紫外可見分光光度計應用與日常維護

2014/8/8 版權(quán)所有 (C)北京普析通用 湖北分公司 1 2014/8/8 版權(quán)所有 (C)北京普析通用 湖北分公司 2 Beijing Purkinje General Instrument Co.,Ltd. 紫外可見分光光度計 應用與日常維護 2014/8/8 版權(quán)所有 (C)北京普析通用 湖北分公司 3 簡單回顧 主要部件 儀器展示 比色皿的沾污問題 試樣的光解與防止 紫外區(qū)常用溶劑的最短可用波長 測樣不穩(wěn)定的原因 常見的非儀器問題 鎢燈、氘燈的更換 主要內(nèi)容 2014/8/8 版權(quán)所有 (C)北京普析通用 湖北分公司 4 目的 多年的經(jīng)驗、教訓、體會與大家交流和共賞 適用性強，提高儀器使用者的應用水平 從客觀視角看待國產(chǎn)紫外的現(xiàn)狀，正確對待國貨。 日常分析對儀器的性能需求、價格、后期使用及維護成本。 尖端有距離，但日常分析不需要。 物質(zhì)對 光 的吸收是 選擇性 的，利用被測物質(zhì)對某波長的光的吸收來了解物質(zhì)的特性，這就是 光譜法 。 測定被測物質(zhì)對不同波長的光的吸收強度（吸光度），以波長為橫坐標，吸光度為縱坐標作圖，得出該物質(zhì)在測定波長范圍的 吸收曲線 。 簡單回顧 2014/8/8 版權(quán)所有 (C)北京普析通用 湖北分公司 6 物質(zhì)對光的吸收遵循如下規(guī)律 朗伯定律：物質(zhì)對光的吸收與其厚度成正比 比爾定律：物質(zhì)對光的吸收與其濃度成正比 朗伯 比爾定律：朗伯、比定律的結(jié)合 以上條件成立的必需條件：濃度適當 試樣濃度大多取 10g/ml 100g/ml（相當 0.3 0.7Abs左右）為最佳 簡單回顧 2014/8/8 版權(quán)所有 (C)北京普析通用 湖北分公司 7 紫外 -可見分光光度法 (ultraviolet-visible spectrophotometry, UV-VIS) 按所吸收光的波長區(qū)域不同，分為紫外分光光度法和可見分光光度法，合稱為紫外 -可見分光光度法。 它是利用物質(zhì)的分子或離子對紫外可見波段范圍（ 150nm到 800nm）單色輻射的吸收或反射強度來進行物質(zhì)的 定性分析 、 定量分析 或 結(jié)構(gòu)分析的方法 。 所依據(jù)的光譜是分子或離子吸收入射光中特定波長的光而產(chǎn)生的吸收光譜。 簡單回顧 紫外 -可見分光光度法的特點： 1 與其它光譜分析方法相比，其儀器設備和操作都比較簡單，費用少，分析速度快 ； 2 靈敏度高 ； 3 選擇性好 ； 4 精密度和準確度較高 ； 5 用途廣泛。 簡單回顧 紫外 -可見分光光度計 光源； 單色器； 吸收池； 檢測器； 顯示與數(shù)據(jù)處理； 簡單回顧 2014/8/8 版權(quán)所有 (C)北京普析通用 湖北分公司 10 在紫外可見分光光度計中，常用的光源有兩類： 熱輻射光源和氣體放電光源 光源 熱輻射光源用于可見光區(qū)，如鎢燈和鹵鎢燈；氣體放電光源用于紫外光區(qū)，如氫燈和氘燈。 主要部件 2014/8/8 版權(quán)所有 (C)北京普析通用 湖北分公司 11 吸收池又稱比色皿或比色杯，按材料可分 為玻璃吸收池和石英吸收池 玻璃比色皿不能用于紫外區(qū)。 區(qū)分方法 :可用儀器實測紫外區(qū) 200nm波長處的吸光度值。 吸收池 主要部件 2014/8/8 版權(quán)所有 (C)北京普析通用 湖北分公司 12 因比色皿的使用不當易導致數(shù)據(jù)重復性差 角度、位臵變化、表面潔凈度、污染程度 注意：粘接的比色皿不適合裝濃硫酸、不適合用高于 25瓦的超聲波機清洗 吸收池 主要部件 2014/8/8 版權(quán)所有 (C)北京普析通用 湖北分公司 13 檢測器的作用是檢測光信號，并將光信號 轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘枴，F(xiàn)今使用的分光光度計大多采 用光電管或光電倍增管作為檢測器。 檢測器 主要部件 1、 高檔 - 紫外可見分光光度計 TU-1950 TU-1950紫外可見分光光度計 儀器展示 1、 高檔 - 紫外可見分光光度計 19系列 TU-1901/1900 紫外可見分光光度計 儀器展示 2、 中檔 - 紫外可見分光光度計 18系列 181系列（準雙光束） /188系列（雙光束） 儀器展示 3、 普及型 - 紫外可見分光光度計 T6系列 T6 紫外可見分光光度計 儀器展示 2014/8/8 版權(quán)所有 (C)北京普析通用 湖北分公司 18 比色皿的沾污問題 重視比色皿的沾污問題的重要性 在日常的分析工作中，許多工作者往往不大重視比色皿的沾污問題。其實，這個非常重要。比色皿沾污會直接嚴重影響分析測試的結(jié)果 如何鑒別比色皿是否被沾污 肉眼觀察： 如果有污點，就應清除掉；可用高級擦鏡紙、軟的黃鼠狼毛筆等柔軟的物質(zhì)擦洗 儀器檢查： 光譜掃描方式或光度測量模式下，設好參數(shù) (波長、測光方式等 )；空著儀器的樣池架；蓋上樣品室蓋板、校零；比色皿內(nèi)裝入 3/4高度蒸餾水，并正確放入試樣池架內(nèi)，使之處于光路中；掃描或讀數(shù)；根據(jù)參考值分析顯示的結(jié)果以區(qū)分比色皿是否臟污。 參考方法：從光譜長波至短波，顯示平滑。參考值： 400nm以上，應小于 0.08 Abs，從 400nm至 200nm吸光度平滑上升過渡， 200nm應小于0.13Abs，如果發(fā)現(xiàn)有超出限象，可以按方法清潔再測試，各波長下 Abs降至最低可判斷為凈潔。 2014/8/8 版權(quán)所有 (C)北京普析通用 湖北分公司 19 比色皿的沾污問題 如何解決比色皿沾污的問題 用洗液清洗： 當發(fā)比色皿被沾污時可用洗液清洗。但有些比色皿被沾污用洗液清洗是解決不了問題的。如比色皿被粘著力很強的物質(zhì)沾污（如被木質(zhì)素沾污），或特濃的試樣沾污，并且凝結(jié)在比色皿的通光面上，用洗液清洗是不行的 用超聲波清洗： 當發(fā)比色皿被沾污時，可用 20瓦的玻璃儀器清洗超聲波超洗半小時，一般都能解決問題。但是要特別注意，不能用大功率超聲波來清洗比色皿，否則，會損壞比色皿。 此外，還應特別注意的是，不能用金屬棒或硬的木棒 (如牙簽等 )重擦比色皿，否則，也會損壞比色皿的通光面。還不能用帶易掉毛的工具 (如劣質(zhì)紙、劣質(zhì)棉花等 ) 擦拭比色皿的受光面， 不要用洗潔精之類的清潔劑。以免影響測量。 2014/8/8 版權(quán)所有 (C)北京普析通用 湖北分公司 20 注意防止試樣的光解 所謂光解，是指試樣在紫外光的照射下會發(fā)生化學反應。 試樣的光解是從事紫外可見分光光度計的分析工作者會經(jīng)常碰到的一個棘手的問題。許多使用者，特別是年輕的分析測試工作者，因為缺乏經(jīng)驗，往往碰到試樣的光解時，不會判斷，反而認為是儀器不好，去找儀器的問題。結(jié)果事倍功半 如何處理有光解的試樣 一般可以采用兩種方法處理；其一，把試樣存放在棕色瓶中保存，因為棕色瓶不透紫外光，可以防止試樣光解；其二，將存放試樣的瓶子，用黑紙包住，也同樣可防止試樣光解。這兩種方法，都可以有效的解決防止試樣光解的問題。 2014/8/8 版權(quán)所有 (C)北京普析通用 湖北分公司 21 如何判斷被測試樣有光解現(xiàn)象呢？ 這是年輕的分析工作者們感到棘手的問題；其實，很好判斷。首先要 看規(guī)律 ；對同一個試樣多次測量，看其吸光度值是否都是向同一個方向變化；例如 :在多次測試中，吸光度值從第一次到最后一次測試的數(shù)據(jù)都是一直在減小，或一直在增大，這就可能是光解現(xiàn)象所引起的，即試樣可能有光解。如果不是向同一個方向變化，在多次測試中，吸光度值有時增大，有時減小，就可以肯定不是光解所致，應另找原因；如果多次測試的數(shù)據(jù)是向同一個方向變化，這時，可將試樣倒進比色皿中，放在比色皿架上，蓋好樣品室蓋，作一次測試后，不要把試樣取出來；而將樣品室的光路用文獻卡片擋住，待半小時后取去文獻卡，再重復測試多次；如果試樣有光解特性，其測試的數(shù)據(jù)就會不變。如果試樣沒有光解，而是其它原因使測試數(shù)據(jù)不穩(wěn)定，則測試的數(shù)據(jù)仍然會不斷在變化。這時分析測試工作者，應再找不穩(wěn)定的原因。 注意防止試樣的光解 2014/8/8 版權(quán)所有 (C)北京普析通用 湖北分公司 22 紫外區(qū)常用溶劑的最短可用波長 溶劑 nm 溶劑 nm 溶劑 nm 溶劑 nm 二硫化碳 380 四氯化碳 265 乙醚 220 二甲替甲酰胺 270 丙酮 330 甲酸甲脂 260 乙腈 215 1,2-二氧乙烷 230 吡啶 305 乙酸、乙脂 260 乙醇 210 對二氧六環(huán) 220 四氯乙烯 290 氯仿 245 正乙烷 220 乙酸正丁脂 260 甲苯 285 二氯甲烷 235 異丙醇 210 異辛烷 210 苯 280 甘油 220 甲醇 210 甲基環(huán)已烷 210 96%硫酸 210 環(huán)已烷 210 正丁烷 210 2,2,4-三甲戊烷 215 水 210 2014/8/8 版權(quán)所有 (C)北京普析通用 湖北分公司 23 測樣不穩(wěn)定和不準確的原因 市電不穩(wěn) 如：大功率用電器的啟停 (空調(diào)、烘箱、大型電機、電爐等 ) 比色皿的原因 如：紫外區(qū)錯用玻璃比色皿；臟污；比色皿質(zhì)量差； 操作原因 如：參數(shù)設臵不當；樣池架設臵不當；比色皿放臵傾斜、晃動；取放比色皿方向不豎直，用力過大使樣池架挪位等。 樣品自身的問題 如：空白值過大、樣品濃度過高，超出動態(tài)線性范圍；試劑等被污染或純度不高；有氣泡；樣品顯色在變化，未穩(wěn)定；有懸浮或沉淀物；見光分解；揮發(fā)、溶劑使用不當?shù)?環(huán)境影響 如：溫度、濕度、粉塵、電場、磁場、振動等影響 儀器自身或 PC機的原因 如 ：光源及光學器件、電路、機械、計算機病毒等 2014/8/8 24 常見的非儀器問題 自檢時提示樣品池電機項失敗，或有常異響聲； 樣品室內(nèi)放臵有干燥劑或雜物，造成機械卡住。 自檢時提示光源電機項失??； 樣池架類型設臵錯誤 (樣品池類型與使用樣池數(shù)的區(qū)別 )、自檢時樣品池架內(nèi)放有比色皿或其它物件擋了光、光源未點亮或老化、損壞等。 自檢時提示鎢燈能量低或提示氘燈能量低； 同上一條原因 自檢時提示氘燈能量高 附件類型設臵錯誤 (非積分球附件錯設臵成積分球 ) 2014/8/8 版權(quán)所有 (C)北京普析通用 湖北分公司 25 鎢燈、氘燈的更換 1. 鎢燈座 2. 鎢燈座固定釘 3. 光源反射鏡 4. 氘燈卡子 5. 氘燈 6. 鎢燈 7. 鎢燈固定釘 8. 入射狹縫 注意：在更換氘燈及鎢燈時注意保護光源反射鏡鏡 面，禁止觸摸鏡面以及擦拭鏡面。 2014/8/8 版權(quán)所有 (C)北京普析通用 湖北分公司 26 鎢燈、氘燈的更換 鎢燈更換 儀器需要更換鎢燈一般有這幾種情況如 :鎢燈不亮、玻璃表面變黃或變黑、燈體漏氣變白等。 儀器的鎢燈設計為插座型，鎢燈已套裝在鎢燈座上 ,出廠前已調(diào)好，更換時打開光源室，松開 2個鎢燈座固定螺釘，取下鎢燈座。松開鎢燈固定螺釘取下壞鎢燈，將新鎢燈換上并調(diào)整鎢燈，使燈絲中心與鎢燈座底部距離為 40mm，之后擰緊鎢燈固定螺釘。 將換完新鎢燈的鎢