細(xì)胞培養(yǎng)基的生產(chǎn)和過(guò)程控制

1、細(xì)胞培養(yǎng)基的生產(chǎn)和過(guò)程控制細(xì)胞培養(yǎng)基作為生物制品生產(chǎn)的重要原材料之一，其質(zhì)量對(duì)生物制品有重要的影響。細(xì)胞培養(yǎng)基的生產(chǎn)工藝和細(xì)胞培養(yǎng)基的原材料選用、生產(chǎn)過(guò)程及檢驗(yàn)過(guò)程中的質(zhì)量控制對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)基的產(chǎn)品質(zhì)量具有直接影響。其中原材料的成份及其質(zhì)量直接決定了細(xì)胞培養(yǎng)基產(chǎn)品的質(zhì)量及安全性，選擇合適的物料是實(shí)現(xiàn)細(xì)胞培養(yǎng)基功能過(guò)程中需要解決的基礎(chǔ)問(wèn)題。生產(chǎn)工藝的選擇（如原料的研碎、混合技術(shù)等）及生產(chǎn)過(guò)程中的質(zhì)量控制等直接影響產(chǎn)品的溶解性、批生產(chǎn)量及批次間差異，進(jìn)而影響產(chǎn)品的質(zhì)量。cGMP稽查員在對(duì)國(guó)內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)基生產(chǎn)企業(yè)進(jìn)行cGMP審計(jì)時(shí)指出，細(xì)胞培養(yǎng)基的生產(chǎn)工藝及設(shè)備應(yīng)經(jīng)過(guò)驗(yàn)證，原材料必須做鑒別試驗(yàn)，記錄應(yīng)真

2、實(shí)反映生產(chǎn)過(guò)程的實(shí)際情況，生產(chǎn)過(guò)程偏差處理應(yīng)包括對(duì)出現(xiàn)偏差之前涉及到的批次均應(yīng)進(jìn)行調(diào)查等等。這些要求是基于FDA對(duì)生物制藥用原料的質(zhì)量要求方面提出，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于國(guó)內(nèi)對(duì)藥用原料的要求。隨著對(duì)人用和動(dòng)物保健用生物制品安全性要求的提高，嚴(yán)格執(zhí)行GMP規(guī)范進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)基生產(chǎn)是國(guó)內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)基行業(yè)發(fā)展的必然趨勢(shì)。1.1細(xì)胞培養(yǎng)基的原料選擇及質(zhì)量控制1.1.2原材料的原料選擇由于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基產(chǎn)品屬于藥用原料，哺乳類(lèi)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)基產(chǎn)品的微生物限度、內(nèi)毒素含量進(jìn)行了限定，所以細(xì)胞培養(yǎng)基所用原料宜采用注射級(jí)、藥用級(jí)原料。對(duì)于部份沒(méi)有注射級(jí)和藥用級(jí)的原料，細(xì)胞培養(yǎng)基制造者針對(duì)自身產(chǎn)品質(zhì)量要求，制定

3、一些重要指標(biāo)（微生物限度、內(nèi)毒素、重金屬等）進(jìn)行原材料的質(zhì)量控制。1.1.2原材料的質(zhì)量控制細(xì)胞培養(yǎng)基生產(chǎn)企業(yè)建立完善的原材料質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)于原材料的來(lái)源、檢驗(yàn)、使用、及銷(xiāo)毀等有明確的可追溯記錄。在質(zhì)量控制過(guò)程中，藥用級(jí)原材料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)參考中國(guó)藥典相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)于非藥用級(jí)原材料應(yīng)根據(jù)生產(chǎn)工藝需要與供應(yīng)商一起共同確定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)包括如下內(nèi)容：指定的物料名稱(chēng)和企業(yè)內(nèi)部使用的物料代碼、藥典專(zhuān)論的名稱(chēng)（如有）、 經(jīng)批準(zhǔn)的供應(yīng)商以及原始生產(chǎn)商、印刷包裝材料的樣張、物料質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)及其編號(hào)、取樣、檢驗(yàn)方法或相關(guān)規(guī)程編號(hào)、定性和定量的限度要求、貯存條件和注意事項(xiàng)、復(fù)驗(yàn)前的最長(zhǎng)貯存期。原材料的質(zhì)量檢測(cè)主

4、要從材料、人員、方法三個(gè)方面進(jìn)行控制：1) 具有必要的檢測(cè)試劑、設(shè)備和設(shè)施，如鱟試劑、分析天平、潔凈操作室或取樣柜。2) 擁有相應(yīng)操作資質(zhì)和能力的檢驗(yàn)人員，如相應(yīng)檢測(cè)人員應(yīng)具備化驗(yàn)員資質(zhì)并經(jīng)過(guò)全面的技能培訓(xùn)。選擇具有法律效力的檢測(cè)方法以及對(duì)應(yīng)的操作規(guī)范，在檢測(cè)方法的選擇方面藥用原料應(yīng)優(yōu)先采用藥典方法，非藥用原料應(yīng)采用經(jīng)過(guò)驗(yàn)證有效的檢測(cè)方法，在確定檢測(cè)方法后應(yīng)制定相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)操作文件，用于規(guī)范試驗(yàn)操作。應(yīng)嚴(yán)格控制細(xì)胞培養(yǎng)基的原材料質(zhì)量管理，并建立相應(yīng)完善的原材料質(zhì)量管理文件體系。原材料的質(zhì)量管理方面，應(yīng)明確規(guī)定責(zé)任范圍和流程方法，它們是保證原材料質(zhì)量的基礎(chǔ)。原材料質(zhì)量管理文件體系內(nèi)容通常包括兩個(gè)方面

5、，一方面是明確原材料質(zhì)量責(zé)任應(yīng)歸屬的部門(mén)及人員，以實(shí)現(xiàn)分工明確；另一方面是明確原材料的取樣、檢驗(yàn)、放行、判定不合格、異常情況、偏差、驗(yàn)證等事務(wù)具體流程，確保流程正確，方法無(wú)誤，為質(zhì)量控制提供依據(jù)。1.2細(xì)胞培養(yǎng)基生產(chǎn)生產(chǎn)工藝傳統(tǒng)的細(xì)胞培養(yǎng)基生產(chǎn)工藝即生產(chǎn)過(guò)程通常分為物料配比、物料干燥、物料研碎、物料混合、物料包裝、成品的檢驗(yàn)等6個(gè)階段，下面結(jié)合過(guò)程中的質(zhì)量控制對(duì)此工藝進(jìn)行介紹：1.2.1物料配比物料配比是根據(jù)配方要求將各種原料按比例配制的過(guò)程。配制需嚴(yán)格執(zhí)行配方，才能保證細(xì)胞培養(yǎng)基產(chǎn)品功能的實(shí)現(xiàn)及降低批間差，而實(shí)現(xiàn)低誤差的物料配比過(guò)程需從以下幾個(gè)方面進(jìn)行控制：1) 提供與生產(chǎn)工藝規(guī)程匹配且經(jīng)過(guò)

6、審核的、有效力的物料配方，生產(chǎn)部門(mén)根據(jù)配方制定配比操作記錄，經(jīng)質(zhì)量管理部門(mén)審核后，方可投入生產(chǎn)作業(yè)使用；2) 具有詳細(xì)明確的經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的設(shè)備、設(shè)施、工序操作規(guī)程以及相關(guān)管理規(guī)程，如通過(guò)編制設(shè)備、設(shè)施的驗(yàn)證、使用、維護(hù)、維修操作規(guī)程來(lái)明確操作方法和流程，通過(guò)編制相應(yīng)管理文件，來(lái)明確人員責(zé)任；3) 具有足夠的在校驗(yàn)有效期內(nèi)的精確度合理的計(jì)量器具，及與產(chǎn)品質(zhì)量要求相匹配的生產(chǎn)環(huán)境設(shè)施，如為降低細(xì)胞培養(yǎng)基微生物、內(nèi)毒素限度使用潔凈廠房進(jìn)行生產(chǎn)等；4) 足夠的經(jīng)過(guò)合理培訓(xùn)具有上崗資質(zhì)的操作人員和設(shè)備管理人員（操作員上崗證、計(jì)量員證），各崗位操作人員配備足夠，能夠確保操作過(guò)程實(shí)現(xiàn)雙人操作雙人復(fù)核；5) 配備

7、足夠的基層管理人員以及現(xiàn)場(chǎng)QA，起到指導(dǎo)和監(jiān)督作用。1.2.2物料干燥基于細(xì)胞培養(yǎng)基產(chǎn)品營(yíng)養(yǎng)豐富，且不是無(wú)菌制劑的特性，為避免微生物滋生破壞細(xì)胞培養(yǎng)基成份，需控制細(xì)胞培養(yǎng)基中的水分含量，依據(jù)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求，其干燥減重質(zhì)量分?jǐn)?shù)應(yīng)低于5.0%，而原料干燥是控制其含水量的最重要環(huán)節(jié)。目前常用的干燥方法有常壓干燥和冷凍干燥。常壓干燥包括烘干干燥、鼓式干燥、帶式干燥，由于國(guó)內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家普遍采用球磨缸進(jìn)行生產(chǎn)，由于各缸獨(dú)立，無(wú)法使用鼓式干燥、帶式干燥的方式進(jìn)行連續(xù)烘干作業(yè)，所以普遍采用烘干干燥的方式按批進(jìn)行物料干燥。冷凍干燥主要用于不能耐受高溫的貴細(xì)物料的干燥處理。1.2.3物料研磨細(xì)胞培養(yǎng)基顆粒越

8、細(xì)，同質(zhì)條件下比表面積越大，其溶解性越好，而其成品細(xì)度是由物料的研磨過(guò)程直接決定。對(duì)于物料的研磨，傳統(tǒng)普遍采用藥用球磨機(jī)，其主要優(yōu)點(diǎn)是結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、操作方便、易于清潔及使物料混合作用（能夠?qū)崿F(xiàn)缸體內(nèi)各種成份的均勻分布）。球磨缸內(nèi)的研磨球材質(zhì)通常有陶瓷、瑪瑙、不銹鋼（304或316L）。但是球磨機(jī)也存在批量小、噪音大、難以控制溫度、粉狀物料不易取出且取料過(guò)程會(huì)產(chǎn)生大量粉塵等缺點(diǎn)。目前國(guó)內(nèi)一些細(xì)胞培養(yǎng)基生產(chǎn)企業(yè)在球磨缸取料工序裝備了全密閉自動(dòng)取粉裝置，較好的解決了粉塵污染問(wèn)題，也進(jìn)一步降低了由于物料的裸露可能帶來(lái)的引入異物及物料受潮的風(fēng)險(xiǎn)。1.2.4物料混合混合設(shè)備首先必須具備能夠?qū)崿F(xiàn)物料均勻性的功能

9、。在上述物料研磨過(guò)程中，可能存在投料微量誤差、過(guò)程參數(shù)細(xì)微差異以及其他不可控因素，上述因素的累積會(huì)導(dǎo)致不同研磨單元內(nèi)物料可能出現(xiàn)一定的差異（外觀、理化性質(zhì)、培養(yǎng)性能），這些差異將直接影響產(chǎn)品的使用，造成使用者生產(chǎn)效率及產(chǎn)品的批間差異。根據(jù)哺乳類(lèi)細(xì)胞培養(yǎng)基行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)于“批”的定義，即同一臺(tái)混合設(shè)備一次混合量所生產(chǎn)的均質(zhì)產(chǎn)品為一批，物料經(jīng)研磨單元研磨以后必須進(jìn)行總混和均勻后才能稱(chēng)為一批成品進(jìn)行包裝。目前常用的物料混合設(shè)備以摻和機(jī)、雙錐混合機(jī)較為常見(jiàn)。1.2.5物料包裝物料的包裝分為內(nèi)包裝和外包裝，主要為了實(shí)現(xiàn)如下功能：1) 阻隔性功能：即密閉保存（避光、防潮、防污染、防氧化等），是指直接與產(chǎn)品接

10、觸的內(nèi)包裝，在選擇內(nèi)包裝材料時(shí)其阻隔性是關(guān)鍵，高阻隔性包裝薄膜所采用的阻隔性樹(shù)脂主要有EVOH、PA、PET、PVDC、PC、MXD6和聚丙烯腈共聚物，其中PVDC是開(kāi)發(fā)較早的阻隔性能優(yōu)異的材料，而包裝用薄膜材料結(jié)構(gòu)包括：紙塑料、塑料鍍鋁塑料、紙鋁箔塑料和塑料鋁箔塑料等幾種【11】；2) 產(chǎn)品信息的提供：產(chǎn)品外包裝上應(yīng)明確標(biāo)識(shí)品名、批號(hào)、代碼、生產(chǎn)日期、有效期、使用方法等基礎(chǔ)信息，并隨附企業(yè)質(zhì)量監(jiān)管部門(mén)下發(fā)的產(chǎn)品合格證以及質(zhì)量檢驗(yàn)報(bào)告等質(zhì)量證明文件；3) 易于運(yùn)輸?shù)姆雷o(hù)：確保外包裝物能夠抵御運(yùn)輸過(guò)程中裝卸產(chǎn)生撞擊的沖擊，并要具備一定的堆疊強(qiáng)度，對(duì)于需要遠(yuǎn)途運(yùn)輸?shù)牟荒苣褪芨邷氐某善窇?yīng)做好低溫保護(hù)

11、工作（填充保溫材料，包裝箱內(nèi)混裝冰袋、干冰等蓄冷物）。1.2.6成品的檢驗(yàn)細(xì)胞培養(yǎng)基產(chǎn)品生產(chǎn)完畢后，由質(zhì)量檢測(cè)部門(mén)對(duì)該批次產(chǎn)品進(jìn)行檢測(cè)，在這一周期內(nèi)，成品處于待驗(yàn)狀態(tài)，儲(chǔ)存條件應(yīng)與合格成品一致，應(yīng)專(zhuān)區(qū)存放專(zhuān)人管理，避免混淆和遺漏，在收到質(zhì)量檢測(cè)部門(mén)檢測(cè)合格予以放行的通知后，轉(zhuǎn)交成品庫(kù)，移入合格品區(qū)備售。1.2.7細(xì)胞培養(yǎng)基生產(chǎn)的新工藝采用上述傳統(tǒng)的生產(chǎn)工藝（通常稱(chēng)作球磨工藝）生產(chǎn)的產(chǎn)品均一性較好，物化性能穩(wěn)定以及細(xì)胞培養(yǎng)效果較好，但是存在批量小、研磨過(guò)程中的散熱難以控制、噪音及粉塵污染較大等缺點(diǎn)。2005年新開(kāi)發(fā)了一種連續(xù)生產(chǎn)的針式研磨系統(tǒng)（pin mill），集“物料混合針式研磨研磨后混合”

12、一體，用于工業(yè)化生產(chǎn)干粉細(xì)胞培養(yǎng)基，可以用來(lái)生產(chǎn)從10kg至4000kg不等批量的干粉細(xì)胞培養(yǎng)基。Pin mill研磨系統(tǒng)是一種高速?zèng)_擊研磨系統(tǒng)，包括一個(gè)進(jìn)料口、兩個(gè)同軸帶有研磨針的轉(zhuǎn)盤(pán)以及一個(gè)出料口。當(dāng)原料通過(guò)進(jìn)料口投入研磨器后到達(dá)轉(zhuǎn)盤(pán)中央，在轉(zhuǎn)盤(pán)旋轉(zhuǎn)離心力的推動(dòng)下往徑向外側(cè)運(yùn)動(dòng)同時(shí)被相互咬合且相對(duì)旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)的研磨針研細(xì)。物料在進(jìn)入針式研磨腔前和完成研磨離開(kāi)研磨設(shè)備后都使用混合機(jī)進(jìn)行了混合，以確保進(jìn)入研磨器和最終產(chǎn)品的成份均勻性，其生產(chǎn)工藝流程見(jiàn)下圖4-1。與傳統(tǒng)的球磨生產(chǎn)工藝相比，pin mill 生產(chǎn)系統(tǒng)研磨的顆粒更細(xì)，批次控制范圍大且靈活（0.54000kg），在研磨及研磨后顆粒輸送的過(guò)

13、程中，采用氮?dú)饪刂茩C(jī)體的溫度，使研磨機(jī)的溫度保持在40以下，并且避免了粉塵污染、交叉污染等。該系統(tǒng)機(jī)體的拆分、組裝及清潔也較為簡(jiǎn)單，適合cGMP生產(chǎn)。關(guān)于使用pin mill 系統(tǒng)生產(chǎn)的DPM性能，如生產(chǎn)過(guò)程中的成份組成均質(zhì)性、生產(chǎn)的產(chǎn)品性能及是否適合細(xì)胞培養(yǎng)和生物制品生產(chǎn)等，有詳細(xì)的驗(yàn)證研究，結(jié)果顯示，pin mill生產(chǎn)工藝生產(chǎn)的產(chǎn)品均勻分布性滿(mǎn)足標(biāo)準(zhǔn)，并且均勻性與成份以及批量大小無(wú)關(guān)；生產(chǎn)的產(chǎn)品諸如溶解性、pH、滲透壓等理化性質(zhì)、細(xì)胞培養(yǎng)方面及生物制品生產(chǎn)與球磨生產(chǎn)工藝相同2細(xì)胞培養(yǎng)基的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和檢測(cè)方法2.1哺乳類(lèi)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)介紹國(guó)內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)基使用者一般采用經(jīng)驗(yàn)法或?qū)嶒?yàn)法選擇

14、培養(yǎng)基，但是這些經(jīng)驗(yàn)或是來(lái)自于以前的傳統(tǒng)方法、或是通過(guò)簡(jiǎn)單的細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，因其影響因素較多，在判定的過(guò)程中，不同的使用者判定的標(biāo)準(zhǔn)也不相同，進(jìn)而可能影響對(duì)產(chǎn)品的正確選擇。因此，采用統(tǒng)一的質(zhì)量管理規(guī)范是控制產(chǎn)品質(zhì)量的一個(gè)基本前提，2007年10月1日國(guó)家發(fā)展和改革委員會(huì)批準(zhǔn)的哺乳類(lèi)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基（HG/T3935-2007）國(guó)家化工行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)正式實(shí)施，為國(guó)內(nèi)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基產(chǎn)品質(zhì)量及檢測(cè)方法提供了統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，該標(biāo)準(zhǔn)對(duì)哺乳類(lèi)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基的檢測(cè)項(xiàng)目和方法做出了明確的規(guī)定。2.2細(xì)胞培養(yǎng)基的檢測(cè)方法2.2.1澄清度檢查法該方法依據(jù)中國(guó)藥典2010版二部附錄IX B 澄清度檢查法制定。澄清度是檢查藥品溶液

15、的渾濁程度，即濁度，藥品溶液中如存在細(xì)微顆粒，當(dāng)直射光通過(guò)溶液時(shí)，可產(chǎn)生光散射和光吸收的現(xiàn)象，致使溶液微顯渾濁，所以澄清度可在一定程度上反映藥品的質(zhì)量和生產(chǎn)工藝水平。水是培養(yǎng)基的溶劑，細(xì)胞培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成份只有完全溶解于水才能被細(xì)胞吸收攝取，細(xì)胞才能生長(zhǎng)增殖，因此培養(yǎng)基是否溶解以及培養(yǎng)液是否透明澄清直接影響培養(yǎng)基使用。通過(guò)對(duì)水溶解后的培養(yǎng)基的澄清度檢查，判斷細(xì)胞培養(yǎng)基的溶解性。此法是用規(guī)定級(jí)號(hào)的濁度標(biāo)準(zhǔn)溶液與供試品溶液比較，以判定細(xì)胞培養(yǎng)液的澄清度或其渾濁程度。2.2.2 pH 值測(cè)定法各種細(xì)胞的正常功能及一切生物化學(xué)反應(yīng)，都是在適當(dāng)和穩(wěn)定的酸堿環(huán)境下進(jìn)行的，因此細(xì)胞培養(yǎng)基的pH值是細(xì)胞生長(zhǎng)的

16、重要參數(shù)，pH值偏低或偏高都會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)。該法依據(jù)中國(guó)藥典2010年版二部附錄 H pH值的測(cè)定法進(jìn)行。由于各酸度計(jì)的精度與操作方法有所不同，應(yīng)嚴(yán)格按各儀器說(shuō)明書(shū)與注意事項(xiàng)進(jìn)行操作，并在使用之前注意校正。在工業(yè)化使用時(shí)，由于傳統(tǒng)的細(xì)胞培養(yǎng)基中含有pH指示劑如酚紅等，通常依據(jù)“眼睛”觀察培養(yǎng)液顏色來(lái)判定pH，或是簡(jiǎn)單的使用pH試紙測(cè)定，但是上述方法存在較大的主觀因素，影響正確判定，并且在配制的過(guò)程中，不同區(qū)域還可能存在一定的水質(zhì)區(qū)別等，采用pH儀器檢測(cè)可以消除人的主觀因素，準(zhǔn)確性高。此外，在檢測(cè)過(guò)程中，添加碳酸氫鈉后的培養(yǎng)基在測(cè)定的過(guò)程中，暴露在空氣中的時(shí)間也會(huì)對(duì)所測(cè)pH的準(zhǔn)確性有一定的影響。

17、2.2.3干燥減量測(cè)定方法細(xì)胞培養(yǎng)基具有吸濕性，在空氣中放置時(shí)水份會(huì)很快升高，干燥減量表示產(chǎn)品中的含濕量。細(xì)胞培養(yǎng)基是有菌制劑，其豐富的營(yíng)養(yǎng)成份有利于微生物生長(zhǎng)，保持培養(yǎng)基中的低水份含量可以防止微生物的繁殖。檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)基中水份的含量采用的方法是干燥減量法。該測(cè)定方法是依據(jù)中國(guó)藥典2010年版二部附錄 L 干燥失重測(cè)定法制定，具體是指產(chǎn)品在規(guī)定條件下干燥后所減失重量的百分率。減失的重量主要是水分、結(jié)晶水及其他揮發(fā)性物質(zhì)等。由減失的重量和取樣量計(jì)算供試品的干燥失重。2.2.4滲透壓通常動(dòng)物細(xì)胞必須生活在等滲環(huán)境中，借助K、Na維持滲透平衡。雖然大多數(shù)細(xì)胞對(duì)滲透壓具有有一定的耐受性，但是培養(yǎng)液滲透

18、壓過(guò)高容易使細(xì)胞脫水萎縮，培養(yǎng)液滲透壓過(guò)低容易使細(xì)胞膨脹破裂，控制培養(yǎng)基的滲透壓范圍對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)具有重要的作用。檢測(cè)通常采用冰點(diǎn)滲透壓儀進(jìn)行，當(dāng)供試品溶液的毫滲透壓摩爾濃度太大或大于儀器的測(cè)定范圍時(shí)，用適宜的溶劑稀釋至可測(cè)定的毫滲透壓摩爾濃度范圍。2.2.5細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)方法細(xì)菌內(nèi)毒素是許多病原性細(xì)菌所產(chǎn)生的毒素。細(xì)胞培養(yǎng)基中細(xì)菌內(nèi)毒素過(guò)高，對(duì)生物制品的質(zhì)量如純度、引起副反應(yīng)等方面有影響，而且會(huì)降低生物制品的產(chǎn)率。細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法通常利用鱟試劑來(lái)檢測(cè)或量化由革蘭氏陰性菌產(chǎn)生的細(xì)菌內(nèi)毒素，以判斷供試品中細(xì)菌內(nèi)毒素的限量是否符合規(guī)定的一種方法。其檢查包括凝膠法和光度測(cè)定法，后者包括濁度法和顯色基質(zhì)

19、法。供試品檢測(cè)時(shí)，可使用其中任何一種方法進(jìn)行試驗(yàn)。通常當(dāng)測(cè)的結(jié)果有爭(zhēng)議時(shí)，以凝膠法結(jié)果為準(zhǔn)。2.2.6微生物限度細(xì)胞培養(yǎng)基不是無(wú)菌產(chǎn)品，其中的微生物在一定條件下會(huì)吸收培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)滋生繁殖，導(dǎo)致培養(yǎng)基變質(zhì)失效。控制細(xì)胞培養(yǎng)基中細(xì)菌和霉菌，是延長(zhǎng)培養(yǎng)基有效期的方法之一，也是對(duì)生產(chǎn)企業(yè)的產(chǎn)品、原料、輔料、設(shè)備器具、工藝流程、生產(chǎn)環(huán)境和操作者的衛(wèi)生狀況進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)的綜合依據(jù)之一，對(duì)其的檢測(cè)是非常必要的。檢測(cè)方法依據(jù)中國(guó)藥典2010年版附錄 J 微生物限度檢查法進(jìn)行，檢查項(xiàng)目為細(xì)菌數(shù)、霉菌數(shù)。2.2.7細(xì)胞生長(zhǎng)試驗(yàn)細(xì)胞在體外進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，失去了機(jī)體的調(diào)節(jié)和控制作用，因此，細(xì)胞培養(yǎng)液除滿(mǎn)足細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)

20、要求外，還必須使其生存環(huán)境接近活體的環(huán)境。其中培養(yǎng)液及外環(huán)境的培養(yǎng)條件如溫度、滲透壓、酸堿度等均能影響細(xì)胞的生長(zhǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)基的功能就是滿(mǎn)足細(xì)胞體外生長(zhǎng)增殖需求，因此細(xì)胞培養(yǎng)效果的檢驗(yàn)是產(chǎn)品質(zhì)量?jī)?yōu)劣的一個(gè)直觀表述，是必檢項(xiàng)目，這也是一個(gè)產(chǎn)品性能特性表述的要求。細(xì)胞培養(yǎng)檢測(cè)方法是：細(xì)胞在37恒溫條件下，在含體積分?jǐn)?shù)為3%10小牛血清的細(xì)胞培養(yǎng)液中生長(zhǎng)72h，觀察細(xì)胞形態(tài)并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)；細(xì)胞生長(zhǎng)72h后，更換不含小牛血清的細(xì)胞培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)48h，觀察細(xì)胞形態(tài)并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。培養(yǎng)過(guò)程中加血清培養(yǎng)主要檢測(cè)培養(yǎng)基的培養(yǎng)質(zhì)量，不加血清培養(yǎng)主要檢測(cè)培養(yǎng)基的有無(wú)毒害物質(zhì)。細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)不但在使用一個(gè)新的產(chǎn)品時(shí)

21、是必須進(jìn)行的檢測(cè)項(xiàng)目，在更換不同批次時(shí)，為檢測(cè)是否有批間差也必須進(jìn)行；此外，即使是同一個(gè)批次，分次購(gòu)買(mǎi)時(shí)，或是存放擱置較長(zhǎng)時(shí)間再次使用時(shí)，也需進(jìn)行該項(xiàng)目檢測(cè)，以防止培養(yǎng)基在貯存、運(yùn)輸過(guò)程中可能發(fā)生的質(zhì)量變化。該行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中的檢測(cè)項(xiàng)目為生物制品廠家控制原材料質(zhì)量提供一定的依據(jù)，但是隨著生物制品安全性要求的提高，其所檢內(nèi)容還有待完善，如添加一些諸如動(dòng)物蛋白、抗生素等的檢測(cè)，為生物制品廠家控制原材料的安全性提供更高的保障。2.3細(xì)胞培養(yǎng)基安全技術(shù)說(shuō)明（MSDS）MSDS是化學(xué)品安全技術(shù)說(shuō)明書(shū)，是化學(xué)品生產(chǎn)或銷(xiāo)售企業(yè)按法律要求向客戶(hù)提供的有關(guān)化學(xué)品特征的一份綜合性法律文件?；瘜W(xué)品安全說(shuō)明書(shū)作為傳遞產(chǎn)品安全信息的最基礎(chǔ)的技術(shù)文件，其主要作用體現(xiàn)在：1) 提供有關(guān)化學(xué)品的危害信息，保護(hù)化學(xué)產(chǎn)品使用者2) 確保安全操作，為制訂危險(xiǎn)化學(xué)品安全操作規(guī)