病毒的雞胚培養(yǎng)法.ppt

病毒的雞胚培養(yǎng) 一 實驗?zāi)康?二 實驗原理 三 實驗器材 四 實驗方法 五 實驗作業(yè) 一 實驗?zāi)康?1 了解雞胚培養(yǎng)有哪幾種常用的接種方法 2 掌握雞胚尿囊腔接種培養(yǎng)雞新城疫病毒的操作技術(shù) 二 實驗原理 實驗室培養(yǎng)病毒常使用動物接種和雞胚培養(yǎng)兩種方法 而雞胚培養(yǎng)更為常見 一般而言 禽病毒病大部分可經(jīng)雞胚分離病毒 其他動物病如犬瘟熱也可經(jīng)雞胚分離病毒 雞胚接種技術(shù)是養(yǎng)禽業(yè)中一種相對新的疫苗接種方法 這種方法就是對孵化后期的雞胚接種某些活的病毒疫苗 這些病毒疫苗不會對孵化率產(chǎn)生不利的影響 通過這種方式接種疫苗后孵出的雛雞具有免疫保護力 三 實驗器材 1 雞胚 要選擇SPF雞胚或低母源抗體的雞胚 從實踐看 法氏囊炎病毒對抗體相當(dāng)敏感 所以要用無母源抗體的雞胚 而新城疫病毒 禽流感病毒等可抵御母源抗體的作用而得以繁殖致死雞胚 孵化前的雞胚應(yīng)注意消毒 置37 38 相對濕度45 60 的孵卵器中孵育 每日翻蛋數(shù)次 孵蛋第4天開始照蛋 棄去無精蛋和死胚 多采用9 11日齡的活胚接種 四 實驗方法 1 接種前的準(zhǔn)備 a 雞胚的準(zhǔn)備 選擇9 11日齡的雞胚 在照蛋時以記號筆勾出氣室 于氣室稍下方胚胎活躍而血管明顯的區(qū)域中 在血管之間的間隙劃上記號 作為接種部位 用3 碘酊對接種部位進行消毒 再用75 酒精棉球擦一遍 在接種定位處打孔 氣室向上豎放于蛋托上 雞胚的模式結(jié)構(gòu)1 卵殼2 絨毛尿囊膜3 尿囊腔4 羊水腔5 卵黃囊6 雞胚胎7 卵白 b 病毒材料的準(zhǔn)備 要分離培養(yǎng)的病毒材料應(yīng)是無菌的 因此在處理材料的過程中 應(yīng)嚴(yán)格按照無菌操作進行 將新城疫弱毒活疫苗按照每1000羽份配成250ml 為達到無菌的目的 可在每毫升接種物中加入青霉素和鏈霉素各100 5000IU 置室溫中1h處理 法氏囊病毒的分離 取疑似感染病毒的法氏囊 稱重 按1 5 w v 加入生理鹽水 研磨 20 反復(fù)凍融2次 每次冷凍時間以研磨物結(jié)冰為準(zhǔn) 將凍融物轉(zhuǎn)入離心管中 3000轉(zhuǎn) 分 離心5分鐘 將上清取出 使用無菌濾器過濾 2 接種 雞胚接種的方法有幾種 絨毛尿囊腔內(nèi)接種 絨毛尿囊膜接種 羊膜腔接種 卵黃囊內(nèi)接種 取10 12日齡的雞胚 照蛋選擇血管較少的部位做一記號 用磨蛋器磨一于縱軸平行的裂痕 小心挑開蛋殼 將白色的殼膜用針尖小心挑破 不要傷及血管豐富而透明的絨毛尿囊膜 在氣室頂端鉆一小孔 用滴管貼近小孔 輕輕一吸 絨毛尿囊膜便下陷成一小凹 絨毛尿囊膜接種 絨毛尿囊膜接種1 雞胚胎2 羊膜腔3 絨毛尿囊膜 取10 12日齡的雞胚 消毒氣室頂上的蛋殼 并將氣室頂端的蛋殼銼一三角形的裂痕 用滅菌鑷子揭去裂痕部位的蛋殼和殼膜 用滅菌平頭鑷子刺破尿囊膜 并輕輕夾去羊膜 用小號針頭刺進羊膜腔內(nèi) 注入0 05 0 1ml的病毒接種液 以氧化鋅膠布封口 滴上溶化的固體石蠟 放回孵化器 使蛋直立孵化 羊膜腔接種 羊膜腔接種1 雞胚胎2 羊膜腔3 絨毛尿囊膜4 羊膜 選擇6 8日齡的雞胚 照蛋檢查 劃出氣室和胎位 并以氣室向上豎立在蛋托上 氣室端的蛋殼經(jīng)消毒后以打孔器鉆一小孔 將注射針頭刺過小孔 沿著卵的縱軸刺入約3cm 然后注入0 2ml的病毒接種液 用氧化鋅膠布及石蠟封口后放回孵化器中培養(yǎng) 卵黃囊內(nèi)接種 卵黃囊接種 雞胚的各種接種途徑1 絨毛尿囊膜接種2 尿囊腔接種3 羊水腔接種4 卵黃囊接種 絨毛尿囊腔內(nèi)接種 絨毛尿囊膜接種 羊膜腔接種 卵黃囊內(nèi)接種 3 收毒 病毒的收毒根據(jù)接種的途徑而定 尿囊液 絨毛尿囊膜 羊水 卵黃液和卵黃膜 4 廢料處理 操作完畢 將所有的用具煮沸消毒 擦凈后再以消毒水浸