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文檔簡介
1、生物化學實驗基本操作,2.容量分析儀器如吸量管、容量瓶、滴定管等,不能用毛刷刷洗。用后應及時用自來水多次沖洗,細心檢查潔凈程度,根據(jù)掛不掛水珠采取不同處理方法。(1)如不掛水珠,用蒸餾水沖洗、干燥,方法同上; (2)如掛水珠,則應瀝干后用重鉻酸鉀洗液浸泡46小時,然后按上法順序操作,即先用自來水沖洗,再用蒸餾水沖洗,最后干燥,3.粘附有血漿的刻度吸量管等,有三種洗滌方法: (1)先用45%尿素溶液浸泡,使血漿蛋白溶解,然后用自來水沖洗; (2)也可用1%氨水浸泡,使血漿溶解,然后再依次用1%稀鹽酸溶液、自來水沖洗; (3)以上二法如達不到清潔要求,可浸泡于重鉻酸鉀洗液46小時,再用大量自來水沖
2、洗,最后用蒸餾水沖洗23次,4.新購置的玻璃儀器,應先置于12%稀鹽酸溶液中浸泡26小時,除去附著的游離堿,再用自來水沖洗干凈,最后用蒸餾水沖洗23次。 5.凡用過的玻璃儀器,均應立即洗滌,久置干涸后洗滌十分困難。如不能及時洗滌,先用流水初步?jīng)_洗后浸泡在清水中,待后按常規(guī)處理,使用重鉻酸鉀洗液(以下簡稱洗液)時應注意以下幾點: 1.需用洗液浸泡的容器,在浸泡前應盡量瀝干。否則會因洗液被稀釋而降低洗液的氧化力。 2.Hg2+、Ba2+、Pb2+等離子可與洗液發(fā)生化學反應,生成不溶性化合物沉積在容器壁上。因此,凡接觸過上述離子的容器,應先除去上述離子(可用稀硝酸或510%EDTA鈉清除)。 3.油
3、類、有機溶劑等有機化合物可使洗液還原失效。因此,容器壁上附有大量油類、有機物時,應先除去,4.洗液的酸性和氧化性很強,使用時應格外注意,千萬不要滴落在皮膚或衣物上,以免灼傷或燒壞。 5.洗液顏色由深棕色變?yōu)榫G色時,說明洗液已經(jīng)失效,應停止使用,更換新液。因重鉻酸變成硫酸鉻后不再具有氧化性,重鉻酸鉀洗液的配制: 取重鉻酸鉀20g溶于20ml蒸餾水中,加熱至沸。冷卻后再將200ml濃硫酸慢慢加入,邊加邊攪拌。注意:此時可產(chǎn)生高熱。為防止容器破裂,應選用耐酸搪瓷缸或耐高溫的玻璃器皿,切忌用量筒及試劑瓶等配制。為防止洗液吸收空氣中的水分而被稀釋變質(zhì),洗液應貯存于帶蓋的容器中。當清潔效力降低時,再加入少
4、量重鉻酸鉀及濃硫酸就可繼續(xù)使用,二. 吸量管的使用 吸量管和定量吸(移)液器(微量加樣器)均為用來轉(zhuǎn)移一定體積溶液的量器。 吸量管:生化實驗中常用的有三種,最常用的是刻度吸量管。 1.刻度吸量管: 刻度吸量管的種類,按容量規(guī)格來分,有0.1、0.2、0.25、0.5、1、2、5、10ml等數(shù)種。其精密度按不同的容積可達移取量的0.11%。通常將管身標明的總?cè)萘糠挚虨?00等分。因此,10ml的吸量管一格代表0.1ml;1ml的吸量管一格代表0.01ml,其余類推,按“零”點位置來分,有“O”點在吸量管上端的(即讀數(shù)從上而下逐漸增大),也有“O”點在吸量管下端的(讀數(shù)從下而上逐漸增大)。兩種標示
5、方法,在使用時各有方便之處。 按刻度方法來分,刻度吸量管也有兩種,一種是刻度刻到尖端的,將液體放出時,應吹出殘留在吸量管尖端的少量液體(我實驗室的刻度吸量管全部是這一種),另一種是刻度不刻到尖端的,刻度吸量管的正確使用方法: 用右手拇指和中指夾住管身,將吸量管的尖端伸入試液深處,左手持洗耳球把試液吸入管內(nèi)至高過刻度以上時,迅速用右手食指按住吸量管的上口,以控制試液的泄放。吸液后應盡量使吸量管保持垂直,使右眼與刻度等高,稍微輕抬食指或輕輕轉(zhuǎn)動吸量管,使試液面緩慢降落,至管內(nèi)試液彎月面的最低點與吸量管的刻度線相齊為止。然后將吸量管插到需加試劑的容器中,讓尖端與容器內(nèi)壁靠緊,松開食指讓液體流出。液體
6、流完后再等15秒鐘,捻動一下吸量管后移去(如需吹的吸量管,則吹出尖端的液體后再捻轉(zhuǎn)一下吸量管移去,使用刻度吸量管的注意事項: 選擇適當規(guī)格的吸量管:吸量管的最大容積應等于或略大于所需容積(ml數(shù))。 仔細看清吸量管的刻度情況:刻度是否包括吸量管尖端的液體?讀數(shù)方向是從上而下,還是從下而上? 拿吸量管時,刻度一定要面向自己,以便讀數(shù),吸取試劑時應注意三點:一是先吹去吸量管內(nèi)可能存在的殘留液體,二是將吸量管插入試劑液面深部(以免吸液過程中因液面降低而吸入空氣產(chǎn)生氣泡或管內(nèi)試劑進入洗耳球),三是使用洗耳球(不可直接用口吸)。 按吸量管上口時應該用食指,不能用拇指,吸取粘滯性大的液體(如血液、血漿、血
7、清等)時,除選用合適的吸管(奧氏管)外,應注意拭凈管尖附著的液體,盡量減慢放液速度(用食指壓力控制),待液體流盡后吹出管尖殘留的最后一滴液體。 使用的吸量管應干凈、干燥無水。如急用而又有水時,可用少量欲取試劑沖洗3次,以免試劑被稀釋,2.移液吸量管:也有兩種,常見的一種是吸量管的上端只有一個刻度,另一種是除了在吸量管上端有刻度外,在吸量管下端狹窄處也有一刻度線。無論哪一種,在使用時將量取的液體放出后,只需將吸量管的尖端觸及受器壁約半分鐘即可,不得吹出尖端的液體。 3.奧氏吸量管:準確度最高,使用時必需吹出留在尖端的液體,定量吸(移)液器(微量加樣器):定量吸液器是吸量管的革新產(chǎn)品。由塑料制成。
8、目前,因產(chǎn)地廠家不同其質(zhì)量、價格差異十分懸殊。 1.定量吸液器的優(yōu)點:使用方便,取、加樣迅速,計量準確,不易破損,能吸取多種樣品(只換吸嘴即可,2.定量吸液器的類型:有兩種類型。 固定式:只能取加一定容量的試劑,不能隨意調(diào)節(jié)取加樣量。其規(guī)格有10l、20l、25l、30l、50l、100l、200l、250l、300l、400l、500l、1000l等,可調(diào)式:在一定容量范圍內(nèi)可根據(jù)需要進行調(diào)節(jié)取加樣量。例如規(guī)格為50200l的可調(diào)式定量吸液器,可以在50到200l的范圍內(nèi)根據(jù)需要調(diào)節(jié)成設計容許的各種取加樣容量(60l、85l、110l、170l、200l等)。 一般來講,固定式吸液器比較準確
9、,可調(diào)式吸液器使用較為方便,3.定量吸液器的使用方法: 選擇適當?shù)奈浩鳌N呵跋劝盐焯自谖苌?,套上后要輕輕旋緊一下,以保證結(jié)合嚴密。 持法:右手四指(除大拇指外)并攏握住吸液器外殼(使外殼突起部分搭在食指近端),大拇指輕輕放在吸液器的按鈕上。 取樣(吸液):用大拇指按下按鈕到第一停止點,以排出一定容量的空氣,隨后把吸嘴尖浸入取樣液內(nèi),徐徐松開大拇指,讓按鈕慢慢自行復原,取樣即告完成,排液:將吸液器的吸嘴尖置于加樣容器壁上,用大拇指慢慢地將按鈕按下到第一停止點,停留1秒鐘(粘性較高的溶液停留時間應適當延長)。然后再把按鈕按到第二停止點上,讓吸嘴沿管壁向上滑動。當吸嘴尖與容器壁或溶液離開時
10、,方可釋放按鈕,使其恢復到初始位置。 吸液器用后應及時取下吸嘴。將吸嘴用自來水沖洗后浸入盛水的容器內(nèi)(以防干涸),待實驗結(jié)束后集中仔細清洗,三. 溶液的混勻 混勻的目的: 使反應體系內(nèi)的各種物質(zhì)分子很好地互相接觸,充分進行反應; 使欲稀釋的溶液成為濃度均一的溶液,混勻的方法通常有以下幾種: 使盛器作離心運動。 左手持試管上端,用右手指輕擊試管下半部,使管內(nèi)溶液作旋轉(zhuǎn)運動。 利用旋渦混合(振蕩)器混勻。 不得已時可用干燥清潔的玻璃棒攪勻,混勻的注意事項: 防止盛器內(nèi)的液體濺出或被污染。 嚴禁用手指堵塞管口或瓶口震蕩混勻,四. 離心機的使用 離心法是分離沉淀的一種方法。它是利用離心機轉(zhuǎn)動產(chǎn)生的離心力,使比重較大的物質(zhì)沉積在管底,以達到與液體分離的目的。因液體在沉淀的上部,故稱清亮的液體部分為上清液,電動離心機的使用方法: 1.將欲離心的液體,置于離心管或小試管內(nèi)。并檢查離心管或小試管的大小是否與離心機的套管相匹配。 2.取出離心機的全部套管,并檢查套管底部是否鋪有軟墊,有無玻璃碎片或漏孔(有玻璃碎片必須取出,漏孔應該用蠟封?。?。檢查合格后,將盛有離心液的兩個試管分別放入套管中,然
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