臨床檢驗方法評價

.,臨床檢驗方法的評價,王治國衛(wèi)生部臨床檢驗中心,cncc.,新方法進入常規(guī)應(yīng)用過程的流程圖,.,臨床實驗室檢測系統(tǒng),臨床檢驗檢測系統(tǒng)包括產(chǎn)生結(jié)果所需要的試劑、校準(zhǔn)物、儀器、消耗品及具體操作程序。試劑是化學(xué)溶液，以可預(yù)測方式給出分析項目的反應(yīng)；可預(yù)測的反應(yīng)允許我們測量每一樣本中存在的分析物的量。校準(zhǔn)物是含有已知量分析物的物質(zhì)。儀器將樣本與試劑混合，并將參考已知的校準(zhǔn)物的值，來比較患者、室間質(zhì)量評價或質(zhì)控樣本的反應(yīng)，或分析物可預(yù)測的化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生每一樣本的結(jié)果。消耗品包括裝樣本、分配樣本和試劑和測量化學(xué)反應(yīng)所需要的物品。過程包括準(zhǔn)備檢驗樣本、準(zhǔn)備試劑和校準(zhǔn)物、建立和維護儀器、將樣本與試劑結(jié)合、計算分析物的量、及報告結(jié)果的所必須的所有步驟。,.,臨床實驗室試劑的選擇,SFDA批準(zhǔn);分析系統(tǒng)（試劑+校準(zhǔn)品+儀器）及檢測結(jié)果的計量學(xué)可溯源性；試劑的穩(wěn)定性：（有效期、待機穩(wěn)定期）及校準(zhǔn)周期；方法學(xué)性能：精密度、線性、可比性,.,分析方法分級,決定性方法（definitivemethod）：經(jīng)詳盡研究尚未發(fā)現(xiàn)不準(zhǔn)確度或不確定性原因的方法。參考方法（referencemethod）：經(jīng)詳盡研究證實其不準(zhǔn)確度與不精密度可以忽略的方法。常規(guī)方法（routingmethod）：可滿足臨床或其他目的需要的日常使用的方法。,.,臨床檢驗方法學(xué)分類,.,臨床檢驗方法學(xué)分類,.,臨床檢驗方法分類,.,常規(guī)方法,參考方法,決定性方法,準(zhǔn)確度,應(yīng)用范圍,不同方法間的關(guān)系,.,標(biāo)準(zhǔn)品分級,標(biāo)準(zhǔn)品（referencematerial）：充分均勻并具有一個或多個良好確定的特性值的材料或物質(zhì)，用來校準(zhǔn)儀器設(shè)備、評估測定方法或給其它物質(zhì)賦值。一級標(biāo)準(zhǔn)品（原級參考物）：具有最高計量學(xué)特性，由一級參考測量程序定值；二級標(biāo)準(zhǔn)品：用一級標(biāo)準(zhǔn)品校準(zhǔn)，二級參考方法定值。校準(zhǔn)品（calibrator）：用二級標(biāo)準(zhǔn)品校準(zhǔn)，擬被用于校準(zhǔn)的常規(guī)方法定值。用于對常規(guī)方法和儀器的校準(zhǔn),.,一級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),人血清無機成分分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)GBW09135血清膽固醇標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)GBW09138,.,二級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),紅細(xì)胞微粒標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)GBW（E）090001膽紅素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)GBW（E）090002氰化高鐵血紅蛋白溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)GBW（E）090004純化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)GBW（E）090011,.,.,溯源鏈中的不確定度,真值,一級參考方法,二級參考方法,廠家標(biāo)準(zhǔn)方法,廠家常規(guī)方法,實驗室常規(guī)方法,不確定度,.,方法選擇的要求,（一）實用性要求在決定是否將新的方法或儀器在某一實驗室執(zhí)行前，一些實際的因素必須首先考慮。它們包括標(biāo)本類型、樣本量、分析能力、周轉(zhuǎn)時間、試驗菜單、標(biāo)本處理、分析批的大小、人員技能要求、每一試驗的成本、校準(zhǔn)方法、校準(zhǔn)頻率、隨機處理能力，質(zhì)控方法、空間需求（包括試劑貯存）、廢物處理要求、以及化學(xué)危險物和安全的考慮。（二）性能參數(shù)與方法或儀器性能有關(guān)的特征包括其準(zhǔn)確度、分析范圍、分析回收、分析靈敏度、分析特異度、空白讀數(shù)、檢出限、干擾、精密度、試劑穩(wěn)定性、“穩(wěn)健性”，及樣本的交互作用等。,.,分析方法相關(guān)的基本概念,校準(zhǔn)（calibration）是指在規(guī)定條件下，為確定測量儀器或測量系統(tǒng)所指示的量值，或?qū)嵨锪烤呋驑?biāo)準(zhǔn)物質(zhì)所代表的量值，與對應(yīng)的由標(biāo)準(zhǔn)所復(fù)現(xiàn)的量值之間關(guān)系的一組操作。（JIF1001-1998）,.,分析方法相關(guān)的基本概念,.,方法的評價的主要內(nèi)容,定量實驗室方法的初步評價（CLSIEP10）臨床化學(xué)設(shè)備操作精密度評價（CLSIEP5）用患者標(biāo)本進行方法學(xué)比較和偏倚評估（CLSIEP9）定量分析方法的線性（CLSIEP6）臨床化學(xué)干擾試驗（CLSIEP7）定性測試性能評估(CLSIEP12)基質(zhì)效應(yīng)的評價（CLSIEP14）精密度和準(zhǔn)確度性能的用戶證實(EP15-A)臨床實驗方法總分析誤差的估計（EP21-A)使用ROC曲線實驗室試驗臨床準(zhǔn)確度評價（CLSIGP10）臨床實驗室如何定義和確定參照區(qū)間(C28-A2)NCCLSNationalCommitteeforClinicalLaboratoryStandardsCLSIClinicalandLaboratoryStandardsInstitute,.,.,.,臨床化學(xué)設(shè)備的精密度評價,EvaluationofPrecisionPerformanceofClinicalChemistryDevices,ApprovedGuideline,1984,EP5,.,精密度的內(nèi)容,批內(nèi)不精密度批間不精密度日內(nèi)不精密度日間不精密度總不精密度,.,實驗方法,試劑和校準(zhǔn)物：同一批號樣本：基質(zhì)與臨床樣本相似，2個以上濃度（參考醫(yī)學(xué)決定水平）。實驗天數(shù)：20天以上實驗次數(shù)：每天2批，每批2個樣本，每個樣本重復(fù)2次,.,精密度實驗,.,批內(nèi)不精密度,I=總實驗天數(shù)（一般為20天）j=每天測定的批次（一般為2批）Xij1=第i天j批實驗第一次結(jié)果Xij2=第i天j批實驗第二次（重復(fù)）結(jié)果,.,批間不精密度,I=實驗天數(shù)（通常為20天）Xi1=第i天第一批實驗結(jié)果的平均值（通常重復(fù)2次）Xi2=第i天第二批實驗結(jié)果的平均值（通常重復(fù)2次）,.,日間不精密度,I=實驗天數(shù)X=所有結(jié)果的平均值Xi第I天所有結(jié)果的平均值,.,總不精密度,.,精密度性能的用戶核實,實驗至少要做5天，每批每個水平(要求2個濃度水平)作4次重復(fù)檢測。利用方差分析進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計。計算批內(nèi)不精密度(CV或SD),并將與廠家批內(nèi)不精密度比較。計算總不精密度(CV或SD)，并將與廠家總不精密度比較?；蛘邔⒖偛痪芏扰c不精密度分析目標(biāo)進行比較。,.,.,.,NCCLS文件EP9-A,用患者樣本進行方法對比及偏倚評估,批準(zhǔn)指南,1995年12月,.,目的及用途,引進新方法前或用一種方法替代另一種方法時進行偏倚分析；評價同一分析項目的兩種分析方法間的偏倚。,.,評價操作要求,熟悉儀器操作熟悉評價方案質(zhì)量控制足夠的數(shù)據(jù),.,實驗樣本要求,來源于健康人或患者，無干擾，盡量避免儲存；測定物濃度范圍應(yīng)在醫(yī)學(xué)決定水平范圍內(nèi)均勻分布；樣本數(shù)至少40例，增加數(shù)量能提高可信性,.,對比方法,廠家要求的實驗室常規(guī)方法或公認(rèn)的參考方法。具有好的精密度沒有已知的干擾物相同單位相對國家標(biāo)準(zhǔn)或參考方法的偏倚是已知的,.,測定方法,每天分別用兩種方法進行測定，測定順序：1、2、3、4、5、6、7、88、7、6、5、4、3、2、1測定次數(shù)：至少測定5天，共40個樣本,.,數(shù)據(jù)監(jiān)督,常規(guī)質(zhì)控：系統(tǒng)誤差人為誤差,.,實驗步驟,熟悉儀器及方法收集數(shù)據(jù)檢查方法內(nèi)的離群點界限：（雙份測定）相對差值均值的4倍,.,繪圖,散點圖：均值散點圖（X，Y）所有值散點圖（Yij，Xi）偏倚圖：散點圖（Yij-Xij），Xi）,.,.,.,均值散點圖（X，Y）,.,偏差圖：每次測定的Y均值與X均值之差-相應(yīng)X均值圖,.,兩種方法間離群值目測檢查,界限：4倍兩種方法間絕對偏倚的均值絕對差值允許范圍:相對差值允許范圍:,.,適合范圍：計算r，r2=0.95范圍適合r20.95擴大數(shù)據(jù)范圍線性回歸：計算均勻離散度的直觀檢查,.,.,.,預(yù)期偏倚及可信范圍線性回歸方程計算偏倚（高、中、低3組）解釋實驗結(jié)果并與內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)比較,.,.,.,準(zhǔn)確度的用戶核實,選擇20份患者的新鮮標(biāo)本，它們內(nèi)含的分析物濃度分布于實驗方法的可報告范圍。不使用分析物濃度超出可報告范圍的樣品。兩個方法對標(biāo)本檢測應(yīng)在同1天的4小時內(nèi)完成。如果實驗安排35天，每天進行57份標(biāo)本檢測，這樣得到的結(jié)論是最可靠的。,.,.,.,評價方法可接受性,1通過試驗確定的誤差估計與分析目標(biāo)建立的規(guī)范確定的界限進行比較。2當(dāng)獲得的總誤差值小于方法允許的總誤差時，可認(rèn)為侯選方法的性能是可接受的。3當(dāng)一種或多種分析參數(shù)發(fā)現(xiàn)大于方法的允許誤差，可認(rèn)為侯選方法的性能是不可接受的。當(dāng)這種情況出現(xiàn)時，必須改進方法的性能；如果不能改進，則需要舍棄該方法。,.,.,允許不精密度制定,根據(jù)本國各實驗室室內(nèi)變異系數(shù)水平確定。根據(jù)室間質(zhì)量評價允許總誤差（TEa)確定允許的CV%:1/4TEa,1/5TEa,1/6TEa根據(jù)生物學(xué)變異確定允許的CV%:,.,.,.,.,.,.,.,臨床檢驗方法評價決定圖的制作及應(yīng)用,.,定量測量程序的線性評價,EvaluationoftheLinearityofQuantitativeMeasurementProcedures:AStatisticalApproachEP6-A,.,目的,為實驗室中采用定量分析方法的用戶提供評價儀器或方法是否滿足廠家線性指標(biāo)的評價方法。用戶可為分析方法設(shè)定線性范圍。,.,定義,實驗范圍（AssayRange）：或者線性范圍（LinearRange)：分析系統(tǒng)最終輸出的、與被測物濃度或活性成比例的、濃度或活性值范圍,.,定義,線性（Linearity）:曲線接近直線的程度的量；與完整系統(tǒng)的反應(yīng)相關(guān)（是最后的分析結(jié)果或解釋，不僅是儀器的輸出結(jié)果）,.,ScopeandLimitations,線性是分析方法的一個特征，不同于準(zhǔn)確性和精密度。線性實驗應(yīng)該使用與待分析物基質(zhì)相似的樣本。線性檢驗“系統(tǒng)”反應(yīng)，包括校準(zhǔn)、線性化技術(shù)、系數(shù)和儀器反應(yīng)。,.,檢測系統(tǒng),TestingSystem全部檢測過程，包括儀器，樣品，人員，試劑，消耗品和程序；注：還有以下屬性（方法特征）：樣本類型，檢測溫度，濕度，等,.,使用者的需求,用簡單的實驗來檢驗廠家標(biāo)示的線性范圍及定量分析方法的分析范圍；在實驗室中作為方法學(xué)的信息（方法線性）；進行線性評價實驗。,.,儀器的熟悉過程,執(zhí)行分析過程的實驗室人員必須掌握儀器操作和維護程序、樣本準(zhǔn)備方法和校準(zhǔn)。對較簡單的設(shè)備需要5天或更少時間。對較復(fù)雜的多通道設(shè)備需要5天或更長時間。,.,實驗周期,在完成儀器熟悉過程后開始實驗并收集數(shù)據(jù)。全部實驗和數(shù)據(jù)采集應(yīng)在同一工作日內(nèi)完成。,.,線性評價實驗樣本要求,樣本數(shù)量：驗證線性：5-7個濃度水平，重復(fù)2次測定。建立線性：7-11個濃度水平，測定2-4次基質(zhì)：應(yīng)使用與病人樣本相似的樣本或注明基質(zhì)類型。,.,可以使用的樣本,病人混合血清（理想的樣本基質(zhì)）建立線性范圍：高值樣本：高于上限20-30%低值樣本：線性低限或更低。,.,可以使用的樣本,含添加物的混合病人血清：加入品在沒有干擾物存在時不需高純度。經(jīng)處理的材料稀釋的混合血清用于降低分析物濃度，材料處理：透析、熱處理、層析。,.,可以使用的樣本,生理鹽水稀釋的混合血清：在線性實驗中使用此類樣本可掩蓋不同的基質(zhì)效應(yīng)。商品質(zhì)控或校準(zhǔn)品：此類樣本由于不是正常的生理形式，可掩蓋實際的線性結(jié)果。,.,可以使用的樣本,不同比例稀釋商品質(zhì)控物；水溶液：一般無基質(zhì)效應(yīng)其它溶液：基質(zhì)效應(yīng)與有機溶劑相似,.,推薦的樣本添加材料,ALB：白蛋白干粉、humanfractionV.乙醇：無水乙醇AMS：腮腺或胰腺提取物BIL：膽紅素純品Ca:CaCO3Cl:NaCl,.,推薦的樣本添加材料,CHOL：膽固醇純品或稀釋質(zhì)控品CO2：CaCO3CREA：標(biāo)準(zhǔn)液或高值血清-ALT：純酶GLU：右旋糖AST：純酶ALT：純酶,.,推薦的樣本添加材料,Lipase：胰腺提取物Mg：MgCl2P:K(H)2PO4或Na(H)PO4TP：白蛋白干粉、人或牛的成份VUA：在得不到高值病人樣本時，使用標(biāo)準(zhǔn)儲備液或干燥尿酸。BUN：在得不到高值病人樣本時，使用標(biāo)準(zhǔn)儲備液或干燥尿素。,.,樣本分析順序,分析序列應(yīng)為隨機排列。有顯著攜帶污染時，應(yīng)用空白隔開樣本。每個實驗組內(nèi)應(yīng)至少分析5-7個不同濃度水平的樣本。,.,樣本濃度范圍,應(yīng)覆蓋待評線性范圍的上、下限。評價結(jié)果不滿意時應(yīng)重新設(shè)定濃度。線性范圍內(nèi)至少應(yīng)保留有5-7個濃度。,.,樣本的準(zhǔn)備,足量的混合血清。低濃度混合血清（No1）；高濃度混合血清（No5）血清（No2）：3份“No1”+1份“No5”血清（No3）：2份“No1”+2份“No5”血清（No4）：1份“No1”+3份“No5”,.,樣本濃度計算,C1V1+C5V5濃度=-V1+V5,.,數(shù)據(jù)收集,x1y1-1y1-2y1-3y1-4x2y2-1y2-2y2-3y2-4x3y3-1y3-2y3-3y3-4x4y4-1y4-2y4-3y4-4x5y5-1y5-2y5-3y5-4,.,數(shù)據(jù)評價,觀察有無明顯的數(shù)據(jù)錯誤；若有明顯異常時應(yīng)判斷是否為離群點；如離群點超出2點，則保留全部數(shù)據(jù)或重做全部實驗。,.,離群點檢查,用于特定濃度Y值離群點的檢驗。將4個重復(fù)值從大到小排列（Y1到Y(jié)4）。計算：D=Y1-Y4若Y1可能是離群點，計算：D1=（Y1-Y2）/D若Y4可能是離群點，計算：D4=（Y3-Y4）/D,.,離群點判斷,判斷值（Criticalvalue)(0.05)0.765(0.01)0.889,.,繪圖和評價,線性X-Y圖，X軸為分析物濃度；反應(yīng)值或儀器輸出值為Y軸；目測離群值：(Y=aX+b)目測線性判斷是否符合要求；進行統(tǒng)計學(xué)判斷和評價。,.,多項式回歸分析,一次方程：y=b+b1x二次方程：y=b+b1x+b2x2三次方程：y=b+b1x+b2x2+b3x3,EP6-A指南的主旨是利用多項式回歸分析方法判定線性。多項式回歸分析是研究一個因變量與一個自變量間的多項式的方法,即比較一階(直線)、二階(拋物線)和三階(S形線)多項式的回歸分析方法。多項式回歸分析的最大優(yōu)點是可以通過增加X的高階項對實測點進行逼近直至滿意為止,從而建立最優(yōu)的多項式回歸方程。,.,.,.,.,.,注意,統(tǒng)計學(xué)標(biāo)準(zhǔn)和臨床可接受限不同。慎用方法學(xué)線性范圍從0開始。有臨床意義的濃度應(yīng)在線性評價中：最小的線性濃度醫(yī)學(xué)決定水平最大的線性濃度,.,衛(wèi)生部臨床檢驗中心組織的線性評價或校準(zhǔn)驗證的室間質(zhì)量評價計劃的結(jié)果可用于實驗室檢測項目的線性評價：Beckman自動生化分析儀器Roche或Hitachi自動生化分析儀器Olympus自動生化分析儀器,.,.,實驗室檢驗的臨床準(zhǔn)確性評價,NCCLGP10A,.,GP10-A,AssessmentofTheClinicalAccuracyofLaboratoryTestsUsingReceiverOperatingCharacteristic(ROC)Plots;ApprovedGuideline(1995)“用ROC曲線圖評價實驗室檢驗的臨床準(zhǔn)確性”,.,定義,臨床檢驗信息：準(zhǔn)確性：敏感性Sensitivity特異性Specificity有用性：,.,定義,臨床準(zhǔn)確性（ClinicalAccuracy）：衡量檢驗項目對于不同健康狀況的區(qū)分能力。如：健康與疾病；良性與惡性疾?。粚χ委煹姆磻?yīng)性與不反應(yīng)性；預(yù)測疾病的好轉(zhuǎn)與惡化,.,定義,臨床有用性（Usefulness）：檢驗信息在病人管理中的實用價值，如：檢驗成本；假陽（或假陰）性率；有損傷小、成本低的其他方法；檢驗技術(shù)要求；檢驗創(chuàng)傷和舒適性,.,定義,ROC：ReceiverOperatingCharacteristic受試者工作特征ROC曲線：描述實驗室檢驗的敏感性和特異性關(guān)系的曲線。,.,ROC曲線,.,.,定義,陽性預(yù)測值（PPV）真陽性結(jié)果數(shù)真陽性結(jié)果數(shù)+假陽性結(jié)果數(shù),.,定義,陰性預(yù)測值（NPV）真陰性結(jié)果數(shù)真陰性結(jié)果數(shù)+假陰性結(jié)果數(shù),.,ROC曲線的意義,.,ROC曲線的意義,.,ROC曲線的意義,.,用ROC圖進行方法比較,.,ROC曲線的繪制,.,ROC曲線的繪制,進行臨床準(zhǔn)確性實驗確定診斷的敏感性和特異性繪制ROC曲線圖ROC分析：敏感性/特異性的置信區(qū)間；ROC曲線下面積；多實驗ROC曲線的比較；其他,.,ROC曲線的繪制,.,ROC曲線的繪制,.,ROC曲線制作及分析軟件,CLINROCMetzROCANALYZERROCLABRULEMAKERSIGNALTEP-UH,.,ROC曲線的優(yōu)點,利用簡單易于分辨的圖形反應(yīng)臨床準(zhǔn)確性指標(biāo)；不需要確定臨床決定水平；可直接用于不同檢驗方法臨床準(zhǔn)確性的比較,.,ROC曲線的局限性,不能顯示實際的臨界值；不能提示樣本數(shù)量；ROC曲線分析參數(shù)計算復(fù)雜；缺少實用性強的計算機軟件。,.,定性實驗性能評估(CLSIEP12),定性實驗（qualitativetests）僅給出陽性或陰性（是或非）的實驗結(jié)果。在臨床實驗室中使用一項新的定性檢驗方法可以有許多理由，如使用簡便、低成本、操作過程規(guī)范或能滿足使用者的特殊要求。但在使用新方法進行患者樣本檢驗前，使用者必須進行相關(guān)的實驗準(zhǔn)備工作，包括與其它方法的比較、使用培訓(xùn)、正確采集標(biāo)本和必要的室內(nèi)質(zhì)量控制過程等。對定性實驗方法進行評價時，使用患者樣品進行重復(fù)性實驗和方法比較是非常重要的內(nèi)容。,.,一、定性實驗的臨床應(yīng)用,在臨床實驗室中，定性試驗可用于篩查、診斷、確認(rèn)、或監(jiān)測為目的的測定。試驗的敏感性、特異性、預(yù)測值和效率等，決定了其在臨床應(yīng)用的范圍。從臨床應(yīng)用的角度講，定性實驗可分為篩查實驗、診斷實驗和確證實驗。,.,一、定性實驗的臨床應(yīng)用,篩查實驗（screeningtests）篩查實驗通常用于對整個人群或特定人群中是否存在初測物的檢查，如大便潛血實驗。作為篩查實驗，通常要求檢驗方法有較高的敏感性，以保證不漏掉真陽性結(jié)果。診斷實驗（diagnostictests）定性實驗用于特定疾病的診斷或臨床可疑指征的判斷，如微生物學(xué)培養(yǎng)與細(xì)菌鑒定。通常情況下，診斷性實驗要求方法學(xué)同時具有較好的敏感性和特異性。但是，在有確證實驗的條件下，可以適當(dāng)放寬對方法學(xué)特異性的要求。確認(rèn)實驗（confirmatorytests）確認(rèn)實驗通常在篩查實驗和診斷實驗之后進行，對已做出的檢驗結(jié)果進行驗證和確認(rèn)，以幫助臨床醫(yī)生做出正確的臨床診斷。確認(rèn)實驗一般設(shè)計為有較好的特異性和較高的陽性預(yù)測值。,.,一、定性實驗的臨床應(yīng)用,臨界值（cutoff）實驗結(jié)果處于（陰、陽性）分界點時的樣品中分析物濃度值，低于此值，定性實驗的結(jié)果為陰性，高于此值，定性實驗的結(jié)果為陽性。對定性實驗來講，臨界值是唯一的醫(yī)學(xué)決定水平，當(dāng)樣品中被測物濃度處于臨界水平時，定性實驗重復(fù)檢查同一樣品，將產(chǎn)生50%的陽性結(jié)果和50%的陰性結(jié)果。當(dāng)樣品濃度在臨界值以上增加時，陽性結(jié)果比率增加；而當(dāng)樣品濃度在臨界值以下減低時，陰性結(jié)果比率增加。臨床界值的95%區(qū)間在樣品濃度高于臨界值并重復(fù)實驗產(chǎn)生95%陽性結(jié)果和濃度低于臨界值并產(chǎn)生95%陰性結(jié)果之間的樣品濃度范圍。,.,二、定性實驗方法學(xué)評價,評價準(zhǔn)備在開展定性實驗方法的評價工作之前，操作人員應(yīng)有一個熟悉和培訓(xùn)的過程，使操作人員掌握樣本的處理和保存、試劑的處理和保存、正確的實驗過程和結(jié)果解釋、及質(zhì)量控制（QC）操作。培訓(xùn)應(yīng)當(dāng)在不同工作日內(nèi)進行，并能使工作人員的操作能力達(dá)到臨床應(yīng)用的要求。在使用生產(chǎn)商提供的質(zhì)控物時，應(yīng)按生產(chǎn)者的要求進行，使用其他商業(yè)質(zhì)控物必須注意可能存在的基質(zhì)效應(yīng)問題?？赡軙r，在進行方法學(xué)評價期間，應(yīng)使用相同的質(zhì)控物。對大多數(shù)定性實驗，每日進行陰性和陽性質(zhì)控物測定已經(jīng)足夠。用于評價實驗的臨床標(biāo)本，應(yīng)按要求采取。必要時，應(yīng)新鮮采取，并盡快完成檢測，在熟悉方法和操作培訓(xùn)過程結(jié)束后，可以繼續(xù)方法學(xué)評價工作。,.,二、定性實驗方法學(xué)評價,重復(fù)性評價在評價實驗期間，應(yīng)做好質(zhì)量控制工作，以保證實驗在預(yù)期的質(zhì)量目標(biāo)下進行和實驗數(shù)據(jù)的有效性。質(zhì)控物可使用試劑生產(chǎn)者推薦的陰性和陽性質(zhì)控物。重復(fù)性評價實驗可以與方法學(xué)比較實驗同期進行。重復(fù)性評價實驗應(yīng)該提供樣品濃度接近臨界值時的精密度結(jié)果，而用遠(yuǎn)低于或高于臨界值濃度的樣品進行定性實驗的重復(fù)性評價是不適當(dāng)?shù)摹Ｔ谂R界值95%區(qū)間之外，定性方法給出相同測定結(jié)果的能力（陰性或陽性）是評價其方法性能的重要指標(biāo)。定性實驗方法的重復(fù)性評價目的是確立被評價方法的臨界值，進一步確立臨界值20%的樣本濃度范圍是否在該方法臨界值95%區(qū)間內(nèi)。重復(fù)性評價實驗可按以下步驟進行：,.,二、定性實驗方法學(xué)評價,重復(fù)性評價1確立方法的臨界值參考試劑說明書或用陽性樣品進行稀釋，直至重復(fù)實驗給出的陽性和陰性結(jié)果各占50%，此時的樣品濃度即為實驗方法的臨界值。2在臨界值基礎(chǔ)上準(zhǔn)備出-20%濃度的樣品和+20%濃度的樣品。3對以上低、高濃度樣品分別測定20次，記錄陰性及陽性結(jié)果數(shù)；重復(fù)次數(shù)低于20時，統(tǒng)計學(xué)意義可能降低。4當(dāng)實驗結(jié)果表明“臨界值”樣品的陰性結(jié)果和陽性結(jié)果不是各占50%時，原因可能是：被評估的臨界值濃度不準(zhǔn)確、或結(jié)果數(shù)據(jù)不充足、或方法學(xué)劑量反應(yīng)曲線在臨界值處是非線性的。5當(dāng)實驗結(jié)果表明+20%濃度的樣品產(chǎn)生陽性結(jié)果數(shù)95%，同時，-20%濃度的樣品產(chǎn)生陰性結(jié)果數(shù)95%，說明臨界值20%濃度范圍等于或超出臨界值的95%區(qū)間，對于被測物濃度在20%濃度范圍以外的樣品，實驗方法將給出穩(wěn)定的結(jié)果。當(dāng)陽性和/或陰性結(jié)果數(shù)95%時，應(yīng)另外準(zhǔn)備不同濃度的實驗樣品，重新進行評價。,.,二、定性實驗方法學(xué)評價,方法學(xué)比較1樣品種類和數(shù)量進行方法學(xué)研究時的樣品最好使用常規(guī)患者的新鮮標(biāo)本，樣品量應(yīng)保證評價實驗方法和比較方法測定的需要。樣品中被測物應(yīng)穩(wěn)定，應(yīng)盡可能用評價方法和對比方法同時完成測定。作為最低要求，用對比方法測定的陰性和陽性樣品，應(yīng)分別在50例以上。常規(guī)檢測時，為保證陽性樣品達(dá)到50例，陰性樣品可能已大大超過50例，為保證正確評價陽性樣品中可能出現(xiàn)的假陰性問題，必須保證有足夠的樣品量。2實驗過程使用臨床樣品進行方法學(xué)對比研究應(yīng)在10到20天內(nèi)完成，一方面能保證足夠的樣品量，另一方面也確保對實驗方法的評價在常規(guī)實驗條件下進行。全部實驗樣品都應(yīng)妥善保存，以備再次檢測用。可以通過對比方法再次測定，或使用另一種對比方法、或使用臨床診斷提供更多的信息以解釋實驗中的問題。,.,二、定性實驗方法學(xué)評價,方法學(xué)比較3參考樣品盤由一組臨床樣品組成，測定結(jié)果可與指定的參考方法或臨床診斷相聯(lián)系，對評價定性實驗方法是非常有效的。參考樣品盤通常包含不同濃度被測物的臨床樣品，可能時，還包括干擾物質(zhì)。雖然樣品盤有許多優(yōu)點，適用于評價實驗，但是不易得到，也不能反映實驗室條件下