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油脂很重的器皿應先將油脂擦去。粘有煤膏、焦油及樹脂一類的物質(zhì),可用濃硫酸或40%氫氧化鈉或用洗滌液浸泡;沾有臘或油漆物,可加熱使之融熔后揩去,或用有機溶劑(苯、二甲苯、汽油、丙酮。松節(jié)油等)揩去。 載玻片或蓋玻片,先揩去油垢,再放入5%肥皂水中煮分鐘,立即用清水沖洗,以后放在稀的洗液中浸泡2小時,再用清水洗干凈,最后用蒸餾水沖洗,干后浸于95%酒精中保存?zhèn)溆?。洗滌后的器皿應達到玻璃壁能被水均勻濕潤面無條紋和水珠。器皿包扎要滅菌 后的器皿仍能保持無菌狀態(tài),需在滅菌 前進行包扎。培養(yǎng)皿 洗凈的培養(yǎng)皿烘干后每10套(或根據(jù)需要而定)疊在一起,用牢固的紙卷成一筒,或裝入特制的鐵筒中,然后進行滅菌。吸管 洗凈、烘干后吸管,在吸口的一頭塞入少許脫脂棉花,以防在使用時造成污染,塞入的棉花量要適宜,多余的棉花可用酒精燈火焰燒掉。每支吸管用一條寬約45cm的紙條,以3045的角度螺旋形卷起來,吸管的尖端在頭部,另一端用剩余的紙條,打成一結(jié),以防散開,標上容量,若干支吸管包扎成一束進行滅菌。使用時,從吸管事間擰斷紙條,抽出吸管。試管和三角瓶 試管和三角瓶都需要做合適的棉塞,棉塞可起過濾作用,避免空氣中的微生物進入容器,制作棉塞時,要求棉花緊貼玻璃壁,沒有皺紋和縫隙,松緊適宜。過緊易擠破管口和不易塞入;過松易脫落和污染。棉塞的長度不小于管口直徑的2倍,約2/3塞進管口。 目前,國內(nèi)已開始采用塑料試管塞,可根據(jù)所用的試管的規(guī)格和實驗要求來選擇和采用合適的塑料試管塞。 若干支試管用繩扎在一起,在棉花塞部分外包裹油紙或牛皮紙,再用繩扎緊。三角瓶加棉塞后單個用油紙包扎。3、滅菌把要滅菌的物品放在箱內(nèi),堆積時要留入空隙,勿使接觸器壁、鐵殼,關閉箱門。接通電源,把位于箱頂?shù)耐饪走m當打開,使箱內(nèi)濕空氣能逸出,至箱內(nèi)溫度達到100時關閉。調(diào)節(jié)溫度控制器旋扭,直至箱內(nèi)溫度達到所需要溫度為止,觀察溫度是否恒定。若不穩(wěn)定,再進行調(diào)節(jié),穩(wěn)定后不可再撥動調(diào)節(jié)旋扭和通氣孔,保持140160,23h。滅菌結(jié)束后切斷電源,待箱內(nèi)溫度降至60時,才能打開箱門取出滅菌物品。同時,應將溫度調(diào)節(jié)旋扭調(diào)到零點,并打開通氣孔。高壓蒸汽滅菌鍋的操作過程:使用前,先在滅菌鍋內(nèi)加入適量的水,然后把要滅菌的物品放入鍋內(nèi),蓋上鍋蓋,對稱地擰緊螺栓,以防漏氣。在滅菌鍋底部加熱,同時打開排氣閥,待自排氣閥冒熱氣35min后關閉。至壓力表所示壓力升至所需壓力時開始計時。通過調(diào)整熱源,而維持一定的壓力。達到滅菌時間后,停止加熱。待鍋內(nèi)蒸氣全部排完后,方可打開排氣閥,打開鍋蓋,取出滅菌物品。使用完后,應及時將鍋內(nèi)的放去,以防生銹。高壓蒸汽滅菌鍋種類規(guī)格很多,以上操作步驟適用于手提式高壓蒸汽滅菌鍋。其它種類的滅菌鍋,它在使用時應嚴格按操作說明書操作。1、 根據(jù)要求清洗各玻璃器皿,并進行包扎。2、 用電熱干燥箱對玻璃器皿進行干熱滅菌。3、 用高壓蒸汽滅菌鍋對玻璃器皿進行蒸汽滅菌。實驗報告:1、 在干熱滅菌操作過程中應注意哪些問題,為什么?答:物品不要擺放太擠,以免妨礙空氣流通。滅菌物品不要接觸干燥箱內(nèi)壁的鐵板,以防包裝紙烤焦起火。滅菌時人不能離開。滅菌結(jié)束后不能忘記關掉電源。待溫度降到60度以下再打開,否則冷熱空氣交替,玻璃器皿容易炸裂或發(fā)生燙傷事故。2、為什么干熱滅菌比濕熱滅菌所需要的溫度要高,時間要長?答:在濕熱條件下,有水蒸汽的作用:高溫水蒸汽導熱比干空氣要快;高溫水蒸汽冷凝變水時有放熱過程;高溫水蒸汽能穿透細菌的細胞膜,直接進入細胞內(nèi)破壞細胞;高溫水蒸汽能水解一部分細胞結(jié)構,加速導熱。3、高壓蒸汽滅菌開始之前,為什么要將鍋內(nèi)冷空氣排盡?滅菌完畢后,為什么待壓力降低“0”時才能打開排氣閥,開蓋取物?答:在同一溫度下,濕熱的殺菌效力比干熱大,其原因有三:一是濕熱中細菌菌體吸收水分,蛋白質(zhì)較易凝固,因蛋白質(zhì)含水量增加,所需凝固溫度降低,二是濕熱的穿透力比干熱大;三是濕熱的蒸汽有潛熱存在,每1克水在100時,由氣態(tài)變?yōu)橐簯B(tài)時可放出226kJ(千焦)的熱量。這種潛熱,能迅速提高被滅菌物體的溫度,從而增加滅菌效力。 在使用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌時,滅菌鍋內(nèi)冷空氣的排除是否完全極為重要,因為空氣的膨脹壓大于水蒸汽的膨脹壓,所以,當水蒸汽中含有空氣時,在同一壓力下,含空氣蒸汽的溫度低于飽和蒸汽的溫度。如果壓力未降到0時,打開排氣閥,就會因鍋內(nèi)壓力突然下降,使容器內(nèi)的培養(yǎng)基由于內(nèi)外壓力不平衡而沖出燒瓶口或試管口,造成棉塞沾染培養(yǎng)基而發(fā)生污染。4、 在使用高壓蒸汽滅菌鍋時,怎樣杜絕一切不安全的因素?答:步奏正確,密封要好。一、高壓滅菌鍋使用前要水加到水位線;二、將需滅菌的培養(yǎng)基、蒸餾水或其它器皿放入滅菌鍋內(nèi),關閉鍋蓋,檢查排氣閥、安全閥狀態(tài),三、打開電源,檢查參數(shù)設置是否正確,然后按下“work”鍵,滅菌鍋開始工作;自動派冷氣,到105時,底部排氣閥門自動關閉,然后壓力開始上升;四、壓力升至 0.15MPa(121)時,滅菌鍋再次自動放氣,然后開始記時,一般培養(yǎng)基滅菌20min,蒸餾水滅菌30min;五、達到規(guī)定的滅菌時間后,關閉電源,打開放氣閥緩慢放氣;當壓力指針降至 0.00MPa時,放氣閥無蒸汽排除時,方可開啟鍋蓋。5、滅菌在微生物實驗操作中有何重要意義?答:防止培養(yǎng)基被污染;防止雜菌影響實驗結(jié)果。6、 黑曲霉的孢子與芽孢桿菌的孢子對熱的抗性

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