GB 29686-2013 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 豬可食性組織中阿維拉霉素殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

G 中華人民共和國 國 家標(biāo)準(zhǔn) 9686 2013 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 豬可食性組織中阿維拉霉素殘留 量的測定液相色譜 in of （電子版本僅供參考，以標(biāo)準(zhǔn)正式出版物為準(zhǔn)） 2013布 2014施 中華人民共和國農(nóng)業(yè)部 中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會 發(fā)布 I 目 次 目 次 . I 前 言 . 可食性組織中阿維拉霉素殘留量的測定 液相色譜 . 1 范圍 . 2 規(guī)范性引用文件 . 3 原理 . 4 試劑和材料 . 5 儀器和設(shè)備 . 6 試料的制備與保存 . 料的制備 . 料的保存 . 7 測定步驟 . 取 . 化 . 準(zhǔn)曲線的制備 . 定 . 白試驗 . 8 結(jié)果計算與表述 . 9 檢測方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度 . 敏度 . 確度 . 密度 . 附錄 A . 言 本標(biāo) 準(zhǔn)的附錄 A 為資料性附錄。 本標(biāo)準(zhǔn)系國內(nèi)首次發(fā)布的國家標(biāo)準(zhǔn)。 豬可食性組織中阿維拉霉素殘留量的測定 液相色譜 1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了豬 可食性 組織中阿維拉霉素殘留 量 檢測的 制樣和 液相色譜 法 。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于豬 的 肌肉 、 脂肪 /皮 、 肝臟 和 腎臟中 阿維拉霉素 殘留量的檢測。 2 規(guī)范性引用文件 下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件， 其 隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用 這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。 準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第 1 部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫規(guī)則 6682 分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法 3 原理 試料中殘留的阿維拉霉素， 用 丙酮提取，氫氧化鈉溶液水解， 再用 乙酸乙酯提取， 氧化鋁 固相萃取柱凈化 ，以二氯甲氧苯酸為內(nèi)標(biāo)物， 液相色譜 定 ，內(nèi)標(biāo)法定量。 4 試劑和材料 以下所用的試劑，除特別注明外均為 分析 純試劑，水為符合 6682 規(guī)定的一級水。 阿維拉霉素 、 阿維拉霉素殘留標(biāo)示物 準(zhǔn)品： 含量 98。 內(nèi)標(biāo)物： 二氯甲氧苯酸 標(biāo)準(zhǔn)品 ：含量 98。 甲醇 ： 色譜純 。 正己烷 乙睛 ：色譜純 。 乙酸乙酯 丙酮 甲酸 氫氧化鈉 磷酸 中性氧化鋁 固相萃取 柱： 1 000 相當(dāng)者 。 1 氫氧化鈉溶液 ： 取氫氧化鈉 4 g，用水溶解 并 稀釋至 100 洗脫液 ： 取 甲酸 5 乙腈 溶解并稀釋至 100 1 mg/維拉 霉素 和阿維拉霉素殘留標(biāo)示物 準(zhǔn)貯備液： 精密稱取 阿維拉霉素 和阿維拉霉素殘留標(biāo)示物 0 別于 10 甲醇 溶解并稀釋至刻度，配制成濃度為 1 mg/維拉霉素 和阿維拉霉素殘留標(biāo)示物 準(zhǔn)貯備液。 2 4 保存 ，有效期 1 個月 。 10 g/維拉霉素 和阿維拉霉素殘留標(biāo)示物 準(zhǔn)工作液： 精密量取 1 mg/維拉霉素和阿維拉霉素殘留標(biāo)示物 準(zhǔn)貯備液 各 1.0 別于 100 瓶中，用 甲醇 溶解并稀釋至刻度，配制成濃度為 10 g/ 阿維拉霉 素和阿維拉霉素殘留標(biāo)示物 準(zhǔn) 工作液。 2保存 ，有效期 1 個月。 1 mg/標(biāo)物 二氯甲氧苯酸 標(biāo)準(zhǔn)貯備液 ： 精密稱取 二氯甲氧苯酸 10 10 瓶中， 用 甲醇 溶解并稀釋至刻度，配制成濃度為 1 mg/ 二氯甲氧苯酸 標(biāo)準(zhǔn)貯備液。 2 4 保存 ，有效期1 個月 。 2 g/標(biāo)物 二氯甲氧苯酸 標(biāo)準(zhǔn)工作液： 精密量取 1 mg/氯甲氧苯酸 標(biāo)準(zhǔn)貯備液 200 L，于 100 瓶中，用 甲醇 溶解并稀釋至刻度，配制成濃度為 2 g/ 二氯甲氧苯酸 標(biāo)準(zhǔn) 工作液。2保存 ，有效期 1 個月。 5 儀器和設(shè)備 效液相色譜 配 大氣壓化學(xué)電離源（ 。 析天平 ： 感量 1 g。 平 ： 感量 g。 凍高速離心機(jī) 蕩器 渦混合器 質(zhì)機(jī) 吹儀 轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 相萃取裝置 底燒瓶： 50 心管： 15 50 6 試料的制備與保存 料 的制備 取新鮮或冷凍空白或供試組織， 絞碎， 并使均質(zhì)。 取 均質(zhì)后的 供試樣品 ，作為 供試 試料 。 取均質(zhì) 后的 空白樣品，作為空白 試料 。 取 均質(zhì)后的空白樣品 ， 添加適宜濃度 的 標(biāo)準(zhǔn) 工作 液 ， 作為空白添加試料。 料 的保存 以下 保存。 7 測定步驟 取 稱取 肌肉 或 脂肪 試料 （ 2g 、 肝臟 或 腎臟 試料 （ 1g ， 于 15 心管中，加丙酮 4 旋 5 6 000 r/心 10取 上清 液 ， 于 50 底燒瓶中 。殘渣中 加 丙酮 4 復(fù) 提取 兩次，合并 3 次上清液， 于 60 旋轉(zhuǎn) 蒸發(fā)至 干， 用 1 氫氧化鈉 溶液 4 解殘 余物 ，轉(zhuǎn) 至 50 心管中， 于 70 水浴 2 h，取出，用 85磷酸調(diào) 乙酸乙酯 4 混勻，于 6 000 r/心 10 取 上清液 于 另一離心管中， 重復(fù)兩次，合并 3 次 上清液 ，加 2 g/氯甲氧苯酸內(nèi)標(biāo) 0.5 空白 試料 除外 ） ，混勻備用。 化 氧化鋁 萃取柱 用乙酸乙酯 10 化 ， 取 備用液 過柱 ， 分別用正己烷 5 酸乙酯 5 甲醇 5 洗， 用 洗脫 液洗脫兩次 ，每 次 7收集洗脫液， 于 50 旋轉(zhuǎn) 蒸發(fā)至干 ， 用 甲醇 1.0 解 殘余物 ， 渦旋 混勻 ， 供 液相色 譜 準(zhǔn)曲線的制備 精密量取 10 g/維拉霉素殘留標(biāo)示物 準(zhǔn)工作液 適 量 ，用甲醇 稀釋， 配 制成濃度為 5、50、 100、 200、 400 和 800 g/L 的 系列 標(biāo)準(zhǔn) 溶 液， 供液相色譜 以特征離子質(zhì)量色譜峰面積為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 。 求回歸方程和相關(guān)系數(shù)。 定 相 色譜條件 色譜柱： 150 .6 徑 5 m） ，或相當(dāng)者； 流動相：甲醇 +水（ 50+50， v/v） ； 流速： 0.6 mL/樣量： 10 g/L； 柱溫： 40 ； 譜 條件 離子源： 掃描方式：負(fù)離子掃描； 檢測方式：選擇反應(yīng)監(jiān)測； 蒸發(fā)溫度： 400 ； 離子傳輸管溫度： 275 ； 鞘氣壓力： 25 輔助氣壓力： 5 選擇反應(yīng)監(jiān)測的優(yōu)化參數(shù)見表 1。 表 1 阿維拉霉素選擇反應(yīng)監(jiān)測的優(yōu)化參數(shù) 藥物名稱 相對保留時間 離子質(zhì)量數(shù) 定性離子及碰撞能量v 定量離子及碰撞能量v 阿維拉霉素殘留標(biāo)示物 49 249189（ 23） 249205（ 16） 249205（ 16） 二氯 甲氧苯酸 19 219159（ 18） 219145（ 15） 219175（ 8） 定法 性測定 通過 試樣 色譜圖的保留時間與 相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品 的保留時間、各色譜峰的特征離子與相應(yīng)濃度 標(biāo)準(zhǔn)溶液 各色譜峰的特征離子相對照定性。 試樣 與標(biāo)準(zhǔn) 品 保留時間的相對偏差不大于 5； 試樣 特征離子的相對豐度 與濃度相當(dāng)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的相對豐度一致，相對豐度偏差不超過表 2 的規(guī)定，則可判斷 試樣 中存在相應(yīng)的被測物 。 表 2 定性測定時相對離子豐度的最大允許偏差 相對離子豐度 50% 20%至 50% 10%至 20% 10% 允許的相對偏差 20% 25% 30% 50% 將供試試樣和標(biāo)準(zhǔn)溶液的定量離子面積之比作單點校正定量。 量測定 取試樣溶液和 標(biāo)準(zhǔn)溶液 ，按外標(biāo)法 ，以峰面積 定量，標(biāo)準(zhǔn) 溶 液及試樣 溶 液中的 阿維拉霉素 響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測的線性范圍內(nèi)。在上述色譜 阿維拉霉素 標(biāo)準(zhǔn)溶液和 空白 添加 試樣溶液 中特征離子質(zhì)量色譜圖 見附錄 A。 白試驗 除不加試料外，采用完全相同的步驟進(jìn)行平行操作。 8 結(jié)果計算與表述 試料中阿維拉霉素殘留標(biāo)示物（ 殘留量（ g/按下式計算 殘留量， g/ 濃度， ng/ 色譜峰面積； 色譜峰面積； 液 中內(nèi)標(biāo)物的濃度， ng/ ng/ 量， g。 注：計算結(jié)果需扣除空白值，測定結(jié)果用平行測定的算術(shù)平均值表示，保留 三 位有效數(shù)字。 9 檢測方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度 敏度 本方法 在肌肉 和 脂肪 組織 中的 檢測限為 10 g/定量限 為 20 g/在肝臟 和 腎臟 組織 中的 檢測限為 20 g/定量限為 50 g/ 確度 本方法在 20 600