吞噬細(xì)胞吞噬功能檢測實(shí)驗(yàn)推薦word范文.docx

.Everlab云端實(shí)驗(yàn)室-吞噬細(xì)胞吞噬功能檢測實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)概要本文介紹了吞噬細(xì)胞吞噬功能檢測（Assay of the Phagocytic Function of Phagocyte）實(shí)驗(yàn)的基本原理、操作步驟及注意事項(xiàng)等。實(shí)驗(yàn)原理吞噬細(xì)胞具有對異物(細(xì)菌、綿羊紅細(xì)胞、雞紅細(xì)胞等)吞噬和消化的功能，在機(jī)體非特異性免疫中發(fā)揮重要作用。小鼠腹腔內(nèi)注射硫代乙醇酸鈉，可刺激巨噬細(xì)胞的聚集。四日后小鼠腹腔內(nèi)注入羊紅細(xì)胞懸液，一小時(shí)后解剖收集腹腔吞嗜細(xì)胞，染色、鏡檢可觀察對羊紅細(xì)胞的吞嗜現(xiàn)象。通過計(jì)算吞嗜百分比或吞噬指數(shù)可測定吞噬細(xì)胞的吞嗜功能。主要試劑1. PBS 緩沖液2. 3硫代乙醇酸鈉3. 1羊紅細(xì)胞懸液4. 瑞氏染液5. 甲醇主要設(shè)備1. 解剖器材2. 注射器3. 尖吸管4. 橡皮吸頭5. 小試管6. 載玻片實(shí)驗(yàn)材料ICR 小鼠實(shí)驗(yàn)步驟1. 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：用無菌注射器吸取3硫代乙醇酸鈉3ml，注射于小鼠腹腔內(nèi)。2. 四日后，注射1羊紅細(xì)胞懸液1ml 于小鼠腹腔內(nèi)。3. 注射1 小時(shí)后，將小鼠用頸椎脫臼法處死，解剖暴露腹腔，于腹腔靠上部位，用鑷子輕輕夾起腹膜，將腹膜剪一小口，用尖吸管注入5ml 預(yù)溫的PBS，同時(shí)用手反復(fù)揉搓腹腔約12 分鐘，以便盡可能多地沖洗出小鼠腹腔的吞噬細(xì)胞。4. 用尖吸管吸取腹腔液，置一潔凈試管內(nèi)。5. 用尖吸管將腹腔液吹打均勻(盡量避免產(chǎn)生氣泡)，吸取一滴滴于載玻片上，加蓋玻片鏡檢。6. 觀察結(jié)果，也可以將腹腔液涂片，平放于濕盤內(nèi)，37，孵育30 分鐘。取出涂片，用預(yù)溫的PBS 沖洗3 次，然后用甲醇固定1 分鐘，以瑞氏染液1 份加pH6.4 的PBS 2 份混勻后，滴于涂片上染色5-10 分鐘，以蒸餾水沖洗（切勿先將染液傾去）后，待干，鏡檢。7. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果觀察小鼠腹腔巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞對羊紅細(xì)胞的吞噬現(xiàn)象，計(jì)算吞噬百分比，即每100 個(gè)吞噬細(xì)胞中吞噬有羊紅細(xì)胞的細(xì)胞數(shù)。也可用吞噬指數(shù)表示，即將100 個(gè)吞噬細(xì)胞中所吞噬羊紅細(xì)胞的總數(shù)除以100，即為吞噬指數(shù)。吞噬百分比和吞噬指數(shù)一般是平行的。注意事項(xiàng)1. 充分揉搓腹腔，盡可能將吞噬細(xì)胞沖洗下來。2. 用尖吸管吸取腹腔液時(shí)，盡量避開腹腔臟器，避免損傷血管引起出血，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。