熒光顯微鏡.ppt

熒光顯微術(shù) 1 了解熒光顯微鏡的基本構(gòu)成和基本原理 2 初步掌握熒光顯微鏡的調(diào)節(jié)步驟和使用 實驗?zāi)康?實驗用品 Olympus熒光顯微鏡 載玻片 蓋玻片 擦鏡紙 吖啶橙染料等實驗用材料 實驗內(nèi)容 一 熒光顯微鏡的成像原理二 熒光顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)三 熒光顯微鏡的使用方法四 觀察動植物細(xì)胞的自發(fā)熒光和繼發(fā)性熒光 一 顯微鏡的成像原理 熒光顯微鏡是利用一定波長的光使樣品受到激發(fā) 產(chǎn)生不同顏色的熒光 以用來觀察和分辨樣品中某些化學(xué)成分和細(xì)胞組分的一種顯微鏡 自發(fā)熒光 組織 細(xì)胞不經(jīng)熒光色素染色 在紫外光照射下 某些成分所呈現(xiàn)的熒光 稱為自發(fā)熒光 繼發(fā)性熒光 組織 細(xì)胞經(jīng)熒光色素染色 由于熒光色素和組織細(xì)胞內(nèi)的某種成分結(jié)合后而呈現(xiàn)的熒光為繼發(fā)性熒光 二 熒光顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)和光路圖 1 基本結(jié)構(gòu) 光源 超高壓汞燈 用以產(chǎn)生強(qiáng)光照 含大量紫外光 藍(lán)紫光 濾片系統(tǒng) 激發(fā)濾色鏡 提供一定波長范圍的激發(fā)光 阻斷濾色鏡 透過相應(yīng)波長范圍的熒光 阻斷或吸收剩余激發(fā)光 二向分色鏡 透射長波光線和反射短波光線的功能 熒光物鏡普通顯微鏡 熒光顯微鏡結(jié)構(gòu)圖 熒光顯微鏡的光路圖 三熒光顯微鏡的使用方法 1 汞燈的安裝 切斷電源 從插座上拔下電源線 開啟燈室 將汞燈安裝到燈架上 嚴(yán)防手指觸摸燈管 特別是中心球狀部分 以免污染汞燈裝入燈室 封上燈室蓋后 方可按通電源 一 熒光顯微鏡的調(diào)整方法 2 汞燈的點亮 確信各連接部分皆處于正常狀態(tài)接通啟動器電源開關(guān) 按下起動鈕 汞燈點亮 經(jīng)2 3min 電弧趨于穩(wěn)定 點亮后15min內(nèi) 勿切斷電源 一旦汞燈熄滅 在5min或稍長時間內(nèi) 不許重新點亮 待汞燈冷卻后 始能再次點亮 3 汞燈的調(diào)中 開啟光閥 開放孔徑光闌和視場光闌至最大開度 即 Min Max 旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)換器 無物鏡的空洞進(jìn)入光路 旋下防塵蓋光線射向鏡臺 載物臺上放一白紙 讓汞燈電弧像投在其上 用燈室外的聚焦桿 使電弧像在白紙上聚焦 并用調(diào)中螺釘 調(diào)中汞燈 4 濾色鏡系統(tǒng)的配合使用 該熒光顯微鏡具激發(fā)濾色鏡 阻斷濾色鏡和二向色鏡等 5 樣品聚焦 經(jīng)熒光染料染色的樣品放在載物臺上 先用溴鎢燈透射照明 用低倍物鏡聚焦 待尋找到最佳影像后 熄滅溴鎢燈改用汞燈 點亮汞燈 嵌入系統(tǒng)濾色鏡使用UVFL40X Oil 和UVFL100X Oil 油浸物鏡 應(yīng)用無熒光浸油 物鏡的內(nèi)裝可變光闌應(yīng)適當(dāng)縮小 以增大影像反差和清晰度 在UVFL40X dry 物鏡內(nèi)裝有校正環(huán) 對較薄或較厚的蓋片進(jìn)行球面校正 6 縮小光闌開度視場光闌 F 和孔徑光闌 A 的開度 在觀察樣品時應(yīng)朝 Min 向轉(zhuǎn)動 使其適當(dāng)縮小 7 光閥的使用在熒光觀察暫短中止時 可用光閥阻斷光路 勿熄滅汞燈 以免減短其使用壽命 二 熒光鏡檢樣品的制作 1 不能使用本身能產(chǎn)生熒光的藥劑2 切片標(biāo)本不能太厚3 因石蠟可產(chǎn)生青色熒光 采用石蠟制片時 脫蠟必須徹底 切片進(jìn)入水后 應(yīng)充分水洗 再經(jīng)熒光染料處理 4 最好采用螢石玻璃制成的載玻片 蓋玻片 5 封片時可采用甘油等無熒光的封固劑 材料 藻類 鴨趾草下表皮 動物結(jié)締組織 血細(xì)胞 花粉 染液 0 01 丫啶橙染液 觀察藻類 鴨趾草下表面葉綠體的自發(fā)熒光丫啶橙染花粉 血細(xì)胞 疏松結(jié)締組織 四