臨床醫(yī)學(xué)論文梅毒檢測不同方法的比較

1、梅毒檢測不同方法的比較【摘要】 目的：對甲苯胺紅不加熱血清試驗(trust)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(tpelisa)檢測方法的有效性進(jìn)行綜合分析，選擇適合采供血機(jī)構(gòu)篩查梅毒的方法。方法：用trust、tpelisa方法對獻(xiàn)血者進(jìn)行梅毒篩查，陽性標(biāo)本用梅毒螺旋體明膠凝集試驗(tppa)方法確證。結(jié)果：trust方法靈敏度為39.02%，假陽性率為3.03%，漏檢率為60.98%；elisa方法靈敏度為98.73%，假陽性率為20.59%，漏檢率為1.22%。結(jié)論：trust、elisa兩種試劑作為獻(xiàn)血員篩查梅毒的首選組合方案，更有利于血液質(zhì)量安全。 【關(guān)鍵詞】 梅毒；檢測；trust；elisa；t

2、ppacomparison of the different methods examing treponema abstract： objective to select the best screening method suiting for blood donors by assessing the validity of trust，elisa and tppamethods trust and elisa were used to screen patients with syphilis from blood donors，and tppa was used to confirm

3、ed positive results detected by elisa or trustresults the sensitivity，false positive rate and false negative rate of trust were 39.02%，3.03%，and 60.98% respectivelythe sensitivity，false positive rate and false negative rate of elisa were 98.73%，20.59% and 1.22%conclusion the combination of trust and

4、 elisa is the first choice to screen patients with syphilis from blood donors.moreover this screening contributes to blood safety. key words: treponema；examing; trust；elisa；tppa who認(rèn)為全球輸血不安全因素之一是傳染性因子未有效篩檢，因此選用特異性強、靈敏度高的篩檢方法和試劑對安全輸血意義重大。梅毒是嚴(yán)重危害人類健康的疾病之一，當(dāng)前我國梅毒流行呈逐年上升的趨勢1，2，在一些高危人群中尤為嚴(yán)重。梅毒螺旋體侵入人體后，刺激

5、機(jī)體產(chǎn)生針對螺旋體表面抗原的特異性抗體，而且還破壞機(jī)體組織產(chǎn)生抗磷脂的反應(yīng)素即非特異性抗體。目前國內(nèi)血站普遍采用快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗（rpr）3或甲苯胺紅不加熱血清試驗（trust）篩查獻(xiàn)血者非特異性抗體，由于其特異性和敏感性存在著相對差異，因而不能滿足篩選獻(xiàn)血者的需要1。而梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗如梅毒螺旋體血凝試驗（tpha）、梅毒螺旋體明膠凝集試驗（tppa）法等大多為確證試驗。近年來，針對梅毒螺旋體特異性抗體檢測，建立了酶聯(lián)免疫吸附試驗（tpelisa）用于采供血機(jī)構(gòu)對獻(xiàn)血者血液的檢測。為了比較tpelisa、trust檢測試劑的敏感性和特異性，筆者同時采用上述兩種試驗方法篩查獻(xiàn)

6、血者血液，并對其中任一方法檢測為陽性樣本的血清再用tppa方法進(jìn)行鑒定。現(xiàn)將結(jié)果報告如下。1 材料與方法1.1 標(biāo)本來源選用在15 368例次無償獻(xiàn)血者篩查中產(chǎn)生的104例陽性標(biāo)本以及由江蘇省臨床檢驗中心發(fā)放的室間質(zhì)控血清。1.2 試劑elisa tpigg試劑盒（北京吉比愛科技有限公司提供）；trust（上海榮盛生物技術(shù)有限公司提供）；tppa試劑盒（日本富士公司產(chǎn)品）。1.3 儀器酶標(biāo)儀和洗板機(jī)(labsystems dragon),梅毒旋轉(zhuǎn)儀(廈門新創(chuàng)科技有限公司)。1.4 試驗方法同時采用tpelisa和trust兩種方法對15 368例次無償獻(xiàn)血標(biāo)本進(jìn)行梅毒篩檢,若trust或eli

7、sa任何一種試劑檢測為陽性,均用檢出陽性的試劑三孔復(fù)試(一孔為原始樣本,兩孔為血袋樣本),兩孔以上陽性視為陽性,前提是原始樣本須陽性或可疑,若兩種試劑均為陽性則用tpelisa試劑三孔復(fù)試,共篩檢出陽性標(biāo)本104例。各項試驗操作均按試劑說明書進(jìn)行,復(fù)試陽性標(biāo)本用tppa試劑確證。2 結(jié)果2.1 篩檢結(jié)果在104例篩檢陽性標(biāo)本中，trust紙板法檢出陽性33例，elisa檢出陽性102例，tppa確認(rèn)陽性82例。以tppa確認(rèn)試驗作為判斷標(biāo)準(zhǔn)，其中trust紙板法只檢測出32例陽性，elisa檢測出81例陽性，見表1、表2。從表1中可看出，與tppa確認(rèn)試驗相比較，trust方法靈敏度為39.0

8、2%（32/82），假陽性率3.03%（1/33），漏檢率60.98%（50/82）；而elisa方法靈敏度為98.78%（81/82），假陽性率為20.59%（21/102），漏檢率1.22%（1/82）。表1 104例陽性標(biāo)本tpelisa、trust、tppa三種試劑檢測結(jié)果分布（略）表2 三種試劑檢測結(jié)果(略)2.2 用trust、tppa、elisa試劑分別對質(zhì)控血清不同稀釋倍數(shù)樣本進(jìn)行檢出靈敏度測試（見表3）從以上三種檢測方法對不同稀釋倍數(shù)的血清測定結(jié)果看，elisa方法靈敏度明顯高于trust法。表3 三種試劑對質(zhì)控血清不同稀釋倍數(shù)樣本檢測結(jié)果（略）3 討論 梅毒螺旋體梅毒亞種引

9、起的梅毒是重要的性傳播疾病之一，主要是通過性接觸傳播，但也可經(jīng)輸血感染、胎兒垂直傳播。因此檢測梅毒螺旋體抗體是預(yù)防經(jīng)輸血傳染性病的重要手段之一，無論對獻(xiàn)血者和受血者來說都是非常重要的。從本血庫近幾年來獻(xiàn)血者梅毒篩查結(jié)果來看，獻(xiàn)血人群中的梅毒陽性率呈逐年上升的趨勢。梅毒的防治已成為十分重要的醫(yī)學(xué)和社會問題。加強獻(xiàn)血者梅毒篩查工作，選擇特異性好，靈敏度高的篩查試劑，對確保臨床安全輸血具有重要的意義。 從以上結(jié)果中可看出，trust方法靈敏度僅有39.02%（32/82），與臨床報道有差異46，表明臨床患者與獻(xiàn)血員兩類人群血液中梅毒抗體濃度與性質(zhì)存在不同，使用單一的rpr或trust類試劑篩查獻(xiàn)血員

10、不安全；而trust假陽性率為3.03%（1/33），elisa靈敏度為98.78%（81/82）與唐躍華等報道接近4。但elisa方法假陽性率高達(dá)20.59%（21/102），高于相關(guān)報道，有待進(jìn)一步探討。從表1、表2中可看出，在全部82例確證陽性標(biāo)本中，elisa方法檢出陽性81例，漏檢1例，trust法檢出陽性32例，漏檢50例。所有漏檢部分均被trust、elisa方法相互檢出，說明這兩種試劑具有很強的互補性。這與試劑不同的抗原差異和靈敏度有關(guān)。 從表3不難看出，trust檢出靈敏度最低，造成陽性漏檢，說明該試劑質(zhì)量有待提高，而tppa檢出靈敏度也低于elisa方法，表明存在方法學(xué)靈敏

11、度的差異符合有關(guān)報道7。elisa、trust、tppa三種方法，elisa試劑的靈敏度優(yōu)于tppa，特異性優(yōu)于trust，三種方法中trust法的特異性最差8。三種方法在特異性、敏感性上有一定的差異，其原因主要是采用的抗原度方法不同。trust試驗是測定血清中反應(yīng)素的非特異性試驗，采用非特異性類脂質(zhì)抗原（心磷脂）檢測抗心磷脂抗體，此類抗原的大部分可以與其他非特異性抗體有交叉反應(yīng)，易受某些傳染病及自身免疫性疾病等因素的影響，從而出現(xiàn)生物學(xué)假陽性911，同時由于此試驗對期梅毒、期梅毒和治療后梅毒檢測的不同步性往往可出現(xiàn)假陰性，造成漏檢10；而tppa是測定血清中梅毒螺旋體的特異性抗體，采用稀釋血

12、清和吸附抗原的方法，特異性較高，當(dāng)然成本也相對較高，常作為梅毒確證試驗；梅毒特異性抗體酶聯(lián)免疫試劑作為新一代診斷試劑，采用高度純化的重組梅毒螺旋體抗原，表達(dá)了梅毒螺旋體優(yōu)勢表位抗原連接后再進(jìn)行克隆，表達(dá)的多表位嵌合抗原，避免了單片段抗原混合干擾，因此敏感性高，特異性強。 從表1中可看出，經(jīng)tppa確認(rèn)的82份陽性標(biāo)本中，有1份為trust方法檢出，而elisa方法未能檢出，說明elisa方法尚不能完全取代trust方法，而且trust方法快速、簡便，因此，目前采用此法進(jìn)行梅毒檢測還是必要的。elisa方法是近年來采用的檢測梅毒特異性抗體的方法，其存在假陽性的問題（20.59%）,但靈敏度高(9

13、8.78%)，且與tppa鑒定試驗吻合度較高12，因此采用此法進(jìn)行血液的梅毒檢測也是必要的，可行的。 綜上所述，trust方法雖然易受人為因素影響，敏感性低，容易造成陽性漏檢，但操作簡便，出結(jié)果較快；tpelisa方法敏感性與特異性較之trust法均有所提高，有間接法，雙抗原夾心法，適合大批量篩選。在tppa確認(rèn)的陽性標(biāo)本中有31份標(biāo)本是兩種方法共同檢出，其余標(biāo)本或trust法陽性或elisa法陽性。因此，筆者認(rèn)為同時采用trust、elisa兩種方法組合篩查梅毒更有利于血液質(zhì)量的保證，質(zhì)量成本也更為經(jīng)濟(jì)。 血站本著對獻(xiàn)血員負(fù)責(zé)的態(tài)度，如果trust法和elisa法檢出均為陽性的可直接告之獻(xiàn)血

14、者，如果出現(xiàn)兩種方法其中一種檢出為陽性的標(biāo)本則做tppa確診試驗，實驗結(jié)果方可告之獻(xiàn)血者，這樣可以使部分實驗假陽性者減輕思想負(fù)擔(dān)，但不提倡上述幾類獻(xiàn)血者再次獻(xiàn)血。本著對受血者安全用血的原則，上述兩種篩選方法出現(xiàn)一種方法檢測陽性的血液作為陽性血報廢。 從長遠(yuǎn)角度來考慮，采供血機(jī)構(gòu)需要靈敏度與特異性都比較好的試劑，以減少血液的浪費和提高輸血的安全性。當(dāng)然，最重要的是要對獻(xiàn)血員加大梅毒危害性的宣傳和如何預(yù)防梅毒的感染?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】 1郭兌山，寧平，方德強,等.梅毒螺旋體抗體igg elisa和rpr 試驗的比較j.中國輸血雜志,2001,14(2):88.2龔向東,葉順章,張國成,等.2000年全國

15、性病流行病學(xué)分析j.中國性病艾滋病防治,2001，7(3):131.3中華人民共和國衛(wèi)生部.中國輸血技術(shù)操作規(guī)程(血站部分)m.天津:天津科學(xué)技術(shù)出版社,1997：26.4唐躍華，謝健敏，劉建輝.elisa檢測梅毒螺旋體的臨床應(yīng)用評價j.中華傳染病雜志,2003,21:280281.5于柏峰,林永前,劉冰.四種梅毒血清學(xué)檢測方法的實驗室評價j.中國熱帶醫(yī)學(xué),2003,3:825827.6李金宇,張建萍.trust測定結(jié)果與梅毒診斷關(guān)系的探討j.皮膚病與性病,2003,25:5051.7萬德勝,鄭和香,姚換娟.三種檢測梅毒螺旋體血清學(xué)方法評估j.熱帶醫(yī)學(xué)雜志,2003,3:7576.8schmidt.bl,edjlalipour m.luger a,courpara five evaluation of nine different enzymelinkeel immunosorlent assays for determination of antibodies against treponema.pallidum.in pat