《基因工程的基本操作程序》第2、3步

1、1.2基因工程的基本操作程序,復(fù)習(xí)提問,1.基因工程的基本操作程序的四個(gè)步驟 2.目的基因主要指什么?也可以是什么? 3.獲得目的基因常用的方法。 4.基因文庫(kù)主要包括哪兩種? 5.PCR技術(shù)的原理、條件 6.PCR與DNA復(fù)制的區(qū)別（表格）,PCR技術(shù)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),原理： 條件：,PCR擴(kuò)增儀,DNA雙鏈復(fù)制的基本原理,四種脫氧核苷酸,一對(duì)引物,熱穩(wěn)定DNA聚合酶(Taq酶）,DNA的兩條鏈為模板,溫度控制,PCR技術(shù)與DNA復(fù)制的比較,DNA復(fù)制,PCR技術(shù),解旋酶催化,DNA在高溫作用下變性解旋,細(xì)胞內(nèi)（主要在細(xì)胞核內(nèi)）,細(xì)胞外（主要在PCR擴(kuò)增儀內(nèi)）,DNA解旋酶、普通的DNA 聚合

2、酶等,耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）,細(xì)胞內(nèi)溫和條件,需控制溫度，在較高溫度下進(jìn)行,區(qū) 別,解旋 方式,場(chǎng)所,酶,溫度 條件,前提,有一段已知的目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成引物,聯(lián)系,模板：均需要脫氧核苷酸鏈作為模板進(jìn)行物質(zhì)合成 原料：均為四種脫氧核苷酸,PCR技術(shù)擴(kuò)增過程,a、DNA變性（90-95）：雙鏈DNA模板 在熱作用下， 斷裂，形成_,b、復(fù)性（55-60）：系統(tǒng)溫度降低，引物 與DNA模板結(jié)合，形成局部_。,c、延伸（70-75）：在Taq酶的作用下，從 引物的5端3端延伸，合成與模板互補(bǔ) 的_。,氫鍵,單鏈DNA,雙鏈,DNA鏈,1.用一定的_切割 質(zhì)粒，使其出現(xiàn)

3、一個(gè)切 口，露出_。 2.用_切斷目 的基因，使其產(chǎn)生_ _。, 核心,3.將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的_處， 再加入適量_，形成了一個(gè)重組 DNA分子（重組質(zhì)粒）,限制酶,黏性末端,同一種限制酶,的黏性末端,切口,DNA連接酶,相同,(二)基因表達(dá)載體的構(gòu)建,基因表達(dá)載體的構(gòu)建核心,質(zhì)粒,DNA分子,一個(gè)切口 兩個(gè)黏性末端,兩個(gè)切口 獲得目的基因,DNA 連接酶,重組DNA分子（重組質(zhì)粒）,同一種 限制酶,目的基因與運(yùn)載體的結(jié)合過程，實(shí)際上是不同來源的基因重組的過程。,科學(xué)家在培育抗蟲棉時(shí)，經(jīng)過了許多復(fù)雜的過程和不懈的努力，才獲得成功。 起初把蘇云金芽孢桿菌的抗蟲基因插入載體質(zhì)粒中，然后導(dǎo)

4、入棉花的受精卵中，結(jié)果抗蟲基因在棉花體內(nèi)沒有表達(dá)。 然后在插入抗蟲基因的質(zhì)粒中插入啟動(dòng)子(抗蟲基因首端)，導(dǎo)入棉花受精卵，長(zhǎng)成的棉花植株還是沒有抗蟲能力?？茖W(xué)家又在有啟動(dòng)子、抗蟲基因的質(zhì)粒中插入終止子(抗蟲基因末端)，導(dǎo)入棉花受精卵，結(jié)果成長(zhǎng)的植株，有了抗蟲能力。,資 料:,基因表達(dá)載體的組成：,目的：使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時(shí)使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。,(三)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞,借鑒細(xì)菌或病毒侵染細(xì)胞的途徑。,轉(zhuǎn)化,目的基因進(jìn)入_內(nèi)，并且在 受體細(xì)胞內(nèi)維持_和_的過程,受體細(xì)胞,穩(wěn)定,表達(dá),方法,導(dǎo)入植物細(xì)胞,導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞,導(dǎo)入微生物細(xì)胞,農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法

5、,基因槍法,花粉管通道法,顯微注射法, Ca離子處理法,(三)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞,目的基因插入Ti質(zhì)粒的T-DNA上 農(nóng)桿菌 導(dǎo)入植物細(xì)胞 整合到受體細(xì)胞的染色體上 目的基因的遺傳特性得以維持穩(wěn)定和表達(dá),1.農(nóng)桿菌特點(diǎn)：易感染雙子葉植物和裸子植物。Ti質(zhì)粒的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞的染色體上,2.轉(zhuǎn)化,1.下表關(guān)于基因工程中有關(guān)基因操作 的名詞及對(duì)應(yīng)的內(nèi)容，正確的組合是,2、下列屬于獲取目的基因的方法的是( ) 利用mRNA反轉(zhuǎn)錄形成從基因組文庫(kù)中提取 從受體細(xì)胞中提取 利用PCR技術(shù) 利用DNA轉(zhuǎn)錄 人工合成 A. B. C. D.,3.細(xì)菌的質(zhì)粒分子帶有一個(gè)抗菌素抗性基因，該抗性基因

6、在基因工程中的主要作用是 A提高受體細(xì)胞在自然環(huán)境中的耐藥性 B有利于對(duì)目的基因是否導(dǎo)入進(jìn)行檢測(cè) C增加質(zhì)粒分子的分子量 D便于與外源基因連接 4. 有關(guān)基因工程的敘述正確的是 A限制酶只在獲得目的基因時(shí)才用 B重組質(zhì)粒的形成是在細(xì)胞內(nèi)完成的 C質(zhì)粒都可作為運(yùn)載體 D蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)可為合成目的基因提供資料,5.哪項(xiàng)不是基因表達(dá)載體的組成部分( ) A.啟動(dòng)子 B.終止密碼 C.標(biāo)記基因 D.目的基因 6.下列哪項(xiàng)不是將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法( ) A基因槍法 B顯微注射法 C.農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 D花粉管通道法,胰島素是治療糖尿病的特效藥，長(zhǎng)期以來只能依靠從豬、牛等動(dòng)物的胰腺中提取，100Kg胰腺只能提取4-5g的胰島素，其產(chǎn)量之低和價(jià)格之高可想而知。 假如讓你用基因工程的方法使大腸桿菌生產(chǎn)出人的胰島素，想一想，如何設(shè)計(jì)？,嘗試設(shè)計(jì),(四)目的基因的檢測(cè)與鑒定,檢查是否成功,檢測(cè),鑒定,檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物