樣本采集與實(shí)驗(yàn)室分析-教學(xué)課件

1、 細(xì)菌性食品中毒的主要特征及主要檢驗(yàn)標(biāo)本細(xì)菌性食品中毒的主要特征及主要檢驗(yàn)標(biāo)本 流行病學(xué)流行病學(xué)實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)室 n樣本采集方案與檢測(cè)人員溝通，便于實(shí)驗(yàn)室分析處理。樣本采集方案與檢測(cè)人員溝通，便于實(shí)驗(yàn)室分析處理。 樣本前期處理，做好實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備。樣本前期處理，做好實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備。 n共同商定分析方案：現(xiàn)場(chǎng)工作人員或臨床醫(yī)務(wù)工作者共同商定分析方案：現(xiàn)場(chǎng)工作人員或臨床醫(yī)務(wù)工作者 要和實(shí)驗(yàn)室分析人員多溝通，對(duì)現(xiàn)場(chǎng)情況、所收集樣本要和實(shí)驗(yàn)室分析人員多溝通，對(duì)現(xiàn)場(chǎng)情況、所收集樣本 的情況、現(xiàn)場(chǎng)工作的方向等進(jìn)行討論，確定應(yīng)該檢驗(yàn)的的情況、現(xiàn)場(chǎng)工作的方向等進(jìn)行討論，確定應(yīng)該檢驗(yàn)的 毒物種類以及是否需要定量，據(jù)此制定實(shí)

2、驗(yàn)室檢測(cè)工作毒物種類以及是否需要定量，據(jù)此制定實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作 方案。方案。 一、標(biāo)本采集 （1）及時(shí)性原則 （2）針對(duì)性原則 （3）適量性原則 （4）不污染原則 規(guī)范采樣是獲得可靠檢測(cè)結(jié)果的重要保證 n合理的采樣時(shí)機(jī)和種類 n足夠的樣品采樣量 n多種樣品同時(shí)采集 n正確的采樣方法 n樣品妥善保存運(yùn)輸 合理的采樣時(shí)機(jī)和種類合理的采樣時(shí)機(jī)和種類 傷寒病人樣本采集： 血液：宜在病程1-2周發(fā)燒期內(nèi) 骨髓：整個(gè)病程 糞便：宜在病程3-4周內(nèi)，抗生素治療前或者停藥 3天后采集，帶菌者以糞便采集為主。 根據(jù)臨床癥狀確定樣品采集根據(jù)臨床癥狀確定樣品采集 根據(jù)流行病學(xué)、衛(wèi)生學(xué)調(diào)查采集根據(jù)流行病學(xué)、衛(wèi)生學(xué)調(diào)查采

3、集 細(xì)菌性食品中毒的主要特征及主要檢驗(yàn)標(biāo)本細(xì)菌性食品中毒的主要特征及主要檢驗(yàn)標(biāo)本 杯狀病毒杯狀病毒（諾如病毒、扎如病毒）（諾如病毒、扎如病毒）排病毒數(shù)量與病程有排病毒數(shù)量與病程有 關(guān)關(guān)，發(fā)病發(fā)病4天內(nèi)幾乎天內(nèi)幾乎100%病人排病毒，易于檢查；病人排病毒，易于檢查； 病程病程59天時(shí)天時(shí) 50%排病毒；病程排病毒；病程10天后約天后約10%排病毒。排病毒。 采樣時(shí)機(jī)對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的影響采樣時(shí)機(jī)對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的影響 注意：樣品標(biāo)簽和登記信息，幫助實(shí)驗(yàn)室選擇最佳樣品檢注意：樣品標(biāo)簽和登記信息，幫助實(shí)驗(yàn)室選擇最佳樣品檢 測(cè)，幫助實(shí)驗(yàn)室結(jié)果的解釋測(cè)，幫助實(shí)驗(yàn)室結(jié)果的解釋 正確采樣方法正確采樣方法 n無菌操作 n

4、防止采集的標(biāo)本受到影響 多種樣品同時(shí)采集多種樣品同時(shí)采集 （一） 食品 （二）水源 （三） 臨床標(biāo)本 糞便、血液、嘔吐物、手表面、尸體標(biāo)本 （四）物體表面： 剛被稀便污染的尿布、衣服、 床單等， 炊事用具，其它可能被污染的物體表面 （五） 宿主動(dòng)物 （六） 昆蟲等媒介生物 （一）食品標(biāo)本的采集方法 n用滅菌工具采取可疑食物，以及原配料、 半成品等，置于滅菌容器中。 n如已無可疑食物，可用滅菌棉拭在可疑 食物的容器內(nèi)涂抹，置于裝有少量生理 鹽水的試管內(nèi)。 n可疑的食物盒子可直接送檢，如僅?？?盒，可將空盒送檢。 （二）水源標(biāo)本的采集方法及注意事項(xiàng) n以滅菌的500ml鹽水瓶采取水樣至少450ml

5、， 但不能讓水樣充滿整個(gè)瓶子，應(yīng)留有一定 的空氣。一般在可疑污染的河流、池塘岸 邊的30cm深度以內(nèi)的表層水采取水樣。連 續(xù)采取多份水樣時(shí)，注意防止水樣間相互 污染。采取的水樣應(yīng)立即放入冷藏箱中盡 快送到實(shí)驗(yàn)室。不能在3小時(shí)內(nèi)送檢者， 應(yīng)在采水點(diǎn)即將水樣加入培養(yǎng)基中，搖勻， 室溫下運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室。 （三） 臨床標(biāo)本的采集方法 1. 糞便標(biāo)本 n一般采用自然留便，若采樣時(shí)病人無便或嬰幼兒則可采用 肛拭法。 n留便：用2個(gè)棉拭子分別在自然排出的新鮮糞便中可疑部 分多點(diǎn)挑取采集約5g標(biāo)本。腹瀉病人應(yīng)取膿、血、粘液等 異常部分。液體糞便取絮狀物約5ml。 n肛拭法：先用無菌甘油水或生理鹽水濕潤棉簽，多余

6、的液 體緊靠管壁擠出；再用棉拭或肛門采便管由肛門插入直腸 內(nèi)約3cm5cm（幼兒約2cm3cm）處，輕輕旋轉(zhuǎn)360， 擦取直腸表面黏液后取出。避免采便量過少（注意棉簽上 應(yīng)沾有糞便）。 n為作厭氧菌檢查應(yīng)將標(biāo)本置于厭氧袋中轉(zhuǎn)送。 （三） 臨床標(biāo)本的采集方法 2. 血液標(biāo)本 n（1）綁上止血帶，并用手觸摸，以確定固定住的靜脈 位 置。 n（2）用2%碘酒消毒皮膚，從穿刺點(diǎn)中心部位開始向外 擴(kuò)大，消毒范圍不應(yīng)小于5cm（直徑）。 n（3）待皮膚干后，再75%酒精擦去碘酒，且不能用手指 觸 摸消毒后的皮膚。 n（4）皮膚酒精干后，穿刺采集血液，采血量成人5-10ml， 嬰幼兒1-5ml。 n（5）根

7、據(jù)需要，血標(biāo)本分為抗凝和不抗凝兩種，于采 集后無菌操作分別注入市售抗凝和不抗凝采集管中。需 做抗體檢測(cè)時(shí)，第二份血與第一份血采集時(shí)間一般相隔 約2周，最短不能少于10天。 （三） 臨床標(biāo)本的采集方法 3. 嘔吐物 n用無菌壓舌板或棉拭子挑取少量嘔吐物 作為檢材，放入自封塑料袋中并封好袋 口或置于滅菌帶蓋瓶中，然后蓋緊瓶蓋， 立即置于冷藏箱中。 （三） 臨床標(biāo)本的采集方法 4. 手表面 n用滅菌棉拭蘸以滅菌生理鹽水，涂抹手表 面，立即置于采樣管中，蓋緊管蓋。 （三） 臨床標(biāo)本的采集方法 5. 尸體標(biāo)本 n應(yīng)于死后盡可能早地?zé)o菌采取，放于無 菌容器內(nèi)，不要使用防腐劑；對(duì)于各種 器官標(biāo)本，解剖器材和

8、盛裝容器要分開。 （四）物體表面標(biāo)本的采集方法 n用滅菌棉拭蘸以滅菌生理水涂擦沾染糞 便的衣物、床單等表面或食品表面或水 生動(dòng)物體表，放入到采樣管中或直接置 于增菌液中增菌。 （五） 宿主動(dòng)物標(biāo)本的采集方法 n以無菌操作采集可疑宿主動(dòng)物新鮮糞便 約5克，置于采樣袋中，立即置于冷藏箱 中。 （六） 昆蟲等媒介生物的采集方法 n如采集蒼蠅標(biāo)本：在每個(gè)采樣點(diǎn)以10 15只蒼蠅作為一份標(biāo)本放入自封袋中， 立即封好袋口，置于冷藏箱中。 標(biāo)本采集送檢注意事項(xiàng) n送檢標(biāo)本時(shí)應(yīng)填寫“標(biāo)本送檢單”，寫明姓名、 地址、發(fā)病時(shí)間、采集時(shí)間、臨床診斷等。標(biāo) 本管/袋或瓶上標(biāo)記樣品編號(hào)樣品編號(hào)。病人標(biāo)本含有 大量病菌，

9、標(biāo)本裝入試管或小瓶時(shí)，注意勿污 染容器口外壁，必須妥善包裝以防破碎、滲漏 等，放在堅(jiān)固的送檢箱內(nèi)由專人送往檢驗(yàn)室， 運(yùn)送過程中注意安全。 標(biāo)本的保存 n所有標(biāo)本采集后都應(yīng)立即置于冷藏箱中，盡快送往實(shí)驗(yàn) 室。不能在3小時(shí)內(nèi)送達(dá)者，細(xì)菌標(biāo)本應(yīng)盡可能在現(xiàn)場(chǎng)接 種；病毒標(biāo)本可臨時(shí)保存在4冰箱，但不能超過3天， 如近期不能檢測(cè)，則應(yīng)直接在-20 或-80 下凍存，有 條件的可將樣品分成幾小份，以避免以后接種標(biāo)本時(shí)的 反復(fù)凍融。 標(biāo)本的運(yùn)輸 n標(biāo)本采集后必須盡快送至實(shí)驗(yàn)室。 n用于RNA檢測(cè)的標(biāo)本，如果未經(jīng)穩(wěn)定化 處理，則必須速凍后，放在干冰中運(yùn)送。 n標(biāo)本在運(yùn)送時(shí)，應(yīng)采用不易破碎的容器 裝載標(biāo)本。 n運(yùn)

10、送要注意生物安全 生物安全 1.標(biāo)本采集時(shí)要嚴(yán)格執(zhí)行生物安全防護(hù)要求， 防止污染、傳播和自身感染 。 2.標(biāo)本采集完畢，首先消毒，然后脫掉防護(hù) 裝備。 3.所有使用過的采樣相關(guān)物品要帶離現(xiàn)場(chǎng)， 高壓滅菌消毒后丟棄。 4.采樣箱每次用完后要及時(shí)消毒處理。 二、檢測(cè)項(xiàng)目的確定 標(biāo)本檢測(cè)項(xiàng)目的確定標(biāo)本檢測(cè)項(xiàng)目的確定 n檢測(cè)那些項(xiàng)目？ n誰決定檢測(cè)項(xiàng)目？ 在暴發(fā)調(diào)查中，實(shí)驗(yàn)室的病因物質(zhì)在暴發(fā)調(diào)查中，實(shí)驗(yàn)室的病因物質(zhì) 檢測(cè)，不是搜索尋找病因，是對(duì)病因假檢測(cè)，不是搜索尋找病因，是對(duì)病因假 設(shè)的證實(shí)。根據(jù)病因假設(shè)、檢驗(yàn)條件，設(shè)的證實(shí)。根據(jù)病因假設(shè)、檢驗(yàn)條件， 確定檢驗(yàn)指標(biāo)。確定檢驗(yàn)指標(biāo)。 流行病學(xué)流行病學(xué)實(shí)

11、驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)室 n樣本采集方案與檢測(cè)人員溝通，便于實(shí)驗(yàn)室分析處理。樣本采集方案與檢測(cè)人員溝通，便于實(shí)驗(yàn)室分析處理。 n共同商定分析方案：現(xiàn)場(chǎng)工作人員或臨床醫(yī)務(wù)工作者共同商定分析方案：現(xiàn)場(chǎng)工作人員或臨床醫(yī)務(wù)工作者 要和實(shí)驗(yàn)室分析人員多溝通，對(duì)現(xiàn)場(chǎng)情況、所收集樣本要和實(shí)驗(yàn)室分析人員多溝通，對(duì)現(xiàn)場(chǎng)情況、所收集樣本 的情況、現(xiàn)場(chǎng)工作的方向等進(jìn)行討論，確定應(yīng)該檢驗(yàn)的的情況、現(xiàn)場(chǎng)工作的方向等進(jìn)行討論，確定應(yīng)該檢驗(yàn)的 毒物種類以及是否需要定量，據(jù)此制定實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作毒物種類以及是否需要定量，據(jù)此制定實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作 方案。方案。 三、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn) 檢什么 毒素檢測(cè)毒素檢測(cè) 病原分離病原分離 細(xì)菌細(xì)菌 病毒病毒 寄生

12、蟲寄生蟲 血清學(xué)檢查血清學(xué)檢查 抗原抗原 抗體抗體 急性期急性期IgMIgM抗體抗體 急性期和恢復(fù)期雙份靜脈血測(cè)定特異性急性期和恢復(fù)期雙份靜脈血測(cè)定特異性IgGIgG抗體?？贵w。 核酸檢測(cè)核酸檢測(cè) 特征基因、毒力基因、溯源比較特征基因、毒力基因、溯源比較 定性定性/ /定量定量 怎么檢 n用什么方法用什么方法（同時(shí)需要考慮方法靈敏度、準(zhǔn)確度、同時(shí)需要考慮方法靈敏度、準(zhǔn)確度、 重現(xiàn)性、不同方法結(jié)果的可比較性、還需要考慮待測(cè)重現(xiàn)性、不同方法結(jié)果的可比較性、還需要考慮待測(cè) 樣品（毒物、代謝物）、分析要求（定性、定量）、樣品（毒物、代謝物）、分析要求（定性、定量）、 樣品類型、實(shí)驗(yàn)室條件，分析目的等因

13、素，還要考慮樣品類型、實(shí)驗(yàn)室條件，分析目的等因素，還要考慮 時(shí)效性、準(zhǔn)確性、經(jīng)濟(jì)性等要求）時(shí)效性、準(zhǔn)確性、經(jīng)濟(jì)性等要求） n用什么試劑用什么試劑 對(duì)重大事件的毒物鑒定或樣本檢測(cè)要同時(shí)送數(shù)家具有鑒定檢驗(yàn)對(duì)重大事件的毒物鑒定或樣本檢測(cè)要同時(shí)送數(shù)家具有鑒定檢驗(yàn) 資質(zhì)的實(shí)驗(yàn)室同步開展工作，避免因?qū)嶒?yàn)室管理和技術(shù)因素對(duì)結(jié)果的資質(zhì)的實(shí)驗(yàn)室同步開展工作，避免因?qū)嶒?yàn)室管理和技術(shù)因素對(duì)結(jié)果的 影響。影響。 采樣時(shí)，分裝采樣時(shí)，分裝N份，分別保存和送檢份，分別保存和送檢 怎么檢 快速靈敏方法的應(yīng)用快速靈敏方法的應(yīng)用 儀器自動(dòng)化方法儀器自動(dòng)化方法 改進(jìn)分離培養(yǎng)方法改進(jìn)分離培養(yǎng)方法 怎么檢怎么檢 檢驗(yàn)流程：檢驗(yàn)流程：

14、 1 . 樣品采集樣品采集 2. 初步檢驗(yàn)初步檢驗(yàn)（直接鏡檢、免疫快診、（直接鏡檢、免疫快診、PCR。) 3. 分離培養(yǎng)分離培養(yǎng) (包括增菌培養(yǎng)和直接平板培養(yǎng)包括增菌培養(yǎng)和直接平板培養(yǎng)) 4. 初篩試驗(yàn)、純培養(yǎng)初篩試驗(yàn)、純培養(yǎng)（快速診斷方法的使用）（快速診斷方法的使用） 5. 全面鑒定全面鑒定（菌株鑒定、毒素測(cè)定）（快速檢測(cè)方法）（菌株鑒定、毒素測(cè)定）（快速檢測(cè)方法） 四、結(jié)果的報(bào)告與分析 結(jié)果的報(bào)告與分析 n檢驗(yàn)結(jié)果的正確性不僅取決于實(shí)驗(yàn)室的條件檢驗(yàn)結(jié)果的正確性不僅取決于實(shí)驗(yàn)室的條件 和技術(shù)水平，同時(shí)還與檢驗(yàn)樣品的采集、保和技術(shù)水平，同時(shí)還與檢驗(yàn)樣品的采集、保 存、送樣方法等方面有關(guān)。因此在

15、分析檢驗(yàn)存、送樣方法等方面有關(guān)。因此在分析檢驗(yàn) 結(jié)果時(shí)，除了應(yīng)考慮結(jié)果是否符合有關(guān)實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)，除了應(yīng)考慮結(jié)果是否符合有關(guān)實(shí)驗(yàn) 室判定標(biāo)準(zhǔn)外，還應(yīng)綜合考慮各種影響檢驗(yàn)室判定標(biāo)準(zhǔn)外，還應(yīng)綜合考慮各種影響檢驗(yàn) 結(jié)果的因素。結(jié)果的因素。 結(jié)果的報(bào)告與分析 n陽性結(jié)果不一定能說明病原因子在爆發(fā)事件陽性結(jié)果不一定能說明病原因子在爆發(fā)事件 中的致病作用；反之陰性結(jié)果也不一定能完中的致病作用；反之陰性結(jié)果也不一定能完 全否定某種病原因子的病因假設(shè)全否定某種病原因子的病因假設(shè). 結(jié)果的報(bào)告與分析 n實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果是確定病因的重要依據(jù)，但實(shí)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果是確定病因的重要依據(jù)，但實(shí) 驗(yàn)室結(jié)果要和現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查情況、患者的

16、臨床表現(xiàn)驗(yàn)室結(jié)果要和現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查情況、患者的臨床表現(xiàn) 一起分析，才能確定病因。一起分析，才能確定病因。 五、案例分析五、案例分析 n2010年9月8日起，四川某高職學(xué)院陸續(xù) 有學(xué)生發(fā)病，癥狀以腹痛、腹瀉為主， 部分學(xué)生伴惡心、嘔吐，個(gè)別有發(fā)熱等 癥狀并到本校醫(yī)院進(jìn)行治療,疾病預(yù)防控 制中心疫情處理人員于9月15日接到報(bào)告 后趕赴現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查和采樣。 n問題1：現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查內(nèi)容？ n1）基本情況 學(xué)校情況，食堂情況，飲用水情況 n2） 發(fā)病情況發(fā)病情況 n3）臨床表現(xiàn)臨床表現(xiàn) n4）治療情況 1）、基本情況 n該學(xué)院位于岷江二號(hào)橋旁，占地三百七十余畝， 全院有教職工330人，學(xué)生4500人，學(xué)生均住 校。8

17、月23日新學(xué)期整體搬入該新校址。學(xué)院 生活飲用水為自備式供水，水源位于岷江旁， 取水點(diǎn)位于學(xué)院污水排污口下方200米；學(xué)校 未集中供應(yīng)開水，學(xué)生寢室多配有飲水機(jī)，主 要飲用“龍蓀泉”、“清心泉”牌桶裝礦泉水。 學(xué)校的水處理廠沒有定期對(duì)水源水進(jìn)行消毒和 監(jiān)測(cè)。同時(shí)，污水處理設(shè)備一直未啟用，且污 水管道在鋪設(shè)時(shí)不符合標(biāo)準(zhǔn)，導(dǎo)致生活污水泄 露，并蓄積在取水點(diǎn)上方的低洼地帶，該校生 活飲用水取水點(diǎn)設(shè)置見圖1。 2）、發(fā)病情況）、發(fā)病情況 9月8日以來陸續(xù)有學(xué)生發(fā)病，癥狀以腹 痛、腹瀉為主，部分學(xué)生伴惡心、嘔吐，個(gè)別 有發(fā)熱等癥狀。共計(jì)249例。病例在9月13日以 后逐漸增多，9月1416日發(fā)病人數(shù)達(dá)到

18、高峰， 17日以后發(fā)病人數(shù)有所下降，每日新增病例數(shù) 見圖2。病例中男性72人，女性177人，性別比 例1：2.46。學(xué)生243人，年齡在1423歲之間； 教師1人，食堂工作人員4人，工人1人?；疾?學(xué)生廣泛分布于各個(gè)專業(yè)、班級(jí) 3）、臨床表現(xiàn)）、臨床表現(xiàn) 共對(duì)176例患者進(jìn)行了調(diào)查，97.7% （172人）出現(xiàn)腹瀉癥狀，89.8%（158人） 在24小時(shí)內(nèi)腹瀉次數(shù)3次，腹瀉糞便形狀 以水樣便為主（132人），33.0%（58人） 有里急后重；21.6%（38人）出現(xiàn)嘔吐癥 狀，55.1%（97人）有頭昏頭痛癥狀， 15.9%（28人）出現(xiàn)發(fā)熱癥狀。 4）治療情況 醫(yī)生采取輸液、吃藥方式抗生素治療。 結(jié)果： 部分學(xué)生反復(fù)出現(xiàn)癥狀 部分學(xué)生經(jīng)治療無效 樣本采集 問題2 采集哪些樣本？ 樣本采集 食堂廚師肛拭 食堂樣本 水源水 經(jīng)學(xué)校消毒裝置消毒后的出廠水 學(xué)生食堂管網(wǎng)末梢水 學(xué)生宿舍飲用礦泉水 病例糞便、肛拭、嘔吐物等 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè) n問題3： 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)什么項(xiàng)目？ 檢測(cè)項(xiàng)目 n細(xì)菌：腸道致病菌（致瀉性大腸埃希氏 菌、沙門菌、志賀菌、致病性弧菌等） n腹瀉病毒