艾滋病實驗室檢測規(guī)范要求及方法選擇與質(zhì)量控制

1、實驗方法 檢測策略 結(jié)果解釋 樣本問題 人類免疫缺陷病毒人類免疫缺陷病毒(HumanImmunodeficiency Virus, HIV)(HumanImmunodeficiency Virus, HIV)，屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒，屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒， RNARNA病毒，主要病毒，主要 破壞人體的免疫系統(tǒng)，主要分為破壞人體的免疫系統(tǒng)，主要分為HIV-1HIV-1和和HIV-2HIV-2兩種型兩種型 別。別。 HIV的主要基因及其產(chǎn)物 （HIV標(biāo)志物）標(biāo)志物） HIVHIV病毒標(biāo)志物產(chǎn)生的動力學(xué)病毒標(biāo)志物產(chǎn)生的動力學(xué) 病毒RNA P24抗原 AB 感染時間 標(biāo)志物強度 安全安全輸輸血血 流行流行病病學(xué)學(xué)調(diào)

2、調(diào)查查、高 高危危人人群群監(jiān)監(jiān)測測 自愿自愿咨咨詢詢檢檢測測VCTVCT B C D 臨床臨床診診斷斷 A 抗抗病病毒毒治治療耐療耐藥藥性性檢檢測測 免免疫疫功功能能測定測定 F 抗抗病病毒毒治治療后療后效效果果檢檢測測 E G 實驗室檢測主要目實驗室檢測主要目 的的 HIVHIV HIV抗體檢抗體檢 測測 HIV-1 P24抗原抗原 檢測檢測 HIV核酸檢測核酸檢測 CD4+/CD8+T淋淋 巴細胞檢測巴細胞檢測 艾滋病適宜檢測技艾滋病適宜檢測技術(shù)術(shù) 篩查試驗 酶聯(lián)免疫吸附試驗 ELISA 快速檢測 RT：金標(biāo)、硒標(biāo)等 化學(xué)發(fā)光免疫分析（CLIA） 時間分辨熒光免疫（TRFIA） 電化學(xué)發(fā)光

3、免疫分析（ECLIA) 補充試驗補充試驗 免疫印跡法 WB:（Western Blot） 條帶免疫試驗RIBA/LIA 核酸定性定量 實驗原理：實驗原理：利用包被在固相載體表面的HIV抗原或抗體，與待檢 血清及酶標(biāo)記抗原結(jié) 合形成抗原抗體復(fù)合物，加底物顯色，用酶標(biāo)儀 （450/620nm雙波長）測定光密度值。 ELISA 是國際上應(yīng)用最早是國際上應(yīng)用最早! 目前目前HIV臨床最常用的初篩檢測方法臨床最常用的初篩檢測方法! E 固固相相抗原抗原 標(biāo)本（含抗標(biāo)本（含抗 體）體） 酶酶標(biāo)標(biāo)抗抗 原原 底物底物 E E 實驗原理：實驗原理：利用包被在固相載體表面的HIV抗原或抗體，與待檢 血清及酶標(biāo)記

4、抗原結(jié) 合形成抗原抗體復(fù)合物，加底物顯色，用酶標(biāo)儀 （450/620nm雙波長）測定光密度值。 ELISA 是國際上應(yīng)用最早是國際上應(yīng)用最早! 目前目前HIV臨床最常用的初篩檢測方法臨床最常用的初篩檢測方法! E 固固相相抗原抗原 標(biāo)本（含抗標(biāo)本（含抗 體）體） 酶酶標(biāo)標(biāo)抗抗 原原 底物底物 E E 4.2 HIV 抗體檢測的要點 4.2.1 根據(jù)目的選擇檢測方法及檢測策略。 4.2.2 嚴(yán)格遵守實驗室標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）。 4.2.3 結(jié)果判定以試劑盒說明書為標(biāo)準(zhǔn)。 4.2.4 篩查試驗有反應(yīng)，須作補充試驗。 補充試驗是通過檢測樣本中是否存在艾滋病病毒 抗體、抗原或者核酸而確定艾滋病病毒感

5、染的檢 測方法。補充試驗包括抗體確證試驗（免疫印跡 試驗，條帶/線性免疫試驗，特定條件*下的替代檢 測，免疫層析或免疫滲濾試驗）和核酸試驗（核 酸定性和核酸定量試驗）。替代檢測包括三種酶 聯(lián)免疫試驗、三種快速試驗或酶聯(lián)免疫加 快速試驗。(替代確認策略，四川不用) * 特定條件：高流行地區(qū)（流行率大于5%）、高 危人群（如男男同性戀，吸毒人群）、三種試劑 均經(jīng)過使用地區(qū)中心實驗室評價。 4.2.5 篩查試驗無反應(yīng)，不應(yīng)做補充試驗。 4.2.6 對篩查及補充試驗對象均應(yīng)做好咨詢工作。 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ ELISA）以珠海麗珠試劑為 例 實驗的操作步驟（加樣、溫育、洗板、顯色）必 須嚴(yán)格按照試劑說

6、 明書要求； 實驗必須設(shè)置4陽性孔+3陰性孔+1外部對照孔， 其中HIV-1陽性2孔， HIV-2陽性2孔； 實驗審核發(fā)放的前提：必須是實驗陽性、陰性質(zhì) 控孔正確顯色，外 部對照結(jié)果在控。若外部對照失 控，應(yīng)分析查找實驗原因，做好失控 處理記錄，立 即重新實驗，實驗在控后才能審核結(jié)果。 酶標(biāo)儀、洗板機必須定時、規(guī)范的做好儀器維護 和保養(yǎng)； 實驗必須做好樣本原始檢測記錄、復(fù)查記錄登記， 患者信息需完善。 陽性樣本應(yīng)立作危急值處理，電話告知患者和臨床 醫(yī)生，做好危急 異常值記錄和臨床溝通記錄； 陽性樣本除按要求送樣到相關(guān)做補充實驗， 實驗室還應(yīng)保存患者血 清樣本，并做好相應(yīng)的保存記錄。 陽性樣本初

7、篩實驗室結(jié)果報告模式“待確認” ELISA容易出的問題 不仔細看說明書，不能理解說明書含義： 對照設(shè)孔錯誤* 樣本量錯誤 CUT值計算錯誤 結(jié)果是否有效等？ 3、快速檢測方法（ RT）：金標(biāo)、 硒標(biāo)等 優(yōu)點：簡便快速，一般可在1030分鐘 內(nèi)得出結(jié)果。適用于應(yīng)急檢測、門診急 診 檢測。 檢測結(jié)果采用目測法，不需要特殊的儀 器 設(shè)備。對檢測人員技術(shù)要求不高，適 用于各 級檢測機構(gòu)。 做好實驗記錄（快速檢測原始記錄以能再現(xiàn) 檢測過程為主） 1、全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范2015年修訂版對快速檢 測質(zhì)控專門有要求 2、采用商用質(zhì)控品或自制質(zhì)控品。 （8NCU/ml？） 3、可以由當(dāng)?shù)谻DC不定期提供質(zhì)控

8、品 全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范2015年修訂版 對快速檢測質(zhì)控專門有要求 分為分為HIVHIV定性和定性和HIVHIV定量檢測兩大類定量檢測兩大類： HIVHIV定性檢測定性檢測：HIVHIV核核 酸酸（RNARNA和前病毒和前病毒DNADNA） 的檢測的檢測 HIVHIV定量檢測：定量檢測：又稱又稱HIVHIV病毒載量病毒載量 檢測檢測（ViralViralloadload），），主要用于主要用于 抗病毒治療患者的療效評價，也抗病毒治療患者的療效評價，也 可可用于補充試驗。用于補充試驗。 艾滋病實驗診斷方法 艾滋病檢測策略原則艾滋病檢測策略原則 首先應(yīng)選擇 最敏感的實 驗 第二次實驗應(yīng) 該采用更

9、特異 的實驗 HIV檢測順序 孕產(chǎn)婦產(chǎn)檢時HIV初篩和復(fù)檢流程 孕產(chǎn)婦臨產(chǎn)及分娩首次HIV檢測 流程 臨產(chǎn)及分娩的孕產(chǎn)婦首次檢測，應(yīng)同時應(yīng)用兩 種不同的快速檢測試劑 進行篩查，若兩種試劑均 無反應(yīng)直接報告陰性，若兩種均有反應(yīng)或其 中一 種有反應(yīng)必須立即報告臨床采取相應(yīng)措施。 適用于未進行嬰兒早期診斷檢測或嬰兒早期診斷 檢測結(jié)果為陰性的兒童。應(yīng)于12、18月齡進行艾滋 病抗體篩查 及必要的補充試驗，以明確艾滋病感 染狀態(tài)。 HIV感染產(chǎn)婦所生嬰幼兒滿12個月時應(yīng) 進行第一 次HIV抗體檢測。 同時使用兩 種不同原理或不同廠家篩查試劑進行 樣本問題 抗體篩查和確認，目前常用的是血清或血漿 不復(fù)合要

10、求樣本： 嚴(yán)重脂血 嚴(yán)重溶血 樣本量嚴(yán)重不足 要有規(guī)范的送檢單 檢測試劑的選擇 希望是敏感度和特異度均為100%， (任何檢測都不可能絕對，所有方法都存在缺陷和不 足) 檢測結(jié)果是給臨床醫(yī)生提供診斷參考，而不是把實 驗結(jié)果作為唯一標(biāo)準(zhǔn)。 臨床醫(yī)生不應(yīng)該過度依賴檢測結(jié)果，而應(yīng)該結(jié)合臨 床進行綜合分析。 檢測要點 根據(jù)目的選擇檢測方法及策略 嚴(yán)格遵守實驗室標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP） 結(jié)果判定以試劑說明書為標(biāo)準(zhǔn) 篩查試驗有反應(yīng)，須作補充試驗 篩查試驗無反應(yīng)，不應(yīng)作補充試驗 對篩查及補充試驗對象均應(yīng)做咨詢工作（接診 醫(yī)生尤其作好工作） 結(jié)果解釋 初篩實驗中的假陽性：初篩實驗中的假陽性： 血液惡性病變 自身

11、免疫性疾病 多發(fā)性膽汁型肝硬化 酒精性肝炎 疫苗接種（流感，乙肝） 多發(fā)性骨髓瘤 腎移植或慢性腎衰竭 瘧疾或絲蟲病 其他（試劑或操作原因、某些孕婦） 結(jié)果解釋 初篩實驗中的假陰性初篩實驗中的假陰性 窗口期* 抗體遲反應(yīng)* 免疫移植 換血輸血 惡性腫瘤 免疫功能喪失（B細胞功能缺損） 其他（試劑或操作原因） 結(jié)果解釋 確證試驗的假陽性確證試驗的假陽性 樣本搞錯樣本搞錯 實驗過程中意外實驗過程中意外 。 結(jié)果解釋 確證試驗的假陰性確證試驗的假陰性 感染晚期，無法產(chǎn)生能檢測限內(nèi)的抗體感染晚期，無法產(chǎn)生能檢測限內(nèi)的抗體 樣本錯誤樣本錯誤 。 實際上確證樣都是篩查陽性才確認，所實際上確證樣都是篩查陽性才

12、確認，所 以篩查的結(jié)果非常重要，記錄也要能夠以篩查的結(jié)果非常重要，記錄也要能夠 準(zhǔn)確無誤。準(zhǔn)確無誤。 低病毒檢測值可能是核酸污染所致的結(jié)果，低病毒檢測值可能是核酸污染所致的結(jié)果，陰陰 性不能排除感染！性不能排除感染！ 核酸用于核酸用于HIV-1HIV-1感染的診斷感染的診斷* *： 檢測值檢測值5000 5000 CPs/mLCPs/mL( (或或IUs/mLIUs/mL) )，報告檢測值；檢測值，報告檢測值；檢測值 5000 5000 CPs/mLCPs/mL( (或或IUs/mLIUs/mL) )* *，盡快再次嚴(yán)格按核酸檢測，盡快再次嚴(yán)格按核酸檢測 的要求采樣檢測，報告檢測值，結(jié)果的要求采樣檢測，報告檢測值，結(jié)果5000 5000 CPs/mLCPs/mL( (或或 IUs/mLIUs/mL) )，報告檢測值，結(jié)果仍，報告檢測值，結(jié)果仍5000 5000 CPs/mLCPs/mL，則需充，則需充 分結(jié)合流行病學(xué)史、臨床病史、分結(jié)合流行病學(xué)史、臨床病史、CD4+TCD4+T淋巴細胞計數(shù)和淋巴細胞計數(shù)和 HIV-1HIV-1抗體隨訪檢測結(jié)果等進行綜合判斷?？贵w隨訪檢測結(jié)果等進行綜合判斷。 結(jié)果解釋 是否把核酸檢測作為剖腹產(chǎn)依據(jù)？ 上送陽性樣本問題 1 1、送樣單位、日期有沒有邏輯錯誤、送樣單位、日期有沒