《倒置熒光顯微鏡》PPT課件.ppt

1、倒置熒光顯微鏡操作及注意事項(xiàng),李玉紅,顯微鏡部件及名稱,顯微鏡機(jī)體,明視場(chǎng)(BF)鏡檢,關(guān)鍵點(diǎn)： 從光路中卸下其它形式觀察需要的所有光學(xué)組件，聚光器調(diào)節(jié)好（調(diào)節(jié)聚焦和對(duì)中），轉(zhuǎn)動(dòng)孔徑光闌調(diào)節(jié)好像的清晰度。,1，復(fù)位 1） 逆時(shí)針轉(zhuǎn)動(dòng)，松開透射照明器中的“聚光器再聚焦指緊螺釘”。 2） 把“目鏡筒轉(zhuǎn)盤”設(shè)置到O位。 3） 把顯微鏡右側(cè)的“中間放大倍數(shù)刻度盤”打到1X。 4） 逆時(shí)針轉(zhuǎn)動(dòng)，松開顯微鏡右側(cè)粗微調(diào)旋鈕后面的“物鏡再聚焦定位環(huán)”。,2. 打開透射照明器 1） 把電源后部的“外部開關(guān)”打到開的位置。 2） 把電源“電源開關(guān)”打開。（把開關(guān)撥至） 3） 按下顯微鏡左側(cè)的“照明器開關(guān)”接通燈泡

2、。 3. 調(diào)節(jié)燈泡亮度保證色彩真實(shí)。 1） 把顯微鏡左側(cè)的“亮度調(diào)節(jié)盤”設(shè)置成12V100W。 2） 把透射照明器中的“NCB11濾色片”插入光路中。 3） 把透射照明器中的“ND4濾色片”插入光路中。 4. 調(diào)節(jié)光路 1） 把10X物鏡轉(zhuǎn)到光路中。 2） 把顯微鏡右側(cè)的“光路轉(zhuǎn)換盤”轉(zhuǎn)到1的位置。（100%光到觀察口） 3） 向上推透射照明器上的“視場(chǎng)光闌桿”完全打開視場(chǎng)光闌。 4） 將系統(tǒng)聚光器上的“孔徑光闌桿”轉(zhuǎn)至右側(cè)極限處把“孔徑光闌”完全打開。 5） 轉(zhuǎn)動(dòng)聚光器調(diào)焦旋鈕把聚光器調(diào)至最低位置。 5. 明視場(chǎng)觀察時(shí)對(duì)顯微鏡的調(diào)整 1） 把“聚光器轉(zhuǎn)盤”轉(zhuǎn)到A位置。,6 調(diào)節(jié)視度及瞳距 1

3、）將顯微鏡前部的“攝影取景框轉(zhuǎn)盤”逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)，使 攝影取景框進(jìn)入光路。 2）用左眼對(duì)著左側(cè)目鏡，轉(zhuǎn)動(dòng)目鏡 “屈光度調(diào)節(jié)環(huán)”， 使取景框中的雙十字線清晰成像。 3）用右眼對(duì)著右側(cè)目鏡，轉(zhuǎn)動(dòng)目鏡 “屈光度調(diào)節(jié)環(huán)”， 使取景框中的雙十字線清晰成像。 4）將顯微鏡前部的“攝影取景框轉(zhuǎn)盤”順時(shí)針旋轉(zhuǎn)，使 其退出光路。 5）調(diào)節(jié)目鏡瞳距，將兩目鏡視場(chǎng)所見的影像重合在一起。 7. 調(diào)焦 1）將樣品放置載物臺(tái)中。 2）轉(zhuǎn)動(dòng)同軸粗微調(diào)旋鈕，將標(biāo)本對(duì)好焦。,8. 聚光器中心調(diào)節(jié) 1）確信10X物鏡在光路中。 2）將“視場(chǎng)光闌調(diào)節(jié)桿”降低直到能從目鏡看到視場(chǎng)光 闌像。 3）轉(zhuǎn)動(dòng)“聚光器調(diào)焦鈕”升降聚光器，使視場(chǎng)光闌

4、像清 晰地成象在標(biāo)本面上。 4）轉(zhuǎn)動(dòng)兩個(gè)“聚光器中心調(diào)節(jié)螺釘”，使視場(chǎng)光闌像在 視場(chǎng)中心。 5）更換40X物鏡。 6）調(diào)節(jié)“視場(chǎng)光闌調(diào)節(jié)桿”，使視場(chǎng)光闌的象與視場(chǎng)大 致相同。 7）轉(zhuǎn)動(dòng)兩個(gè)“聚光器中心調(diào)節(jié)螺釘”，使視場(chǎng)光闌像在 視場(chǎng)正中。,9. 進(jìn)行觀察 1）選擇要使用的物鏡 2）移動(dòng)系統(tǒng)聚光器上的“孔徑光闌調(diào)節(jié)桿”，使孔徑為 物鏡數(shù)值孔徑的 7080%。（“把目鏡筒轉(zhuǎn)盤”設(shè)到 B位置，轉(zhuǎn)動(dòng)勃氏鏡調(diào)焦螺釘使其聚焦，當(dāng)觀察 到物鏡的出瞳和孔徑光欄的象時(shí)，調(diào)節(jié)其大小。） 3）調(diào)節(jié)“視場(chǎng)光闌調(diào)節(jié)桿”使視場(chǎng)光闌像與視場(chǎng)相大致 相同。 4）把透射照明器里的“ND減光片”進(jìn)入或退出光路以調(diào) 節(jié)視場(chǎng)亮度。

5、補(bǔ)充說明 如果不需要色溫很準(zhǔn)確的顏色，可以通過顯微鏡 左側(cè)的“亮度調(diào)節(jié)盤”，改變燈泡電壓來調(diào)節(jié)亮 度。 10. 更換樣品 利用顯微鏡主體上的“物鏡再聚焦定位環(huán)”，照明器上 的“傾斜裝置”，“聚光器再聚焦指緊螺釘，可容易更 換樣品。 11. 顯微鏡操作結(jié)束后 1) 關(guān)閉電源開關(guān)(開關(guān)撥至O) 2) 燈室冷卻后，把顯微鏡上的聚乙烯防塵罩蓋好。,相差（PH）顯微術(shù) 關(guān)鍵點(diǎn)： 將有ph標(biāo)記的物鏡與物鏡相同ph標(biāo)記的聚光器模塊一起送入光路，在進(jìn)行顯微術(shù)前，校正(對(duì)中)物鏡里的相差板及聚光器模塊里的環(huán)形光闌。,1. 用明視場(chǎng)（BF）顯微術(shù)對(duì)樣品聚焦。 2. 相差觀察時(shí)對(duì)顯微鏡的調(diào)整。 1) 將ph物鏡轉(zhuǎn)入

6、光路。 2) 轉(zhuǎn)動(dòng)“聚光器轉(zhuǎn)盤”，使其與在光路中的物鏡(步驟1中所安置 的)具有相同的ph標(biāo)記。 3) 向右轉(zhuǎn)動(dòng)聚光器上的“孔徑光闌調(diào)節(jié)桿”，完全打開孔徑光闌。 補(bǔ)充說明 如果孔徑光闌沒有完全打開，光路中的環(huán)形光闌將受到限制， 影響相差效果。 4) 提高透射照明器中的“視場(chǎng)光闌調(diào)節(jié)桿”位置，使視場(chǎng)光闌完全打開。 3. 對(duì)中環(huán)形光闌 1) 把“目鏡筒轉(zhuǎn)盤”設(shè)到位置，轉(zhuǎn)動(dòng)勃氏鏡聚焦螺 釘，使環(huán)形光闌像清晰。 2) 用六角起子轉(zhuǎn)動(dòng)聚光器模塊中的兩個(gè)“環(huán)形光闌對(duì)中 螺釘”，使環(huán)形光闌像與物鏡中的相差板環(huán)形像同心。 3) 把目鏡筒轉(zhuǎn)盤位置再轉(zhuǎn)到上。,4. 進(jìn)行觀察 1) 把聚光器“孔徑光闌”完全打開。

7、2) 移動(dòng)透射照明器上的“視場(chǎng)光闌調(diào)節(jié)桿”，使視場(chǎng)光 闌像大小與視場(chǎng)大小接近。 3) 把透射照明器上的“NCB11 濾色片”從光路中移開， 把“GIF濾色片”移進(jìn)光路。(提高反差) 4) 可通過把“ND濾色片”移進(jìn)或移出光路來調(diào)節(jié)視場(chǎng)亮度。 補(bǔ)充說明 如果不需要色溫準(zhǔn)確的顏色，可以通過顯微鏡左側(cè)的 “亮度調(diào)節(jié)盤”，改變燈泡電壓來調(diào)節(jié)亮度。 5. 使用不同放大倍數(shù)的物鏡進(jìn)行觀察 1) 把所需放大倍數(shù)的相差物鏡移入光路。 2) 轉(zhuǎn)動(dòng)“聚光器轉(zhuǎn)盤”，使其與在光路上物鏡（步驟 1 中所安置的）具有相同的ph標(biāo)記。 3) 調(diào)節(jié)放入光路中的環(huán)形光闌中心。(見程序3) 6. 更換樣品 利用使用顯微鏡主機(jī)上的

8、“物鏡再聚焦定位環(huán)”，透射 照明器上的“傾斜”裝置及“聚光器再聚焦指緊螺釘”， 可容易更換樣品。,調(diào)焦裝置 當(dāng)使用TE2000-U/時(shí)： 不要同時(shí)反方向轉(zhuǎn)動(dòng)顯微鏡左右兩側(cè)的調(diào)焦鈕，否則會(huì)導(dǎo)致顯微鏡損壞。 粗動(dòng)調(diào)焦鈕達(dá)到限定位置后，如果繼續(xù)向同一方向旋轉(zhuǎn)會(huì)引起顯微鏡故障。請(qǐng)不要旋轉(zhuǎn)過度。 旋鈕的轉(zhuǎn)動(dòng)量與物鏡的移動(dòng)量關(guān)系如下所示。粗微調(diào)焦鈕所提供的物鏡往復(fù)范圍為：基準(zhǔn)位置上方 7 毫 米，下方3毫米。 粗微調(diào)旋轉(zhuǎn)量 物鏡的垂直移動(dòng)量 微動(dòng)調(diào)焦鈕旋轉(zhuǎn)一個(gè)刻度 1微米 微動(dòng)調(diào)焦鈕旋轉(zhuǎn)一周 0.1微米 粗動(dòng)調(diào)焦鈕旋轉(zhuǎn)一周 4.9毫米,聚光器座的轉(zhuǎn)動(dòng) 擰松聚光器座旋轉(zhuǎn)指緊螺釘，聚光器座就可以轉(zhuǎn)動(dòng)。 此功能

9、主要用于微分干涉顯微術(shù)時(shí)調(diào)節(jié)偏振方向。 當(dāng)用系統(tǒng)聚光器及無起偏器時(shí)(例如進(jìn)行明場(chǎng)顯微術(shù)或相差顯微術(shù)時(shí))，此功能可用來左右移動(dòng)聚光器轉(zhuǎn)盤位置，為顯微操作器或其它系統(tǒng)留下空間。,故障及對(duì)策,維護(hù) 1. 鏡頭的清潔 不要將灰塵、指紋等留在鏡頭上。鏡頭、濾色片上的灰塵將影響視場(chǎng)中的圖像。如果鏡頭變臟，按以下方法進(jìn)行清潔。 將灰塵用軟刷刷去，或用紗布輕輕擦掉。 如果鏡頭上有指紋或油脂，可用一塊沾有純酒精（乙醇或甲醇）的柔軟清潔的棉布、鏡頭紙或紗布擦去。 當(dāng)擦物鏡上的浸油時(shí)，使用石油醚。如果沒有石油醚，請(qǐng)用乙醇。但是，因?yàn)橐掖嫉那鍧嵭Ч麤]有石油醚效果好，需要重復(fù)擦表面。（通常清潔鏡頭要三到四次。） 勿用石

10、油醚清潔目鏡筒底部的鏡頭或目鏡筒表面。 純酒精和石油醚均為高度易燃品。因此在使用、保管、搬運(yùn)過程中應(yīng)格外小心。操作電源開關(guān)或臺(tái)燈尚熱時(shí)，勿將它們放在燈泡附近。 使用純酒精時(shí)，請(qǐng)遵守廠家提供的使用說明書。,簡易操作程序： 倒置顯微鏡中最常用的觀察方法就是相差。由于這種方法不要求染色，是觀察活細(xì)胞和微生物的理想方法。在此提供各種聚光器來滿足需要，這種方法提供帶有自然背景色的、高對(duì)比度的、高清晰度的圖像。 1.開機(jī)。接連電源。打開鏡體下端的電控開關(guān)。 2.使用 (1)準(zhǔn)備：將待觀察對(duì)象置于載物臺(tái)上。旋轉(zhuǎn)三孔轉(zhuǎn)換器，選擇較小的物鏡。觀察，并調(diào)節(jié)鉸鏈?zhǔn)诫p目目鏡，舒適為宜。 (2)調(diào)節(jié)光源：推拉調(diào)節(jié)鏡體下

11、端的亮度調(diào)節(jié)器至適宜。通過調(diào)節(jié)聚光鏡下面的光柵來調(diào)節(jié)光源的大小。 (3)調(diào)節(jié)像距：轉(zhuǎn)三孔轉(zhuǎn)換器，選擇合適倍數(shù)的物鏡；更換并選擇合適的目鏡；同時(shí)調(diào)節(jié)升降， 以消除或減小圖像周圍的光暈，提高了圖像的襯度。 (4)觀察：通過目鏡進(jìn)行觀察結(jié)果；調(diào)整載物臺(tái)，選擇觀察視野。 3.關(guān)機(jī) 取下觀察對(duì)象，推拉光源亮度調(diào)節(jié)器至最暗。關(guān)閉鏡體下端的開關(guān)，并斷開電源。旋轉(zhuǎn)三孔轉(zhuǎn)換器，使物鏡鏡片置于載物臺(tái)下側(cè)，防止灰塵的沉降。,相差是倒置顯微鏡最常用的觀察方法。該方法不要求標(biāo)本染色，用于觀察活體細(xì)胞和微生物最為理想。 相差成像技術(shù)提供了帶中性背景的明亮、高對(duì)比度、高分辨率的圖像。 尼康采用了“切趾相襯的新技術(shù)，減少了成像光暈，從而產(chǎn)生對(duì)比度優(yōu)越、色調(diào)范圍更廣的圖像。,熒光：在涉及熒光蛋白質(zhì)這樣的活體細(xì)胞顯微術(shù)中，這種方法不可或缺。 尼康獨(dú)創(chuàng)的消雜光機(jī)構(gòu)最大限度地消除了背景雜光，從而在動(dòng)態(tài)活細(xì)胞成像試驗(yàn)中觀察發(fā)微弱熒光的標(biāo)本時(shí)能產(chǎn)生更高信噪比的圖像。,霍夫曼調(diào)制相襯(HMC)方法使用尼康的專用物鏡和標(biāo)鏡，它將相們梯度轉(zhuǎn)換為光強(qiáng)度變化，使透明的活體標(biāo)本產(chǎn)生生動(dòng)、具有三維立體感的圖像。 HMC成像技術(shù)中，標(biāo)本可以置于塑料培養(yǎng)皿中觀察，彌補(bǔ)了諾馬斯基微分干涉相襯技術(shù)的不足。,微分干涉相襯(DIC)