實(shí)驗(yàn)十一多管發(fā)酵法測(cè)定水中大腸菌群.ppt

1、多管發(fā)酵法測(cè)定水中大腸菌群,考查內(nèi)容： 一、預(yù)習(xí)報(bào)告（包括提問） 二、操作（無菌操作，隨機(jī)抽看） 三、實(shí)驗(yàn)報(bào)告,實(shí)驗(yàn)十一(綜合實(shí)驗(yàn)）,多管發(fā)酵法測(cè)定水中大腸菌群,一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?二、實(shí)驗(yàn)原理 三、實(shí)驗(yàn)材料 四、實(shí)驗(yàn)步驟 五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告,一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1、學(xué)習(xí)測(cè)定水中大腸菌群數(shù)量的多管發(fā)酵法。 2、了解大腸菌群的數(shù)量在飲水中的重要性。,發(fā)酵法： 又稱多管發(fā)酵法或三步發(fā)酵法 1) 初發(fā)酵（推測(cè)試驗(yàn)）： 將不同稀釋度的水樣，分別接種于含有乳糖等糖類的培養(yǎng)液中（3倍或1倍乳糖液），經(jīng)37 C培養(yǎng)24 h，觀察產(chǎn)酸產(chǎn)氣情況，培養(yǎng)基內(nèi)加有溴甲酚紫作為PH指示劑，細(xì)菌產(chǎn)酸后，培養(yǎng)基即由原來的紫色變?yōu)辄S色，以初步

2、判斷是否有大腸菌群存在。,二、實(shí)驗(yàn)原理,2）平皿分離（證實(shí)試驗(yàn)）,水中除大腸菌群外，尚有其它細(xì)菌可能引起糖類發(fā)酵，因此需要進(jìn)一步證實(shí)。 將初發(fā)酵管中已發(fā)酵的菌液接種于伊紅美蘭培養(yǎng)基，37 C培養(yǎng)24 h，根據(jù)菌落特征（帶核心的、有金屬光澤的深紫色菌落），挑取可能為大腸菌群的菌落制片，經(jīng)革蘭氏染色，進(jìn)一步證實(shí)是否為大腸菌群。,3） 復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)(完成實(shí)驗(yàn)）,將上述可能為大腸菌群的菌落再次轉(zhuǎn)接入1倍乳糖培養(yǎng)液中，經(jīng)37 C培養(yǎng)24 h，產(chǎn)酸產(chǎn)氣者即最后確證為存在大腸菌群。 產(chǎn)酸、產(chǎn)氣分別記為陽性反應(yīng)，不產(chǎn)酸、產(chǎn)氣則記為陰性反應(yīng)； 根據(jù)陽性管數(shù)量，查表求得水體大腸菌群的數(shù)量。,三、實(shí)驗(yàn)材料,1、培養(yǎng)基

3、： 乳糖蛋白胨發(fā)酵管（內(nèi)有倒置小套管），三倍濃縮乳糖蛋白胨發(fā)酵管（瓶）（內(nèi)有倒置小套管），伊紅美藍(lán)瓊脂平板，滅菌水。 2、儀器或其他用具： 載玻片，滅菌帶玻璃塞空瓶，滅菌吸管，滅菌試管等。,四、操作步驟,1水樣的采取 實(shí)驗(yàn)室提供水樣 2河水的檢查 （1）初（步）發(fā)酵實(shí)驗(yàn) 水樣的稀釋： 10-1與10-2 接種：分別吸取1ml 10-2 、 10-1和原水樣接入裝有10ml普通濃度乳糖蛋白胨發(fā)酵管 ；另取10ml原水樣接入裝有5ml三倍濃縮乳糖蛋白胨發(fā)酵管 ，混勻后，37 培養(yǎng)24 h，24 h未產(chǎn)氣的繼續(xù)培養(yǎng)48 h。,（2）平板分離 將經(jīng)24 h和48 h培養(yǎng)后產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管，分別劃線接種于伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，再于37 培養(yǎng)1824 h，將符合下列特征的菌落進(jìn)行染色鏡檢。 深紫黑色，有金屬光澤； 紫黑色，不帶或略帶金屬光澤； 淡紫紅色，中心顏色較深。,（3）復(fù)發(fā)酵試驗(yàn) 將鏡檢為革蘭氏陰性無芽孢桿菌的菌株重復(fù)初步發(fā)酵試驗(yàn)。并根據(jù)初發(fā)酵管試驗(yàn)的陽性管查表，即得大腸菌群數(shù)。,圖1 多管發(fā)酵測(cè)定水中大腸菌群的操作步驟和結(jié)果解釋,五、思考題,1.實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)告 河水水樣：陽性結(jié)果記“”，陰性結(jié)果記“”。 查表6獲得每升水樣中總大腸菌群是多少？ 2.思考題