實驗一_普通光學顯微鏡以及顯微標本制作

1、普通光學顯微鏡以及顯微標本制作普通光學顯微鏡以及顯微標本制作 一 實驗目的 二 實驗原理 三 實驗儀器、材料和試劑 四 實驗內容與方法 五 實驗報告 實驗目的實驗目的 1.熟悉普通光學顯微鏡的主要結構和基本性能。 2.掌握低倍鏡、高倍鏡和油鏡的正確使用方法。 3.初步了解光學顯微鏡的維護方法。 4.了解并掌握簡單的顯微標本制作技術 實驗原理 普通光學顯微鏡是最通用的一種光學顯微鏡。 利用光線照明，標本中各點依照其光吸收的不同而 在明亮的背景中成像。它由物鏡、目鏡、聚光鏡、 光源、載物臺和支架等部件組成。其中聚光鏡用于 調節(jié)顯微鏡的照明，物鏡和目鏡是放大微小物體成 像的主要部件。其基本成像原理是

2、：物鏡、目鏡、 聚光鏡各自相當于一個凸透鏡，被檢標本置于聚光 器與物鏡之間，物鏡可使標本在物鏡上方形成一個 倒立的放大實像。目鏡將此倒像進一步放大成像， 該虛像看起來好像在離眼睛250mm處。 實驗原理 顯微標本制作技術是組織學、胚胎學、生理學及細胞 學等學科研究觀察細胞、組織的生理、病理形態(tài)變化的一 種主要方法。大多數的生物材料，在自然狀態(tài)下是不適合 顯微觀察的，也無法看到其內部結構。因為材料較厚，光 線不易透過，以致不易看清其結構，另外細胞內的各個結 構，由于其折射率相差很小，即使光線可透過，也難以辨 明。但在經過固定、脫水、透明、包埋等手續(xù)后就可把材 料切成較薄的片，再用不同的染色方法就

3、可以顯示不同細 胞組織的形態(tài)及其中某些化學成份含量的變化，就可以在 顯微鏡下清楚地看到其中不同的區(qū)域組分狀態(tài)，切片也便 于保存，所以是教學和科研中常用的方法。 實驗儀器、材料和試劑 普通光學顯微鏡、擦鏡紙、吸水紙、蒸餾水、 載玻片、蓋玻片、香柏油、二甲苯、刀片等 實驗內容與方法 (一)普通光學顯微鏡的主要結構 1.機械部分：鏡座、鏡柱、鏡臂、鏡筒、轉換 器、載物臺 2.照明部分：反光鏡或者光源燈、聚光器、光 圈 3.光學部分：目鏡、物鏡(物鏡上的標志：放大 倍數、數值孔徑、機械筒長、蓋片厚度) 實驗內容與方法 (二)普通光學顯微鏡的性能和質量 1.數值孔徑 2.分辨力 3.放大率 4.焦點深度

4、 (三)普通光學顯微鏡的使用方法 1.用前的準備工作 2.低倍鏡的使用 3.高倍鏡的使用 4.油鏡的使用方法 實驗內容與方法 (四)本實驗室內使用普通光學顯微鏡的主要注意事項 1.取顯微鏡時，請盡量小心，防止震動損壞鏡頭 2.觀察帶有液體的臨時標本時，請務必加蓋玻片，以免鏡頭 受污染 3.鏡頭污染時，請用專業(yè)擦鏡紙及時擦拭，注意單方向擦拭 4.非觀察時候，請將物鏡鏡頭偏離光軸，避免鏡頭受損 5.非教師授課需要及實驗室管理員允許，請勿擅自拆卸零件 6.每位同學本學期固定使用一臺顯微鏡，并做好登記工作； 如有問題請及時報告管理員老師 實驗內容與方法 (五)顯微標本制作 1.非切片法 (1)涂片法：

5、將材料均勻地涂布在載玻片上的一種制片方法； 常用的涂片材料有單細胞生物、小型藻類、血液、細菌培養(yǎng)液、 動植物的疏松組織、精巢、花藥等。 (2)鋪片法：主要用于動、植物組織的表皮層觀察，可活體取 待觀察動、植物組織，用尖鑷子撕去一層表皮，迅速平鋪在載 玻片上。 (3)壓片法：壓片法是將一些較幼嫩，柔軟的生物材料如植物 根尖、花粉粒等置于載玻片和蓋片之間，施加一定壓力，將組 織細胞壓散的一種制片方法。 實驗內容與方法 (4)磨片法：用于很堅硬的組織，如骨和牙。 (5)離析法：利用化學試劑使組織的細胞間質溶解，使細胞能 分散成單個個體；適用于肌肉、葉片、莖等部位。 (6)整裝片法等：裝片法是將生物材料采取整體封固制成玻片 標本的方法，常用材料有：微小生物如衣藻、水綿、變形蟲、 水螅，植物的葉表皮；昆蟲的翅、足、口器，人的口腔上皮 細胞等。 2.切片法 包括徒手切片法、石蠟切片法、火棉膠切法、冰凍切片 法等類型。 實驗內容與方法 3.常用固定劑 (1)包音氏固定液：由苦味酸飽和水溶液、甲醛、冰醋 酸配制。 (2)海利氏液：由重鉻酸鉀、氯化汞、蒸餾水100毫升、 甲醛液配制。 (3)卡諾固定液：由純酒精、冰醋酸配制。 (4)約翰森固定液：由福爾馬林、丙酸、50% 酒精配制。 實驗內容與方法 4.常用染劑 (1)代氏染液 (2)伊紅水溶液 (3)番紅-固綠對染 (4