蛋白結合率相關知識

1、蛋白結合率相關知識蛋白結合率相關知識血漿蛋白結合率：藥物與血漿蛋白結合的程度，即血液中與 蛋白結合的藥物占總藥量的百分數。血漿蛋白結合率為可逆性疏松結合，結合型藥物分子量增大，不 能跨膜轉運、代謝和排泄，并暫時失去藥理活性，某些藥物可在 血漿蛋口結合部位上發(fā)生競爭排擠現(xiàn)象。藥物分子與血漿蛋白結 合的特點（和藥物與受體蛋口結合情況相似）:具有飽和性與可 逆性、結合物無活性、有競爭置換現(xiàn)象。藥物進入循環(huán)后，有兩種形式：結合型藥物：藥物與血漿蛋白結合。特點：（1）暫時失去藥理活性。（2）體積增大，不易通過血管壁，暫時“儲存”于血液中。 意義：結合型藥物起著類似藥庫的作用。藥物進入相應組織后也與組織蛋

2、口發(fā)生結合，也起到藥庫作用，影響藥物作用和作 用維持時間長短，一般蛋白結合率高的藥物體內消除慢，作用維 持時間長。游離型藥物：未被血漿蛋白結合的藥物。特點：能透過生物膜，進入到相應的組織或靶器官，產生效 應或進行代謝與排泄。藥物與血漿蛋白結合方式：酸性藥物與口蛋口結合：華法林、磺胺類藥物主要與血漿 口蛋白結合，三環(huán)類抗抑郁藥、氯丙嗪也與白蛋白結合。堿性藥物與a 1-糖蛋白結合：B-糖蛋白和雖然量比口蛋白少 很多，但在癌癥、關節(jié)炎、心肌梗死等疾病中可增高，能與奎寧 結合。特點：(1) 可逆性藥物與血漿蛋白的結合是可逆的，極少數是共價結合(如烷 化劑)。藥物在血液中轉運時，結合型與游離型藥物快速達

3、到動態(tài)平 衡。游離型藥物一透過生物膜一血液中游離型藥物濃度降低一結 合型藥物，釋出游離型藥物。(2) 飽和性血漿中蛋白有一定的量，與藥物的結合有限，因此，藥物與 血漿蛋口結合具有飽和性。當藥物濃度大于血漿蛋白結合能力時一飽和一游離型藥物急 劇增加一毒性反應。某些病理情況下，血漿蛋白過少(如肝硬化、慢性腎炎)、 變質(如尿毒癥)一藥物與血漿蛋口結合減少一毒性反應。有些 藥物在老年人中呈現(xiàn)較強的藥理效應，與老年人的血漿蛋口減少 有關。(3) 競爭性兩種藥物f競爭結合同一蛋白f置換f游離型藥物濃度增加 f導致中毒。女口：保泰松f結合型雙香豆素f游離型f濃度增加f出血傾 向。與內源性代謝物競爭與血漿蛋

4、白結合，如磺胺藥f置換膽紅 素一新生兒核黃疸癥。此外，注射口蛋白可與藥物結合而影響療效。血漿蛋白與藥物結合時，血漿蛋白在體內的各種作用暫時消失， 但是與藥物分離之后，血漿蛋白各種性質基本不變，繼續(xù)發(fā)揮原 來的作用。血漿蛋白結合率的測定1、實驗目的測定磺胺卩密唳鈉在不同動物體內的血漿蛋口結合率。2、實驗原理將蛋白置于一個隔室內，用半透膜將此隔室與另一隔室隔開。 蛋口等大分子不能通過此半透膜，但系統(tǒng)中游離配基可自由通過。 當達到平衡時半透膜兩側自由配基的濃度相等。若系統(tǒng)中自由配基 的總量己知，測定不含蛋口隔室中自由配基的濃度，即可推算與蛋 口結合的配基量。具有游離氨基的磺胺藥在酸性介質中與亞硝酸發(fā)

5、生重氮化反應 后，可與N-（l蔡基）乙二胺產生偶合反應生成紫紅色偶氮染料，與 經過同樣處理的磺胺藥標準液比較，用721分光光度計比色法測出 組織中和不同時間的血液中磺胺喀唳濃度。由于亞硝酸不穩(wěn)定，在實驗中，用三氯醋酸與亞硝酸鈉反應制 的得。剩余的過量亞硝酸影響測定，用氨基磺酸胺分解除去。3、實驗材料1、實驗動物兔子一只。2、設備與器械712分光光度計、管狀半透膜（周長5cm,長約12cm）、絲線、廣口瓶、移液器。3、藥物與試劑10%磺胺喀唳鈉注射液15%三氯醋酸溶液%亞硝酸鈉溶液%氨基磺酸胺溶液%二鹽酸N- （1蔡基）-乙二胺溶液磺胺喀唳鈉貯存標準液磺胺卩密唳鈉應用標準液4、試驗方法1、試劑的

6、制備%二鹽酸N- （1蔡基）-乙二胺溶液：溶于95%乙醇約400mL 中，再用乙醇稀釋至500ml,棕色瓶于冰箱中保存透析液（PBS）：的磷酸鹽緩沖液，內含磺胺喀唳鈉應用標準液：10%磺胺喀唳鈉注射液n 1溶于約 80ml3%三氯醋酸溶液再定容于100ml容量瓶中備用2、血漿制備兔心臟采血，肝素抗凝，以3000rpm離心lOmin,取上清液即 為血漿。3、透析將管狀半透膜一端折疊，用紗線扎緊，保留結扎線段10cm左 右，以調節(jié)袋內外液而在同一水平，加血漿樣品于上述半透膜袋 內，并扎緊口袋另一端，袋口不得污染血漿。將兩端扎緊的半透膜 置于盛有透析液的30ml廣口瓶中，用袋兩端線段調節(jié)袋內外液面，

7、 加ml的磺胺喀唳鈉溶液于各瓶袋外透析液中。置廣口瓶于冰箱中， 平衡透析約60h左右。吸出袋外透析液少許，加等量磺基水楊酸試 劑，無渾濁，說明無血漿蛋白漏出。取出半透膜，用濾紙吸干袋外 壁透析液，小心解開透析袋，使袋內血漿流入干凈試管。4、用重氮化-偶合比色法測定袋內外溶液中磺胺藥濃度。取袋內外溶液各，加水；加15%三氯醋酸4ml,混勻，靜置 2min,過濾，取試管3支，各加入濾液5mL,為測定管；取試管3 支，加入空口對照液5mL,為空口管；取試管3支，加入應用標準 液5mL,為標準管，在以上各管中各加入%亞硝酸鈉溶液，混勻，放透析袋外藥物濃度二ml3、藥物血漿蛋白結合率的計算結果：兔：fb

8、=%六、結果討論與總結1、分光光度計的使用操作。由于應該使用一套比色杯來測定吸光度，而在實際操作中比色杯使 用混亂，而且并沒有做到嚴格的潤洗，所以吸光度的測量存在較大 的誤差。分光光度計的使用應該注意的事項：（1）為了防止光電管疲勞。不測定時必須將比色皿暗箱蓋打開，使 光路切斷，以延長光電管使用壽命。（2）拿比色皿時，手指只能捏住比色皿的毛玻璃面，不要碰比色皿 的透光而，以免沾污。（3）清洗比色皿時，一般先用水沖洗，再用蒸鐳水洗凈。每次做完 實驗時，應立即洗凈比色皿。（4）測定有色溶液吸光度時，一定要用有色溶液洗比色皿內壁幾 次，以免改變有色溶液的濃度。另外，在測定一系列溶液的吸光度 時，通常都按由稀到濃的順序測定，以減小測量誤差。（5）在實際分析工作中，通常根據溶液濃度的不同，選用液槽厚度 不同的比色皿，使溶液的吸光度控制在。2、總結動物的種屬、生理病理狀態(tài)、個體差異可以影響血漿蛋白結合 率。理論上當蛋口濃度足夠高時所有與蛋白作用的藥物都能被結 合。但實際情況下，當親和力較低時不可能達到這種所謂的足夠高 的蛋白濃度。蛋口濃度一定時，一定范圍內當藥物濃度增加結合的 藥量會隨之增加，但結合分數降低。相反，當藥物濃度下降時，結 合分數增加并逐漸趨向于一個最大值，因此不同藥物在低濃度時的 最大結合率各不相同。平衡透析法是一種相對簡單不需要復雜設備 的可行性強的操作方法。實驗過程中所用三