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1、第1頁/共63頁 液液- -液萃取法液萃取法 生物催化法生物催化法 不對(duì)稱合成法不對(duì)稱合成法 膜分離法膜分離法 傳感器法傳感器法 結(jié)晶法結(jié)晶法 毛細(xì)管電泳毛細(xì)管電泳色譜法色譜法 手性分離方法手性分離方法 第2頁/共63頁 超臨界超臨界 ( (SFCSFC) ) 氣相色譜氣相色譜 (GCGC) 薄層色譜薄層色譜 (TLCTLC) 逆流色譜逆流色譜 (CCCCCC) 模擬移動(dòng)床模擬移動(dòng)床 ( (SMBSMB) ) 高效液相色譜高效液相色譜 (HPLCHPLC) 色譜法色譜法 第3頁/共63頁 方法方法精度精度說明說明 旋光法旋光法 低 (5%) 非對(duì)映體異構(gòu)體法非對(duì)映體異構(gòu)體法 高 (0.1%)幾

2、十毫克 . 中等 (2%) 幾毫克需要位移試劑. 色譜法色譜法高高 (0.1%)(0.1%)微克微克- -毫克毫克HPLCHPLC、GCGC、SFCSFC 對(duì)映體純度測(cè)定方法及其比較對(duì)映體純度測(cè)定方法及其比較 幾十毫克 樣品用量樣品用量 需要其它的手性化合物來制 備非對(duì)映體 需要真實(shí)樣品 第4頁/共63頁 手性色譜固定相法基本原理手性色譜固定相法基本原理 操作簡(jiǎn)單操作簡(jiǎn)單 不需要預(yù)處理不需要預(yù)處理 準(zhǔn)確度高準(zhǔn)確度高 R R R R 對(duì)映體分離示意圖對(duì)映體分離示意圖 S S S S S S S S S S S S S S S S S S S SR,S R,S 消旋體消旋體 (racemate)(

3、racemate) 手性選擇劑手性選擇劑 R R S S R R R R R R R R R R R R R R R R 引入手性環(huán)境是實(shí)引入手性環(huán)境是實(shí) 現(xiàn)手性分離的前提現(xiàn)手性分離的前提 第5頁/共63頁 Daicel手性色譜柱一覽表手性色譜柱一覽表 正相正相 l直鏈淀粉衍生物直鏈淀粉衍生物 CHIRALPAK AD / AD-H/AD-3 CHIRALPAK AS / AS-H/AS-3 CHIRALPAK AY-H/AY-3 CHIRALPAK AZ-H/AZ-3 l纖維素纖維素衍生物衍生物 CHIRALCEL OD / OD-H/OD-3 CHIRALCEL OJ / OJ H/OJ-

4、3 CHIRALCEL OZ H /OZ-3 CHIRALCEL OA, OB, OC CHIRALCEL OF, OG, OK CHIRALCEL CA-1 反相反相 CHIRALPAK AD -RH/AD-3R CHIRALPAK AS RH/AS-3R CHIRALCEL OD-RH/OD-3R CHIRALCEL OJ RH/OJ-3R CHIRALPAK AY RH/AY-3R CHIRALCEL OZ RH/OZ-3R 其它其它 Chiral -AGP CROWNPAK CR (), () CHIRALPAK OT(), OP () CHIRALPAK WH, MA () CHIR

5、ALPAK QD-AX CHIRALPAK QN-AX 共價(jià)鍵合型共價(jià)鍵合型 CHIRALPAK IA/IA-3 CHIRALPAK IB/IB-3 CHIRALPAK IC/IC-3 第6頁/共63頁 第7頁/共63頁 第8頁/共63頁 分析條件優(yōu)化流程圖分析條件優(yōu)化流程圖 (1 (1) ) 酸性酸性 中性中性 堿性堿性 Hex/IPA/Hex/IPA/TFATFA = =7 70/0/3 30/0.10/0.1 Hex/IPA/Hex/IPA/DEADEA = =7 70/0/3 30/0.10/0.1 Hex/IPAHex/IPA = =7 70/0/3 30 0 第9頁/共63頁 堿性

6、樣堿性樣 品品 mV Minutes 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0 024681012141618202224 10.74 13.96 Hex/IPA/DEA=90/10/0.1 流量:1.0mi/min. 溫度:25、檢測(cè)波長(zhǎng):(254) 流動(dòng)相Hex/IPA=90/10Hex/IPA/AcOH=90/10/0.1 流動(dòng)相Hex/IPA=90/10 -0.10 -0.05 0.00 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25 0.30 0.35 mV 024681012141618202224262830 Minutes 10.94 0.40 流量:1

7、.0mi/min.溫度:40、檢測(cè)波長(zhǎng):(254) 0 5 10 15 20 25 30 35 mV 0123456789101112131415 Minutes 6.66 7.52 Minutes 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 mV 0510152025303540 酸性樣品酸性樣品 F COOH NH2 N O N (沒出峰(沒出峰 ) (無法分離(無法分離 ) 第10頁/共63頁 *1 主要用于1級(jí)胺 *2 主要用于1級(jí)氨基醇 第11頁/共63頁 Minutes 0.02.55.07.510.012.515.017.520.0 mv 0 200

8、400 600 800 1000 1200 mv 0 200 400 600 800 1000 1200 12.240 14.853 1: 220 nm, 4 nm Retention Time Minutes 051015 mv 0 1000 2000 3000 mv 0 1000 2000 3000 1: 220 nm, 4 nm Retention Time Column: AY-H (4.6*150mm) Temp: 35 Flow:2.0ML/MIN Mobile phase: CO2/IPA/DEA =85/15/0.1 Column: AY-H (4.6*150mm) Temp:

9、 35 Flow:1.2ML/MIN Mobile phase: CO2/IPA/1-propylamine =85/15/0.1 第12頁/共63頁 0.05.010.015.020.025.0min 0 100 200 300 400 mV Detector A Ch1:220nm 2.225 29.879 0.02.55.07.510.012.515.017.520.0min -25 0 25 50 75 100 125 mV Detector A Ch1:220nm 12.005 15.046 0.02.55.07.510.012.515.017.5min -50 -25 0 25 5

10、0 75 100 mV Detector A Ch1:220nm 12.164 14.754 Column: OZ-H (4.6*150mm) Temp: 35 Flow: 1.0 ml/min Mobile phase:hexane/IPA/DEA(75/25/0.1) Column: OZ-H (4.6*150mm) Temp: 35 Flow: 1.0 ml/min Mobile phase:hexane/IPA/TFA(85/15/0.1) Column: OZ-H (4.6(150mm) Temp: 35 Flow: 1.0 ml/min Mobile phase: hexane/I

11、PA/TFA/DEA(80/20/O.1/0.05) 第13頁/共63頁 保留時(shí)間保留時(shí)間? ? 適宜的分析時(shí)間 (10-30 min.) 增加增加 異異丙醇 增加增加 正已烷 第14頁/共63頁 OK!OK! 分離?分離? 第15頁/共63頁 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 0123456789101112131415 Minutes 4.68 4.82 OB 15 mV 1234567891011121314 Minutes 6.71 6.87 OD 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 mV 0 -5 0

12、 5 10 15 20 25 30 35 mV 0123456789101112131415 Minutes 6.66 7.52 AD 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 mV 0123456789101112131415 OJ mV 0 10 20 30 40 50 60 70 80 mV 01234567891011121314 4.70 90 AS 15 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 0123456789101112131415 Minutes 4.70 OC Minutes 10 20 30 40 50 6

13、0 70 80 mV 0123456789101112131415 Minutes 4.36 15 OG Minutes 0 0 10 20 30 40 50 60 70 80 mV 01234567891011121314 Minutes 4.36 OF 色譜條件色譜條件 流動(dòng)相: Hex./IPA/ AcOH = 90/10/0.1 流量:1.0ml/min. 溫度 :40 檢測(cè)波長(zhǎng) :UV254nm 樣品: F COOH 選擇效果最好的手性柱, 然后繼續(xù)優(yōu)化分析條件 第16頁/共63頁 部分分離部分分離 A.A.降低異丙醇濃度降低異丙醇濃度 B. B. 調(diào)整溫度調(diào)整溫度 C. C. 更換

14、醇類更換醇類 第17頁/共63頁 0 5 10 15 20 25 30 35 mV 0123456789101112131415 Minutes 6.66 7.52 在多數(shù)情況下,降低醇的濃度可延長(zhǎng)保持時(shí)間,改善分離度在多數(shù)情況下,降低醇的濃度可延長(zhǎng)保持時(shí)間,改善分離度 Column:AD, Temp.:40, Flow rate:1.0ml/min. Hex./IPA/ AcOH =90/10/0.1Hex./IPA/ AcOH =100/1/0.1 -0.5 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 mV 051015202530354045505560 Minute

15、s 35.77 43.71 F COOH Sample:Flurbiprofen 第18頁/共63頁 部分分離部分分離 B. B. 調(diào)整溫度調(diào)整溫度 C. C. 更換醇類更換醇類 A.A.降低異丙醇濃度降低異丙醇濃度 第19頁/共63頁 Column:CHIRALPAK AD Mobile phase: Hex./IPA/ AcOH =90/10/0.1, Flow rate:1.0ml/min. 2540Temp.: 5 F COOH 降低柱溫降低柱溫可增大可增大值,但會(huì)使峰形變寬值,但會(huì)使峰形變寬 升高柱溫升高柱溫會(huì)減少會(huì)減少值,但會(huì)使峰形尖鋒值,但會(huì)使峰形尖鋒 -0.5 0.0 0.5

16、1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 0123456789101112131415 Minutes 8.72 12.13 :1.59 mV Minutes 0 5 10 15 20 25 30 35 0123456789101112131415 6.66 7.52 :1.23 mV 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 0123456789101112131415 Minutes 7.66 9.12 :1.32 第20頁/共63頁 0.02.55.07.5min -10 -5 0 5 10 15 20 mV Detector A Ch1:20

17、0nm 3.217 3.732 Temp.: 25 Rs: 1.99 0.02.55.07.5min 0 25 50 75 mV Detector A Ch1:200nm 4.335 5.281 Temp.: 20 Rs: 2.78 Temp.: 15 Rs: 3.56 0.02.55.07.5min 0 10 20 30 40 50 60 70 mV Detector A Ch1:200nm 4.397 5.661 Column: CROWNPAK CR(+) (4.6*150 mm) Mobile phase: PH=1.0高氯酸高氯酸 Flow: 0.3 ml/min Sample: 蘇

18、氨酸蘇氨酸 第21頁/共63頁 部分分離部分分離 C C. .更換醇類更換醇類B. B. 調(diào)整溫度調(diào)整溫度 A.A.降低異丙醇濃度降低異丙醇濃度 第22頁/共63頁 由異丙醇換為乙醇由異丙醇換為乙醇-選擇性增大選擇性增大 Hex./IPA/AcOH=90/10/0.1 F COOH IPA和和EtOH有時(shí)會(huì)使峰形和有時(shí)會(huì)使峰形和值發(fā)生明顯變化值發(fā)生明顯變化 Column:CHIRALPAK AD Temp.:40, Flow rate:1.0ml/min. Sample:Flurbiprofen 0 5 10 15 20 25 30 35 mV 0123456789101112131415 M

19、inutes 6.66 7.52 =1.23 0 5 10 15 20 25 30 0123456789101112131415 7.58 9.64 =1.45 mV Minutes Hex./EtOH/AcOH=95/5/0.1 第23頁/共63頁 0.05.010.015.020.025.0min 0 25 50 75 100 mV Detector A Ch2:254nm 20.241 21.424 0.02.55.07.510.012.515.0min 0 50 100 150 200 250 300 mV Detector A Ch2:254nm 10.011 13.410 Colu

20、mn: AY-H (4.6X250mm) Temp: 35 Flow:1.0 ml/min Mobile phase:hexane/IPA/DEA(90/10/O.1) Column: AY-H (4.6X250mm) Temp: 35 Flow:1.0 ml/min Mobile phase:hexane/EtOH/DEA(90/10/O.1) 第24頁/共63頁 01020min 0 250 500 mV Detector A Ch1:220nm 0.05.010.0min 0 250 500 750 mV Detector A Ch1:220nm 8.475 11.818 IA-H80I

21、20DEA0.1-1.0mlmin-35IA-M100DEA0.1-1.0mlmin-35 0.02.55.07.510.012.515.017.5min -50 -25 0 25 50 75 100 mV Detector A Ch1:220nm 12.164 14.754 0.02.55.07.510.012.5min 0 50 100 150 200 250 300 350 mV Detector A Ch1:214nm 5.011 7.462 OZ-H,Hexane/IPA /TFA/DEA= 80/20/0.1/0.05(v/v/v),1.0 ml/min OZ-H,MeOH/DEA

22、=100/0.1(v/v), 0.8 ml/min 第25頁/共63頁 第26頁/共63頁 第27頁/共63頁 CHIRALPAK IA/IB/IC CHIRALPAK IA/IB/IC研發(fā)背景研發(fā)背景 第28頁/共63頁 CHIRALPAK IA, IB, IC O N H CH3 CH3 OR O OR OR O n R OR O OR OR O n O N H CH3 CH3 R O N H Cl Cl R OR O OR OR O n CHIRALPAK IA CHIRALPAK IB CHIRALPAK IC New! 第29頁/共63頁 l 流動(dòng)相組分沒有任何限制流動(dòng)相組分沒有任何

23、限制 l 可以選用任何有機(jī)溶劑溶解樣品可以選用任何有機(jī)溶劑溶解樣品 l 新的手性選擇性新的手性選擇性 l 可以再生,壽命長(zhǎng)可以再生,壽命長(zhǎng) l 正相與反相可以在同一支柱子上實(shí)現(xiàn)正相與反相可以在同一支柱子上實(shí)現(xiàn) 第30頁/共63頁 對(duì)于一些化合物,分離度可能 優(yōu)于涂布型 第31頁/共63頁 0.02.55.07.5min 0 250 500 750 mV Detector A Ch1:220nm 0.01.02.03.04.05.0min 0 250 500 750 mV Detector A Ch1:220nm 分離度優(yōu)于涂布型實(shí)例分離度優(yōu)于涂布型實(shí)例 Column: AD-H (4.6X25

24、0mm) Temp: 35 Flow:1.0 ml/min Mobile phase: hexane/IPA/DEA (90/10/0.1) Column: IA (4.6X150mm) Temp: 35 Flow:1.0 ml/min Mobile phase: hexane/IPA/DEA (90/10/0.1) 第32頁/共63頁 0.02.55.07.510.0min 0 250 500 750mV Detector A Ch1:220nm 0.02.55.07.5min 0 50 100 150 200 mV Detector A Ch1:220nm 3.944 5.528 由于在流

25、動(dòng)相中改善了溶解度,由于在流動(dòng)相中改善了溶解度, 柱效優(yōu)于涂布型柱效優(yōu)于涂布型 Column: AD-H (4.6X250mm) Temp: 35 Flow: 1.0 ml/min Solubility: 0.5 mg/ml Mobile phase: hexane/IPA (70/30) Column: IA (4.6X250mm) Temp: 35 Flow: 1.0 ml/min Solubility: 7.0 mg/ml Mobile phase: MtBE/MeOH (80/20) 第33頁/共63頁 更高的柱效,更好的峰形更高的柱效,更好的峰形 Chromatographic Co

26、ndition: Hexane/IPA, 90/10 (v/v) 第34頁/共63頁 通過溶劑多樣性優(yōu)化手性分離通過溶劑多樣性優(yōu)化手性分離 第35頁/共63頁 IBIB含水流動(dòng)相含水流動(dòng)相 非水與水相體系通用非水與水相體系通用 第36頁/共63頁 C H 3 N N O C H 3 024681012 50 100 150 200 250 300 a= 2.81 0 010102020 0.000.00 0.010.01 0.020.02 0.030.03 0.040.04 0.050.05 a= 2.36 a= 1.96 0 01 12 2 3 34 45 5 6 67 78 8 9 910

27、101111121213131414 0 0 0.10.1 0.20.2 0.30.3 0 02 24 46 68 8101012121414 0.00.0 0.20.2 0.40.4 0.60.6 0.80.8 1.01.0 a= 1.79 0 010102020 0.000.00 0.010.01 0.020.02 0.030.03 0.040.04 a= 1.70 02468101214 0 50 100 150 200 250 a= 1.65 0 010102020 0.00.0 0.10.1 0.20.2 a= 1.63 a= 1.33 0 02 24 46 68 810101212

28、1414 0.00.0 0.20.2 0.40.4 0.60.6 0.80.8 1.01.0 第37頁/共63頁 修復(fù)再生后修復(fù)再生后 (可使用各種強(qiáng)極性溶劑)(可使用各種強(qiáng)極性溶劑) 柱性能受損柱性能受損 ( 如受強(qiáng)吸附雜質(zhì)的影響)如受強(qiáng)吸附雜質(zhì)的影響) O O F O O H O H 樣品樣品新色譜柱新色譜柱 第38頁/共63頁 IA柱的修復(fù)再生方法: 第一:第一:EtOH 0.EtOH 0.4 4ml/min 30minml/min 30min 第二:第二:DMF 0.3ml/min 3hDMF 0.3ml/min 3h 第三:第三:EtOH 0.3ml/min 50minEtOH 0.

29、3ml/min 50min 第四:第四:H/E=90/10H/E=90/10 還不行,再用下面條件還不行,再用下面條件 第一:第一:EtOH 0.EtOH 0.4 4ml/min 30minml/min 30min 第二:第二:THF 0.5ml/min 2hTHF 0.5ml/min 2h 第三:第三:EtOH 0.EtOH 0.4 4ml/min 30minml/min 30min 第四:第四:DMF 0.3ml/min 3hDMF 0.3ml/min 3h 第五:第五:EtOH 0.3ml/min 50minEtOH 0.3ml/min 50min 第六:第六:H/E=90/10H/E=

30、90/10 第39頁/共63頁 IB IC柱的修復(fù)再生方法: 第一:第一:EtOAc 1ml/min 30minEtOAc 1ml/min 30min,有添加劑的,有添加劑的2h, 2h, 室溫保存室溫保存2 2天天 第二:第二:H/I=90/10 1ml/min 1hH/I=90/10 1ml/min 1h 第40頁/共63頁 鍵合型固定相篩選一般流程鍵合型固定相篩選一般流程 l 選用比較典型的溶劑組合作為起始篩選流動(dòng)相選用比較典型的溶劑組合作為起始篩選流動(dòng)相 Hexane/IPA(EtOH) Hexane/THF(DCM, EA) MtBE/ MeOH (IPA,EtOH) MtBE/ T

31、HF(DCM, EA) ACN/ MeOH (IPA,EtOH) l 如果分析物的溶解度不好,優(yōu)先選用溶解度好的有機(jī)溶劑作為流動(dòng)相組分如果分析物的溶解度不好,優(yōu)先選用溶解度好的有機(jī)溶劑作為流動(dòng)相組分 l 使用多元流動(dòng)相優(yōu)化分離使用多元流動(dòng)相優(yōu)化分離 第41頁/共63頁 第42頁/共63頁 (MPa)() OD-RH *1 =90/100/100 10 54027 OJ-RH AS-RH 540*229*2,3 AD-RH 新新產(chǎn)產(chǎn)品:品: AY-RH / OZ-RH 第43頁/共63頁 根據(jù)樣品性質(zhì)選擇流動(dòng)相根據(jù)樣品性質(zhì)選擇流動(dòng)相 樣品性質(zhì)OD-RH、OJ-RHAD-RH、AS-RH 中性水/

32、乙腈 酸性 磷酸水溶液(pH2)/乙腈 0.1M 磷酸緩沖液(pH2)/乙腈 堿性 0.1M KPF6 水溶液/乙腈 0.1M NaPF6水溶液/乙腈 20mM 硼酸緩沖液(pH9)/乙腈 20mM 磷酸緩沖液(pH8)/乙腈 1) 酸性流動(dòng)相: 甲酸、乙酸 2) 堿性流動(dòng)相: 碳酸氫氨(醋酸銨,甲酸銨) 第44頁/共63頁 第45頁/共63頁 反相流動(dòng)相的反相流動(dòng)相的pH值對(duì)分離度的影響值對(duì)分離度的影響 (AS-RH ) O O H 中性化合物 Benzoin ON H O C O O H 酸性化合物 N-CBZ-Norvaline 堿性化合物 Ofloxacin ethyl ester O

33、 NN N F O C O O Et 水溶液 水溶液/CH3CN=60/40 流速:1.0ml/min. 水溶液/CH3CN=60/40 流速:1.0ml/min. 水溶液/CH3CN=80/20 流速:0.5ml/min. 0 5 10 15 mV 02468101214 Minutes 7.16 8.77 0 2 4 6 8 10 12 mV 012345678910 Minutes 2.25 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 mV 05 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Minutes 27.79 水 磷酸水溶液 (pH2) 硼酸緩沖液 (pH9)

34、0 5 10 15 mV 02468101214 Minutes 7.11 8.70 0 5 10 15 20 mV 0.02.04.06.08.0 Minutes 4.17 4.69 0 20 40 60 80 mV 0510 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Minutes 4.00 4.484.77 0 5 10 15 mV 02468101214 Minutes 6.97 8.53 0 10 20 30 40 50 60 70 mV 012345678910 Minutes 1.85 0.0 2.0 4.0 6.0 8.0 05 10 15 20 25 30

35、35 40 45 50 55 60 Minutes 30.74 36.78 第46頁/共63頁 有機(jī)溶劑種類對(duì)分離的影響有機(jī)溶劑種類對(duì)分離的影響 12.18 13.54 8.20 8.84 11.52 12.35 8.21 14.12 15.78 7.45 7.97 水水/乙腈乙腈 =50/50 水水/乙醇乙醇 =35/65 水水/甲醇甲醇 =25/75 O O H 2-Methyl-1-tetralone2-Phenyl-2-butanol 手性柱手性柱: CHIRALPAK AD-RH 、流速流速:0.5ml/min、溫度、溫度:25 第47頁/共63頁 反相柱分析條件優(yōu)化的總結(jié)反相柱分析

36、條件優(yōu)化的總結(jié) 第48頁/共63頁 第49頁/共63頁 手性色譜柱組合篩選手性色譜柱組合篩選 CHIRALPAK AD-H CHIRALPAK AS-H CHIRALCEL OD-H CHIRALCEL OJ-H CHIRALPAK AY-H CHIRALCEL OZ-H CHIRALPAK IA CHIRALPAK IB CHIRALPAK IC : 0.46cmI.D.15cmL 第50頁/共63頁 組合篩選設(shè)備組合篩選設(shè)備 IPA 第51頁/共63頁 泵泵 紫外檢測(cè)器紫外檢測(cè)器 色譜柱自動(dòng)切換閥色譜柱自動(dòng)切換閥 流動(dòng)相流動(dòng)相2 自動(dòng)進(jìn)樣器自動(dòng)進(jìn)樣器 組合篩選設(shè)備示意圖組合篩選設(shè)備示意圖

37、流動(dòng)相流動(dòng)相1 溶劑切換閥溶劑切換閥 旋光檢測(cè)器旋光檢測(cè)器 第52頁/共63頁 串聯(lián)旋光檢測(cè)器的好處串聯(lián)旋光檢測(cè)器的好處 1 1.1.用用UVUV檢測(cè)器只出現(xiàn)檢測(cè)器只出現(xiàn)“峰峰”的時(shí)候的時(shí)候 應(yīng)用旋光檢測(cè)器可確認(rèn)其分離狀況應(yīng)用旋光檢測(cè)器可確認(rèn)其分離狀況 第53頁/共63頁 2. 2. 可確認(rèn)洗脫順序可確認(rèn)洗脫順序 串聯(lián)旋光檢測(cè)器的好處串聯(lián)旋光檢測(cè)器的好處 2 第54頁/共63頁 若篩選沒得到理想的分析條件時(shí)若篩選沒得到理想的分析條件時(shí) 第55頁/共63頁 第56頁/共63頁 Daicel大部分手性柱是涂敷型產(chǎn)品,在市場(chǎng)上具有獨(dú)特性。大部分手性柱是涂敷型產(chǎn)品,在市場(chǎng)上具有獨(dú)特性。 若導(dǎo)入錯(cuò)誤的溶

38、劑若導(dǎo)入錯(cuò)誤的溶劑(CH2Cl2、乙酸乙酯、甲苯等、乙酸乙酯、甲苯等),柱子會(huì)馬上被破壞,柱子會(huì)馬上被破壞。 當(dāng)流動(dòng)相或樣品溶液導(dǎo)入錯(cuò)誤的溶劑時(shí),柱壓劇增,分離突然變差當(dāng)流動(dòng)相或樣品溶液導(dǎo)入錯(cuò)誤的溶劑時(shí),柱壓劇增,分離突然變差。 一旦錯(cuò)誤地使用了溶劑,重新恢復(fù)柱子性能的可能性很低。一旦錯(cuò)誤地使用了溶劑,重新恢復(fù)柱子性能的可能性很低。 若您遇到此類分析故障,請(qǐng)對(duì)照出廠報(bào)告重新確認(rèn)柱子的性能或與大賽璐聯(lián)系若您遇到此類分析故障,請(qǐng)對(duì)照出廠報(bào)告重新確認(rèn)柱子的性能或與大賽璐聯(lián)系 常見使用故障常見使用故障-溶劑錯(cuò)誤溶劑錯(cuò)誤 1 第57頁/共63頁 DaicelDaicel正相手性柱的流動(dòng)相和樣品溶液不能使

39、用水溶液正相手性柱的流動(dòng)相和樣品溶液不能使用水溶液 若不小心導(dǎo)入水,柱子不會(huì)徹底受損若不小心導(dǎo)入水,柱子不會(huì)徹底受損。 只需要使用色譜級(jí)無水乙醇低流速將水置換出來只需要使用色譜級(jí)無水乙醇低流速將水置換出來。 常見使用故障常見使用故障- -溶劑錯(cuò)誤溶劑錯(cuò)誤 2 2 第58頁/共63頁 所有溶劑入口所有溶劑入口 泵 泵與進(jìn)樣閥之間 定量環(huán) 進(jìn)樣閥清洗液 進(jìn)樣閥與柱子之間 柱子與檢測(cè)器之間 檢測(cè)器 使用前徹底清洗管路使用前徹底清洗管路 1.用水將HPLC所有管路徹底清洗() 2.用異丙醇將HPLC所有管路徹底清洗 () 3.用流動(dòng)相將HPLC所有管路徹底清洗()。 第59頁/共63頁 l流動(dòng)相或樣品

40、溶液過濾不徹底,固體顆粒堵塞管路或柱頭,會(huì)引起柱壓過高。流動(dòng)相或樣品溶液過濾不徹底,固體顆粒堵塞管路或柱頭,會(huì)引起柱壓過高。 l樣品中成分在柱頭析出或強(qiáng)烈吸附,會(huì)引起柱壓升高。樣品中成分在柱頭析出或強(qiáng)烈吸附,會(huì)引起柱壓升高。 l流速過快,會(huì)引起柱壓過高,特別是當(dāng)使用粘度高的溶劑,流速過快,會(huì)引起柱壓過高,特別是當(dāng)使用粘度高的溶劑, 如如IPA, EtOH,流速應(yīng)控制在,流速應(yīng)控制在0.1-0.3 ml/min l 每種柱子有特定的承壓范圍,請(qǐng)仔細(xì)參照相應(yīng)的每種柱子有特定的承壓范圍,請(qǐng)仔細(xì)參照相應(yīng)的色譜柱說明書色譜柱說明書。 l 徹底過濾流動(dòng)相及樣品溶液。徹底過濾流動(dòng)相及樣品溶液。 l 樣品預(yù)處

41、理樣品預(yù)處理 l 更換流動(dòng)相時(shí),或者剛把柱子剛接上儀器的時(shí)候,逐步增加流速更換流動(dòng)相時(shí),或者剛把柱子剛接上儀器的時(shí)候,逐步增加流速 l 儀器設(shè)定保護(hù)柱壓儀器設(shè)定保護(hù)柱壓 原因:原因: 后果:后果: l 長(zhǎng)期超壓會(huì)引起柱頭塌陷,反壓上升,柱效下降。長(zhǎng)期超壓會(huì)引起柱頭塌陷,反壓上升,柱效下降。 解決方法:解決方法: 壓力壓力 第60頁/共63頁 殘留物在普通流動(dòng)相中可長(zhǎng)時(shí)間地穩(wěn)定保留 用醇洗滌可除去大部分的堿性殘留物 用酸洗滌也可除去堿性殘留物 用堿洗滌可除去酸性殘留物 如何避免如何避免“殘留效應(yīng)殘留效應(yīng)” 第61頁/共63頁 歡迎您訪問!歡迎您訪問! 第62頁/共63頁 大大賽賽璐璐藥藥物物手手性性技技術(shù)術(shù)(上上海海)有有限限公公司司 DAICEL CHIRAL TECHNOLOGIES (CHIN

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