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文檔簡介

1、2013307341 葉蘋蘋 根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理，先將已知的抗原 或抗體標(biāo)記上熒光素制成熒光標(biāo)記物，再用 這種熒光抗體（或抗原）作為分子探針檢查 細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原（或抗體）。在細(xì) 胞或組織中形成的抗原抗體復(fù)合物上含有熒 光素，利用熒光顯微鏡觀察標(biāo)本，熒光素受 激發(fā)光的照射而發(fā)出明亮的熒光（黃綠色或 桔紅色），可以看見熒光所在的細(xì)胞或組織， 從而確定抗原或抗體的性質(zhì)、定位，以及利 用定量技術(shù)測定含量。 1)FITC：黃色結(jié)晶粉末，吸收光：490495nm，發(fā)射 光：520530nm，明亮的黃綠色熒光。 2)RB200：橘紅色粉末，吸收光570nm，發(fā)射光 595600nm，橘紅色熒光。

2、 3)TRITC：紫紅色粉末，吸收550nm，發(fā)射光620nm， 橙紅色熒光。 4）鑭系：Eu、Tb 5)PE：吸收光490560nm，發(fā)射光595nm，紅色熒光。 6）其它：酶作用后產(chǎn)生熒光物質(zhì)。 直接免疫熒光法 間接免疫熒光法 將病毒接到敏感細(xì)胞上進(jìn)行增殖復(fù)制， 待病價最高的時候進(jìn)行間接熒光免疫實 驗 用于分毒時，確定有無病毒的存在 測抗體 優(yōu)點：特異性高、敏感性高、速度快 缺點：非特異性染色 注意事項： 1、每次試驗應(yīng)設(shè)陽性和陰 性對照 2、應(yīng)注意熒光抗體的質(zhì)量 3、標(biāo)本應(yīng)避光保存 1、病毒吸附：5%cpv同步接毒，3d 2、丙酮固定：80%丙酮，4 ,1h 3、洗滌：用 PBS 洗滌3遍 3min 4、加入一抗：加入抗 CPV 陽性血清（1：100倍稀 釋），200L/孔，37濕盒中作用 3h 5、洗滌 6、加入二抗：加入 FITC 標(biāo)記羊抗鼠 IgG 二抗 （1:300倍稀釋）50L，37閉光作用 1h； 7、洗滌 8

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