醫(yī)療器械產(chǎn)品輻照滅菌劑量驗(yàn)證方案與報(bào)告

XXXXX公司建立醫(yī)用產(chǎn)品滅菌劑量驗(yàn)證報(bào)告送檢單位： 公司日 期： 年 月 日目 錄序言2試驗(yàn)前準(zhǔn)備工作2方法3實(shí)施內(nèi)容4結(jié)果5結(jié)論6附注6參考資料6初始污染菌檢測(cè)規(guī)范7確定滅菌劑量9無(wú)菌檢查10序言本實(shí)驗(yàn)是對(duì)醫(yī)用產(chǎn)品公司的一次性醫(yī)療用品進(jìn)行了輻射滅菌劑量設(shè)定和驗(yàn)證。實(shí)驗(yàn)原理是基于ISO11137-2：2006的方法，即先對(duì)輻照前產(chǎn)品的初始污染菌進(jìn)行測(cè)定，然后選擇驗(yàn)證劑量。再用驗(yàn)證劑量對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行輻照，并測(cè)定輻照后存活微生物的樣品件數(shù)，以此來(lái)確定所確定的驗(yàn)證劑量能夠滿(mǎn)足10-6的滅菌保證水平。本實(shí)驗(yàn)從 年 月 日開(kāi)始至 年 月 日結(jié)束。試驗(yàn)前準(zhǔn)備工作一、樣品1樣品：醫(yī)用產(chǎn)品，三個(gè)批號(hào)：生產(chǎn)企業(yè)： 公司。2器具及試劑2.1器材試管容量瓶三角燒瓶酒精燈滅菌剪刀、鑷子滅菌平皿（9cm）75乙醇棉滅菌刻度吸管(1ml、5ml)紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)立式壓力蒸汽滅菌器電熱鼓風(fēng)干燥箱酸度計(jì)恒溫培養(yǎng)箱電熱恒溫水浴鍋生化培養(yǎng)箱電熱恒溫干燥箱2.2培養(yǎng)基及試劑：a)流體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基b)改良馬丁培養(yǎng)基c)營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基2.3稀釋液、沖洗液及其制備方法 a)質(zhì)量濃度為9g/L的無(wú)菌氯化鈉溶液b)0.1蛋白胨水溶液 取蛋白胨1.0g，加水1000ml，微溫溶解，濾清，調(diào)節(jié)pH值至7.10.2，分裝，滅菌。c)pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液 取磷酸二氫鉀3.56g、磷酸氫二鈉7.23g、氯化鈉4.30g、蛋白胨1.0g，加水1000ml，微溫溶解，濾清，分裝，滅菌。 二、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備2.1培養(yǎng)基要求：用于培養(yǎng)需（厭）氣菌和真菌的培養(yǎng)基的制備、培養(yǎng)基靈敏度檢查及其他各項(xiàng)要求應(yīng)符合中國(guó)藥典（二部）附錄中無(wú)菌檢查法的規(guī)定。培養(yǎng)基使用按中國(guó)藥典方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基。制備后采用驗(yàn)證合格的滅菌程序滅菌。制備好的培養(yǎng)基保存在225、避光的環(huán)境。2.2器具滅菌：與供試液接觸的所有器具應(yīng)采用可靠方法滅菌，置壓力蒸氣滅菌器內(nèi)12130min，或置電熱干燥箱內(nèi)1602h。2.3無(wú)菌室要求：無(wú)菌室操作臺(tái)局部符合潔凈度100級(jí)單向流空氣區(qū)域要求。無(wú)菌室在消毒處理完畢后，檢查空氣中的菌落數(shù)，方法如下：取直徑約90mm培養(yǎng)皿數(shù)支，無(wú)菌操作注入融化的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基約20mL，在3035培養(yǎng)48h證明無(wú)菌后，取3只培養(yǎng)皿在無(wú)菌室操作臺(tái)或超凈工作臺(tái)平均位置打開(kāi)上蓋，暴露30min后蓋好，置3035培養(yǎng)48h后取出檢查，3只培養(yǎng)皿上生長(zhǎng)的菌落數(shù)平均不得超過(guò)1個(gè)。無(wú)菌試驗(yàn)過(guò)程中檢查空氣中的菌落數(shù)，方法同上。在試驗(yàn)開(kāi)始進(jìn)行時(shí)打開(kāi)平皿蓋，至試驗(yàn)結(jié)束蓋好照上法培養(yǎng)，符合上述要求。2.4陽(yáng)性對(duì)照：選擇金黃色葡萄球菌為對(duì)照菌，接種金黃色葡萄球菌的新鮮培養(yǎng)物至營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，2328培養(yǎng)2448小時(shí)，將上述培養(yǎng)物用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)小于100cfu的菌懸液。陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)的菌液制備方法驗(yàn)證試驗(yàn)，加菌量小于100cfu，供試品用量同供試品無(wú)菌檢查每份培養(yǎng)基接種的樣品量。陽(yáng)性對(duì)照管培養(yǎng)4872小時(shí)應(yīng)生長(zhǎng)良好。2.5陰性對(duì)照：取相同稀釋液、沖洗液同上法操作，作為陰性對(duì)照。陰性對(duì)照不得有菌生長(zhǎng)。方法客戶(hù)提供生產(chǎn)的醫(yī)用產(chǎn)品，每件醫(yī)用產(chǎn)品均是一個(gè)獨(dú)立的單元產(chǎn)品，其樣品份額為1。具體步驟如下：1. 隨機(jī)抽取連續(xù)三批常規(guī)生產(chǎn)的產(chǎn)品，每批10件，共30件做生物負(fù)載檢測(cè)。另從其中一批隨機(jī)取5件樣品，做回收率實(shí)驗(yàn)。2. 當(dāng)每個(gè)批平均生物負(fù)載都不超過(guò)三批總平均生物負(fù)載的2倍時(shí)，根據(jù)三批的總平均負(fù)載的檢測(cè)結(jié)果，選擇滅菌保證水平為10-2的滅菌劑量作為驗(yàn)證劑量。3. 對(duì)以上三批抽樣產(chǎn)品連續(xù)生產(chǎn)的110件產(chǎn)品實(shí)施驗(yàn)證劑量，實(shí)際吸收劑量應(yīng)在驗(yàn)證劑量的3%之內(nèi)。4. 對(duì)用驗(yàn)證劑量輻照過(guò)的100件產(chǎn)品做無(wú)菌實(shí)驗(yàn)，其余的10件產(chǎn)品做無(wú)菌試驗(yàn)的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。5. 根據(jù)無(wú)菌實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，確定驗(yàn)證劑量是否被接受，即確定的驗(yàn)證劑量是否能夠滿(mǎn)足10-6的滅菌保證水平。實(shí)施內(nèi)容一、回收率測(cè)定取5ml洗脫液洗脫5支產(chǎn)品，分別洗脫四次，然后將樣品用營(yíng)養(yǎng)瓊脂做瓊脂覆蓋，于37培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)482h，記錄結(jié)果并得出修正系數(shù)。二、初始污染菌測(cè)定將隨機(jī)抽取的30件樣品中生物負(fù)載進(jìn)行評(píng)估，編號(hào)后，分別用5ml 洗脫液洗脫，吸取1ml置于9ml稀釋液中，振搖均勻后分別取1ml樣品液于兩個(gè)平皿中，記錄編號(hào)為101，102，代表五十倍樣，取1ml置于9ml稀釋液，振搖均勻后分別取1ml樣品液于兩個(gè)平皿中，記錄編號(hào)為1001，1002，代表五百倍樣。依次取第二件樣品，至30件樣品。傾注營(yíng)養(yǎng)瓊脂，于37培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)482h，記錄結(jié)果。三、 確定驗(yàn)證劑量ISO 11137：2006 醫(yī)療器械滅菌的有效性確認(rèn)和常規(guī)控制的要求中規(guī)定，若批次平均生物負(fù)載的每一個(gè)生物負(fù)載數(shù)值 總的平均生物負(fù)載*2，則用總的平均生物負(fù)載，若一批或更多批次的平均生物負(fù)載總的平均生物負(fù)載*2，則用最高批次。本次試驗(yàn)采用總平均初始污染菌120（cfu/SIP）確定驗(yàn)證劑量。查ISO11137：2006 表格得出對(duì)應(yīng)的驗(yàn)證劑量為8.2kGy，該試驗(yàn)劑量下的無(wú)菌保證水平SAL為10-2。四、驗(yàn)證劑量輻照結(jié)果從產(chǎn)品的單個(gè)批次中選出110個(gè)單元產(chǎn)品的樣本，暴露在XXXXX公司的電子加速器傳送帶上輻照，使輻射劑量落在8.25% kGy 范圍內(nèi)。輻照后進(jìn)行無(wú)菌試驗(yàn)。五、無(wú)菌試驗(yàn)5.1供試液制備及接種取樣品按容器內(nèi)表面積每10cm2加入浸提介質(zhì)1ml的比例，振搖數(shù)次。收集上述沖洗液或浸提介質(zhì)于無(wú)菌容器中。5.2無(wú)菌檢驗(yàn)培養(yǎng)溫度硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，置3035培養(yǎng)。改良馬丁培養(yǎng)基，置2328培養(yǎng)。5.3接種采用直接接種法每管培養(yǎng)基的最低用量硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基每管裝量不少于15ml，改良馬丁培養(yǎng)基每管裝量不少于10 ml。5.4培養(yǎng)、觀察上述含培養(yǎng)基的容器分別置規(guī)定溫度的恒溫培養(yǎng)箱中，除陽(yáng)性對(duì)照管和陰性對(duì)照管培養(yǎng)4872小時(shí)外，其余管培養(yǎng)14天。培養(yǎng)期間應(yīng)逐日觀察并記錄是否有菌生長(zhǎng)。結(jié)果對(duì)三批醫(yī)用產(chǎn)品進(jìn)行初始污染菌測(cè)試后，修正系數(shù)為1.08，結(jié)果如下：批 號(hào)初始污染菌平均數(shù)（cfu/件）總平均數(shù)因此，根據(jù)ISO11137-2：2006建立滅菌劑量的規(guī)定，選用總平均生物負(fù)載為120（cfu/件）來(lái)確定驗(yàn)證劑量。根據(jù)以上數(shù)據(jù)查表得驗(yàn)證劑量為 kGy,對(duì)以上 批次110件，實(shí)測(cè)劑量為 kGy（見(jiàn)輻照證明書(shū)）。經(jīng)觀察，100件樣品經(jīng)驗(yàn)證劑量輻照后的無(wú)菌檢查陽(yáng)性數(shù)為零。結(jié)論依據(jù)ISO 11137 ：2006 規(guī)定，當(dāng)SAL=10-6時(shí)，醫(yī)用產(chǎn)品的滅菌劑量為 kGy。在隨后的常規(guī)輻照滅菌過(guò)程中，應(yīng)通過(guò)劑量計(jì)監(jiān)測(cè)，證明每一個(gè)產(chǎn)品的最小吸收劑量能夠達(dá)到 kGy 的滅菌劑量，使滅菌保證水平為10-6SAL。依據(jù)ISO 11137 ：2006 標(biāo)準(zhǔn)，為了確保作為10-6SAL的滅菌劑量持續(xù)有效，必須按照規(guī)定的周期進(jìn)行驗(yàn)證劑量審核，通常每三個(gè)月進(jìn)行一次。附注1、 試驗(yàn)樣品不可替代批量產(chǎn)品。2、 當(dāng)批量產(chǎn)品輻照時(shí)的劑量確定，必須隨機(jī)抽取該批量部分產(chǎn)品作初始污染菌驗(yàn)證。參考資料1、 ISO11137-1：2006醫(yī)療保健產(chǎn)品的滅菌-輻照-第一部分：醫(yī)療器械滅菌過(guò)程的發(fā)展、確認(rèn)和常規(guī)控制要求2、 ISO11137-2：2006醫(yī)療保健產(chǎn)品的滅菌-輻照-第二部分：建立滅菌劑量3、 ISO11137-3：2006醫(yī)療保健產(chǎn)品的滅菌-輻照-第三部分：劑量指南4、 ISO11737-1：1995醫(yī)用器材滅菌-微生物學(xué)方法-第1部分：產(chǎn)品上微生物總數(shù)量的測(cè)定5、 ISO11737-2：1998醫(yī)用器材滅菌-微生物學(xué)方法-第2部分：滅菌過(guò)程確認(rèn)中的無(wú)菌試驗(yàn)初始污染菌檢測(cè)規(guī)范試驗(yàn)方法：1、初始污染菌檢測(cè)按ISO11737-2006醫(yī)療器械的滅菌-微生物方法第一部分產(chǎn)品上微生物總數(shù)的測(cè)定-MRC初始污染菌的測(cè)定2、菌落總數(shù)回收率的測(cè)定方法同（一）回收率測(cè)定結(jié)果樣品名稱(chēng)： 醫(yī)用產(chǎn)品 生產(chǎn)企業(yè)： 生產(chǎn)批號(hào)： 型號(hào)規(guī)格： 樣品數(shù)量： 樣本號(hào)洗脫次數(shù)每次洗脫的細(xì)菌數(shù)（cfu/SIP）平均菌落數(shù)123451234瓊脂覆蓋全部菌落數(shù)回收率%平均回收率修正系數(shù)初始污染菌檢測(cè)生產(chǎn)批號(hào)： 型號(hào)規(guī)格： 樣品數(shù)量： 樣本號(hào)批號(hào)樣本號(hào)批號(hào)樣本號(hào)批號(hào)需氧菌（cfu/SIP）需氧菌（cfu/SIP）需氧菌（cfu/SIP）111212122231323414245152561626717278182891929102030SIP 平均初始污染菌SIP 平均初始污染菌SIP 平均初始污染菌校正后批平均初始污染菌（*1.08）校正后批平均初始污染菌（*1.08）校正后批平均初始污染菌（*1.08）校正后平均初始污染菌確定滅菌劑量每批產(chǎn)品初始污染菌如下：批號(hào)平均初始污染菌數(shù)（cfu/件）總平均數(shù)劑量確定：按照ISO11137-2：2006中關(guān)于建立滅菌劑量驗(yàn)證方式1查得120cfu/件的驗(yàn)證劑量為 kGy。再按要求對(duì)A03批次110件醫(yī)用產(chǎn)品采用 kGy的驗(yàn)證劑量進(jìn)行輻照處理，經(jīng)無(wú)菌檢查，陽(yáng)性數(shù)為零。這表明， kGy能夠滿(mǎn)足醫(yī)用產(chǎn)品10-6的滅菌保證水平。無(wú)菌檢查試驗(yàn)方法:1、樣品接種均應(yīng)按無(wú)菌操作法進(jìn)行；2、無(wú)菌打開(kāi)包裝用滅菌剪刀、鑷子，將產(chǎn)品轉(zhuǎn)移至胰酪胨大豆肉湯中；3、將置有樣品的培養(yǎng)基放30+0.5的培養(yǎng)箱中的培養(yǎng)14天；觀察有無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)；結(jié)果：無(wú)菌試驗(yàn)的驗(yàn)證試驗(yàn)檢驗(yàn)結(jié)果生產(chǎn)批號(hào)試驗(yàn)樣品數(shù)量培養(yǎng)基溫度（）培養(yǎng)天數(shù)陽(yáng)性數(shù)陰性數(shù)110胰胳蛋白胨大豆肉湯300.521010結(jié)論：經(jīng)測(cè)