鱗莖貯藏時間對誘導(dǎo)大蒜四倍體植株的影響

1、鱗莖貯藏時間對誘導(dǎo)大蒜四倍體植株的影響大蒜種質(zhì)資源豐富、 優(yōu)良品種眾多， 但由于長期采用無性繁殖， 不能進行雜交育種，其遺傳學(xué)和生物學(xué)多樣性未得到充分利用，也有一些優(yōu)良的品種因種性退化而瀕臨滅絕。 利用多倍體誘導(dǎo)技術(shù)培育的多倍體蔬菜，無論是抗逆性， 抗病性，還是品質(zhì)方面與二倍體相比均存在很多優(yōu)勢，為蔬菜優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)育種開辟了一條重要的途徑。利用愈傷組織誘導(dǎo)植株又稱為大蒜快繁技術(shù)，是近年來為提高大蒜繁殖系數(shù)，提純復(fù)壯，避免種性退化，得到迅猛發(fā)展的一項新技術(shù)，現(xiàn)已得到以大蒜莖尖，氣生鱗芽等為外植體的通過愈傷組織誘導(dǎo)出的不定芽體系。在大蒜快繁技術(shù)的基礎(chǔ)上利用秋水仙素誘導(dǎo)大蒜四倍體再生體系是大蒜多倍體育中

2、的新途徑。大蒜自 6 月份收獲，經(jīng)歷后熟、休眠后，到9 月份由于夜間溫度下降，蒜鱗莖開始解除休眠。 大蒜在貯藏過程中， 鱗莖薄壁細(xì)胞衰退， 其營養(yǎng)物質(zhì)供給幼芽萌發(fā)生長，伴隨著幼芽的不斷生長， 鱗莖逐漸進入衰亡過程， 營養(yǎng)物質(zhì)含量下降，酶活性降低。因此尋找大蒜整個貯藏時期的最佳微繁擴繁時間有著重要的意義，但目前關(guān)于這一方面的報道還不多見。 試驗于 2009-2011 年在山東農(nóng)業(yè)大學(xué)科技創(chuàng)新園和農(nóng)業(yè)部園藝作物重點開放試驗室進行。研究探討了，大蒜愈傷組織誘導(dǎo)及增殖分化的影響因素，建立了大蒜愈傷組織誘導(dǎo)、增殖及器官分化的培養(yǎng)體系， 在此基礎(chǔ)上分別研究了貯藏時間和秋水仙素對大蒜再生體系的影響， 并進一

3、步開展了貯藏時間與秋水仙素對大蒜四倍體再生體系的互作效應(yīng)研究。主要研究結(jié)果如下：1. 影響大蒜愈傷組織誘導(dǎo)的因素：鱗芽莖盤、基部及莖尖誘導(dǎo)的愈傷組織出愈量較高，出愈率高， 為大蒜外植體的最優(yōu)選擇；與此相比鱗莖中部誘導(dǎo)的愈傷組織質(zhì)量較差，出愈率較低， 作為外植體效果不理想。選用外植體的基因型及規(guī)格對大蒜愈傷組織的再生影響較大，最佳選擇為蘇聯(lián)蒜 0.3 0.2 0.2cm 規(guī)格的外植體?？股乜捎行p少大蒜愈傷組織生長過程中的染菌率。愈傷組織誘導(dǎo)最佳光照條件為黑暗處理，繼代培養(yǎng)及分化最佳光照度為36 molm-2s-1 （16h/d ）。試驗表明，較高濃度的生長素和較低濃度的細(xì)胞分裂素組合有利于蘇

4、聯(lián)蒜鱗芽愈傷組織的誘導(dǎo)， 但并不利于其分化。其中，2,4-D 對愈傷組織的發(fā)生起決定作用， MS+2.0mg/L2,4-D+1.0mg/L6-BA有利于大蒜愈傷組織的產(chǎn)生，MS+2.0mg/L NAA+1.0mg/L6-BA較適宜于愈傷組織增殖和芽分化， 無激素的培養(yǎng)基利于生根。 2. 貯藏時間對大蒜再生體系的影響本試驗采用收獲后不同貯藏時間的大蒜鱗莖作為外植體進行組織培養(yǎng)，研究了貯藏時間對大蒜誘導(dǎo)愈傷組織， 誘導(dǎo)脫分化不定芽， 不定根的生成以及鱗芽誘導(dǎo)不定芽的影響。結(jié)果表明，在大蒜收獲后貯藏期間，外植體的出愈率、出愈量、胚性愈傷組織率，分生不定芽的直徑、發(fā)芽率、平均發(fā)芽數(shù)，分生不定根的生根率

5、、平均生根數(shù)，以鱗莖基部及莖尖誘導(dǎo)不定芽的發(fā)芽率、平均發(fā)芽數(shù)的最高點出現(xiàn)在收獲后 61122d （即大蒜打破休眠幼芽萌動時期） 。3. 秋水仙素對大蒜再生體系的影響以經(jīng)秋水仙素浸泡的大蒜鱗芽為外植體， 建立大蒜四倍體無性繁殖體系。結(jié)果表明，鱗芽基部為誘導(dǎo)四倍體不定芽的最適外植體； 進行四倍體誘導(dǎo)的最佳處理為 0.1%的秋水仙素浸泡36h，其不定芽誘導(dǎo)的適宜培養(yǎng)基為MS+2.0mg/L2,4-D+1.0mg/L6-BA，不定芽生根的最適培養(yǎng)基為基本MS培養(yǎng)基。4.貯藏時間對大蒜四倍體再生體系的影響本試驗采用收獲后不同貯藏時間的大蒜鱗莖作為外植體進行組織培養(yǎng)，研究了貯藏時間對大蒜誘導(dǎo)四倍體植株（愈傷組織，誘導(dǎo)脫分化不定芽，不定根的生成以及鱗芽誘導(dǎo)不定芽）的影響。研究發(fā)現(xiàn)貯藏時間對大蒜四倍體再生植株的影響與大蒜再生植株的影響一致，呈明顯的先上升后下降趨勢， 但染色體變異植株占總發(fā)芽植株的百分比變化比較平緩。由于經(jīng)長期培養(yǎng)的愈傷組織常常會分化出變異植物，即體細(xì)胞無性系變異。因此大蒜經(jīng)愈傷組織途徑生成的