抗原抗體反應(yīng)與免疫化學(xué)

1、多塞多塞(1916) 法國(guó)免疫學(xué)家、醫(yī)學(xué)家法國(guó)免疫學(xué)家、醫(yī)學(xué)家 1965年發(fā)現(xiàn)人類的白細(xì)胞表面抗原年發(fā)現(xiàn)人類的白細(xì)胞表面抗原(HLA) 系統(tǒng)，此發(fā)現(xiàn)在系統(tǒng)，此發(fā)現(xiàn)在 輸血和組織器官移植中有重要意義，于輸血和組織器官移植中有重要意義，于1980年獲諾貝爾獎(jiǎng)。年獲諾貝爾獎(jiǎng)。 利根川進(jìn)利根川進(jìn)(1939) 日本分子生物學(xué)家日本分子生物學(xué)家 1976年發(fā)現(xiàn)了抗體多樣性的遺傳現(xiàn)象，年發(fā)現(xiàn)了抗體多樣性的遺傳現(xiàn)象，80年代初揭示了年代初揭示了 抗體合成的基本原理，為了解機(jī)體如何制造出抵抗多種疾病抗體合成的基本原理，為了解機(jī)體如何制造出抵抗多種疾病 所需的不同抗體作出了重要貢獻(xiàn)。于所需的不同抗體作出了重要貢獻(xiàn)

2、。于1987年獲諾貝爾獎(jiǎng)。年獲諾貝爾獎(jiǎng)。 杰尼杰尼(19111994)丹麥免疫學(xué)家丹麥免疫學(xué)家 50至至70年代相繼提出了年代相繼提出了 抗體形成的抗體形成的“天然天然”選擇學(xué)說(shuō)、抗體多樣性發(fā)生學(xué)說(shuō)和免疫系選擇學(xué)說(shuō)、抗體多樣性發(fā)生學(xué)說(shuō)和免疫系 統(tǒng)統(tǒng) 的網(wǎng)絡(luò)學(xué)說(shuō)，由此建立了細(xì)胞免疫學(xué)理論。于的網(wǎng)絡(luò)學(xué)說(shuō)，由此建立了細(xì)胞免疫學(xué)理論。于1984年獲諾年獲諾 貝爾獎(jiǎng)。他被稱為是貝爾獎(jiǎng)。他被稱為是“現(xiàn)代免疫學(xué)之父現(xiàn)代免疫學(xué)之父”。 2.1抗原的免疫原性與分子基礎(chǔ)抗原的免疫原性與分子基礎(chǔ) 2.1.1抗原及其免疫原性基礎(chǔ)抗原及其免疫原性基礎(chǔ) n抗原概念：指能刺激機(jī)體免疫誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，并能與抗原概念：指能刺激機(jī)

3、體免疫誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，并能與 應(yīng)答產(chǎn)生的抗體或致敏淋巴細(xì)胞發(fā)生特異性反應(yīng)的物應(yīng)答產(chǎn)生的抗體或致敏淋巴細(xì)胞發(fā)生特異性反應(yīng)的物 質(zhì)。質(zhì)。 n免疫性能：完全抗原和半抗原免疫性能：完全抗原和半抗原 n免疫原性和免疫反應(yīng)性免疫原性和免疫反應(yīng)性 n抗原產(chǎn)生作用的因素：免疫原性是抗原最重要的性抗原產(chǎn)生作用的因素：免疫原性是抗原最重要的性 質(zhì)，免疫原性取決于三個(gè)因素：抗原性質(zhì)、宿主的反質(zhì)，免疫原性取決于三個(gè)因素：抗原性質(zhì)、宿主的反 應(yīng)性和免疫方式。應(yīng)性和免疫方式。 n宿主的反應(yīng)性宿主的反應(yīng)性 n免疫方式免疫方式 n抗原性質(zhì)？抗原性質(zhì)？ 抗原性質(zhì)：抗原性質(zhì)： n異物性：分子量大?。夯瘜W(xué)結(jié)構(gòu)：異物性：分子量大?。夯?/p>

4、學(xué)結(jié)構(gòu)： 抗原特異性基礎(chǔ)抗原特異性基礎(chǔ) n半抗原及其應(yīng)用（藥物殘留檢測(cè)）半抗原及其應(yīng)用（藥物殘留檢測(cè)） n半抗原半抗原-載體效應(yīng)：載體不僅賦予半抗原以免疫原性，載體效應(yīng)：載體不僅賦予半抗原以免疫原性， 還與半抗原免疫應(yīng)答的記憶性密切相關(guān)。還與半抗原免疫應(yīng)答的記憶性密切相關(guān)。 天然抗原的表位天然抗原的表位 n抗原表位：也稱抗原決定簇，表位是抗原分子抗原表位：也稱抗原決定簇，表位是抗原分子 表面或者其他部位的具有一定組成和結(jié)構(gòu)的特表面或者其他部位的具有一定組成和結(jié)構(gòu)的特 殊化學(xué)基團(tuán)。蛋白質(zhì)抗原有幾個(gè)氨基酸殘基組殊化學(xué)基團(tuán)。蛋白質(zhì)抗原有幾個(gè)氨基酸殘基組 成；糖類抗原有單糖殘基組成的特殊結(jié)構(gòu)。成；糖類

5、抗原有單糖殘基組成的特殊結(jié)構(gòu)。 n順序表位和構(gòu)象表位。順序表位和構(gòu)象表位。 表位的數(shù)目和定位表位的數(shù)目和定位 n數(shù)目：用飽和情況下能夠結(jié)合多少抗體分子來(lái)數(shù)目：用飽和情況下能夠結(jié)合多少抗體分子來(lái) 測(cè)定，一般情況下，表位數(shù)目與抗原分子量呈測(cè)定，一般情況下，表位數(shù)目與抗原分子量呈 正相關(guān)。甲狀腺球蛋白的分子量正相關(guān)。甲狀腺球蛋白的分子量700kD，大約，大約 有有40個(gè)表位。個(gè)表位。 n顯性表位：多個(gè)抗原表位中起主要作用，是宿顯性表位：多個(gè)抗原表位中起主要作用，是宿 主產(chǎn)生特異性的免疫應(yīng)答，這種表位稱之為顯主產(chǎn)生特異性的免疫應(yīng)答，這種表位稱之為顯 性表位，這種現(xiàn)象稱之為免疫顯性。性表位，這種現(xiàn)象稱之

6、為免疫顯性。 共同表位與交叉反應(yīng)共同表位與交叉反應(yīng) n單純抗原：一個(gè)表位 n共同抗原 n類屬抗原 n異嗜性抗原 n交叉反應(yīng)：由某一抗原誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體，也可 以與其共同抗原結(jié)合，發(fā)生特異性免疫反應(yīng)， 這種現(xiàn)象稱之為交叉反應(yīng)。 表位的細(xì)胞識(shí)別性表位的細(xì)胞識(shí)別性 nB細(xì)胞表位：供細(xì)胞表位：供B細(xì)胞識(shí)別誘導(dǎo)抗體應(yīng)答，而細(xì)胞識(shí)別誘導(dǎo)抗體應(yīng)答，而T細(xì)胞不細(xì)胞不 能識(shí)別的表位能識(shí)別的表位 nT細(xì)胞表位：細(xì)胞表位： 抗原的類型 n依據(jù)誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的性能：胸腺依賴性（依據(jù)誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的性能：胸腺依賴性（T細(xì)細(xì) 胞參與）、胸腺非依賴性、超抗原胞參與）、胸腺非依賴性、超抗原 n與宿主親緣相關(guān)性：異種抗原、同種異型抗

7、原、與宿主親緣相關(guān)性：異種抗原、同種異型抗原、 自身抗原。自身抗原。 n化學(xué)結(jié)構(gòu)：蛋白質(zhì)抗原、多糖抗原、核酸抗原化學(xué)結(jié)構(gòu)：蛋白質(zhì)抗原、多糖抗原、核酸抗原 等。等。 2.2免疫球蛋白結(jié)構(gòu)及特征免疫球蛋白結(jié)構(gòu)及特征 n概念： 一組具有抗體活性或抗體結(jié)構(gòu)的 球蛋白。由漿細(xì)胞產(chǎn)生，存在于血液和 其他體液（組織液和外分泌液）中。 Ig的基本結(jié)構(gòu)：Y字形。 一一IgG n IgG是血清中含量最高的免疫球蛋白類型，占人血清是血清中含量最高的免疫球蛋白類型，占人血清 免疫球蛋白總量的免疫球蛋白總量的80%。 n IgG為單體為單體，IgG是主要的抗感染抗體，大多數(shù)抗菌是主要的抗感染抗體，大多數(shù)抗菌 性、抗病毒

8、性、抗毒素抗體都屬于性、抗病毒性、抗毒素抗體都屬于IgG類抗體。類抗體。 n 不少自身抗體如抗甲狀腺球蛋白抗體、系統(tǒng)性紅斑狼不少自身抗體如抗甲狀腺球蛋白抗體、系統(tǒng)性紅斑狼 瘡瘡(systemic lupus erythematosis, SLE)和引起和引起、 型超敏反應(yīng)的抗體也都屬于型超敏反應(yīng)的抗體也都屬于IgG類抗體。類抗體。IgG能通能通 過(guò)胎盤進(jìn)入嬰兒體內(nèi)，是新生兒抗感染的重要因素。過(guò)胎盤進(jìn)入嬰兒體內(nèi)，是新生兒抗感染的重要因素。 二二IgM IgM由由5個(gè)單體的個(gè)單體的IgM通過(guò)通過(guò)J鏈連接而成，鏈連接而成，是分是分 子量最大的免疫球蛋白，不能穿過(guò)血管壁。子量最大的免疫球蛋白，不能穿過(guò)

9、血管壁。 IgM是機(jī)體最早出現(xiàn)的免疫球蛋白，在胚胎發(fā)是機(jī)體最早出現(xiàn)的免疫球蛋白，在胚胎發(fā) 育晚期的胎兒就有能力合成育晚期的胎兒就有能力合成IgM，主要在脾臟，主要在脾臟 合成合成。IgM主要分布于血液里，占人血清免疫主要分布于血液里，占人血清免疫 球蛋白總量的球蛋白總量的10%左右。左右。 三三IgA IgA占人血清免疫球蛋白總量的占人血清免疫球蛋白總量的10%15%，具有，具有 單體、雙體甚至三體和多聚體種形式，單體、雙體甚至三體和多聚體種形式，單體單體IgA主要主要 存在于血清之中，而分泌型二聚體存在于血清之中，而分泌型二聚體IgA(SIgA)主要存主要存 在于外分泌液中，在于外分泌液中，

10、SIgA是機(jī)體粘膜防御感染的重要抗是機(jī)體粘膜防御感染的重要抗 體，主要分布于初乳、唾液、呼吸道分泌液、胃腸液、體，主要分布于初乳、唾液、呼吸道分泌液、胃腸液、 泌尿生殖道分泌液中。泌尿生殖道分泌液中。SIgA能與相應(yīng)的病原微生物結(jié)能與相應(yīng)的病原微生物結(jié) 合，抑制病毒感染和細(xì)菌侵入，尤其對(duì)于防御流感病合，抑制病毒感染和細(xì)菌侵入，尤其對(duì)于防御流感病 毒，呼腸病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、沙門氏菌、霍亂弧毒，呼腸病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、沙門氏菌、霍亂弧 菌、淋病雙球菌等的感染發(fā)揮重要作用。菌、淋病雙球菌等的感染發(fā)揮重要作用。嬰兒可從初嬰兒可從初 乳中獲得乳中獲得SIgA，4-6個(gè)月后開(kāi)始自身合成個(gè)月后開(kāi)始自身

11、合成IgA。 四四 IgE IgE為單體，在人血清中含量極低，主要由鼻咽部、為單體，在人血清中含量極低，主要由鼻咽部、 扁桃腺、支氣管、胃腸道等處粘膜固有層的漿細(xì)胞合扁桃腺、支氣管、胃腸道等處粘膜固有層的漿細(xì)胞合 成與分泌。當(dāng)寄生蟲感染，如蠕蟲、血吸蟲和旋毛蟲成與分泌。當(dāng)寄生蟲感染，如蠕蟲、血吸蟲和旋毛蟲 等，真菌感染，如曲霉菌、白色念珠菌等可誘發(fā)機(jī)體等，真菌感染，如曲霉菌、白色念珠菌等可誘發(fā)機(jī)體 產(chǎn)生大量的產(chǎn)生大量的IgE。阿米巴痢疾和阿米巴肝膿腫時(shí)也能。阿米巴痢疾和阿米巴肝膿腫時(shí)也能 引發(fā)產(chǎn)生抗阿米巴的引發(fā)產(chǎn)生抗阿米巴的IgE抗體，但原蟲感染一般不引抗體，但原蟲感染一般不引 起起IgE分泌

12、量增加分泌量增加。IgE能介導(dǎo)速發(fā)型超敏反應(yīng)，如哮能介導(dǎo)速發(fā)型超敏反應(yīng)，如哮 喘、蕁麻疹、過(guò)敏性休克、枯草熱等。還有，花粉敏喘、蕁麻疹、過(guò)敏性休克、枯草熱等。還有，花粉敏 感者在花粉季節(jié)，機(jī)體內(nèi)感者在花粉季節(jié)，機(jī)體內(nèi)IgE含量升高。含量升高。 五五 IgD IgD在人血清含量中極低，不穩(wěn)定，容易被胰在人血清含量中極低，不穩(wěn)定，容易被胰 蛋白酶降解蛋白酶降解。IgD的功能不清楚，的功能不清楚，mIgD是是B 細(xì)胞成熟的重要標(biāo)志。在細(xì)胞成熟的重要標(biāo)志。在B細(xì)胞分化過(guò)程中，細(xì)胞分化過(guò)程中， 先出現(xiàn)先出現(xiàn)mIgM，后出現(xiàn)，后出現(xiàn)mIgD，當(dāng)當(dāng)mIgM和和 mIgD同時(shí)存在時(shí)，標(biāo)志著同時(shí)存在時(shí)，標(biāo)志著B(niǎo)

13、細(xì)胞成熟，并且細(xì)胞成熟，并且 容易被抗原激活容易被抗原激活。 mIgM 和和mIgD 是是B細(xì)胞細(xì)胞 抗原受體。抗原受體。 免疫學(xué)反應(yīng)舉例免疫學(xué)反應(yīng)舉例 n輸血輸血 n根據(jù)人類紅細(xì)胞表面所含有的 A 、 B 抗原的不同，將 人類血型分為 A 、 B 、 AB 和 O 四種血型。 A 型和 B 型紅細(xì)胞上分別有 A 抗原和 B 抗原； AB 型紅細(xì)胞上 有 A 、 B 兩種抗原； O 型紅細(xì)胞上不含 A 、 B 抗原， 但含有 A 、 B 抗原的前體物質(zhì) H 抗原，如圖 2-3 所示。同一人血清中不含與本人血清抗原相應(yīng)的抗體。 A 血型人血清中含有抗 B ， B 血型人血清中含有抗 A ， AB

14、 血型人血清中既無(wú)抗 A 又無(wú)抗 B ， O 血型人血清 中既有抗 A 又有抗 B 。 2.3免疫學(xué)反應(yīng)舉例 一、體外免疫學(xué)檢測(cè)一、體外免疫學(xué)檢測(cè) （一）體液免疫檢測(cè)（血清學(xué)反應(yīng)） 1、抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)： 特異性 可逆性 比例性 n特異性特異性是由抗原決定簇和抗體分子的超變區(qū)之間空間是由抗原決定簇和抗體分子的超變區(qū)之間空間 結(jié)構(gòu)的互補(bǔ)性確定的。這種高度的特異性在傳染病的結(jié)構(gòu)的互補(bǔ)性確定的。這種高度的特異性在傳染病的 診斷與防治方面得到有效的應(yīng)用。隨著免疫學(xué)技術(shù)的診斷與防治方面得到有效的應(yīng)用。隨著免疫學(xué)技術(shù)的 發(fā)展進(jìn)步，還將在醫(yī)學(xué)和生物學(xué)領(lǐng)域得到更加深入和發(fā)展進(jìn)步，還將在醫(yī)學(xué)和生物學(xué)領(lǐng)域得到更

15、加深入和 廣泛的應(yīng)用，比如腫瘤的診斷和特異性治療等。廣泛的應(yīng)用，比如腫瘤的診斷和特異性治療等。 n比例性比例性是指抗原與抗體發(fā)生可見(jiàn)反應(yīng)需遵循一定的量 比關(guān)系，只有當(dāng)二者濃度比例適當(dāng)時(shí)才出現(xiàn)可見(jiàn)反應(yīng)， 在抗原抗體比例相當(dāng)或抗原稍過(guò)剩的情況下，反應(yīng)最 徹底，形成的免疫復(fù)合物沉淀最多、最大。而當(dāng)抗原 抗體比例超過(guò)此范圍時(shí)，反應(yīng)速度和沉淀物量都會(huì)迅 速降低甚至不出現(xiàn)抗原抗體反應(yīng)。 n可逆性可逆性是指抗原抗體結(jié)合形成復(fù)合物后，在一是指抗原抗體結(jié)合形成復(fù)合物后，在一 定條件下又可解離恢復(fù)為抗原與抗體的特性。定條件下又可解離恢復(fù)為抗原與抗體的特性。 由于抗原抗體反應(yīng)是分子表面的非共價(jià)鍵結(jié)合，由于抗原抗體反

16、應(yīng)是分子表面的非共價(jià)鍵結(jié)合， 所形成的復(fù)合物并不牢固，可以隨時(shí)解離，解所形成的復(fù)合物并不牢固，可以隨時(shí)解離，解 離后的抗原抗體仍保持原來(lái)的理化特征和生物離后的抗原抗體仍保持原來(lái)的理化特征和生物 學(xué)活性。學(xué)活性。 2.3免疫學(xué)反應(yīng)舉例 一、體外免疫學(xué)檢測(cè) 1、抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)： 抗體過(guò)剩比例適當(dāng)抗原過(guò)剩 抗原抗體的比例與其形成免疫復(fù)合物大小的關(guān)系 一、體外免疫學(xué)檢測(cè) 常見(jiàn)的體液免疫檢測(cè)法： （1）凝集反應(yīng)： 間接凝集和間接凝集抑制試驗(yàn) n凝集反應(yīng)：凝集反應(yīng)：顆粒性抗原顆粒性抗原(如細(xì)菌、紅細(xì)胞或表面帶有抗原的如細(xì)菌、紅細(xì)胞或表面帶有抗原的 乳膠顆粒乳膠顆粒)與相應(yīng)抗體結(jié)合，在一定條件下可形成凝

17、集團(tuán)塊的現(xiàn)與相應(yīng)抗體結(jié)合，在一定條件下可形成凝集團(tuán)塊的現(xiàn) 象。象。 n直接凝集反應(yīng)：直接凝集反應(yīng)： 顆粒狀抗原（如細(xì)菌、紅細(xì)胞等）與相應(yīng)顆粒狀抗原（如細(xì)菌、紅細(xì)胞等）與相應(yīng) 抗體直接結(jié)合所出現(xiàn)的凝集現(xiàn)象。分為玻片法和試管法。玻片法抗體直接結(jié)合所出現(xiàn)的凝集現(xiàn)象。分為玻片法和試管法。玻片法 是一種定性試驗(yàn)方法?？捎靡阎贵w來(lái)檢測(cè)未知抗原。若鑒定新是一種定性試驗(yàn)方法?？捎靡阎贵w來(lái)檢測(cè)未知抗原。若鑒定新 分離的菌種時(shí)，可取已知抗體滴加在玻片上，將待檢菌液一滴與分離的菌種時(shí)，可取已知抗體滴加在玻片上，將待檢菌液一滴與 其混勻。數(shù)分種后，如出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集現(xiàn)象，為陽(yáng)性反應(yīng)。其混勻。數(shù)分種后，如出現(xiàn)肉眼

18、可見(jiàn)的凝集現(xiàn)象，為陽(yáng)性反應(yīng)。 n間接凝集反應(yīng)：間接凝集反應(yīng)： 將可溶性抗原（或抗體）先吸附于將可溶性抗原（或抗體）先吸附于 一種與免疫無(wú)關(guān)的、一定大小的顆粒狀載體的表面，一種與免疫無(wú)關(guān)的、一定大小的顆粒狀載體的表面， 然后與相應(yīng)抗體（或抗原）作用。然后與相應(yīng)抗體（或抗原）作用。 （2）沉淀反應(yīng)： 單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn) n單向瓊脂擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)單向瓊脂擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)：一種常用的定量檢測(cè)抗原的一種常用的定量檢測(cè)抗原的 方法。將適量抗體與瓊脂混勻，澆注成板，凝固后，方法。將適量抗體與瓊脂混勻，澆注成板，凝固后， 在板上打孔，孔中加入抗原，抗原就會(huì)向孔的四周擴(kuò)在板上打孔，孔中加入抗原，抗原就會(huì)向孔的四周擴(kuò) 散，邊擴(kuò)散

19、邊與瓊脂中的抗體結(jié)合。一定時(shí)間后，在散，邊擴(kuò)散邊與瓊脂中的抗體結(jié)合。一定時(shí)間后，在 兩者比例適當(dāng)處形成白色沉淀環(huán)。沉淀環(huán)的直徑與抗兩者比例適當(dāng)處形成白色沉淀環(huán)。沉淀環(huán)的直徑與抗 原的濃度成正比。如事先用不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)抗原制成原的濃度成正比。如事先用不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)抗原制成 標(biāo)準(zhǔn)曲線，則從曲線中可求出標(biāo)本中抗原的含量。本標(biāo)準(zhǔn)曲線，則從曲線中可求出標(biāo)本中抗原的含量。本 試驗(yàn)主要用于檢測(cè)標(biāo)本中各種免疫球蛋白和血清中各試驗(yàn)主要用于檢測(cè)標(biāo)本中各種免疫球蛋白和血清中各 種補(bǔ)體成分的含量，敏感性很高。種補(bǔ)體成分的含量，敏感性很高。 （2）沉淀反應(yīng)： 雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn) n雙向瓊脂擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)：雙向瓊脂擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)：常用

20、于定性檢測(cè)，也可用于半定量常用于定性檢測(cè)，也可用于半定量 檢測(cè)。將抗原與抗體分別加入瓊脂凝膠板上相鄰近的小孔內(nèi)，讓檢測(cè)。將抗原與抗體分別加入瓊脂凝膠板上相鄰近的小孔內(nèi)，讓 它們相互向?qū)Ψ綌U(kuò)散。當(dāng)兩者在最適當(dāng)比例處相遇時(shí)，即形成一它們相互向?qū)Ψ綌U(kuò)散。當(dāng)兩者在最適當(dāng)比例處相遇時(shí)，即形成一 條清晰的沉淀線。根據(jù)有否出現(xiàn)沉淀線，可用已知的抗體鑒定未條清晰的沉淀線。根據(jù)有否出現(xiàn)沉淀線，可用已知的抗體鑒定未 知的抗原，或用已知的抗原鑒定未知的抗體。知的抗原，或用已知的抗原鑒定未知的抗體。 n臨床常用本方法檢查原發(fā)性肝癌患者血清中的甲胎蛋白，作為原臨床常用本方法檢查原發(fā)性肝癌患者血清中的甲胎蛋白，作為原 發(fā)

21、性肝癌的早期輔助診斷發(fā)性肝癌的早期輔助診斷。甲種胎兒蛋白（甲種胎兒蛋白（-Fetal protein, AFP），是胎兒組織及體液中的正常組織成份。胎兒在第），是胎兒組織及體液中的正常組織成份。胎兒在第9周才周才 出現(xiàn)此種蛋白，出現(xiàn)此種蛋白，1319周達(dá)高峰，到周達(dá)高峰，到21周后逐漸下降，胎兒出周后逐漸下降，胎兒出 生后該蛋白即行消失或含量甚微，普通試驗(yàn)方法檢查不出，而肝生后該蛋白即行消失或含量甚微，普通試驗(yàn)方法檢查不出，而肝 癌病人的血清檢出有此種蛋白。癌病人的血清檢出有此種蛋白。 （2）沉淀反應(yīng)： 對(duì)流免疫電泳 - + n對(duì)流免疫電泳：對(duì)流免疫電泳：即將抗原和抗體在瓊脂凝膠孔中即將抗原和

22、抗體在瓊脂凝膠孔中 電泳，帶負(fù)電荷的抗原向正極運(yùn)動(dòng)，帶正電荷的抗體電泳，帶負(fù)電荷的抗原向正極運(yùn)動(dòng)，帶正電荷的抗體 向負(fù)極運(yùn)動(dòng)，二者在瓊脂凝膠中相互作用而形成沉淀向負(fù)極運(yùn)動(dòng)，二者在瓊脂凝膠中相互作用而形成沉淀 線。線。 （3）補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)： 補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng) 一、體外免疫學(xué)檢測(cè) 免疫標(biāo)記技術(shù)：免疫熒光技術(shù) 免疫熒光直接法免疫熒光間接法 免疫標(biāo)記技術(shù)：免疫酶技術(shù) 1、包被抗體 洗 2、加抗原 洗 3、加酶標(biāo)抗體 洗 4、加底物顯色 1、包被抗原 洗 2、加抗體 洗 3、加酶標(biāo)抗 球蛋白 洗 4、加底物顯色 ELISA雙抗體夾心法ELISA間接法 免疫標(biāo)記技術(shù)：免疫標(biāo)記技術(shù)：放射免疫測(cè)定法（放射免疫測(cè)定

23、法（RIARIA） 將放射性檢測(cè)高靈敏度與抗原將放射性檢測(cè)高靈敏度與抗原-抗體反應(yīng)高特異性相結(jié)合、抗體反應(yīng)高特異性相結(jié)合、 對(duì)抗原對(duì)抗原(激素、藥物等激素、藥物等)進(jìn)行測(cè)定的技術(shù)。即利用標(biāo)記物與非進(jìn)行測(cè)定的技術(shù)。即利用標(biāo)記物與非 標(biāo)記物對(duì)抗體的競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合作用，通過(guò)比較未標(biāo)記的未知量標(biāo)記物對(duì)抗體的競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合作用，通過(guò)比較未標(biāo)記的未知量 抗原及已知量標(biāo)準(zhǔn)抗原，分別對(duì)放射性標(biāo)記抗原與特定抗抗原及已知量標(biāo)準(zhǔn)抗原，分別對(duì)放射性標(biāo)記抗原與特定抗 體結(jié)合的抑制效應(yīng)，可得出未知抗原的量。體結(jié)合的抑制效應(yīng)，可得出未知抗原的量。 n膠體金是由氯金酸膠體金是由氯金酸(HAuCl4)在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞在還原劑

24、如白磷、抗壞血酸、枸櫞 酸鈉、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金顆粒，并由于靜電酸鈉、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金顆粒，并由于靜電 作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，形成帶負(fù)電的疏水膠溶液，由于作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，形成帶負(fù)電的疏水膠溶液，由于 靜電作用而成為穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，故稱膠體金。膠體靜電作用而成為穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，故稱膠體金。膠體金標(biāo)金標(biāo)記，實(shí)記，實(shí) 質(zhì)上是蛋白質(zhì)等高分子被吸附到膠體金顆粒表面的包被過(guò)程。質(zhì)上是蛋白質(zhì)等高分子被吸附到膠體金顆粒表面的包被過(guò)程。 n免疫金標(biāo)記技術(shù)免疫金標(biāo)記技術(shù)(Immunogold labelling techique) 主要利用主要利用 了金顆粒具有

25、高電子密度的特性，在金標(biāo)蛋白結(jié)合處，在顯微鏡了金顆粒具有高電子密度的特性，在金標(biāo)蛋白結(jié)合處，在顯微鏡 下可見(jiàn)黑褐色顆粒，當(dāng)這些標(biāo)記物在相應(yīng)的配體處大量聚集時(shí)，下可見(jiàn)黑褐色顆粒，當(dāng)這些標(biāo)記物在相應(yīng)的配體處大量聚集時(shí)， 肉眼可見(jiàn)紅色或粉紅色斑點(diǎn)，因而用于定性或半定量的快速免疫肉眼可見(jiàn)紅色或粉紅色斑點(diǎn)，因而用于定性或半定量的快速免疫 檢測(cè)方法中，這一反應(yīng)也可以通過(guò)銀顆粒的沉積被放大，稱之為檢測(cè)方法中，這一反應(yīng)也可以通過(guò)銀顆粒的沉積被放大，稱之為 免疫金銀染色。免疫金銀染色。 免疫標(biāo)記技術(shù)：免疫標(biāo)記技術(shù)：膠體金免疫技術(shù)膠體金免疫技術(shù) 二、體內(nèi)免疫學(xué)檢測(cè)二、體內(nèi)免疫學(xué)檢測(cè) （一）體液免疫檢測(cè) 1 1、I

26、 I型超敏反應(yīng)皮膚試驗(yàn)型超敏反應(yīng)皮膚試驗(yàn) 用常見(jiàn)變應(yīng)原作皮內(nèi)注射或劃痕后，在 20分鐘內(nèi)引起紅斑及丘疹。如超過(guò)1cm或無(wú) 紅腫但注射處有癢感，或全身有不適反應(yīng) 者均為陽(yáng)性，反之為陰性。 2、中和反應(yīng)皮膚試驗(yàn)、中和反應(yīng)皮膚試驗(yàn) 將微量外毒素注射于受試者前臂屈側(cè)皮內(nèi)，24-48小 時(shí)局部出現(xiàn)皮膚紅腫者為陽(yáng)性反應(yīng)，表示無(wú)免疫力。 陰性反應(yīng)為有免疫力。 n錫克實(shí)驗(yàn)檢測(cè)對(duì)白喉易感性：錫克實(shí)驗(yàn)檢測(cè)對(duì)白喉易感性：注射一定量的白喉毒素 于受試者前臂屈側(cè)皮內(nèi)。受試者如無(wú)免疫力，2448 小時(shí)，局部皮膚出現(xiàn)紅腫，直徑在12厘米者為陽(yáng)性 反應(yīng)。相反，受試者如有免疫力，其血清中含有足量 的抗毒素抗體，能中和注入的毒素

27、，局部不出現(xiàn)紅腫， 為陰性反應(yīng)。此試驗(yàn)除用來(lái)測(cè)定機(jī)體對(duì)白喉的易感性 以外，還可檢測(cè)白喉預(yù)防接種后是否產(chǎn)生免疫力。 二、體內(nèi)免疫學(xué)檢測(cè) （二）細(xì)胞免疫檢測(cè) 以特異性抗原或有絲分裂原注入皮內(nèi)，剌激體內(nèi) 致敏T細(xì)胞分化增殖，釋放淋巴因子，引起局部皮膚的IV 型超敏反應(yīng)。 1、特異性抗原皮膚試驗(yàn)：在受試者前臂內(nèi)側(cè)皮 內(nèi)注入少量可溶性抗原，24-48小時(shí)后，觀察局部皮膚紅 腫硬結(jié)的大小。大于1cm即為陽(yáng)性，表示有細(xì)胞免疫力。 2、植物血凝素（PHA）皮試：將PHA注射于受試 者前臂屈側(cè)皮內(nèi)，6-12小時(shí)后局部出現(xiàn)紅斑硬結(jié)，24-48 小時(shí)達(dá)高峰，即為陽(yáng)性反應(yīng)，常用于檢測(cè)細(xì)胞免疫水平。 利根川進(jìn)利根川進(jìn)(

28、1939) 日本分子生物學(xué)家日本分子生物學(xué)家 1976年發(fā)現(xiàn)了抗體多樣性的遺傳現(xiàn)象，年發(fā)現(xiàn)了抗體多樣性的遺傳現(xiàn)象，80年代初揭示了年代初揭示了 抗體合成的基本原理，為了解機(jī)體如何制造出抵抗多種疾病抗體合成的基本原理，為了解機(jī)體如何制造出抵抗多種疾病 所需的不同抗體作出了重要貢獻(xiàn)。于所需的不同抗體作出了重要貢獻(xiàn)。于1987年獲諾貝爾獎(jiǎng)。年獲諾貝爾獎(jiǎng)。 抗原的類型 n依據(jù)誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的性能：胸腺依賴性（依據(jù)誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的性能：胸腺依賴性（T細(xì)細(xì) 胞參與）、胸腺非依賴性、超抗原胞參與）、胸腺非依賴性、超抗原 n與宿主親緣相關(guān)性：異種抗原、同種異型抗原、與宿主親緣相關(guān)性：異種抗原、同種異型抗原、 自身抗原。自身抗原。 n化學(xué)結(jié)構(gòu)：蛋白質(zhì)抗原、多糖抗原、核酸抗原化學(xué)結(jié)構(gòu)：蛋白質(zhì)抗原、多糖抗原、核酸抗原 等。等。 三三IgA IgA占人血清免疫球蛋白總量的占人血清免疫球蛋白總量的10%15%，具有，具有 單體、雙體甚至三體和多聚體種形式，單體、雙體甚至三體和多聚體種形式，單體單體IgA主要主要 存在于血清之中，而分泌型二聚體存在于血清之中，而分泌型二聚體IgA(SIgA)主要存主要存 在于外分泌液中，在于外分泌液中，SIgA是機(jī)體粘膜防御感染的重要抗是機(jī)體粘膜防御感染的重要抗 體，主要分布于初