常用的組織固定液及配制

1、常用固定液及其配制 固定液分單純固定液和混合固定液。1 甲醛（formaldehyde ）是無色氣體，易溶于水成為甲醛溶液。易揮發(fā)，且有強(qiáng)烈刺激氣味，常用得是37%40%得甲醛溶液，商品名為福爾馬林（ formalin ）。用作固定的濃度習(xí)慣為 10%福爾馬林（即 1 份甲醛溶液加9份水配制而成），實(shí)際含甲醛4%。10%福爾馬林滲透力強(qiáng)，固定均勻，對組織收縮少。對脂肪、神經(jīng)及髓鞘、糖等固定效果好， 是最常用的固定劑。經(jīng)福爾馬林固定時(shí)間長的組織，易產(chǎn)生黑色的沉淀，稱福爾馬林色素。2乙醇無色液體，易溶于水，它除可作為固定劑外，還可作為脫水劑，對組織有硬化作用。固定用 一般是80%95%濃度，乙醇滲

2、透力校弱，它能溶解脂肪，核蛋白被沉淀后，仍能溶于水， 因此核的著色不良。3中性甲醛液（混合固定液）甲醛（濃）120ml，加蒸餾水880ml,磷酸二氫鈉（NaH2PO4?H2C） 4g,磷酸氫二納（Na2HPO4）13g。此液固定效果比單純 10%福爾馬林要好。4 AF液（混合固定液）95%乙醇90ml,甲醛（濃）10ml。也有配方是95%乙醇85ml,甲醛（濃）10ml,冰醋酸5ml。此液除有固定作用外，兼有脫水作用，因此，固定后可直接入95%乙醇脫水。以上4種固定液中，以中性甲醛為首選，其次為10%福爾馬林，乙醇應(yīng)盡量不用。yzbai wrote:（1） 10%甲醛：對組織滲透性強(qiáng)，固定均勻

3、。對組織膨脹約5%，經(jīng)酒精脫水時(shí)有較大的收縮。能保存脂肪，不能沉淀核蛋白及白蛋白，長期用其固定的組織使組織變?yōu)樗嵝?，不利于染色，特別是細(xì)胞核的著色。經(jīng)自來水沖洗624小時(shí)后，可以使其酸堿中和，并減少結(jié)晶。（2）4%多聚甲醛：對組織穿透性好，組織收縮小，對大多數(shù)抗原物質(zhì)保存較好，特別是對脂肪和各種酶的固定效果更好。固定的時(shí)間不宜太長，以24小時(shí)以內(nèi)為宜，適用于免疫組織化學(xué)染色。幾種細(xì)胞固定方法 選擇最佳固定液標(biāo)準(zhǔn)是：（1）最好地保持細(xì)胞和組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)；（2）最大限度地保存抗原的免疫活性。一些含重金屬的固定液在免疫組化和細(xì)胞化學(xué)技術(shù) 中是禁用的；（3）不要用可能帶有自發(fā)熒光的固定劑，如帶有苦味酸

4、的固定劑，還有甲醛升汞固定液， 會使上皮細(xì)胞產(chǎn)生非特異性熒光；（4）固定劑的選擇、固定時(shí)間、溫度和PH 值都會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。單純固定液（1 ）4%中性甲醛固定液：最常用的固定液，能滿足常規(guī)HE及免疫組化、PCR等工作（Job）。 中性甲醛是以PH7.2-7.4的磷酸緩沖液為溶劑配制的，其固定效果及對組織抗原性的保存均 優(yōu)于一般的 4%甲醛固定液。此固定液配制后應(yīng)密封并保存在陰涼處，保存時(shí)間不超過一個(gè) 月。甲醛（ 40%）100ml無水磷酸氫二鈉 6.5g 磷酸二氫鈉 4.0g 蒸餾水 900ml（2）乙醇固定液：使用時(shí)以 80%-95%的濃度為宜，具有硬化、固定、脫水等作用，對組織滲透力較弱，

5、 因此很少單獨(dú)使用， 但其保存組織中的核酸強(qiáng)于中性甲醛， 故常用于有核酸操 作的實(shí)驗(yàn)或檢查，假如用于證實(shí)尿酸結(jié)晶和保存糖原，可用于100%乙醇固定組織。（3）4%多聚甲醛固定液：主要用于培養(yǎng)細(xì)胞的固定。 混合固定液（1） 乙醇-甲醛（乙醇-福爾馬林，AF）固定液：適用于皮下組織中肥大細(xì)胞的固定。該固 定液有固定兼脫水作用，固定后的標(biāo)本可直接入95%乙醇脫水。甲醛（ 40%）100ml95%乙醇 900ml（2） B5（醋酸鈉-升汞-甲醛）固定液：多用于固定淋巴組織。 染色前應(yīng)進(jìn)行脫汞沉淀處理。 無水醋酸鈉 1.25g升汞 6.0g 蒸餾水 90ml使用前加入甲醛 10ml（3） Bouin固定液：非凡適用于睪丸活檢組織的固定。Bouin液對組織固定較均勻，收縮很 少，不會使組織變硬變脆。需現(xiàn)配現(xiàn)用。飽和苦味酸水溶液（約 1.22%） 75ml甲醛 25ml 冰醋酸 5ml（4）Carnoy 固定液：穿透能力強(qiáng)，可很好的固定細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核，非凡適用于固定外膜致 密的組織，也適用于糖原及尼氏小體的固定。無水乙醇 60ml 氯仿 30ml 冰醋酸 10ml（5）Zenker 固定液： 經(jīng)此液固定的標(biāo)本