蜂膠中抗腫瘤成分的研究

1、蜂膠中抗腫瘤成分的研究蜂膠作為一種天然藥物， 已證明其具有抗病原微生物、抗炎、 免疫調(diào)節(jié)和抗腫瘤作用， 特別 是其抗腫瘤作用引起人們廣泛的關(guān)注。 研究表明蜂膠對人鼻咽癌、 子宮頸癌、 乳腺癌、 腎癌、 大腸癌等人癌細胞株均具有強烈的毒殺作用。 已有多種抑制腫瘤細胞生長的有效成分已被鑒 定出來， 主要是咖啡酸及肉桂酸類的衍生物和黃酮類化合物等。 本文就蜂膠的抗腫瘤成分及 作用機理研究進展進行簡要論述。1 咖啡酸類衍生物CAPE咖啡酸苯乙酪)是蜂膠中一種較早被確認的抗腫瘤成分。近年國外研究報道，作為蜂膠抗腫瘤作用的主要活性成分， 對人白血病細胞和多種實體瘤細胞具有明顯的抑制增殖和誘導(dǎo) 凋亡作用，而

2、且能顯著抑制NIH/3T3細胞被肉瘤相關(guān)病毒 MuSV-124的惡性傳染。CAPEE抑制兩種腫瘤細胞系的生長，調(diào)節(jié)兩種細胞系中與腫瘤相關(guān)抗體的表達。CAP阿選擇性誘導(dǎo)癌細胞株的DNA斷裂。如鼠高肝轉(zhuǎn)移性結(jié)腸癌 26-lj細胞株、鼠高肝轉(zhuǎn)移性惡性黑色素瘤BL6細胞株、鼠肺癌LLC細胞株、人纖維肉瘤 HT-1080細胞株、人肺腺癌 A549細胞株和人宮頸癌 HeLa 細胞株的生長均有抑制作用，但不同的細胞株對，CAP的敏感性不同。結(jié)腸癌 26-L5細胞的半數(shù)致死濃度(EC50)為0.15卩molL-1，而HeLa細胞為10.7卩molL-1。CAP還可減少由致癌 物氧化偶氮甲烷導(dǎo)致的小鼠結(jié)腸畸形腺

3、窩灶(ACF)的形成和腫瘤的產(chǎn)生，而目前認為結(jié)腸黏膜ACF勺形成是導(dǎo)致大腸癌發(fā)生的關(guān)鍵階段。更值得研究人員興奮的是CAP及其衍生物對不同細胞具有選擇性的毒性作用， 對舌鱗癌、 頸部牙齦轉(zhuǎn)移癌等腫瘤細胞生長具有明顯的抑制 作用，但對黏膜成纖維細胞等正常細胞卻沒有作用。CAPE勺抗腫瘤作用部分機理已經(jīng)被闡明。Hye等認為具有潛在的抑制腫瘤入侵及轉(zhuǎn)移作用，這種作用是由細胞基質(zhì)金屬蛋白酶的調(diào)節(jié)決定的。細胞基質(zhì)金屬蛋白酶是一種Zn-依賴的蛋白水解酶，在細胞外基質(zhì)的分裂增殖過程中起著關(guān)鍵作用。用不同劑量CAP處理人成纖維肉瘤發(fā)現(xiàn)CAPEE夠顯著下調(diào)基因的表達水平。另外，也觀察到CAP能抑制MMP-活化的全

4、過程，如人侵、活動、細胞遷移、聚集，為CAP抗腫瘤提供了有力證據(jù)。CAP航腫瘤作用可能與 CAPE能夠修復(fù)細胞間縫隙連接有關(guān)。用CAP處理縫隙連接缺失的WB-ras2細胞后，可引起細胞生長受抑，細胞縫隙連接明顯恢復(fù)，其細胞連接相關(guān)蛋白連接 素-43 的表達上調(diào)并定位于細胞膜。CAP能夠抑制腫瘤基因的表達。CAPE寸TPA引起的腫瘤增長和5-經(jīng)甲基-2 -脫氧尿嘧啶形成 有潛在的抑制活性，在 Hela細胞培養(yǎng)基中1.25、2.5、5、10、20 mmol - L-1的CAPE寸DNA合 成抑制率分別為32%、44%、朗、79%、95%;對RN合成抑制率分別為39%、43%、58%、 64%、75

5、%,對蛋白質(zhì)合成抑制率分別為 29%、30%、37%、32%、47%。CAP處理兩個p53 腫瘤突變異種細胞系 NCI-H358和SKOV-3及缺乏型p53細胞引起cas-pase-3和DNA斷裂。CAP呂I起腫瘤細胞凋亡作用還可由 p38絲裂原活化蛋白激酶通路介導(dǎo)。CAPE(50卩molL-1)處理C6膠質(zhì)瘤細胞，能夠誘導(dǎo)細胞色素C從線粒體釋放到細胞漿， 激活CPP32也上調(diào)了 p53、 Bax和Bak基因的表達。活化了細胞外的 ERKs/p38 MAP通路，p38激酶和p53形成一個復(fù)合體，誘導(dǎo)p53磷酸化，使得C6!交質(zhì)瘤細胞凋亡。另外，從荷蘭蜂膠中提取得到CAP類似物咖啡酸苯乙酪、咖啡

6、酸苯丙酯、咖啡酸肉桂醇酯。3種成分對鼠肝轉(zhuǎn)移結(jié)腸癌26-L5細胞都顯示了抑制作用，EC50分別為0.288、1.76和0.114molL-1。2 肉桂酸類衍生物近年來研究人員發(fā)現(xiàn)， Artepillin C ( 阿替匹林 ) 及其結(jié)構(gòu)衍生物是蜂膠中一類獨特的對腫 瘤細胞具有細胞毒性作用的活性成分。 實驗中發(fā)現(xiàn)， 在體外腫瘤細胞抑制試驗中， 100 1 m-l1 An epillin C發(fā)現(xiàn)具有明顯的細胞毒作用，能夠強烈抑制人肺癌 HLCffl胞(腺癌)、腸癌HG細胞、鼠肝癌HTSAE胞、鼠惡性腫瘤Colon 26和B-16細胞、喉癌KB細胞、和鼠黑素瘤上皮細胞 Clone M-3的DNA合成，

7、并能引起HLG HGC Colon 26、人白血病細胞的細胞凋亡。在裸鼠移植HLGHGCColon 26、HTSA PLC/PRF/5、黑色素瘤細胞動物實驗中，每只裸鼠瘤內(nèi)注射 ArtepillinC 500 ig即檢測到細胞凋亡、有絲分裂中止、腫瘤細胞核溶解、腫瘤細胞死亡，最后癌 病變組織被膠原限制， 腫瘤細胞入侵浸潤也被阻止， 而人正常細胞的生長不受影響。 低劑量 Artepillin C(500 i g還可以預(yù)防鐵-氮基三醋酸酪(FeNTA)誘發(fā)的小鼠支氣管和細支氣管腺 瘤惡性轉(zhuǎn)化，阻止肺癌的發(fā)展。Arteplli nC對于不同系列的人白血病細胞如T-淋巴細胞性白血病細胞、伕淋巴細胞性白

8、血病細胞、髓性白血病細胞、非淋巴、非髓性白血病顯示了明顯的細胞毒作用，100 i mlL-1 “處理24h，能顯著誘導(dǎo)這些白血病腫瘤細胞凋亡，其中對T-淋巴細胞性白血病細胞作用最強。所有細胞都觀察到了凋亡小體和DNA碎片。所有白血病細胞的DNA合成都受到抑制，同時顯微鏡觀察到細胞被瓦解。白血病細胞的凋亡可能與Fas抗原的表達增強和喪失線粒體膜電位有關(guān)。試驗證明 Artepllin C 有抗白血病作用，但對正常的淋巴細胞僅僅是有限的抑制作用。氧化偶氮甲烷處理DDY小鼠造成結(jié)腸癌模型，灌胃80和160 mgkg-1蜂膠或10 mgkg-1Artepillin C (相當(dāng)160 mg蜂膠)能夠顯著將

9、結(jié)腸畸形腺窩灶的發(fā)生率降低39.2 %,43.7 %和43.4 %。Shimizu等將Artepllin C加到人結(jié)腸癌腺細胞 WiDr中，發(fā)現(xiàn)能夠誘導(dǎo) 細胞周期G(O)肥(1)期，并抑制腫瘤細胞生長。通過增強腫瘤關(guān)鍵蛋白Cip1/p21的活性，刺激Cip1/p21的表達來影響腫瘤細胞周期。Akao 等報道了另外兩種肉桂酸的衍生物 drupanin 、 Baccharin 對結(jié)腸癌細胞、胃癌細胞、 白血病細胞的抑制活性。濃度為150 i molL-1時，它們對以上所有細胞均有顯著抑制作用，抑制效果為artepillin C Baccharin drupanin。從試驗結(jié)果推測出該類化合物苯環(huán)上

10、3位異戊二烯基團有助于抗腫瘤活性。但 Drupanin 似乎體現(xiàn)了比 artepillin C 更小的副作 用，對于Con-A誘導(dǎo)的人正常血中淋巴細胞的細胞毒作用，Drupanin要弱于Artepillin C 。3 黃酮類化合物蜂膠中對腫瘤起作用的黃酮類化合物主要是黃酮及黃酮醇類、二氫黃酮及二氫黃酮醇類化合物,這些物質(zhì)對致癌物有抑制作用。 試驗中用抗微核實驗?zāi)Ｐ蛯σ恍S酮和黃酮醇衍生物進 行篩選,發(fā)現(xiàn)大多數(shù)黃酮醇有抗苯并花的作用,其中高良姜黃素活性最強。蜂膠中的蘆丁、 桑黃素、槲皮素均能抑制苯并芘對小鼠皮膚的致癌作用； 芹黃素、 山奈酚、槲皮素對黃曲霉素B1與DNZ加合物的形成有抑制作用，并

11、能明顯抑制對二甲基苯并蒽誘導(dǎo)的小鼠皮膚癌作用；槲皮素對TPA 3-甲基膽恿、N-甲基-N-亞硝基脂等引起的皮膚癌也有抑制作用。Kyung等的實驗發(fā)現(xiàn)蜂膠中的 Chrysin（白楊素）能夠誘導(dǎo)人白血病細胞 U937細胞凋亡，并闡 明了機理。在U937細胞中，如使用PI3K抑制劑，抑制了 Akt的磷酸化，就會發(fā)現(xiàn)增強了 Chrysin 的誘導(dǎo)凋亡作用；而如果 Akt 的過度表達，則會抑制 Chrysin 誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡。提示了 Akt 信號途徑在 chrysin 誘導(dǎo)人白血病細胞凋亡過程中起著重要作用， 即有可能是建立了 ChrYsin 和P13K從kt-相關(guān)的通路之間的連接。這對惡性血液疾病提

12、供了一個新的治療策略。還有研 究表明Chrysin能夠顯著下調(diào)NF-IL6，抑制了 NF-IL6與DNA勺結(jié)合，抑制和阻斷癌基因表達。Chen等從臺灣蜂膠中分離到三種新異戊二烯基黃酮，Propolin A、B、C。Propolin A和B對3個癌細胞系的都顯示了細胞毒性，DNA含量和DNA片段分析，Propolin A有效地誘導(dǎo)癌細胞凋亡，并表現(xiàn)出強力的抗大部分自由基的消除作用。Propoli n C對于人黑色素瘤細胞也觀察到細胞毒作用（IC50為8.5卩molL-1），能夠劑量或時間依賴性地降低幾種能夠引起人黑色素 瘤細胞凋亡的蛋白的水平如 Procaspase-8 ， Bid 蛋白、 pr

13、ocaspase-3 ，而且能使細胞色素 C 從線粒體釋放到細胞漿中，提示了 Propolin C 的細胞毒作用是由線粒體介導(dǎo)。4 雙萜烯酸類化合物試驗用高效液相色譜從巴西蜂膠甲醇提取液中分離出一種抗腫瘤物質(zhì)，定性為新clerodane二萜烯（PMS-1），分子式C20H32O3 （分子量320）。該化合物能夠抑制 DNA勺合成減少皮膚癌 的發(fā)生率，并且通過降低 DNA勺合成抑制腫瘤的生長。日本研究人員根據(jù)對人肝細胞癌細胞 毒性的檢驗， 從巴西蜂膠甲醇提取液中分離出兩個 clerodane 雙萜異構(gòu)體， 分別為 15-氧代-3， 13Z-kolavadien-17- 含氧酸和 15- 氧代 -

14、3z-13E-kolavadien-17- 含氧酸。5 苯并吡喃類Luo從巴西蜂膠中分離出活性成分苯并-Y-毗喃衍生物PM-3,能夠抑制人胸腺癌 MCF-7細胞生長。在G1階段用PM-3處理MCF-7細胞，結(jié)果導(dǎo)致細胞周期蛋白D俐E蛋白水平的降低，PM-3也抑制了轉(zhuǎn)錄水平上的細胞周期蛋白D1的表達。從巴西蜂膠分離出（Z） -2 , 2-甲基-8-（3-甲基-2- 丁基）-苯并吡喃-6-丙烯酸（A）和（E）-2 , 2-甲基-8-（3-甲基-2- 丁基）-苯并吡喃-6- 丙烯酸（B）。在紫外線（365 nm）照射下B迅速變成A,也觀察到相反的反應(yīng)。反應(yīng)從A或 B開始，A和B的比率到達2.3，達到一個光穩(wěn)定態(tài)。在抗人肺癌細胞HLC-20方面，A比B勺細胞毒性強7 倍。蜂膠的抗腫瘤作用早已為人所知， 但是一些研究報道值得注意。 烏拉圭蜂膠的乙醇提取物是 乳腺癌的一種抑制劑， 而巴西蜂膠的水提取物和乙醇提取物對乳腺癌影響不大。