GB 5009.258-2016 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中棉子糖的測(cè)定.pdf

中 華 人 民 共 和 國(guó) 國(guó) 家 標(biāo) 準(zhǔn) G B5 0 0 9.2 5 82 0 1 6 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中棉子糖的測(cè)定 2 0 1 6 - 0 8 - 3 1發(fā)布2 0 1 6 - 0 9 - 2 0實(shí)施 中華人民共和國(guó) 國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì) 發(fā) 布 G B5 0 0 9.2 5 82 0 1 6 1 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中棉子糖的測(cè)定 1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中棉子糖含量測(cè)定的離子色譜方法。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于嬰幼兒配方食品、 嬰幼兒谷類輔助食品、 嬰幼兒罐裝輔助食品、 飲料及豆粉食品中棉 子糖含量的測(cè)定。 2 原理 試樣采用乙腈沉淀、 高速離心的方式去除樣品中的蛋白質(zhì)和脂肪, 經(jīng)固相萃取柱凈化后, 注入離子 色譜儀, 氫氧化鈉溶液為淋洗液, 經(jīng)陰離子交換柱分離, 脈沖安培檢測(cè)器檢測(cè)。保留時(shí)間定性, 外標(biāo)法 定量。 3 試劑和材料 除非另有說(shuō)明, 本方法所用試劑均為優(yōu)級(jí)純, 水為G B/T6 6 8 2規(guī)定的一級(jí)水。 3.1 試劑 3.1.1 乙腈(C2H3N) : 色譜純。 3.1.2 5 0%氫氧化鈉溶液(N a OH) : 色譜純。 3.1.3 -淀粉酶: 酶活力1.5U/ m g 。 3.1.4 氮?dú)?N2) : 純度9 9.9 9%。 3.2 試劑配制 氫氧化鈉溶液( 2 5 0mm o l /L) : 在2L塑料試劑瓶中加入5 0 0m L經(jīng)過(guò)0. 2 2m尼龍濾膜過(guò)濾的蒸 餾水, 移取1 3. 1m L氫氧化鈉(3.1.2) 溶液至水面以下, 加蒸餾水至10 0 0m L, 通入氮?dú)獗Ｗo(hù)后, 搖勻 備用。 3.3 標(biāo)準(zhǔn)品 棉子糖標(biāo)準(zhǔn)品( C1 8H3 2O1 6) : 純度9 9.0%。 3.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制 3.4.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(10 0 0m g/L) : 準(zhǔn)確稱取棉子糖1 0 0m g( 精確到0.1m g) 于5 0m L燒杯中, 用蒸餾 水溶解, 轉(zhuǎn)移到1 0 0m L容量瓶中, 用水定容。搖勻, 4保存, 有效期為1個(gè)月。 3.4.2 標(biāo)準(zhǔn)使用溶液(5 0.0m g/L) : 準(zhǔn)確吸取5m L標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液于1 0 0m L容量瓶中, 用蒸餾水定容 至刻度?，F(xiàn)用現(xiàn)配。 3.4.3 標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液: 分別準(zhǔn)確吸取棉子糖標(biāo)準(zhǔn)使用溶液0 m L、1 m L、2 m L、5 m L、1 0 m L、 G B5 0 0 9.2 5 82 0 1 6 2 2 0m L、5 0m L于1 0 0m L容量瓶中, 用蒸餾水定容。得到標(biāo)準(zhǔn)曲線工作溶液濃度分別為0.0 0 0m g/L、 0.5 0 0m g/L、1.0 0m g/L、2.5 0m g/L、5.0 0m g/L、1 0.0m g/L、2 5.0m g/L。 4 儀器和設(shè)備 4.1 離子色譜儀: 配置脈沖安培檢測(cè)器。 4.2 天平: 感量為0.1m g。 4.3 離心機(jī): 轉(zhuǎn)速1 00 0 0r/m i n。 4.4 渦旋混合器。 4.5 超聲波清洗器。 4.6 固相萃取裝置。 4.7 培養(yǎng)箱:6 02。 4.8 固相萃取柱:O n G u a r d R P柱( 填料為反相聚二乙烯基苯聚合物) 和O n G u a r d H柱( 填料為 H型聚苯乙烯基強(qiáng)酸樹脂) , 或其他等效柱。規(guī)格為1.0m L,H柱為6 5 0m g,R P柱為3 5 0m g。 4.9 0.2 2m水性濾膜針頭濾器。 4.1 0 注射器:1 5m L。 5 分析步驟 5.1 試樣制備 5.1.1 試樣預(yù)處理 5.1.1.1 乳粉、 米粉、 豆粉等試樣: 取試樣約1 0 0g( 其他固體試樣先進(jìn)行粉碎、 研磨) ,裝入能夠容納2倍 試樣體積的帶蓋容器中, 通過(guò)反復(fù)搖晃和顛倒容器使試樣充分混勻直到使試樣均一化。 5.1.1.2 液體試樣: 取試樣約1 0 0m L,裝入能夠容納2倍試樣體積的帶蓋容器中, 通過(guò)反復(fù)搖晃和顛 倒容器使試樣充分混勻直到使試樣均一化。 5.1.1.3 肉泥等其他半固體試樣: 稱取試樣5 0.0g, 稱取等量的水與之混合, 渦旋混勻, 超聲2 0m i n。 5.2 試樣處理 5.2.1 米粉等含淀粉的試樣: 稱取混合均勻的試樣1g 5g( 精確至0.1m g, 含有棉子糖約為2 0m g) 于 離心管中, 加入1g -淀粉酶, 固體試樣需用約5 0m L4 55 0的水使其溶解, 混合均勻后充氮, 蓋 上管蓋, 置于6 02培養(yǎng)箱內(nèi)酶解3 0m i n。冷卻至室溫后, 用水定容至1 0 0m L。 5.2.2 乳粉、 豆粉、 飲料、 肉泥等其他試樣: 稱取混合均勻的試樣1g5g( 精確至0.1m g, 含有棉子糖 約為2 0m g) 于1 0 0m L燒杯中, 加水溶解, 固體試樣需用約5 0m L4 55 0的水使其溶解, 轉(zhuǎn)移到 1 0 0m L容量瓶中, 用水定容。 5.3 凈化 5.3.1 吸取5m L經(jīng)過(guò)處理的試樣溶液于5 0m L具塞錐形瓶中, 加入1 0m L水, 搖勻, 超聲3 0m i n, 轉(zhuǎn) 移到5 0m L容量瓶中, 加入3 0m L乙腈, 用水定容。轉(zhuǎn)移到5 0m L離心管中, 于1 00 0 0r/m i n離心 1 0m i n, 取上清液備用( 可以根據(jù)樣液中棉子糖含量調(diào)整稀釋倍數(shù)) 。 5.3.2 固相萃取柱的活化: 將O n G u a r dR P柱使用前依次用1 0m L甲醇、1 5m L蒸餾水進(jìn)行活化; O n G u a r d H柱用1 0m L蒸餾水進(jìn)行活化。必要時(shí)可以使用固相萃取裝置, 液體流速控制在1m L/m i n。 5.3.3 將1 5m L注射器的柱筒部分、0.2 2m水性濾膜針頭濾器、O n G u a r d R P柱、O n G u a r d H G B5 0 0 9.2 5 82 0 1 6 3 柱順序連接, 接在固相萃取裝置上。取備用的上清液( 5.3.1) 約1 5.0m L加入注射器柱筒, 調(diào)節(jié)固相萃 取裝置, 液體流速控制在1m L/m i n。棄去前面3m L流出液, 收集后面的流出液待測(cè)。 5.4 儀器參考條件 5.4.1 色譜柱:C a r b o P a cP A 2 0(1 5 0mm3mm) ; 保護(hù)柱:C a r b o P a cP A 2 0(3 0mm3mm) , 或性能相 當(dāng)?shù)碾x子色譜柱。 5.4.2 淋洗液: 水+2 5 0mm o l /L氫氧化鈉溶液=5 8+4 2, 等度洗脫。 5.4.3 流速:0.4m L/m i n。 5.4.4 檢測(cè)器: 脈沖安培檢測(cè)器, 金電極, A g /A g C l參比電極, 檢測(cè)池溫度為3 0。 5.4.5 柱溫:3 0。 5.4.6 進(jìn)樣體積:1 0L。 5.5 測(cè)定 5.5.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 將標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液按照從低濃度到高濃度的順序依次進(jìn)樣, 得到各濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖。以 棉子糖的濃度( m g /L) 為橫坐標(biāo), 以峰面積為縱坐標(biāo), 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線或計(jì)算線性回歸方程( 標(biāo)準(zhǔn)溶液離子 色譜圖見圖A. 1) 。 5.5.2 測(cè)定 在與標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定相同的工作條件下, 取1 0L試樣溶液注入離子色譜儀, 以保留時(shí)間定性, 測(cè)得 峰面積, 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)樣液中棉子糖的濃度( 試樣溶液離子色譜圖參見圖A. 2) 。 6 分析結(jié)果的表述 試樣中棉子糖含量按式( 1) 計(jì)算: X=C VK m10 0 0 (1) 式中: X 試樣中棉子糖的含量, 單位為克每千克(g/ k g ) ; C 試樣測(cè)定液中棉子糖質(zhì)量濃度, 單位為毫克每升( m g /L) ; V 試樣制備時(shí)定容體積, 單位為毫升(m L) ; K 試樣溶液稀釋倍數(shù), 包括試樣制備和凈化過(guò)程的兩步稀釋; m 試樣質(zhì)量, 單位為克(g) 。 計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示, 結(jié)果保留三位有效數(shù)字。 7 精密度 在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的1 0%。 8 其他 檢出限和定量限: 取樣量為1. 0g, 定容體積為1 0 0m L, 稀釋倍數(shù)為1 0時(shí), 測(cè)定棉子糖的檢出限為 0.1g/ k g ; 定量限為0. 3g /