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文檔簡介
1、實驗方法 檢測策略 結(jié)果解釋 樣本問題 人類免疫缺陷病毒人類免疫缺陷病毒(HumanImmunodeficiency Virus, HIV)(HumanImmunodeficiency Virus, HIV),屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒,屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒, RNARNA病毒,主要病毒,主要 破壞人體的免疫系統(tǒng),主要分為破壞人體的免疫系統(tǒng),主要分為HIV-1HIV-1和和HIV-2HIV-2兩種型兩種型 別。別。 HIV的主要基因及其產(chǎn)物 (HIV標(biāo)志物)標(biāo)志物) HIVHIV病毒標(biāo)志物產(chǎn)生的動力學(xué)病毒標(biāo)志物產(chǎn)生的動力學(xué) 病毒RNA P24抗原 AB 感染時間 標(biāo)志物強度 安全安全輸輸血血 流行流行病病學(xué)學(xué)調(diào)
2、調(diào)查查、高 高危危人人群群監(jiān)監(jiān)測測 自愿自愿咨咨詢詢檢檢測測VCTVCT B C D 臨床臨床診診斷斷 A 抗抗病病毒毒治治療耐療耐藥藥性性檢檢測測 免免疫疫功功能能測定測定 F 抗抗病病毒毒治治療后療后效效果果檢檢測測 E G 實驗室檢測主要目實驗室檢測主要目 的的 HIVHIV HIV抗體檢抗體檢 測測 HIV-1 P24抗原抗原 檢測檢測 HIV核酸檢測核酸檢測 CD4+/CD8+T淋淋 巴細胞檢測巴細胞檢測 艾滋病適宜檢測技艾滋病適宜檢測技術(shù)術(shù) 篩查試驗 酶聯(lián)免疫吸附試驗 ELISA 快速檢測 RT:金標(biāo)、硒標(biāo)等 化學(xué)發(fā)光免疫分析(CLIA) 時間分辨熒光免疫(TRFIA) 電化學(xué)發(fā)光
3、免疫分析(ECLIA) 補充試驗補充試驗 免疫印跡法 WB:(Western Blot) 條帶免疫試驗RIBA/LIA 核酸定性定量 實驗原理:實驗原理:利用包被在固相載體表面的HIV抗原或抗體,與待檢 血清及酶標(biāo)記抗原結(jié) 合形成抗原抗體復(fù)合物,加底物顯色,用酶標(biāo)儀 (450/620nm雙波長)測定光密度值。 ELISA 是國際上應(yīng)用最早是國際上應(yīng)用最早! 目前目前HIV臨床最常用的初篩檢測方法臨床最常用的初篩檢測方法! E 固固相相抗原抗原 標(biāo)本(含抗標(biāo)本(含抗 體)體) 酶酶標(biāo)標(biāo)抗抗 原原 底物底物 E E 實驗原理:實驗原理:利用包被在固相載體表面的HIV抗原或抗體,與待檢 血清及酶標(biāo)記
4、抗原結(jié) 合形成抗原抗體復(fù)合物,加底物顯色,用酶標(biāo)儀 (450/620nm雙波長)測定光密度值。 ELISA 是國際上應(yīng)用最早是國際上應(yīng)用最早! 目前目前HIV臨床最常用的初篩檢測方法臨床最常用的初篩檢測方法! E 固固相相抗原抗原 標(biāo)本(含抗標(biāo)本(含抗 體)體) 酶酶標(biāo)標(biāo)抗抗 原原 底物底物 E E 4.2 HIV 抗體檢測的要點 4.2.1 根據(jù)目的選擇檢測方法及檢測策略。 4.2.2 嚴(yán)格遵守實驗室標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP)。 4.2.3 結(jié)果判定以試劑盒說明書為標(biāo)準(zhǔn)。 4.2.4 篩查試驗有反應(yīng),須作補充試驗。 補充試驗是通過檢測樣本中是否存在艾滋病病毒 抗體、抗原或者核酸而確定艾滋病病毒感
5、染的檢 測方法。補充試驗包括抗體確證試驗(免疫印跡 試驗,條帶/線性免疫試驗,特定條件*下的替代檢 測,免疫層析或免疫滲濾試驗)和核酸試驗(核 酸定性和核酸定量試驗)。替代檢測包括三種酶 聯(lián)免疫試驗、三種快速試驗或酶聯(lián)免疫加 快速試驗。(替代確認策略,四川不用) * 特定條件:高流行地區(qū)(流行率大于5%)、高 危人群(如男男同性戀,吸毒人群)、三種試劑 均經(jīng)過使用地區(qū)中心實驗室評價。 4.2.5 篩查試驗無反應(yīng),不應(yīng)做補充試驗。 4.2.6 對篩查及補充試驗對象均應(yīng)做好咨詢工作。 酶聯(lián)免疫吸附試驗( ELISA)以珠海麗珠試劑為 例 實驗的操作步驟(加樣、溫育、洗板、顯色)必 須嚴(yán)格按照試劑說
6、 明書要求; 實驗必須設(shè)置4陽性孔+3陰性孔+1外部對照孔, 其中HIV-1陽性2孔, HIV-2陽性2孔; 實驗審核發(fā)放的前提:必須是實驗陽性、陰性質(zhì) 控孔正確顯色,外 部對照結(jié)果在控。若外部對照失 控,應(yīng)分析查找實驗原因,做好失控 處理記錄,立 即重新實驗,實驗在控后才能審核結(jié)果。 酶標(biāo)儀、洗板機必須定時、規(guī)范的做好儀器維護 和保養(yǎng); 實驗必須做好樣本原始檢測記錄、復(fù)查記錄登記, 患者信息需完善。 陽性樣本應(yīng)立作危急值處理,電話告知患者和臨床 醫(yī)生,做好危急 異常值記錄和臨床溝通記錄; 陽性樣本除按要求送樣到相關(guān)做補充實驗, 實驗室還應(yīng)保存患者血 清樣本,并做好相應(yīng)的保存記錄。 陽性樣本初
7、篩實驗室結(jié)果報告模式“待確認” ELISA容易出的問題 不仔細看說明書,不能理解說明書含義: 對照設(shè)孔錯誤* 樣本量錯誤 CUT值計算錯誤 結(jié)果是否有效等? 3、快速檢測方法( RT):金標(biāo)、 硒標(biāo)等 優(yōu)點:簡便快速,一般可在1030分鐘 內(nèi)得出結(jié)果。適用于應(yīng)急檢測、門診急 診 檢測。 檢測結(jié)果采用目測法,不需要特殊的儀 器 設(shè)備。對檢測人員技術(shù)要求不高,適 用于各 級檢測機構(gòu)。 做好實驗記錄(快速檢測原始記錄以能再現(xiàn) 檢測過程為主) 1、全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范2015年修訂版對快速檢 測質(zhì)控專門有要求 2、采用商用質(zhì)控品或自制質(zhì)控品。 (8NCU/ml?) 3、可以由當(dāng)?shù)谻DC不定期提供質(zhì)控
8、品 全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范2015年修訂版 對快速檢測質(zhì)控專門有要求 分為分為HIVHIV定性和定性和HIVHIV定量檢測兩大類定量檢測兩大類: HIVHIV定性檢測定性檢測:HIVHIV核核 酸酸(RNARNA和前病毒和前病毒DNADNA) 的檢測的檢測 HIVHIV定量檢測:定量檢測:又稱又稱HIVHIV病毒載量病毒載量 檢測檢測(ViralViralloadload),),主要用于主要用于 抗病毒治療患者的療效評價,也抗病毒治療患者的療效評價,也 可可用于補充試驗。用于補充試驗。 艾滋病實驗診斷方法 艾滋病檢測策略原則艾滋病檢測策略原則 首先應(yīng)選擇 最敏感的實 驗 第二次實驗應(yīng) 該采用更
9、特異 的實驗 HIV檢測順序 孕產(chǎn)婦產(chǎn)檢時HIV初篩和復(fù)檢流程 孕產(chǎn)婦臨產(chǎn)及分娩首次HIV檢測 流程 臨產(chǎn)及分娩的孕產(chǎn)婦首次檢測,應(yīng)同時應(yīng)用兩 種不同的快速檢測試劑 進行篩查,若兩種試劑均 無反應(yīng)直接報告陰性,若兩種均有反應(yīng)或其 中一 種有反應(yīng)必須立即報告臨床采取相應(yīng)措施。 適用于未進行嬰兒早期診斷檢測或嬰兒早期診斷 檢測結(jié)果為陰性的兒童。應(yīng)于12、18月齡進行艾滋 病抗體篩查 及必要的補充試驗,以明確艾滋病感 染狀態(tài)。 HIV感染產(chǎn)婦所生嬰幼兒滿12個月時應(yīng) 進行第一 次HIV抗體檢測。 同時使用兩 種不同原理或不同廠家篩查試劑進行 樣本問題 抗體篩查和確認,目前常用的是血清或血漿 不復(fù)合要
10、求樣本: 嚴(yán)重脂血 嚴(yán)重溶血 樣本量嚴(yán)重不足 要有規(guī)范的送檢單 檢測試劑的選擇 希望是敏感度和特異度均為100%, (任何檢測都不可能絕對,所有方法都存在缺陷和不 足) 檢測結(jié)果是給臨床醫(yī)生提供診斷參考,而不是把實 驗結(jié)果作為唯一標(biāo)準(zhǔn)。 臨床醫(yī)生不應(yīng)該過度依賴檢測結(jié)果,而應(yīng)該結(jié)合臨 床進行綜合分析。 檢測要點 根據(jù)目的選擇檢測方法及策略 嚴(yán)格遵守實驗室標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP) 結(jié)果判定以試劑說明書為標(biāo)準(zhǔn) 篩查試驗有反應(yīng),須作補充試驗 篩查試驗無反應(yīng),不應(yīng)作補充試驗 對篩查及補充試驗對象均應(yīng)做咨詢工作(接診 醫(yī)生尤其作好工作) 結(jié)果解釋 初篩實驗中的假陽性:初篩實驗中的假陽性: 血液惡性病變 自身
11、免疫性疾病 多發(fā)性膽汁型肝硬化 酒精性肝炎 疫苗接種(流感,乙肝) 多發(fā)性骨髓瘤 腎移植或慢性腎衰竭 瘧疾或絲蟲病 其他(試劑或操作原因、某些孕婦) 結(jié)果解釋 初篩實驗中的假陰性初篩實驗中的假陰性 窗口期* 抗體遲反應(yīng)* 免疫移植 換血輸血 惡性腫瘤 免疫功能喪失(B細胞功能缺損) 其他(試劑或操作原因) 結(jié)果解釋 確證試驗的假陽性確證試驗的假陽性 樣本搞錯樣本搞錯 實驗過程中意外實驗過程中意外 。 結(jié)果解釋 確證試驗的假陰性確證試驗的假陰性 感染晚期,無法產(chǎn)生能檢測限內(nèi)的抗體感染晚期,無法產(chǎn)生能檢測限內(nèi)的抗體 樣本錯誤樣本錯誤 。 實際上確證樣都是篩查陽性才確認,所實際上確證樣都是篩查陽性才
12、確認,所 以篩查的結(jié)果非常重要,記錄也要能夠以篩查的結(jié)果非常重要,記錄也要能夠 準(zhǔn)確無誤。準(zhǔn)確無誤。 低病毒檢測值可能是核酸污染所致的結(jié)果,低病毒檢測值可能是核酸污染所致的結(jié)果,陰陰 性不能排除感染!性不能排除感染! 核酸用于核酸用于HIV-1HIV-1感染的診斷感染的診斷* *: 檢測值檢測值5000 5000 CPs/mLCPs/mL( (或或IUs/mLIUs/mL) ),報告檢測值;檢測值,報告檢測值;檢測值 5000 5000 CPs/mLCPs/mL( (或或IUs/mLIUs/mL) )* *,盡快再次嚴(yán)格按核酸檢測,盡快再次嚴(yán)格按核酸檢測 的要求采樣檢測,報告檢測值,結(jié)果的要求采樣檢測,報告檢測值,結(jié)果5000 5000 CPs/mLCPs/mL( (或或 IUs/mLIUs/mL) ),報告檢測值,結(jié)果仍,報告檢測值,結(jié)果仍5000 5000 CPs/mLCPs/mL,則需充,則需充 分結(jié)合流行病學(xué)史、臨床病史、分結(jié)合流行病學(xué)史、臨床病史、CD4+TCD4+T淋巴細胞計數(shù)和淋巴細胞計數(shù)和 HIV-1HIV-1抗體隨訪檢測結(jié)果等進行綜合判斷??贵w隨訪檢測結(jié)果等進行綜合判斷。 結(jié)果解釋 是否把核酸檢測作為剖腹產(chǎn)依據(jù)? 上送陽性樣本問題 1 1、送樣單位、日期有沒有邏輯錯誤、送樣單位、日期有沒
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