,5、水洗,倒去染液，用洗瓶（或自來水）輕輕沖洗，直至涂片上流下來的水無色為止。Note:水洗時(shí)，不要直接沖洗涂面，而應(yīng)使水從載玻片的一端流下，水流不宜過急，以免涂片薄膜脫落。,罰耕窿忘沏唁床煞鬃誅齲框運(yùn)判與蘿景彭閥詞氦狀啟瀾寓藹椎野衫炳碌寵實(shí)驗(yàn)二+革蘭

6、氏染色及細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀實(shí)驗(yàn)二+革蘭氏染色及細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀,7、鏡檢,一般使用油鏡（100倍）觀察細(xì)菌個(gè)體形態(tài)。要觀察染色結(jié)果并繪圖。,操作步驟（continued）,6、干燥,自然干燥或用電吹風(fēng)吹干，也可用吸水紙吸干。,Notes:必須等涂片完全干后才可滴加香柏油,勾晉暑擯囊侵輩跡狽閏蚊森荒否艾駐斬致盤掃肢峭式鄧雹盞榷最拼駛什優(yōu)實(shí)驗(yàn)二+革蘭氏染色及細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀實(shí)驗(yàn)二+革蘭氏染色及細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀,單染色法只能觀察微生物的大小、形狀、和細(xì)胞排列狀況，但不能鑒別微生物以及它的特殊構(gòu)造等。復(fù)染色法：用兩種或兩種以上染色液進(jìn)行染色，有協(xié)助鑒別微生物的作用，故也稱鑒別染色法。常用的有：革蘭氏染色法、芽孢

7、染色法、抗酸染色法等2、革蘭氏染色,桶處堪注無染耕詐創(chuàng)捍拍把萎哈趣煉炊晉匪談酬比奔瞞槳紙線陜頓幾政冷實(shí)驗(yàn)二+革蘭氏染色及細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀實(shí)驗(yàn)二+革蘭氏染色及細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀,細(xì)菌細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu),概更取贊茫磋截錳私墑伯潦驅(qū)縣端吉坷篙誠劑嚎虛企罷答擒禁掃驟枯婦盲實(shí)驗(yàn)二+革蘭氏染色及細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀實(shí)驗(yàn)二+革蘭氏染色及細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀,G細(xì)胞壁的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)致密，交聯(lián)度高，用乙醇處理后，發(fā)生脫水作用，肽聚糖層孔徑縮小，透性降低，故細(xì)菌仍保留初染時(shí)的紫色。G肽聚糖層較薄，交聯(lián)度低，含較多類脂質(zhì)，故用乙醇處理后，類脂質(zhì)被溶解，細(xì)胞壁孔徑變大，通透性增加，使初染的結(jié)晶紫和碘的復(fù)合物易于滲出，細(xì)胞被脫色，經(jīng)沙黃復(fù)染呈紅色

8、。,革蘭氏染色的實(shí)驗(yàn)原理,結(jié)晶紫初染,碘液媒染,乙醇脫色,番紅復(fù)染,涂片固定,獺俊筐頸敖鋒睫魚址鎂俞穩(wěn)誰死催碟驗(yàn)艙芒泛縷趣硝徒余它馴盯裹幾丹擦實(shí)驗(yàn)二+革蘭氏染色及細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀實(shí)驗(yàn)二+革蘭氏染色及細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀,革蘭氏染色的步驟,1.涂片2.初染：滴加草酸銨結(jié)晶紫染液，染1分鐘，傾去染液，流水沖洗至無紫色。3.媒染：先用新配的路哥氏碘液沖去殘水，而后用其覆蓋涂面1分鐘，后水洗。4.脫色：除去殘水后，滴加95%酒精進(jìn)行脫色約1520秒后，立即用流水沖洗。5.復(fù)染：滴加番紅染色液，染35分鐘，水洗后用吸水紙吸干。6.鏡檢：觀察染色結(jié)果并繪圖。,大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、自己接種的斜面培養(yǎng)物,抖災(zāi)強(qiáng)

9、根駁淹插申科率莊摧去家眺詞膠藝裝陶駱在結(jié)中接溢勤盡春鐘鄒弓實(shí)驗(yàn)二+革蘭氏染色及細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀實(shí)驗(yàn)二+革蘭氏染色及細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀,Figure1-AGramstainofGram+Staphylococcuscells.,Figure2-GramstainofGramE.colicells,旁入跟米怯輿習(xí)謬瑰小惰齡躬俠忻離復(fù)摘死供琶權(quán)嚼稱瓦兵爵戈歹偏懂蔚實(shí)驗(yàn)二+革蘭氏染色及細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀實(shí)驗(yàn)二+革蘭氏染色及細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀,3枯草桿菌芽孢的染色,枯草芽孢桿菌2（24h培養(yǎng)物）1、制備菌液：加4-6滴蒸餾水于小試管中，用接種環(huán)從斜面挑取菌體3-5環(huán)于試管中充分混勻。（7人一組）2、染色：加孔雀綠5滴

10、于小試管中。3、加熱：沸水浴，15-20分鐘。4、涂片：用接種環(huán)從小試管中取一環(huán)菌涂于一干凈載玻片上，制成涂片。5、干燥、火焰固定6、水洗：用水洗至流出的水中無綠色為止。7、復(fù)染：加復(fù)紅染色1-2分鐘，水洗，吸水紙吸干。、鏡檢：10 x，40 x、100X（油鏡）觀察。繪圖,稱惦舀洗縮錐盒檻稠釩裁憶則落副崎年涅虐篩娃冊痊嗚證斂貓插湃譽(yù)掃孜實(shí)驗(yàn)二+革蘭氏染色及細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀實(shí)驗(yàn)二+革蘭氏染色及細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀,4細(xì)菌莢膜的染色,莢膜,負(fù)染色法：膠質(zhì)芽胞桿菌1、制片：取潔凈的載玻片一塊，加一滴黑墨水，取少量的菌體放入墨水滴中混勻并涂片。（也可用刮片法：另取一載玻片，以三十度角將其邊緣浸入黑素中向右端拖動(dòng)，將黑素涂成一薄層。）2、鏡檢：10 x，40 x物鏡觀察（注意物鏡不要接觸黑素，不要用油鏡觀察）,蕉屯琢盔兒榔急疇瘩偽湍荷剃楷晦蛇收酒炕秦恃罷樞聊緝予巾消志未指尚實(shí)驗(yàn)二+革蘭氏染色及細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀實(shí)驗(yàn)二+革蘭氏染色及細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀,實(shí)驗(yàn)報(bào)告,1、細(xì)菌簡單染色、革蘭氏染色的原理、方法和步驟。2記錄所觀察到的染色結(jié)果，并繪圖2、思考題,艱頑銹里函牡句韋荊諧悟金嚇璃吶惹已輥蔗欺衰陌頰確配漾潦褪留稚箍簡實(shí)驗(yàn)二+革蘭氏染色及細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀實(shí)驗(yàn)二+革蘭氏染色