《微生物及無菌操作》PPT課件.ppt

學(xué)習(xí)是一本打開的書 你能從中看出未來的抱負(fù)微生物及無菌操作 微生物是什么 微生物是廣泛存在于自然界的一群體形微小 直徑小于1mm 結(jié)構(gòu)簡單 肉眼看不見 必須藉助光學(xué)或電子顯微鏡放大數(shù)百至數(shù)萬倍才能觀察到的生物 需要說明的是 微生物是一個(gè)比較籠統(tǒng)的概念 界線有時(shí)非常模糊 如單細(xì)胞藻類和一些原生動(dòng)物也應(yīng)算是微生物 但通常它們并不放在微生物中進(jìn)行研究 微生物具有以下特點(diǎn) 體積小 面積大 吸收多 轉(zhuǎn)化快 2000倍體重 h 生長旺 繁殖快 20min分裂一次 易變異 適應(yīng)強(qiáng) 分布廣 種類多 10萬種以上 Microorganism 我們所生活的環(huán)境中 到處都存在著大量的微生物 在一般空氣中 微生物達(dá)800 3500個(gè) m3 在土壤中達(dá)1 500 108個(gè) g 在嚴(yán)重污染的水中可達(dá)107個(gè) ml 飲用水要求細(xì)菌總數(shù) 100個(gè) ml 大腸桿菌 3個(gè) ml 經(jīng)水塔或貯水池貯存后 短期內(nèi)可繁殖至105 106個(gè) ml 人的頭皮上有140萬個(gè) cm2 兩手上約有4 40萬個(gè) 1g指甲污垢有38億個(gè) 1g糞便可達(dá)10 1000億個(gè) 可以說微生物是無處不在 無處不有 許多以前被人們認(rèn)為是極端 高溫 高壓 強(qiáng)酸 強(qiáng)堿 低溫等 甚至是致死的環(huán)境 現(xiàn)在已發(fā)現(xiàn)生活著各種類型的微生物 稱為極端微生物 事實(shí)說明 微生物有特別頑強(qiáng)的生存 繁殖和變異能力來適應(yīng)環(huán)境 微生物種類繁多 有的對(duì)人有益 有的有害 有的無益也無害 但在藥品生產(chǎn)過程中 不可能對(duì)環(huán)境中的各種微生物加以區(qū)別對(duì)待 為保證藥品的安全有效 需要對(duì)其進(jìn)行控制 空氣中的微生物多數(shù)附著在灰塵上 或以芽孢形式懸浮于空氣中 1 m以下者處于懸浮狀態(tài) 10 m以上者會(huì)逐漸沉下來而形成菌塵 所以也要對(duì)塵粒進(jìn)行控制 大量臨床資料表明 注射劑 尤其是靜脈注射劑 如污染了7 12 m的塵粒 可導(dǎo)致熱原反應(yīng) 肺動(dòng)脈炎 微血栓或異物肉芽腫等 嚴(yán)重的還會(huì)致人死命 而如果污染了細(xì)菌 輕則局部紅腫化膿 重則引起全身細(xì)菌性感染 因此 對(duì)微生物和塵粒進(jìn)行更加嚴(yán)格的控制對(duì)于針劑生產(chǎn)潔凈室非常重要 人是潔凈室最大的污染源 占90 左右 一般男性每人每分鐘向周圍排放1000個(gè)以上的含菌粒子 女性為750個(gè)以上 穿無菌服時(shí) 靜止時(shí)的發(fā)菌量為10 300個(gè) min 一般活動(dòng)時(shí)發(fā)菌量為150 1000個(gè) min 行走時(shí)發(fā)菌量為900 2500個(gè) min 咳嗽一次發(fā)菌量為70 700個(gè) min 噴嚏一次為4000 60000個(gè) min 所以在潔凈室中 人的數(shù)量和活動(dòng)應(yīng)有特別嚴(yán)格的限制 無處不在的微生物 1 營養(yǎng)物 水分 碳源 氮源 無機(jī)鹽類 生長因子 2 pH值 各種微生物都有其最適宜的pH值 大多數(shù)細(xì)菌最適pH為6 8 7 4 但一般有較大的容忍度 在4 9也可存活和生長 少數(shù)細(xì)菌能在極端pH值范圍內(nèi)生長 真菌適于pH值3 6的微酸性環(huán)境 但在2 10也可生長 3 溫度 微生物適于生長繁殖要有適宜的溫度 當(dāng)超過其最低或最高可耐受的溫度時(shí) 即停止生長或死亡 一般細(xì)菌最適溫度為30 40 真菌為20 30 4 氧氣 大多數(shù)細(xì)菌和所有霉菌都是需氧菌 在有氧環(huán)境中才能生長 少數(shù)細(xì)菌是厭氧菌 在無氧環(huán)境中才能生長 有些細(xì)菌和酵母菌是兼性需氧厭氧的 在有氧或無氧環(huán)境中都能生長繁殖 5 滲透壓 微生物細(xì)胞膜和所有生物膜一樣是一種半透膜 可讓水自由通過 對(duì)溶質(zhì)則有選擇性 由于細(xì)胞壁的保護(hù) 微生物能存活在低滲透壓的水中 而在高滲溶液 如高濃度的鹽溶液或糖溶液 40 甘油 中 細(xì)胞會(huì)脫水并停止生長繁殖 但也有一些專性耐高鹽細(xì)菌只有在高鹽 10 15 條件下才生長 6 表面張力 表面活性劑可降低表面張力 它是影響細(xì)菌生長的因素之一 很多革蘭氏陰性菌 特別是大腸菌群可很好地在表面活性劑包圍的介質(zhì)中生長 而大多數(shù)革蘭氏陽性菌在表面張力低時(shí) 0 05N m 不能很好生長 陽離子表面活性劑對(duì)很多有機(jī)體有毒性 陰離子表面活性劑毒性很小 非離子表面活性劑幾乎沒有毒性 并可成為某些微生物的營養(yǎng)物 微生物生長的影響因素 潔凈室的凈化度標(biāo)準(zhǔn)Cleanlinessofcleanroom 滅菌 系指用物理或化學(xué)等方法殺滅或除去所有致病和非致病微生物繁殖體和芽孢的手段 滅菌法 系指殺滅或除去所有致病和非致病微生物繁殖體和芽孢的方法或技術(shù)無菌 系指在任一指定物體 介質(zhì)或環(huán)境中 不得存在任何活的微生物 無菌操作法 系指在整個(gè)操作過程中利用和控制一定條件 使產(chǎn)品避免被微生物污染的一種操作方法或技術(shù)防腐 系指用物理或化學(xué)方法抑制微生物的生長與繁殖的手段 亦稱抑菌 對(duì)微生物的生長與繁殖具有抑制作用的物質(zhì)稱抑菌劑或防腐劑 消毒 系指用物理或化學(xué)方法殺滅或除去病原微生物的手段 對(duì)病原微生物具有殺滅或除去作用的物質(zhì)稱消毒劑 滅菌方法與無菌操作 基本概念 01 目的提高藥物制劑的安全性保護(hù)制劑的穩(wěn)定性保證制劑的臨床療效 滅菌方法與無菌操作 分類 02 滅菌法物理滅菌法化學(xué)滅菌法無菌操作法 利用蛋白質(zhì)與核酸具有遇熱 射線不穩(wěn)定的特性 采用加熱 射線和過濾方法 殺滅或除去微生物的技術(shù)稱為物理滅菌法 物理滅菌法 1 干熱滅菌法 2 濕熱滅菌法 3 濾過除菌法 4 射線除菌法 系指在干燥環(huán)境中進(jìn)行滅菌的方法 1 干熱滅菌法 火焰滅菌法 干熱空氣滅菌法 1 1火焰滅菌法 系指用火焰直接灼燒滅菌的方法 該法適用于耐火焰材質(zhì) 如金屬 玻璃及瓷器等 的物品與用具的滅菌 不適合藥品的滅菌 1 2干熱空氣滅菌法 系指用高溫干熱空氣滅菌的方法 該法適用于耐高溫的玻璃和金屬制品以及不允許濕氣穿透的油脂類 如油性軟膏基質(zhì) 注射用油等 和耐高溫的粉末化學(xué)藥品的滅菌 不適于橡膠 塑料及大部分藥品的滅菌 系指用飽和蒸氣 沸水或流通蒸氣進(jìn)行進(jìn)行滅菌的方法 2 干熱滅菌法 熱壓滅菌法 煮沸滅菌法 流通蒸汽滅菌法 低溫間接滅菌法 2 1熱壓滅菌法 系指用高壓飽和水蒸氣加熱殺滅微生物的方法 能殺滅所有細(xì)菌繁殖體和芽孢 適用于耐高溫和耐高壓蒸汽的所有藥物制劑 玻璃容器 金屬容器 瓷器 橡膠塞 濾膜過濾器等 滅菌溫度 蒸氣表壓 和時(shí)間 115 67kPa 30min 121 97kPa 20min 126 139kPa 15min 系指采用過濾法除去微生物的方法 該法屬于機(jī)械除菌方法 該機(jī)械稱為除菌過濾器 該法適用于對(duì)熱不穩(wěn)定的藥液 氣體 水等物品的滅菌 對(duì)滅菌用過濾器應(yīng)有較高要求 常用的除菌過濾器 0 22 m的微孔濾膜器和G6垂熔玻璃濾器 3 濾過除菌法 系指采用輻射 微波和紫外線殺滅微生物和芽孢的方法 4 射線滅菌法 輻射滅菌法 微波滅菌法 紫外線滅菌法 4 1紫外線滅菌法 UV200 300nm 254 257nm最強(qiáng)原理1 促使核酸蛋白變性 2 使產(chǎn)生臭氧 共同殺菌后用于空氣滅菌和表面滅菌 效果與微生物敏感性有關(guān) 對(duì)酵母或霉菌力弱 紫外線的殺菌效果Bactericidaleffectofultravioletrays 系指用化學(xué)藥品直接作用于微生物而將其殺滅的方法 殺菌劑是指對(duì)微生物具有觸殺作用的化學(xué)藥品 分為氣體殺菌劑和液體殺菌劑 殺菌劑只對(duì)微生物繁殖體有效 不能殺滅芽孢 殺菌效能決定于微生物的種類與數(shù)量 物體表面光潔度或多孔性以及殺菌劑的性質(zhì)等 化學(xué)滅菌法 該法適用于環(huán)境消毒和不耐熱的醫(yī)用器具 設(shè)備和設(shè)施等的消毒 亦用于粉末注射劑的消毒 常用的氣態(tài)殺菌劑 環(huán)氧乙烷 甲醛 丙二醇 甘油和過氧乙酸 氣體滅菌法 該法常作為其他滅菌法的輔助措施 適用于皮膚 無菌器具和設(shè)備的消毒 常用的消毒液有 75 乙醇 1 聚維酮碘溶液 0 1 0 2 新潔爾滅溶液 酚或煤酚皂溶液等 藥液滅菌法 系指整個(gè)過程控制在無菌條件下進(jìn)行的一種操作方法 該法適用于一些不耐熱藥物的注射液 眼用制劑 皮試液 海綿劑和創(chuàng)傷制劑的制備 無菌操作法 無菌操作室的滅菌 無菌操作 1 無菌操作室的滅菌 常采用紫外線 液體和氣體滅菌法對(duì)無菌操作室環(huán)境進(jìn)行滅菌 常用甲醛溶液加熱熏蒸法 液態(tài)甲醛 氣體發(fā)生裝置 蒸氣加熱夾層鍋 甲醛蒸氣 鼓風(fēng)機(jī) 濕度 60 溫度 25 無菌室關(guān)閉熏蒸12 24h 25 氨水 除氣 2 無菌操作 無菌操作的場所 無菌操作室 層流潔凈工作臺(tái) 無菌操作柜 無菌操作的所用物品 器具 環(huán)境操作人員即操作環(huán)境中的物體表面 空氣中除了你瓶中培養(yǎng)的微生物 沒有其它活的微生物 確保培養(yǎng)菌的純凈 主要有紫外線空氣殺毒 噴灑滅菌水在無菌室 酒精燈火焰操作 無菌操作 無菌技術(shù)是在醫(yī)療護(hù)理操作過程中 保持無菌物品 無菌區(qū)域不被污染 防止病原微生物侵入人體的一系列操作技術(shù) 無菌技術(shù)作為預(yù)防醫(yī)院感染的一項(xiàng)重要而基礎(chǔ)的技術(shù) 醫(yī)護(hù)人員必須正確熟練地掌握 在技術(shù)操作中嚴(yán)守操作規(guī)程 以確保病人安全 防止醫(yī)源性感染的發(fā)生 無菌操作的概念 1 無菌技術(shù) aseptictechnique 是指在執(zhí)行醫(yī)療 護(hù)理技術(shù)過程中 防止一切微生物侵入機(jī)體和保持無菌物品及無菌區(qū)域不被污染的操作技術(shù)和管理方法 2 無菌物品 asepticsupply 經(jīng)過物理或化學(xué)方法滅菌后 未被污染的物品稱無菌物品 3 無菌區(qū)域 asepticarea 經(jīng)過滅菌處理而未被污染的區(qū)域 稱無菌區(qū)域 4 非無菌區(qū) non asepticarea 未經(jīng)滅菌或經(jīng)滅菌后被污染的物品或區(qū)域 稱非無菌物品或區(qū)域 5 相對(duì)無菌區(qū) relativeasepticarea 相對(duì)無菌區(qū)指無菌物品自無菌容器內(nèi)一經(jīng)取出 就認(rèn)為是相對(duì)無菌 不可再放回 無菌區(qū)邊緣向內(nèi)3cm為相對(duì)無菌區(qū) 6 污染物品 infectant 污染物品指未經(jīng)過滅菌處理 或滅菌處理后又被污染的物品 原則 1 操作前準(zhǔn)備 1 操作環(huán)境應(yīng)清潔 寬敞 定期消毒 物品布局合理 無菌操作前半小時(shí)應(yīng)停止清掃工作 減少走動(dòng) 避免塵土飛揚(yáng) 2 工作人員應(yīng)做好個(gè)人準(zhǔn)備 戴好帽子 口罩 修剪指甲并洗手 必要時(shí)穿無菌衣 帶無菌手套 2 操作中保持無菌 1 工作人員應(yīng)面向無菌區(qū) 手臂應(yīng)保持在腰部或操作臺(tái)臺(tái)面以上 不可跨越無菌區(qū)避免面對(duì)無菌區(qū)談笑 咳嗽 打噴嚏 2 用無菌持物鑷取用物品 無菌物品一經(jīng)取出 即使未用 也不可放回?zé)o菌容器內(nèi) 一套無菌物品僅供一位患者使用 避免交叉感染 3 無菌操作中 無菌物品疑有污染或已被污染 應(yīng)予更換并重新滅菌 3 無菌物品保管 1 無菌物品必須與非無菌物品分開放置 2 無菌物品不可暴露于空氣中 應(yīng)存放于無菌包或無菌容器中 無菌包外須標(biāo)明物品名稱 滅菌日期 并按失效期先后順序排放 3 定期檢查無菌物品的滅菌日期及保存情況 無菌包在未被污染的情況下保存期一般為7天 過期或受潮應(yīng)重新滅菌 無菌操作有何意義 做到三重保護(hù) 1 無菌操作本身保證樣品的真實(shí)性 避免對(duì)樣品的污染 2 無菌操作同時(shí)也包括了對(duì)操作者的要求 因此也保護(hù)了操作者本身的安全 3 無菌操作一般都是在特定的生物安全柜進(jìn)行 這樣也利用了生物安全柜的特性 保證操作中形成的氣溶膠不會(huì)擴(kuò)散到環(huán)境中 因此也是對(duì)環(huán)境的保護(hù) 洗手涮手消毒手 1 洗手執(zhí)行無菌操作 取用清潔物品之前 護(hù)理病人前后 接觸污染物之后均應(yīng)洗手 方法 用肥皂搓洗手掌 手背 指間 手指及關(guān)節(jié) 以環(huán)形動(dòng)作搓擦 而后用流水沖洗雙手 將皂沫全部沖凈 必要時(shí)反復(fù)沖洗 最后用清潔小毛巾擦干雙手 2 涮手即利用機(jī)械及化學(xué)作用去除手上污物及微生物的方法 是做好消毒隔離 預(yù)防交叉感染的重要措施 方法 取無菌刷蘸肥皂乳 或肥皂塊 先刷指尖 然后刷手 腕 前臂 肘部到上臂下1 2段 特別要刷凈甲溝 指間 腕部 無遺漏地刷洗三遍 每遍3分鐘 刷洗時(shí) 雙手稍抬高 每遍刷完后 用流水沖去肥皂沫 水由手 上臂至肘部淋下 手不能放在最低位 以免臂部的水返流到手 刷洗畢 用無菌小毛巾依次拭干手 臂 手 臂不可觸碰其它物品 如污染必須重新刷洗 3 消毒手消毒液泡手能有效地去除手上的微生物 方法 刷洗后 雙手及上臂下1 3伸入盛有消毒液的桶內(nèi) 用無菌小毛巾輕擦洗皮膚5分鐘 手不可觸及桶口 浸泡畢 擰干小毛巾 揩去手 臂 消毒液 晾干 雙手保持于胸前半伸位準(zhǔn)備穿手術(shù)衣 1空氣培養(yǎng)2無菌采集護(hù)士手樣3口腔中細(xì)菌培養(yǎng)4手機(jī)上細(xì)菌培養(yǎng)5錢包上細(xì)菌培養(yǎng)注 每組5個(gè)培養(yǎng)基 實(shí)驗(yàn)分組 5組 1室內(nèi)清潔 干燥的條件下進(jìn)行空氣采樣 并關(guān)上門窗 2紫外線消毒照射60分鐘最佳 關(guān)閉后30分鐘內(nèi)完成 以清晨采樣為最佳 3瓊脂平皿放置位置 離地面0 8 1 5m 距墻1m 4采樣點(diǎn) 房間面積大于30平方米的取個(gè)點(diǎn) 5將平皿打開后 蓋子倒扣在平皿邊緣 蓋子不可朝天 暴露5分鐘后加蓋 6每個(gè)平皿做好標(biāo)記 寫上地點(diǎn)及標(biāo)志 檢驗(yàn)?zāi)康氖菫榭諝馀囵B(yǎng) 空氣培養(yǎng)采樣方法 1洗手七步法 用肥皂反復(fù)洗手 自然晾干 用無菌干拭子從一只手大拇指的第二節(jié)根部至手的中指尖 正反兩面來回涂擦10次 每只手的檢測面積為100c 然后涂布方式進(jìn)行 2平板手印法 打開平皿用要檢測的手直接輕輕按下即可 蓋好平板 無菌采集手樣本 1傳統(tǒng)的棉拭子法 用無菌的棉拭子在口腔中對(duì)應(yīng)的左上 坐下 右上 右下四個(gè)方位采集 2用生理鹽水漱口后同樣方法檢測 3采集的位置 口腔側(cè)壁 牙齦 溝 口腔中細(xì)菌采集 1用無菌棉簽擦拭手機(jī)的正面 方面和側(cè)面 然后將棉簽在培養(yǎng)基上做涂布法涂布 2將手機(jī)用75 的酒精擦拭后再用無菌棉簽擦拭 再將棉簽進(jìn)行涂布法涂布 手機(jī)上細(xì)菌采集 直接將紙幣在培養(yǎng)基上輕輕按上即可 用75 的酒精擦拭錢包表面 再用無菌棉簽擦拭再在培養(yǎng)基上做涂布 直接用無菌棉簽擦拭錢包表面直接涂布 錢與錢包上的細(xì)菌采集 Thanks 顯微鏡下區(qū)別細(xì)菌和真菌 顯微鏡下真菌和細(xì)菌的形態(tài)差別還是很明顯的 細(xì)菌一般都要經(jīng)過染色之后才能觀察 而真菌個(gè)體