生物化學實驗基本操作

1、生物化學實驗基本操作,2.容量分析儀器如吸量管、容量瓶、滴定管等，不能用毛刷刷洗。用后應及時用自來水多次沖洗，細心檢查潔凈程度，根據(jù)掛不掛水珠采取不同處理方法。（1）如不掛水珠，用蒸餾水沖洗、干燥，方法同上； （2）如掛水珠，則應瀝干后用重鉻酸鉀洗液浸泡46小時，然后按上法順序操作，即先用自來水沖洗，再用蒸餾水沖洗，最后干燥,3.粘附有血漿的刻度吸量管等，有三種洗滌方法： （1）先用45%尿素溶液浸泡，使血漿蛋白溶解，然后用自來水沖洗； （2）也可用1%氨水浸泡，使血漿溶解，然后再依次用1%稀鹽酸溶液、自來水沖洗； （3）以上二法如達不到清潔要求，可浸泡于重鉻酸鉀洗液46小時，再用大量自來水沖

2、洗，最后用蒸餾水沖洗23次,4.新購置的玻璃儀器，應先置于12%稀鹽酸溶液中浸泡26小時，除去附著的游離堿，再用自來水沖洗干凈，最后用蒸餾水沖洗23次。 5.凡用過的玻璃儀器，均應立即洗滌，久置干涸后洗滌十分困難。如不能及時洗滌，先用流水初步?jīng)_洗后浸泡在清水中，待后按常規(guī)處理,使用重鉻酸鉀洗液（以下簡稱洗液）時應注意以下幾點： 1.需用洗液浸泡的容器，在浸泡前應盡量瀝干。否則會因洗液被稀釋而降低洗液的氧化力。 2.Hg2+、Ba2+、Pb2+等離子可與洗液發(fā)生化學反應，生成不溶性化合物沉積在容器壁上。因此，凡接觸過上述離子的容器，應先除去上述離子（可用稀硝酸或510%EDTA鈉清除）。 3.油

3、類、有機溶劑等有機化合物可使洗液還原失效。因此，容器壁上附有大量油類、有機物時，應先除去,4.洗液的酸性和氧化性很強，使用時應格外注意，千萬不要滴落在皮膚或衣物上，以免灼傷或燒壞。 5.洗液顏色由深棕色變?yōu)榫G色時，說明洗液已經(jīng)失效，應停止使用，更換新液。因重鉻酸變成硫酸鉻后不再具有氧化性,重鉻酸鉀洗液的配制: 取重鉻酸鉀20g溶于20ml蒸餾水中，加熱至沸。冷卻后再將200ml濃硫酸慢慢加入，邊加邊攪拌。注意：此時可產(chǎn)生高熱。為防止容器破裂，應選用耐酸搪瓷缸或耐高溫的玻璃器皿，切忌用量筒及試劑瓶等配制。為防止洗液吸收空氣中的水分而被稀釋變質(zhì)，洗液應貯存于帶蓋的容器中。當清潔效力降低時，再加入少

4、量重鉻酸鉀及濃硫酸就可繼續(xù)使用,二. 吸量管的使用 吸量管和定量吸(移)液器(微量加樣器)均為用來轉(zhuǎn)移一定體積溶液的量器。 吸量管：生化實驗中常用的有三種，最常用的是刻度吸量管。 1.刻度吸量管： 刻度吸量管的種類,按容量規(guī)格來分，有0.1、0.2、0.25、0.5、1、2、5、10ml等數(shù)種。其精密度按不同的容積可達移取量的0.11%。通常將管身標明的總?cè)萘糠挚虨?00等分。因此，10ml的吸量管一格代表0.1ml；1ml的吸量管一格代表0.01ml,其余類推,按“零”點位置來分，有“O”點在吸量管上端的（即讀數(shù)從上而下逐漸增大），也有“O”點在吸量管下端的（讀數(shù)從下而上逐漸增大)。兩種標示

5、方法，在使用時各有方便之處。 按刻度方法來分，刻度吸量管也有兩種，一種是刻度刻到尖端的，將液體放出時，應吹出殘留在吸量管尖端的少量液體(我實驗室的刻度吸量管全部是這一種)，另一種是刻度不刻到尖端的,刻度吸量管的正確使用方法： 用右手拇指和中指夾住管身，將吸量管的尖端伸入試液深處，左手持洗耳球把試液吸入管內(nèi)至高過刻度以上時，迅速用右手食指按住吸量管的上口，以控制試液的泄放。吸液后應盡量使吸量管保持垂直，使右眼與刻度等高，稍微輕抬食指或輕輕轉(zhuǎn)動吸量管，使試液面緩慢降落，至管內(nèi)試液彎月面的最低點與吸量管的刻度線相齊為止。然后將吸量管插到需加試劑的容器中，讓尖端與容器內(nèi)壁靠緊，松開食指讓液體流出。液體

6、流完后再等15秒鐘，捻動一下吸量管后移去（如需吹的吸量管，則吹出尖端的液體后再捻轉(zhuǎn)一下吸量管移去,使用刻度吸量管的注意事項： 選擇適當規(guī)格的吸量管：吸量管的最大容積應等于或略大于所需容積（ml數(shù)）。 仔細看清吸量管的刻度情況：刻度是否包括吸量管尖端的液體？讀數(shù)方向是從上而下，還是從下而上？ 拿吸量管時，刻度一定要面向自己，以便讀數(shù),吸取試劑時應注意三點：一是先吹去吸量管內(nèi)可能存在的殘留液體，二是將吸量管插入試劑液面深部(以免吸液過程中因液面降低而吸入空氣產(chǎn)生氣泡或管內(nèi)試劑進入洗耳球)，三是使用洗耳球(不可直接用口吸)。 按吸量管上口時應該用食指，不能用拇指,吸取粘滯性大的液體(如血液、血漿、血

7、清等)時，除選用合適的吸管(奧氏管)外，應注意拭凈管尖附著的液體，盡量減慢放液速度(用食指壓力控制)，待液體流盡后吹出管尖殘留的最后一滴液體。 使用的吸量管應干凈、干燥無水。如急用而又有水時，可用少量欲取試劑沖洗3次，以免試劑被稀釋,2.移液吸量管：也有兩種，常見的一種是吸量管的上端只有一個刻度，另一種是除了在吸量管上端有刻度外，在吸量管下端狹窄處也有一刻度線。無論哪一種，在使用時將量取的液體放出后，只需將吸量管的尖端觸及受器壁約半分鐘即可，不得吹出尖端的液體。 3.奧氏吸量管：準確度最高，使用時必需吹出留在尖端的液體,定量吸(移)液器(微量加樣器)：定量吸液器是吸量管的革新產(chǎn)品。由塑料制成。

8、目前，因產(chǎn)地廠家不同其質(zhì)量、價格差異十分懸殊。 1.定量吸液器的優(yōu)點：使用方便，取、加樣迅速，計量準確，不易破損，能吸取多種樣品（只換吸嘴即可,2.定量吸液器的類型：有兩種類型。 固定式：只能取加一定容量的試劑，不能隨意調(diào)節(jié)取加樣量。其規(guī)格有10l、20l、25l、30l、50l、100l、200l、250l、300l、400l、500l、1000l等,可調(diào)式：在一定容量范圍內(nèi)可根據(jù)需要進行調(diào)節(jié)取加樣量。例如規(guī)格為50200l的可調(diào)式定量吸液器，可以在50到200l的范圍內(nèi)根據(jù)需要調(diào)節(jié)成設計容許的各種取加樣容量（60l、85l、110l、170l、200l等）。 一般來講，固定式吸液器比較準確

9、，可調(diào)式吸液器使用較為方便,3.定量吸液器的使用方法： 選擇適當?shù)奈浩鳌Ｎ呵跋劝盐焯自谖苌?，套上后要輕輕旋緊一下，以保證結(jié)合嚴密。 持法：右手四指（除大拇指外）并攏握住吸液器外殼（使外殼突起部分搭在食指近端），大拇指輕輕放在吸液器的按鈕上。 取樣(吸液)：用大拇指按下按鈕到第一停止點，以排出一定容量的空氣，隨后把吸嘴尖浸入取樣液內(nèi)，徐徐松開大拇指，讓按鈕慢慢自行復原，取樣即告完成,排液：將吸液器的吸嘴尖置于加樣容器壁上，用大拇指慢慢地將按鈕按下到第一停止點，停留1秒鐘（粘性較高的溶液停留時間應適當延長）。然后再把按鈕按到第二停止點上，讓吸嘴沿管壁向上滑動。當吸嘴尖與容器壁或溶液離開時

10、，方可釋放按鈕，使其恢復到初始位置。 吸液器用后應及時取下吸嘴。將吸嘴用自來水沖洗后浸入盛水的容器內(nèi)（以防干涸），待實驗結(jié)束后集中仔細清洗,三. 溶液的混勻 混勻的目的： 使反應體系內(nèi)的各種物質(zhì)分子很好地互相接觸，充分進行反應； 使欲稀釋的溶液成為濃度均一的溶液,混勻的方法通常有以下幾種： 使盛器作離心運動。 左手持試管上端，用右手指輕擊試管下半部，使管內(nèi)溶液作旋轉(zhuǎn)運動。 利用旋渦混合（振蕩）器混勻。 不得已時可用干燥清潔的玻璃棒攪勻,混勻的注意事項： 防止盛器內(nèi)的液體濺出或被污染。 嚴禁用手指堵塞管口或瓶口震蕩混勻,四. 離心機的使用 離心法是分離沉淀的一種方法。它是利用離心機轉(zhuǎn)動產(chǎn)生的離心力，使比重較大的物質(zhì)沉積在管底，以達到與液體分離的目的。因液體在沉淀的上部，故稱清亮的液體部分為上清液,電動離心機的使用方法： 1.將欲離心的液體，置于離心管或小試管內(nèi)。并檢查離心管或小試管的大小是否與離心機的套管相匹配。 2.取出離心機的全部套管，并檢查套管底部是否鋪有軟墊，有無玻璃碎片或漏孔（有玻璃碎片必須取出，漏孔應該用蠟封?。?。檢查合格后，將盛有離心液的兩個試管分別放入套管中，然