API含量測(cè)定驗(yàn)證方案1

1、API 含量測(cè)定驗(yàn)證方案 1CCC 制藥有限公司驗(yàn)證方案起草、審核、批準(zhǔn)表起草部門起草人職稱職務(wù)日期質(zhì)檢部審核部門審核人職稱職務(wù)日期質(zhì)保部批準(zhǔn)人簽名日期質(zhì)量副總經(jīng)理打算驗(yàn)證時(shí)刻2008年9月驗(yàn)證小組人員名單組長(zhǎng)姓名部門職務(wù)目錄1、概述52、試驗(yàn)所需儀器53、試劑和樣品 54、色譜條 件 55、溶液配制 56、專屬性試驗(yàn) 67、溶液穩(wěn)固性試驗(yàn) 68、線性試驗(yàn)79、回收試驗(yàn)710、周密度試驗(yàn)811、檢出限和定量限 912、含量測(cè)定方法評(píng)判 101、概述通過(guò)對(duì) API 含量測(cè)定方法的驗(yàn)證，得到可信任的和準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)，用于 藥品的含量測(cè)定，從而驗(yàn)證該方法的可行性。2、試驗(yàn)所需儀器分析天平（靈敏度為 0.

2、01mg ）型號(hào) 編號(hào) 有效期液相色譜儀 型號(hào) 編號(hào) 有效期3、試劑和樣品乙腈 HPLC 級(jí)API 標(biāo)準(zhǔn)品 USP 標(biāo)準(zhǔn)品API 有關(guān)物質(zhì) A USP 標(biāo)準(zhǔn)品有關(guān)物質(zhì) B USP 標(biāo)準(zhǔn)品有關(guān)物質(zhì) C USP 標(biāo)準(zhǔn)品4、色譜條件色譜柱：4.6mmx 10cm C8柱，其填料粒徑為3.5微米檢測(cè)波長(zhǎng)： 254nm流速： 1.0 ml/min進(jìn)樣量：20卩l(xiāng)柱溫：40C流淌相： A 溶液和 B 溶液不同比例的混合溶液。 （見(jiàn)下表）其中， 稀釋液水：乙腈（ 60： 40）A 溶液水：乙腈（ 70： 30）B溶液一一水：乙腈（50: 50）時(shí)刻（分鐘）A溶液B溶液洗脫方式0-6.5100 500t 50

3、線性梯度6.5-1050 050t 100線性梯度10-200100衡梯度20-20.10 t 100100 t 0線性梯度20.1-281000衡梯度5、溶液配制系統(tǒng)習(xí)慣性溶液：取API標(biāo)準(zhǔn)品和API有關(guān)物質(zhì)A和有關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn) 品，周密稱定，用稀釋液配制成 0.05mg/ml的溶液。標(biāo)準(zhǔn)溶液：取適量API標(biāo)準(zhǔn)品，用乙腈溶解，超聲處理，得到1.0mg/ml的溶液。 取4ml該溶液置于10ml容量瓶中，用水稀釋至刻度。用稀釋 液進(jìn)一步稀釋，即得濃度為0.04mg/ml的溶液。供試溶液：取本品約20mg，置于50ml容量瓶中，周密稱定，用20ml 乙腈溶解（能夠超聲處理），然后用水稀釋至刻度。吸取

4、1ml此種溶液置于 10ml容量瓶中，用稀釋液稀釋至刻度，混勻即得。6、專屬性試驗(yàn)取系統(tǒng)習(xí)慣性溶液注入色譜系統(tǒng)， 記譜色譜圖，API有關(guān)物質(zhì)B （離A PI峰最近的雜質(zhì)峰）與API峰的分離度應(yīng)不小于1.5,各雜質(zhì)峰分離良好， 同時(shí)取稀釋液作空白溶液，注入色譜系統(tǒng)，記譜色譜圖，在API出峰處無(wú)干擾峰顯現(xiàn)。同時(shí)與API降解試驗(yàn)結(jié)果對(duì)比，各降解產(chǎn)物峰在 API峰處無(wú) 干擾，不阻礙API測(cè)定。7、溶液穩(wěn)固性試驗(yàn)取本品約20mg,置于50ml容量瓶中，周密稱定，用20ml乙腈溶解（能 夠超聲處理），然后用水稀釋至刻度。吸取1ml此種溶液置于10ml容量瓶 中，用稀釋液稀釋至刻度，混勻即得制成供試品溶液。

5、取供試品溶液分別 于0小時(shí)，2小時(shí)，4小時(shí)，6小時(shí)，8小時(shí)注入色譜系統(tǒng)，記譜色譜圖，記錄API峰面積，8小時(shí)內(nèi)API峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD%）不大于2.0%。時(shí)刻（h）02468RSD( %API峰面積&線性試驗(yàn)200%標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液：取API標(biāo)準(zhǔn)品20mg，周密稱定，置50ml容量瓶 中，用20ml乙腈溶解（能夠超聲處理），然后用水稀釋至刻度。周密吸取1 0ml此種溶液置于50ml容量瓶中，用稀釋液稀釋至刻度，混勻即得濃度為 0.08mg/ml的200%的標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液。160%標(biāo)準(zhǔn)溶液：周密移取8.0ml的200%標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液置10ml容量瓶 中，加稀釋液稀釋至刻度，混勻即得。120%標(biāo)

6、準(zhǔn)溶液：周密移取6.0ml的200%標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液置10ml容量瓶 中，加稀釋液稀釋至刻度，混勻即得。100%標(biāo)準(zhǔn)溶液：周密移取5.0ml的200%標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液置10ml容量瓶 中，加稀釋液稀釋至刻度，混勻即得。80%標(biāo)準(zhǔn)溶液：周密移取4.0ml的200%標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液置10ml容量瓶中， 加稀釋液稀釋至刻度，混勻即得。40%標(biāo)準(zhǔn)溶液：周密移取2.0ml的200%標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液置10ml容量瓶中， 加稀釋液稀釋至刻度，混勻即得。20%標(biāo)準(zhǔn)溶液：周密移取1.0ml的200%標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液置10ml容量瓶中， 加稀釋液稀釋至刻度，混勻即得。分別取上述線性供試品溶液注入液相色譜儀，記錄API峰面積，以API

7、的峰面積對(duì)其濃度進(jìn)行一元線性回來(lái)，其有關(guān)系數(shù)（ R）不小于0.999。線性溶液20%40%80%100%120%160%200%濃度（mg/ml）0.0080.0160.0320.040.0480.0640.08峰面積線性方程Y=ax+b有關(guān)系數(shù)r2=r=9、回收試驗(yàn)（標(biāo)準(zhǔn)加入法） 標(biāo)準(zhǔn)溶液：按方法要求制備供試品溶液：按方法要求制備120%加標(biāo)供試品溶液：以線性試驗(yàn)中120%的標(biāo)準(zhǔn)溶液替代稀釋液配 制供試品溶液，平行制備三份。100%加標(biāo)供試品溶液：以線性試驗(yàn)中100%的標(biāo)準(zhǔn)溶液替代稀釋液配 制供試品溶液，平行制備三份。80%加標(biāo)供試品溶液：以線性試驗(yàn)中 80%的標(biāo)準(zhǔn)溶液替代稀釋液配制 供試品

8、溶液，平行制備三份。測(cè)試法：分別吸取上述配制好的溶液，按前述色譜條件進(jìn)樣，記錄 AP I峰面積，按下式運(yùn)算回收率，要求回收率在 98%102%范疇內(nèi)，9個(gè)回收 率的RSD%應(yīng)不大于2.0%。回收率（加標(biāo)供試液主峰面積供試液平均主峰面積）供試品標(biāo)準(zhǔn)溶液平均勺主峰面積加標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度%平均值峰面積100%標(biāo)準(zhǔn)溶液樣品號(hào)123456平均值峰面積80%加標(biāo)供試 品樣品號(hào)123峰面積回收率%100%加標(biāo)供試品樣品號(hào)123峰面積回收率%120%加標(biāo)供試品樣品號(hào)123峰面積回收率%回收率的RSD%10、周密度試驗(yàn)（系統(tǒng)周密度，重復(fù)性和方法中間周密度試驗(yàn)）方法重復(fù)性-1:第一天（不同人或不同儀器），按5中供試

9、品配制方法, 平行配制六份樣品，按含量測(cè)試法進(jìn)行測(cè)定，六份樣品檢測(cè)結(jié)果的相對(duì)標(biāo) 準(zhǔn)偏差（RSD）不大于2.0%。方法重復(fù)性-2:翌日（不同人或不同儀器），按5中供試品配制方法， 平行配制六份樣品，按含量測(cè)試法進(jìn)行測(cè)定，六份樣品檢測(cè)結(jié)果的相對(duì)標(biāo) 準(zhǔn)偏差（RSD）不大于2.0%。每次新奇配制標(biāo)準(zhǔn)溶液和供試品溶液。方法中間周密度：兩次方法重復(fù)性的12個(gè)結(jié)果的RSD%應(yīng)不大于3.0% 系統(tǒng)周密度：兩次方法重復(fù)性試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)溶液的 6次重復(fù)進(jìn)樣峰面積的RSD%應(yīng)不大于2.0%標(biāo)準(zhǔn)溶液重復(fù)進(jìn)樣結(jié)果樣品份數(shù)n123456平均值RSD%系統(tǒng)周密度-1系統(tǒng)周密度-2含量%樣品份數(shù)n123456平均值RSD%方法重

10、復(fù)性-1方法重復(fù)性-2中間周密度11、檢出限和定量限S/N進(jìn)行評(píng)判，定量限S/N應(yīng)不小于對(duì)線性溶液中20%的標(biāo)準(zhǔn)溶液的10，檢出限S/N應(yīng)不小于3。3 C10 CCDLCQLS/ NS/N式中：CDL 檢出限（g/ml）CQL 疋量限（g/ml）C樣品濃度（g/ml）S/N信噪比123信噪比定量限保證濃度檢出限保證12、含量測(cè)定方法評(píng)判附：我們的有關(guān)提咨詢：1、上面5中標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制是直截了當(dāng)從 USP31中翻譯過(guò)來(lái)的, 但我們覺(jué)得那種講法專門繁瑣，同時(shí)標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液配制方法不一致， 我們覺(jué)得直截了當(dāng)按它的供試品溶液配制方法配制標(biāo)準(zhǔn)品挺好的，后面驗(yàn) 證時(shí)我們也是就按供試品溶液配制法配的標(biāo)準(zhǔn)溶液。不知是否妥當(dāng)，請(qǐng)你 們參考一下。有關(guān)物質(zhì)驗(yàn)證時(shí)也涉及到那個(gè)咨詢題。2、含量方法中間周密度12個(gè)數(shù)據(jù)的RSD%多少合適，有關(guān)物質(zhì)呢？ 我們往常做國(guó)內(nèi)只做過(guò)6個(gè)數(shù)據(jù)的評(píng)判。3、原料藥的回收試驗(yàn)如何做啊，請(qǐng)指點(diǎn)一下。上面我們是按你們給我 們殘留溶劑的方案套用過(guò)來(lái)的。我們往常做國(guó)內(nèi)一樣都不做原料藥的回收 試驗(yàn)，而是直截了當(dāng)從周密度等其他驗(yàn)證項(xiàng)目中推論而得。我們只做過(guò)制 劑的向空