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1、實(shí)驗(yàn)二十八 熒光分光光度法測定硫酸奎寧含量,一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1掌握熒光分光光度法的基本原理 2學(xué)會使用F- 4500熒光分光光度計(jì),二、方法原理,利用熒光分析方法,測定能產(chǎn)生熒光的物質(zhì)含量,對不能產(chǎn)生熒光的物質(zhì),可以利用某些具有能發(fā)生熒光基團(tuán)的有機(jī)試劑,與非熒光物質(zhì)形成較純的熒光化合物,然后進(jìn)行測定,是一種高靈敏度的分析方法。,定性依據(jù): 激發(fā)光光譜 熒光光譜,定量依據(jù): 當(dāng) l c0.05時(shí),將括號項(xiàng)近似處理后: F= 2.3 I0 l c = Kc,定量方法,標(biāo)準(zhǔn)曲線法: 配制一系列標(biāo)準(zhǔn)濃度試樣測定熒光強(qiáng)度,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,再在相同條件下測量未知試樣的熒光強(qiáng)度,在標(biāo)準(zhǔn)曲線上求出濃度. 比較法:
2、 在線性范圍內(nèi),測定標(biāo)樣和試樣的熒光強(qiáng)度,比較.,熒光儀器組成: 激發(fā)光源、樣品池、雙單色器系統(tǒng)、檢測器。 特殊點(diǎn):有兩個(gè)單色器,光源與檢測器通常成直角。,三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容,(一)硫酸奎寧激發(fā)光譜的繪制 用0.05 mol/L硫酸溶液為參比溶液,用10 mg/L的硫酸奎寧溶液作為測定液。 固定熒光波長為443 nm,從300 nm到400 nm,每間隔10 nm測定一次熒光相對強(qiáng)度。以波長為橫坐標(biāo),熒光相對強(qiáng)度為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出激發(fā)光譜圖,指出最大激發(fā)波長max為345 nm。,(二)硫酸奎寧熒光光譜的繪制 用10 mg/L的硫酸奎寧溶液作為測定液。 從380 nm到600 nm,每隔20 nm測定一次熒光相對強(qiáng)度。以波長為橫坐標(biāo),熒光相對強(qiáng)度為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出熒光光譜圖,指出最大發(fā)射波長max為445 nm。,(三)直接比較法測定測定硫酸奎寧含量,式中: CX待測液的濃
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