植物細(xì)胞培養(yǎng)的基本技術(shù)

1、 滅菌效果最好，但去除也最困難， 且滅菌時(shí)間不宜過長，以免損傷或殺死植物 細(xì)胞。 作為休眠種子的滅菌劑最為理想， 適用濃度為0.1%，滅菌時(shí)間一般為 210min，用于有較厚種皮的休眠種子滅菌 時(shí)，可延長到20min或更長時(shí)間。 MS、N6、B6、LS、RM-1964、B5、 White等。 MS培養(yǎng)基是Murashige（穆拉希吉）和 Skoog（斯科格）于1962年為煙草細(xì)胞培養(yǎng)設(shè) 計(jì)的，其特點(diǎn)是無機(jī)鹽和離子濃度較高，是較穩(wěn) 定的離子平衡溶液，它的硝酸鹽含量高，其養(yǎng)分 的數(shù)量和比例合適，能滿足植物細(xì)胞的營養(yǎng)和生 理需要，因而適用范圍比較廣，多數(shù)植物組織培 養(yǎng)快速繁殖用它作為培養(yǎng)基的基本培養(yǎng)

2、基。 B5含有較低的鹽離子，這個(gè)成分可能對很多 培養(yǎng)物的生長有抑制作用。 White的無機(jī)鹽含量較低，適于生根培養(yǎng)。 常常使用的碳使用的碳源：源： 糖類、肌醇糖類、肌醇 有時(shí)也用甘油等物質(zhì)代替有時(shí)也用甘油等物質(zhì)代替 ： 是用于調(diào)節(jié)植物生長發(fā)育的一類藥劑，包括 人工合成的具有天然植物激素相似作用的化 合物和從生物中提取的天然植物激素。 植物細(xì)胞植物細(xì)胞/ /組織培養(yǎng)方法分類：組織培養(yǎng)方法分類： 原生質(zhì)體培養(yǎng)原生質(zhì)體培養(yǎng) 按按 培養(yǎng)對象培養(yǎng)對象 分分 單倍體細(xì)胞培養(yǎng)單倍體細(xì)胞培養(yǎng) 固體培養(yǎng)固體培養(yǎng) 按按 培養(yǎng)基類型培養(yǎng)基類型 分分 液體培養(yǎng)液體培養(yǎng) 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)懸浮細(xì)胞培養(yǎng) 按按 培養(yǎng)方式培養(yǎng)方式

3、 分分 固定化細(xì)胞培養(yǎng)固定化細(xì)胞培養(yǎng) 定義：定義： 把把細(xì)胞或生物體的一部分，置于液體培養(yǎng)基中使其細(xì)胞或生物體的一部分，置于液體培養(yǎng)基中使其 發(fā)育，并不斷振蕩，使之均勻地在懸濁液中進(jìn)行培發(fā)育，并不斷振蕩，使之均勻地在懸濁液中進(jìn)行培 養(yǎng)的一種養(yǎng)的一種方法。方法。 液體培養(yǎng)系統(tǒng)液體培養(yǎng)系統(tǒng)包括：包括： 小規(guī)模的懸浮培養(yǎng)；小規(guī)模的懸浮培養(yǎng)； 大規(guī)模的成批培養(yǎng)；大規(guī)模的成批培養(yǎng)； 半連續(xù)培養(yǎng)；半連續(xù)培養(yǎng)； 連續(xù)培養(yǎng)。連續(xù)培養(yǎng)。 懸浮培養(yǎng)指懸浮培養(yǎng)指的的是一是一種在受到不斷攪動(dòng)或種在受到不斷攪動(dòng)或 搖動(dòng)的液體培養(yǎng)基里，培養(yǎng)單細(xì)胞及小細(xì)胞搖動(dòng)的液體培養(yǎng)基里，培養(yǎng)單細(xì)胞及小細(xì)胞 團(tuán)的組織培養(yǎng)系統(tǒng)，是非貼壁依

4、賴性細(xì)胞的團(tuán)的組織培養(yǎng)系統(tǒng)，是非貼壁依賴性細(xì)胞的 一種培養(yǎng)方式。一種培養(yǎng)方式。 懸浮培養(yǎng)可分為懸浮培養(yǎng)可分為靜止靜止和和振蕩振蕩兩類。兩類。 成批培養(yǎng)法成批培養(yǎng)法 半連續(xù)培養(yǎng)法半連續(xù)培養(yǎng)法 連續(xù)培養(yǎng)法連續(xù)培養(yǎng)法 固定化培養(yǎng)法固定化培養(yǎng)法 將愈傷組織培養(yǎng)在一定容積的密閉容器中，將愈傷組織培養(yǎng)在一定容積的密閉容器中， 最后一次收獲的培養(yǎng)方式。最后一次收獲的培養(yǎng)方式。 成批成批培養(yǎng)特點(diǎn)：培養(yǎng)特點(diǎn)： 培養(yǎng)基培養(yǎng)基體積固定培養(yǎng)過程中，細(xì)胞體積固定培養(yǎng)過程中，細(xì)胞生長，其生長，其 數(shù)目不斷發(fā)數(shù)目不斷發(fā) 生變化，呈生變化，呈S S增長。增長。 成成批培養(yǎng)意義批培養(yǎng)意義： 它是進(jìn)行細(xì)胞生長和細(xì)胞分裂的生理它是

5、進(jìn)行細(xì)胞生長和細(xì)胞分裂的生理 生化研生化研 究常用的培養(yǎng)方法。究常用的培養(yǎng)方法。 但要進(jìn)行下一批培養(yǎng)，則生長一定但要進(jìn)行下一批培養(yǎng)，則生長一定時(shí)間后時(shí)間后， 需要繼代轉(zhuǎn)移。需要繼代轉(zhuǎn)移。 在反應(yīng)器中投料和接種培養(yǎng)一段時(shí)間后，在反應(yīng)器中投料和接種培養(yǎng)一段時(shí)間后， 將部分培養(yǎng)液和新鮮培養(yǎng)液進(jìn)行交換的培將部分培養(yǎng)液和新鮮培養(yǎng)液進(jìn)行交換的培 養(yǎng)方法養(yǎng)方法 將愈傷組織培養(yǎng)在一個(gè)恒定溶劑的流動(dòng)系將愈傷組織培養(yǎng)在一個(gè)恒定溶劑的流動(dòng)系 統(tǒng)中，以使培養(yǎng)系統(tǒng)中的細(xì)胞數(shù)量和營養(yǎng)統(tǒng)中，以使培養(yǎng)系統(tǒng)中的細(xì)胞數(shù)量和營養(yǎng) 狀態(tài)保持穩(wěn)定。狀態(tài)保持穩(wěn)定。 流動(dòng)系統(tǒng)：流動(dòng)系統(tǒng)：一方面以一定速率不斷地加入一方面以一定速率不斷地加入 新的培養(yǎng)基，另一方面又以相同的速率流新的培養(yǎng)基，另一方面又以相同的速率流 出培養(yǎng)物出培養(yǎng)物 連續(xù)培養(yǎng)連續(xù)培養(yǎng)意義：意義： 植物細(xì)胞代謝調(diào)節(jié)的研究植物細(xì)胞代謝調(diào)節(jié)的研究( (某種生長限某種生長限 速濃速濃 度度- -細(xì)胞生長的影響細(xì)胞生長的影響); ); 次生物質(zhì)的大量生產(chǎn)。次生物質(zhì)的大量生產(chǎn)。 采用的固定化反應(yīng)器有網(wǎng)狀多孔板、尼龍網(wǎng)套和采用的固定化反應(yīng)器有網(wǎng)狀多孔板、尼龍網(wǎng)套和 中孔纖維膜等多種類型中孔纖維膜等多種類型 固定化培養(yǎng)法固定化培養(yǎng)法突出優(yōu)點(diǎn)：突出優(yōu)點(diǎn)： 細(xì)胞位置固定，細(xì)胞位置固定， 易于獲得高密度細(xì)胞群體及維持細(xì)胞間物易于獲得高密度細(xì)胞群體及維